СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ВИРУСА ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2012 года по МПК A61K39/42 A61P31/12 

Изобретение относится к области биологии и сельского хозяйства, в частности лечения и профилактики инфекционных заболеваний.

Гипериммунные сыворотки против вируса парагриппа-3 получают на разных видах лабораторных и домашних животных.

Известен способ по получению и исследованию гипериммунных сывороток от лабораторных животных против вирусов инфекционного ринотрахеита, герпеса и парагриппа-3 крупного рогатого скота, где в качестве тест-объектов использовали кроликов, а исследования проводили в реакциях нейтрализации, торможения гемадсорбции и гемагглютинации (Зудилина, 1970).

Основным недостатком является трудоемкость работы и применение для инъекции живого вируса штаммов ТК - А и ТА, который при определенных условиях может вызвать распространение инфекции.

Известен способ получения гипериммунных сывороток к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота (Хитрова, 2003, НПО НАРВАК).

Недостаток данного способа получения гипериммунных сывороток связан с иммунизацией дорогостоящих животных - быков (лошадей), что, несомненно, сказывается на стоимости сывороток.

Целью настоящего изобретения является получение гипериммунных сывороток от ослов для лечения телят, больных парагриппом-3, и профилактики здорового молодняка крупного рогатого скота. Преимуществами данного способа получения являются:

- получение гипериммунных сывороток на наиболее дешевых донорах - ослах, что удешевляет гипериммунную сыворотку;

- возможность получения гипериммунных сывороток не на живой вирус, а на инактивированный антиген, находящийся в вакцине.

Для проведения опыта были подобраны по принципу аналогов 15 ослов 3-4-х лет весом 150-200 кг. За 30 дней до начала цикла гипериммунизации ослов клинически осматривали: все опытные животные средней упитанности, нормальной конституции, температура тела в пределах 37,5-38,5°C, пульс 30-40, дыхание 8-14, ран и других повреждений кожного покрова не обнаружили.

Перед началом опыта у всех ослов отобрали кровь, получили сыворотку и исследовали в РТГА на наличие противопарагриппозных антител. Антитела к вирусу парагриппа-3 в сыворотках крови не обнаружили. Ослов разделили на 3 группы по 5 голов. Всем подопытным животным внутримышечно в область крупа ввели по 1 мл эмульсионной инактивированной вакцины против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота производства Юрьевецкого биокомбината г.Владимира, серии №4, госконтроля №4, изготовленной 09.05 г.

Через каждые 14 дней проводили иммунизацию этой же вакциной с увеличением дозы вакцины на 1 мл. Схема иммунизации ослов представлена в таблице 1.

Ослам первой группы в качестве адъюванта в равных объемах в вакцину добавили аэросил, второй группе - монтанид, а третью группу животных иммунизировали без адъювантов.

Начиная с третьей иммунизации, общий объем вакцины и адъюванта вводили в две точки.

Проведенные эксперименты показывают, что ослы являются хорошими тест-объектами для получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота. Так, из 15 взятых в работу ослов ни в одном случае не было осложнений на месте внутримышечного введения вакцины. У отдельных животных отмечали легкое угнетенное состояние, повышение температуры тела на 0,5-1°C в течении 1-2 дней, кратковременный отказ от корма.

В дальнейшем кровь для исследования сывороток отбирали у ослов через 14 дней после последнего введения биопрепарата и в это же время проводили очередную иммунизацию животных по той же схеме.

Результаты исследования сывороток представлены в таблице 1.

Таблица 1. Схема иммунизации ослов № групп К-во жив-х Доза вакцины и адъюванта (в см³) Иммунизация 1-я 2-я 3-я 4-я 5-я 1. 5 2. 5 3. 5 1 2 3 4 5 Примечание: в числителе - доза вакцины, в знаменателе - доза адъюванта.

Таблица 2. Динамика накопления антител в процессе гипериммунизации ослов № групп Титры антител в РТГА До вакц. Через 14 дней после иммунизации 1-я 2-я 3-я 4-я 5-я 1. 0 1:8-1:16 1:64-1:128 1:128-1:256 1:256-1:512 1:512-1:1024 2. 0 1:8-1:16 1:64-1:128 1:128-1:256 1:256-1:512 1:512-1:1024 3. 0 1:4-1:8 1:128-1:256 1:32-1:128 1:64-1:256 1:256-1:512 Примечание: отбор крови проводили через 14 дней после каждой иммунизации.

Из данных таблицы 2 видно, что иммунизация ослов инактивированной вакциной вызывает у них через 14 дней образование антител в таких титрах, которые способны защитить животных от заражения вирусом парагриппа-3 крупного рогатого скота. Так, у животных, которым вакцину ввели совместно с аэросилом или монтанидом, титры антител в РНГА после второго введения вакцины достигли до 1:128. Несколько ниже титры антител у ослов третьей группы, иммунизированных без добавления адъюванта, хотя после четвертой и пятой иммунизации в сыворотке крови этих животных титры антител достигали до 1:512. У животных первой и второй групп антитела были в пределах 1:128-1:256 через 14 дней после третьей иммунизации, а после четвертой и пятой иммунизации уровень антител достигал разведений 1:256-1:1024. Эти данные говорят о высокой иммуногенной активности ослов как продуцентов гипериммунной сыворотки. Результаты иммунизации ослов эмульсионной инактивированной вакциной свидетельствуют о возможности получения высокоактивных гипериммунных сывороток, применяя в качестве антигена инактивированную вакцину.

Таким образом, наши исследования показали, что ослы являются хорошими тест-объектами для производства гипериммунных сывороток против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Кроме непосредственного воздействия на лечение и профилактику вируса парагриппа-3 гипериммунная сыворотка от ослов способствует сокращению времени лечения на 2-3 дня и позволяет снизить затраты в два раза.

Источники информации

Конопаткин А.А., Артемов Б.Т., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные заболевания. Учебник для вузов. М.: Колос, 1993, 369 с.

Зудилина З.Ф. Получение и исследование гипериммунных сывороток от лабораторных животных против вирусов инфекционного ринотрахеита, герпеса и парагриппа-3 крупного рогатого скота в реакциях нейтрализации, торможения гемадсорбции и гемагглютинации. Труды ВИЭВ. Материалы 2-й научной конференции ВИЭВ, 1970, 16 с.

Хитрова А.Е., Верховский О.А., Непоклонова И.В. Получение гипериммунных сывороток к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота. (НПО НАРВАК). Международная научная конференция посвящ. 45-летию ФГУ ВНИИЗЖ, «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных», Владимир, 2003, 222 с.

Конопаткин А.А., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных. Учебник для вузов. М.: Колос, 1984, 296 с.

Изобретение относится к ветеринарии. Способ получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, характеризующийся тем, что осуществляют пятикратную иммунизацию ослов 3-4-летнего возраста эмульсионной инактивированной вакциной против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, причем начинают с введения 1 мл вакцины и через каждые 14 дней проводят иммунизацию той же вакциной с увеличением дозы вакцины при каждой иммунизации на 1 мл, в качестве адъюванта используют аэросил или монтанид. Изобретение обеспечивает получение высокоактивного и нереактогенного препарата для лечения и профилактики парагриппа-3 молодняка и взрослого поголовья крупного рогатого скота. Титры антител сывороток крови иммунизированных животных в РНГА составляют 1:512 - 1:1024, а у отдельных животных достигают 1:2048.

1. Способ получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, характеризующийся тем, что осуществляют пятикратную иммунизацию ослов 3-4-летнего возраста эмульсионной инактивированной вакциной против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, причем начинают с введения 1 мл вакцины и через каждые 14 дней проводят иммунизацию той же вакциной с увеличением дозы вакцины при каждой иммунизации на 1 мл.

2. Способ получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота по п.1, характеризующийся тем, что в качестве адъюванта используют аэросил или монтанид.