СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ АУТОИММУННОГО ТИРЕОИДИТА Российский патент 2012 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к иммунологии, эндокринологии, лабораторной диагностике и предназначено для прогнозирования характера течения аутоиммунного тиреоидита.

Аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) страдают 3-4% населения планеты, с возрастом число больных увеличивается, при этом распространенность заболевания у женщин составляет от 3 до 6 % в год. В последнее время клиницисты многих стран отмечают увеличение числа больных аутоиммунным тиреоидитом среди лиц молодого возраста, особенно среди детей и подростков (Болезни щитовидной железы / Под ред. Браверманна Л.И. - М.: Медицина, 2000). В общем анализе крови больных АИТ возможны лимфоцитоз, моноцитоз, лейкопения и увеличение СОЭ. Иммунологическое исследование крови позволяет выявить повышение количества и активности Т-хелперов и Т-киллеров при снижении количества Т-супрессоров, повышение уровня иммуноглобулинов.

Известен способ оценки секреции ТТГ, включающий пробу с тиролиберином. Тиролиберин стимулирует выброс ТТГ из тиреотропных клеток аденогипофиза, поэтому в норме после введения тиролиберина уровень ТТГ повышается. Пробу с тиролиберином применяют для оценки секреторного резерва ТТГ и степени подавления секреции ТТГ (при тиреотоксикозе). Реакция на тиролиберин снижена или запаздывает на фоне супрессивной терапии левотироксином. В последнее время пробу с тиролиберином применяют редко, поскольку появились высокочувствительные методы определения ТТГ (Эндокринология под ред. Н.Лавина. - М., 1999).

Существует способ оценки эффективности лечения АИТ, включающий определение в сыворотке крови больных содержания интерферона-гамма (Патент №2323443, РФ. Опубл. 27.04.2008). Через 1 месяц после лечения при содержании интерферона-гамма менее 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как эффективное, а при содержании более 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как неэффективное и корректируют дозу лечебного препарата или меняют препарат.

Известен также способ прогнозирования и диагностики заболеваний щитовидной железы (US 2010/0131286 A1, 27.05.2010), при котором исследуется уровень экспрессии специфических маркерных генов, свидетельствующий о риске развития и распространении эндокринных патологий, в том числе АИТ. В указанном способе используются, однако, дорогостоящие аппаратура и реактивы, что не всегда экономически обоснованно.

Прототипом является исследование в сыворотке крови уровня цитокина BLyS, стимулирующего В-лимфоциты, для диагностики, прогноза и скрининга эффективности терапии аутоиммунных болезней (WO 2009043848, 09.04.2009). Метод включает сравнение концентрации BLyS со справочной величиной и последующим вычислением отклонения с целью диагноза, прогноза и скрининга. Однако содержание цитокина BLyS в сыворотке крови повышается не только при АИТ, системной красной волчанке, ревматоидном артрите и синдроме Шегрена, но также и у больных с множественной миеломой, хроническим В-клеточным лейкозом, что не является достаточно объективным критерием прогнозирования характера течения АИТ. Заявленное нами изобретение позволяет повысить точность и объективность прогнозирования, используя два критерия: абсолютное содержание Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) и концентрацию интерлейкина-2 (IL-2). При содержании лимфоцитов CD71+ более 0.3×10⁹ кл/л и концентрации IL-2 менее 25 пг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания, а при содержании лимфоцитов CD71+ менее 0,3×10⁹ кл/л и концентрации IL-2 более 25 пг/мл прогнозируют неблагоприятное течение АИТ. Используемые в способе материалы, реактивы и методы исследования широко применяются в стандартной клинико-лабораторной практике.

Заявленный способ осуществляется стандартно следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в минимальном объеме (1 мл) до 10 часов утра, натощак. Содержание Т-лимфоцитов CD71+ определяли с помощью непрямой иммуннопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенной капли» производства НПЦ МедБиоСпектр г.Москва. Для количественного определения IL-2 используется сыворотка или плазма крови, анализируемая иммуноферментным методом с применением диагностического набора для ИФА. Результаты реакции оцениваются на спектрофотометре с длиной волны 450 нм.

Указанным способом были обследованы лица, проходившие реабилитацию в медицинской компании «Биокор» г.Архангельска: 28 больных аутоиммунным тиреоидитом и 15 человек, прошедших курс гормонального лечения патологий щитовидной железы и находящихся в состоянии ремиссии (контроль). Диагноз установлен врачами городского эндокринологического консультативного центра г.Архангельска, обследование проводили с соблюдением основных норм биомедицинской этики. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6» («StatSoft», США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории России. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия Уилкоксона. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05.

Установлено, что при неблагоприятном течении заболевания (увеличение в крови концентрации антител к тиреопероксидазе) у больных наблюдается снижение абсолютного содержания Т-лимфоцитов CD71+ с 0,47±0,05 до 0,26±0,02×l0⁹кл/л и повышение концентрации IL-2 с 23,8±5,3 до 154,5±11,7 по сравнению с контролем (р<0,05). При благоприятном течении АИТ (уменьшение уровня антител к тиреопероксидазе) увеличивается содержание лимфоцитов CD71+ до 0,56±0,05×10⁹ кл/л и нормализуется показатель IL-2 (менее 25 пг/мл).

Есть сведения о стимулирующем влиянии тироксина на высвобождение растворимых альфа-рецепторов к IL-2 (Zwirska-Korczala K. Influence of thyroxine on serum soluble interleukin-2 receptor alpha levels in thyroid disorders / K. Zwirska-Korczala, A. Berdowska, J. Jochem et al. // J. Clin. Pharm.Therapeut. - 2004. - Vol. 29, N 2. - Р. 151-156), последние могут нейтрализовывать избыточные концентрации IL-2 и тем самым снижать уровень аутоиммунного воспаления в щитовидной железе. Известно, что IL-2, как и трансферрин, обладают достаточно мощным пролиферативным потенциалом (Цинкернагель Р. Основы иммунологии: Пер. с нем. - М.: Мир, 2008. - 135 с.). В тоже время, учитывая, что трансферрин поддерживает клеточную пролиферацию, а блокада рецепторов к трансферрину в трансферринзависимых клетках индуцирует в них апоптоз, снижение в крови концентрации CD71+ клеток может рассматриваться как компенсаторный механизм в регуляции пролиферативного процесса (Neckers L. Geldanamycin as a potential anti-cancer agent: its molecular target and biochemical activity/ L.Neckers, T.W.Schulte, E.Mimnaugh // Investigational New Drugs. - 1999. - Т.17, №4. - С.361-373).

Частные примеры использования способа.

1. Больная П., возраст 51 год. Диагноз: аутоиммунный тиреоидит, подтвержденный высоким уровнем антител к тиреопероксидазе 536 МЕ/мл. Больной назначено лечение L-тироксином в дозе 100 мкг/сутки. В процессе курса гормонотерапии в периферической венозной крови пациентки установлено абсолютное содержание Т-лимфоцитов CD71+ 0,24×10⁹ кл/л, уровень IL-2 составил 286 пг/мл. Сделан прогноз о неблагоприятном течении заболевания, что подтверждено дальнейшим увеличением концентрации антител к тиреопероксидазе.

2. Больная Ш., возраст 54 года. Диагноз: аутоиммунный тиреоидит, подтвержденный высоким уровнем антител к тиреопероксидазе 176 МЕ/мл. Больной назначено лечение L-тироксином в дозе 75 мкг/сутки. В процессе курса гормонотерапии в периферической венозной крови пациентки установлено абсолютное содержание Т-лимфоцитов CD71+ 0,22×10⁹ кл/л, уровень IL-2 составил 89 пг/мл. Сделан прогноз о неблагоприятном течении заболевания, что подтверждено дальнейшим увеличением концентрации антител к тиреопероксидазе.

3. Больная Б., возраст 54 года. Диагноз: аутоиммунный тиреоидит с характерным увеличением уровня антител к тиреопероксидазе 186 МЕ/мл. Больной назначено лечение L-тироксином в дозе 50 мкг/сутки. В процессе курса гормонотерапии в периферической венозной крови пациентки установлено абсолютное содержание Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) 0,62×10⁹ кл/л, уровень IL-2 составил 17,3 пг/мл. Сделан прогноз о благоприятном течении АИТ, что подтверждено дальнейшим снижение концентрации антител к тиреопероксидазе.

Изобретение относится к медицине, конкретно к диагностике в иммунологии и эндокринологии, и касается способа прогнозирования характера течения аутоиммунного тиреоидита. В периферической венозной крови больных аутоиммунным тиреоидитом определяют абсолютное содержание Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) и концентрацию интерлейкина-2 (IL-2). При содержании лимфоцитов CD71+ более 0,3×10⁹ кл/л и концентрации IL-2 менее 25 пг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания, а при содержании лимфоцитов CD71+ менее 0,3×10⁹ кл/л и концентрации IL-2 более 25 пг/мл прогнозируют неблагоприятное течение АИТ. Способ позволяет повысить точность и объективность прогнозирования, используя при этом материалы, реактивы и методы исследования, широко применяемые в стандартной клинико-лабораторной практике. 3 пр.

Способ прогнозирования характера течения аутоиммунного тиреоидита, отличающийся тем, что в периферической венозной крови больных аутоиммунным тиреоидитом определяют абсолютное содержание Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) и концентрацию интерлейкина-2 (IL-2); при содержании лимфоцитов CD71+ более 0,3×10⁹кл/л и концентрации IL-2 менее 25 пг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания, а при содержании лимфоцитов CD71+ менее 0,3×10⁹ кл/л и концентрации IL-2 более 25 пг/мл прогнозируют неблагоприятное течение аутоиммунного тиреоидита.