ДИАЦЕТАТ 13-ЭТИЛГОНА-1,3,5( 10), 8( 9)-ТЕТРАЕН-3,17БЕТА-ДИОЛА, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИИМПЛАНТАЦИОННОЙ И АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2012 года по МПК C07J1/00 A61P15/18 A61P35/00 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при синтезе биологически активных аналогов стероидных эстрогенов, в частности, при получении диацетата рацемического 18-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраен-3,17β-диола, обладающего антиимплантационной и антиоксидантной активностью при пониженном утеротропном действии, что предполагает его применение в качестве контрацептивного препарата.

Известен патент, в котором предложен способ синтез 13-Alkylgona-1,3,5(10),9(11)-tetraenes [1], а также сообщается о наличии у него эстрогенной и гиполипидемической активности, который является наиболее близким к заявленному изобретению и выбран в качестве прототипа. Позднее этот стероид в оптически активной форме использовали в качестве промежуточного вещества для получения других соединений, однако его биологические свойства не изучали [2].

Техническим результатом заявленного изобретения является получение вещества, обладающего антиимплантационным и антиоксидантным действием при пониженной утеротропной активности.

Указанный технический результат достигается синтезом диацетата 13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраен-3,17β-диола.

Схема синтеза стероида приведена в примере 1.

Пример 1. К раствору 1 г известного соединения (3-гидрокси-13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраен-17-он) [3] в 40 мл ТГФ добавляют при перемешивании 10 мл 1М раствора алюмогидрида лития в ТГФ, смесь кипятят 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, избыток растворителя разлагают этилацетатом и выливают в 1 л 3%-ного раствора соляной кислоты. Продукты восстановления экстрагируют тремя порциями этилацетата по 100 мл, объединенные экстракты промывают водой до нейтральной реакции, сушат безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, остаток растворяют в 40 мл пиридина, добавляют 25 мл уксусного ангидрида, реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре. После обычной обработки [1] целевое соединение выделяют кристаллизацией из метанола. Получают 1.03 г (78%) стероида, т.пл. 145-146.5°C (по лит. данным, т.пл. 141-143°C [1]).

Масс-спектр, m/z (I_отн, %): 368 (35, М+), 326 (51), 266 (19), 237 (100), 209 (27), 181 (14), 160 (37), 133 (12), 107 (16).

Спектр ¹³C ЯМР, δ, м.д.: 9.81; 18.41; 21.00; 21.15; 21.91; 23.66; 24.44; 27.95; 28.16; 29.92; 43.88; 48.28; 82.56; 118.77; 120.21; 122.55; 125.97; 133.53; 133.76; 136.62; 148.39; 169.67; 171.10.

Найдено, %: C 74.99; H 7.70. C₂₃H₂₈O₄. Вычислено, %: C 74.97; H 7.66.

Масс-спектры получены в режиме хромато-масс-спектрометрии на приборе Aligent 6850 с масс-селективным детектором Aligent 5973. Хроматографический анализ проводили на капиллярной колонке HP-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0.25 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0.25. Скорость газа-носителя (гелия) через колонку 1.3 мл/мин. Использовали линейное программирование температуры термостата колонки от 220 до 230°С со скоростью 5 С/мин. Температура испарителя 330°С, деление потока 20:1. Масс-селективный детектор обеспечивал сканирование масс-спектров, полученных с помощью ионизации электронным ударом (70 eV) в диапазоне от 50 до 800 m/z со скоростью 2 скана в секунду. Полученную информацию обрабатывали с помощью программы ADMIS.

Спектры получали при 295 °K на спектрометре DPX-300 фирмы Bruker с рабочей частотой 75.468 МГц. Для регистрации использовали раствор 50 мг вещества в 0.6 мл CDCl₃. Химические сдвиги измерены по отношению к TMS путем присвоения сигналу растворителя (CDCl₃/CHCl₃=99.9/0.1) стандартного значения 76.90 м. д.

Антиимплантационную активность рацемического диацетата 3,17β-дигидрокси-18-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраена исследовали следующим образом. К крысам-самкам массой 160-180 г с установившимся эстральным циклом подсаживали самцов, ежедневно в течение 3 суток, со дня обнаружения спермы во влагалищных мазках (первый день беременности) вводили подкожно препарат в масляном растворе. Через 20 дней регистрировали число плодов. Результаты экспериментальных исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 Антиимплантационное действие диацетата 3,17β-дигидрокси-13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраена (1) Введенный препарат Доза, мг/кг массы тела в день Число животных в опыте Контрацептивный эффект, % Контроль - 10 0 1 0.1 15 87 1 0.5 15 100

Кроме того, в ходе исследований не выявлено патологии в развитии плодов и уродств у плодов под действием препарата у животных, сохранивших беременность. Размеры и масса плодов и плацент в этом случае не отличались от таковых у животных контрольной группы.

Утеротропное действие препарата в эффективных дозах заметно меньше, чем у применяемого в медицинской практике 17α-этинилэстрадиола (таблица 2).

Таблица 2 Утеротропное действие рацемического диацетата 3,17β-дигидрокси-13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраена (1) Введенный препарат Доза, мг/кг массы тела в день Число животных в опыте Вес матки, мг Контроль - 6 13.4±0.8 Этинилэстрадиол 0.05 6 98.5±11.5 1 0.1 5 16.6±1.4 1 0.5 6 34.6±2.8 1 1.5 6 71.0±8.4 1 5.0 5 88.5±10.5

Антиоксидантные свойства диацетата 3,17β-дигидрокси-18-метил-эстра-1,3,5(10),8(9)-тетраена исследовали в соответствии с работами [5-9]. Результаты исследований, представленные в таблицах 3 и 4, обработаны по Стьюденту - указаны достоверно значимые различия по сравнению с контрольными опытами.

Таблица 3 Антиоксидантные свойства диацетата 3,17β-дигидрокси-13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраена в мозге крыс (доза - 1.5 мг/кг веса тела в сутки) Группа животных Основания Шиффа, у.е./мг липидов Диеновые конъюгаты, нмоль/мг липидов Триеновые конъюгаты у.е./мг липидов Коэффициент Клейна Малоновый диальдегид, нмоль/мг, белка Интактные           крысы 133±9 3.7±0.4 0.067±0.005 0.186±0.017 1.35±0.08 Интактные           крысы, 91±5 2.6±0.1 0.050±0.005 0.148±0,10 1.14±0,06 получавшие Р<0,01 Р<0,01 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05 стероид 1          

Таблица 4 Антиоксидантные свойства диацетата 3,17β-дигидрокси-13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраена (1) в печени крыс (доза - 1.5 мг/кг веса тела в сутки) Группа животных Основания Шиффа, у.е./мг липидов Диеновые конъюгаты, нмоль/мг липидов Триеновые конъюгаты, у.е./мг липидов Коэффициент Клейна Малоновый диальдегид, нмоль/мг белка Интактные крысы 173±11 5.8±0.4 0.123±0.008 0.248±0.010 1.43±0.10 Интактные 134±6 4.6±0.3 0.163±0.009 0.214±0,14 0.98±0,03 крысы, получавшие стероид 1 Р<0,01 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,01

Таким образом, как показали многочисленные экспериментальные исследования, проведенные на лабораторной базе Санкт-Петербургского государственного университета и НИИ акушерства и гинекологии, стероид [1] в используемых дозах проявляет антиимплантационную и антиоксидантную активность при пониженной утеротропной активности, что является преимуществом по сравнению с используемыми на практике препаратами. Наличие антиоксидантной активности у заявленного стероида очень важно, поскольку соединения с таким действием могут быть использованы как средства профилактики эстрогенозависимого рака молочной железы [4], что является особенно актуальным сегодня для сохранения здоровья, учитывая наблюдающуюся в последние годы тенденцию этого заболевания к существенному росту.

Литература

1. 13-Alkylgona-1,3,5(10),9(11)-tetraenes // U.S. Pat. 3391170 (1968) - прототип

2. 8(9)-Dehydroestradiol derivatives // PCT Int. Appl. WO 98/16544.

3. Сорокина И.Б., Баркова Т.И., Захарычев А.В., Чигирь Р.Н., Ананченко С.Н., Торгов И.В. // Эстрогенная и противоопухолевая активность в ряду трансформированных аналогов эстрона и эстрадиола. Изв. АН СССР, сер. хим. 1973, №5. С.664-670.

4. Felty Q., Singh K., Roy D. Estrogen-induced G1/S transition to go-arrested estrogen-dependent breast cancer cells is regulated by mitochondrial oxidant signaling // Oncogene. 2005. V.24. N 31. P.4883-4893.

5. Folch J., Less M., Sloane-Stanly G.M. A simple method for the isolation and purification total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. V.226. P.497-509.

6. Bartlet G. Phosphorus assay in colomn chromathography // J. Biol. Chem. 1959, V.23. P.466-473.

7. Шведова А.А., Поленский Н.Б. // Метод определения конъюгатов гидроперекисей липидов в экстрактах тканей. Исследование синтетических и природных антиоксидатов (под редакцией Е.Б.Бурлаковой): M. - 1992. С.74-75.

8. Bidlack W.R., Tappel A.L. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation // Lipids. 1973. P.8.

9. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кашкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с ТБК // Лабор. дело. 1988. №11. С.41-43.

Изобретение относится к диацетату рацемического 18-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраен-3,17β-диола, обладающему антиимплантационной и антиоксидантной активностью при пониженном утеротропном действии. Соединение, как показывают результаты проведенных исследований, проявляет антиимплантационную и антиоксидантную активность при пониженной утеротропной активности, что является преимуществом по сравнению с используемыми на практике препаратами. Наличие антиоксидантной активности у указанного стероида весьма важно, поскольку соединения с таким действием могут быть средствами профилактики эстрогенозависимого рака молочной железы. 1 н.п.ф-лы, 1 пр., 4 табл.

Антиимплантационное и антиоксидантное средство, представляющее собой

диацетат13-этилгона-1,3,5(10),8(9)-тетраен-3,17β-диола.