СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕАБСОРБЦИИ КАЛЬЦИЯ ПРИ НАРУШЕНИИ ЕГО ГОМЕОСТАЗА Российский патент 2012 года по МПК G01N33/49 G01N33/493 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике.

Нарушения гомеостаза кальция - распространенное явление у больных с различными патологиями, такими как хроническая почечная недостаточность, онкологические заболевания, остеопороз, остеомаляция и другие. При этом очень важно установить, является ли данное нарушение гомеостаза кальция следствием нарушения его почечной реабсорбциии или оно вызвано другими причинами (пониженное или повышенное поступление кальция из тканей и/или кишечника в кровь). Общепринятым методом количественного измерения почечной реабсорбции кальция в настоящее время является определение его экскретируемой фракции (CCa/GFR). Однако этот метод надежен только в условиях нормальной концентрации кальция в плазме крови. В случае повышения или снижения ионизированного и ультрафильтруемого (CaUF) Ca показатель CCa/GFR неадекватно отражает состояние его реабсорбции.

Nordin (Nordin В. Е. С, Peacock М. - In: Calcium, phosphate and magnesium metabolism // New York - 1976, p.293) предложил метод определения реабсорбции Ca в условиях гиперкальциемии, основанный на определении максимальной реабсорбции Ca. Суть этого метода заключается в том, что увеличение концентрации того или иного иона (Ca или фосфора) в плазме крови сочетается с усилением его реабсорбции. Однако при определенном уровне концентрации электролита в плазме крови рост его реабсорбции прекращается. Это и есть максимальная реабсорбция данного иона. Например, экспериментально установлен факт существования максимальной реабсорбции фосфора.

Данный метод не получил распространения из-за того, что ни одно экспериментальное исследование не подтвердило факта существования максимальной реабсорбции Ca.

В качестве прототипа для наших исследований использовали метод оценки состояния почечной канальцевой реабсорбции Са, предложенный Nordin в 1976 году (Nordin В. Е. С, Peacock М. - In: Calcium, phosphate and magnesium metabolism // New York - 1976, p.294). Метод состоит в следующем. Разработав номограмму зависимости CaE/GFR от CaUF, Nordin обратил внимание на то, что у многих исследуемых больных экскреция Ca в условиях гиперкальциемии остается такой же, как и при нормокальциемии, что свидетельствовало об усилении реабсорбции Ca. Для определения вклада усиления реабсорбции Са в возникновение гиперкальциемии, он предложил измерять показатель «дельта CaUF», позволяющий при экспериментальных значениях CaE/GFR вычислить разницу между измеренным значением CaUF у данного исследуемого и значением CaUF при данном значении экскреции Ca на номограмме. Сочетание увеличения CaUF с повышением CaE/GFR, как и на номограмме, по мнению Nordin, свидетельствовало о повышенном поступлении Ca из тканей и разница в CaUF в этом случае (дельта CaUF) позволяла оценить вклад тканей в гиперкальциемию.

Однако этот метод не получил широкого применения из-за того, что на номограмме не были рассчитаны границы нормы, вследствие чего данный метод не дает возможности оценить, какая реабсорбция Ca является нормальной, а какая - повышенной или сниженной.

Таким образом, на сегодняшний день надежного метода определения реабсорбции Ca в условиях гипо- и гиперкальциемии не существует.

Задачей заявляемого способа является создание надежного метода определения реабсорбции Ca в условиях гипо- и гиперкальциемии.

Техническим результатом является создание лабораторного метода, позволяющего производить надежное количественное определение реабсорбции Ca у больных с повышенной или сниженной концентрацией Ca в плазме крови.

Сущность изобретения заключается в следующем. Способ определения реабсорбции Ca (CaR) при нарушении его гомеостаза характеризуется следующим. Осуществляют забор крови, центрифугированием отделяют сыворотку крови и определяют в ней креатинин. Анаэробно добавляют к 1,5-2,0 мл сыворотки крови 5% раствор карбогена в азоте и получают ультрафильтрат сыворотки крови, для чего используют фильтр, задерживающий молекулы с молекулярной массой свыше 50000 MW. Определяют концентрацию Ca в ультрафильтрате в моль/л (CaUF). Одновременно с забором крови осуществляют сбор мочи после приема 300-500 мл дистиллированной воды. Затем определяют в моче концентрацию Са и креатинина. Рассчитывают клиренс креатинина (GFR), определяют экскрецию Ca из 1 литра клубочкового фильтрата (CaE/GFR), для чего концентрацию Ca в моче умножают на минутный диурез и полученный результат делят на клиренс креатинина. Далее определяют разницу между CaUF и CaE/GFR, получая CaR. Строят номограмму зависимости значений CaR от CaUF (Фиг.1). Определяют границу области допустимых значений, соответствующую здоровым людям. На рисунке сплошная линия обозначает середину области нормальных значений, штрихпунктирные линии - верхнюю и нижнюю границы допустимых значений. При этом, если определенные у пациента значения лежат в области допустимых значений, выносят суждение о нормальной реабсорбци Ca. При расположении полученных у пациента величин выше области допустимых значений делают вывод об увеличении реабсорбции Ca. Суждение о сниженной реабсорбции Ca выносят при их расположении ниже нижней границы области допустимых значений.

Способ осуществляется следующим образом.

1. Подготовка пациента к исследованию. Перед сдачей крови пациент двое суток должен соблюдать диету с низким содержанием кальция, то есть исключить из рациона молочные продукты.

2. В день сдачи крови утром в 7 часов утра пациент должен помочиться в унитаз и сразу после этого выпить 300-500 мл дистиллированной воды. В 8 часов утра пациент должен помочиться в банку, в 9 часов утра - в другую банку. Точное время мочеиспускания в унитаз и точное время сбора обеих порций мочи должно быть зафиксировано.

3. Утренний сбор мочи в 8 и 9 часов должен осуществляться в одноразовую посуду или в стеклянные банки, вымытые хромпиком, поскольку на стенках банки, вымытой водопроводной водой, скапливается Ca, который переходит в собранную мочу и приводит к завышению концентрации Ca в моче пациента.

4. Взятие крови должно осуществляться утром около 9 часов утра натощак.

5. Ультрафильтрация должна осуществляться с помощью фильтра, задерживающего молекулы, имеющие молекулярную массу свыше 50000 MW.

6. Ультрафильтрат плазмы крови должен быть прозрачным. Если ультрафильтрат получается желтоватым или желтым, значит, ультрафильтрация сделана некачественно.

7. Важно, чтобы pH плазмы крови до ультрафильтрации отличался от pH сыворотки, задержанной фильтром, не более чем на 0,02.

Для доказательства возможности реализации заявленного изобретения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные. Были проведены исследования на 8 здоровых людях с нормальной функцией почек и нормальным обменом Ca, у которых была искусственно с помощью капельницы вызван повышенный уровень Ca в плазме крови (гиперкальциемия). У каждого из них было произведено по 5 исследований при разных уровнях гиперкальциемии с забором крови и сбором мочи и с последующим измерением CaUF и определением CaR. По результатам исследований была составлена номограмма зависимости значений CaR от CaUF у здоровых людей в условиях искусственно вызванной гиперкальциемии и определены границы области допустимых значений. Таким образом, были определены границы нормальных значений CaR при разных степенях повышения CaUF.

Пример: был обследован пациент А, перенесший аллотрансплантацию трупной почки. Он в течение двух дней соблюдал низкокальциевую диету, исключив из своего рациона молочные продукты. Он собрал 2 порции мочи в одноразовую посуду в 8 и 9 часов утра. В 9 часов утра у него взяли кровь. В моче определили концентрацию кальция и креатинина, в плазме крови измерили креатинин. Получили ультрафильтрат плазмы крови и измерили CaUF. Рассчитали CaE/GFR и CaR. У данного пациента при значении CaUF 1,72 ммоль/л значение CaR составляло 1,54 и попадало в область допустимых значений на номограмме, что говорило о нормальном состоянии реабсорбции Ca и позволяло сделать вывод, что гиперкальциемия у данного больного развилась вследствие повышенного поступления Ca в кровь из тканей. У пациента Б было проведено такое же исследование, в результате которого выяснилось, что при CaUF, равном 1,62 ммоль/л, значение CaR у него составило 1,7 и располагалось значительно выше верхней границы допустимых значений. В этом случае причиной развития гиперкальциемии являлось, видимо, усиление реабсорбции Ca.

Таким образом, разработанный метод позволяет измерить реабсорбцию Ca в условиях нарушений его гомеостаза, а также достоверно определить, является ли реабсорбция Ca у данного пациента нормальной или нарушенной.

Всего предложенный способ был использован для определения реабсорбции кальция при нарушении его гомеостаза у 58 пациентов. Выявленные данные позволили выбрать адекватные пути коррекции нарушений гомеотаза кальция.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения реабсорбции кальция (CaR) при нарушении его гомеостаза, где осуществляют забор крови, центрифугированием отделяют сыворотку крови и определяют в ней креатинин, добавляют к 1,5-2,0 мл сыворотки крови 5% раствор карбогена в азоте и получают ультрафильтрат сыворотки крови, для чего используют фильтр, задерживающий молекулы с молекулярной массой свыше 50000 MW, определяют концентрацию кальция в ультрафильтрате в ммоль/л (CaUF), одновременно с забором крови осуществляют сбор мочи после приема 300-500 мл дистиллированной воды, затем определяют в моче концентрацию кальция и креатинина, рассчитывают клиренс креатинина (GFR), определяют экскрецию кальция из 1 литра клубочкового фильтрата (CaE/GFR), для чего концентрацию кальция в моче умножают на минутный диурез и полученный результат делят на клиренс креатинина; далее определяют разницу между CaUF и CaE/GFR, получая CaR, строят номограмму зависимости значений CaR от CaUF, определяют границу области допустимых значений, соответствующую здоровым людям, при этом, если определенные у пациента значения, лежат в области допустимых значений, выносят суждение о нормальной реабсорбции кальция, при расположении определенных величин выше области допустимых значений выносят суждение об увеличенной реабсорбции кальция и о сниженной реабсорбции кальция - при их расположении ниже нижней границы области допустимых значений. Способ позволяет производить надежное количественное определение реабсорбции Ca у больных с повышенной или сниженной концентрацией Ca в плазме крови. 1 пр., 1 ил.

Способ определения реабсорбции кальция (CaR) при нарушении его гомеостаза, характеризующийся тем, что осуществляют забор крови, центрифугированием отделяют сыворотку крови и определяют в ней креатинин, добавляют к 1,5-2,0 мл сыворотки крови 5%-ный раствор карбогена в азоте и получают ультрафильтрат сыворотки крови, для чего используют фильтр, задерживающий молекулы с молекулярной массой свыше 50000 MW, определяют концентрацию кальция в ультрафильтрате в ммоль/л (CaUF), одновременно с забором крови осуществляют сбор мочи после приема 300-500 мл дистиллированной воды, затем определяют в моче концентрацию кальция и креатинина, рассчитывают клиренс креатинина (GFR), определяют экскрецию кальция из 1 л клубочкового фильтрата (CaE/GFR), для чего концентрацию кальция в моче умножают на минутный диурез и полученный результат делят на клиренс креатинина; далее определяют разницу между CaUF и CaE/GFR, получая CaR, строят номограмму зависимости значений CaR от CaUF, определяют границу области допустимых значений, соответствующую здоровым людям, при этом, если определенные у пациента значения лежат в области допустимых значений, выносят суждение о нормальной реабсорбции кальция, при расположении определенных величин выше области допустимых значений выносят суждение об увеличенной реабсорбции кальция и о сниженной реабсорбции кальция - при их расположении ниже нижней границы области допустимых значений.