СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННОГО ТИРЕОИДИТА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 G01N33/53 G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к области эндокринологии.

Аутоиммунный тиреоидит (АИТ) является одним из наиболее распространенных органоспецифических аутоиммунных заболеваний эндокринной системы, которое диагностируется у 3-4% населения (Voipe R. Autoimmune diseases of the endocrine system. CRC. Boca Raton, 1990. 364 P.). АИТ рассматривается как самая частая причина первичного гипотиреоза вследствие постепенного разрушения функциональной ткани щитовидной железы в процессе ее иммунного воспаления (Фадеев В.В. Гипотиреоз. / В.В.Фадеев, Г.А Мельниченко. - М.: ЗАО «РКИ Соверо пресс». 2004 - С.38). Известно, что к «большим» диагностическим критериям АИТ относят развитие гипотиреоза и наличие антител к ткани щитовидной железы (Актуальные проблемы заболеваний щитовидной железы. Материалы 2 Всероссийского тиреоидологического конгресса. - М., 2002. С.9).

Известен метод диагностики гипотиреоза на основе определения в сыворотке крови уровней гормонов. Внедрение в медицинскую практику метода радиоиммунологического анализа (РИА) произвело революцию в различных областях клинической медицины и по сей день является одним из наиболее важных достижений в области определения биологически активных веществ. Суть метода заключается во введении в систему антиген - антитело антигена, меченного радиоактивным изотопом, в результате чего происходит связывание определяемого (немеченого) и меченого антигена с ограниченным количеством антител. Реакция антиген - антитело приводит к состоянию равновесия между свободным и связанным антигеном. Количество включившихся в состав иммунных комплексов меченого антигена обратно пропорционально количеству немеченого антигена в пробе.

Метод РИА отличается высокой воспроизводимостью и чувствительностью, но имеет такие недостатки, как возможность радиоактивного загрязнения окружающей среды; непродолжительный срок жизни радиоактивной метки и потребность в относительно дорогостоящем специальном оборудовании для регистрации радиоактивности (А.Г.Таранов. Диагностические тест-системы. - М.: Издатель Мокеев, 2002. С.46-47).

В последние 1,5 десятилетия одним из наиболее активно развивающихся направлений в определении гормонов является метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод ИФА основан на том же принципе, что и метод РИА. Отличие состоит в том, что вместо радиоактивной используется ферментная метка. Являясь по своей природе мощными химическими катализаторами, ферменты эффективно осуществляют выработку определяемого вещества, что делает возможным определение ферментной метки в весьма малых количествах. Метод ИФА имеет ряд преимуществ, т.к. является экологически чистым; стабильность конъюгатов увеличивает срок годности набора, и результаты исследований можно оценивать без применения дорогостоящей аппаратуры. Доминирующее значение в диагностике гипотиреоза отводится определению уровней тиреотропного гормона (ТТГ) методом ИФА. Эффективность лечения АИТ также оценивается по снижению значений ТТГ сыворотки крови, которое подтверждает восстановление нарушенной функции при АИТ, но не отражает состояния иммунологических изменений.

Известен способ способ определения аутоантител к ткани щитовидной железы для диагностики АИТ. Наибольшее значение имеет определение аутоантител к тиреопероксидазе (AT-ТПО). Доказано, что чувствительность AT-ТПО при АИТ достигает 90-100% (Фадеев В.В., Мельниченко Г.А. Гипотиреоз: Руководство для врачей. / ЗАО «РКИ Соверо пресс», 2004, с.282-283).

Если наличие высоких уровней аутоантител к тиреоидной пероксидазе является необходимым диагностическим критерием АИТ, то определение их для оценки эффективности лечения АИТ отечественными (Материалы 2 Всероссийского тиреоидологического конгресса. - М., 2002. С.12) и зарубежными авторами (Эндокринология. Под редакцией Н.Лавина. - Практика. М., 1999. С.622) признано нецелесообразным из-за отсутствия прогностического значения. Так, при лечении адекватными дозами L-тироксина в течение 6 месяцев исчезновение антител к тиропероксидазе наблюдалось только у 30%, тогда как у 70% отмечено их снижение (Э.Г.Гаспарян. Проблема аутоиммунного тиреоидита при эутиреозе. Материалы 2-го Всероссийского тиреоидологического конгресса. - М., 2002. С.218). Вместе с тем установлено, что классические антитела к щитовидной железе (АТ-ТПО и др.) являются неспецифическим маркером любой аутоиммунной патологии щитовидной железы (уровень этого показателя повышается при базедовой болезни до 60-70%). Известно, что носительство антител к щитовидной железе многократно превышает распространенность гипотиреоза в популяции, т.е. клинически значимый АИТ развивается далеко не у всех носителей антител к щитовидной железе. Известно, что гипотиреоз в зависимости от возраста обнаруживается в среднем у 1% мужчин и 3-6% женщин, тогда как распространенность носительства антител к щитовидной железе достигает 7-9% для мужчин и 17-26% для женщин (Фадеев В.В. Гипотиреоз. / В.В.Фадеев, Г.А Мельниченко. - М.: ЗАО «РКИ Соверо пресс». 2004 - С.39).

Ближайшим аналогом заявленного нами способа использования интерферона-гамма (ИНФ-γ) для оценки эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита является работа В.А.Горскова и соавт. «Иммуноферментный метод определения аутоантител к микросомальным антигенам тиреоцитов человека» // Проблемы эндокринологии, 1990, т.36, №6, с.8-11, в которой описывается метод ИФА-определения аутоантител к микросомальным тиреоцитам. Способ позволяет подтвердить диагноз аутоиммунных заболеваний щитовидной железы, характеристики аутоиммунного процесса и клинико- диагностического контроля эффективности лечения.

Однако данный способ не позволяет произвести значимый и убедительный контроль эффективности лечения. Предложенный прогностический показатель признан недостаточно информативным, так как он отчетливо не изменяется при терапии.

Задачей нашего изобретения является разработка способа оценки эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита, обладающего достаточной чувствительностью и специфичностью.

Поставленная задача достигается тем, что осуществляют способ оценки эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита, включающий определение в сыворотке крови белковых молекул, а именно интерферона-гамма (ИФН-γ). Через 1 месяц после лечения определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-γ) иммуноферментным методом. При его содержании менее 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как эффективное, а при содержании более 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как неэффективное и корректируют дозу лечебного препарата или меняют препарат.

Новизна изобретения:

- Через 1 месяц после лечения определяют содержание ИФН-γ иммуноферментным методом. Положительная динамика данного показателя получена уже через 1 месяц лечения.

- При его содержании менее 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как эффективное, а при содержании более 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как неэффективное и корректируют дозу лечебного препарата или меняют препарат. При этих значениях получена высокая чувствительность и специфичность.

Способ обладает высокой специфичностью (81%) и чувствительностью (80%) и позволяет с достаточно большой точностью оценить эффективность лечения аутоиммунного тиреоидита. Способ прост, доступен, информативен и экономичен и не имеет аналогов. Ранее данный способ для диагностики и контроля за лечением АИТ не использовался.

В качестве маркера нарушенного иммунного реагирования принят интерферон-гамма (ИФН-γ) - гликопротеид, продуцируемый иммунными клетками и обладающий мощными иммунорегулирующими свойствами. Мы исследовали содержание ИФН-γ до лечения L-тироксином в дозе 100 мкг/сутки и через 1, 2 и 6 месяцев приема препарата у 25 пациентов с АИТ. Забор венозной крови производился в утренние часы, натощак, в количестве 2,0 мл. Сыворотка отбиралась после центрифугирования при 3000 об/мин, определение концентрации ИФН-γ проводилось методом иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов фирмы «Вектор-Бест». Метод был апробирован в эндокринологическом отделении МЛПУ «ГКБ №1» г.Новокузнецка на 25 пациентах с АИТ.

Таблица 1
Содержание используемых показателей у здоровых и пациентов с аутоиммунным тиреоидитомПоказателиКонтрольная группа (п=18)Пациенты с аутоиммунным тиреоидитомДо лечения (n=32)Через 6 мес лечения (n=25)ТТГ (мМе/л)1,54±0,1911,07±2,23*4,07±2,18**АТ-ТПО (ед/л)0,00-50,00544,70±42,72*401,31±49,73* **ИФН-γ (пг/мл)18,85±4,0038,72±8,3417,15±2,20**Пояснения: * - достоверные отличия от данных контрольной группы;
** - достоверные отличия от группы АИТ до лечения

В качестве контрольной группы по результатам диспансеризации были отобраны 18 практически здоровых человек, соответствующих по полу и возрасту группе с АИТ.

Содержание ИФН-γ в сыворотке крови пациентов до лечения составляло 38,72±8,34 пг/мл, тогда как через 6 месяцев приема тироксина - 17,15±2,2 пг/мл (р=0,013), т.е. наблюдалось снижение уровня ИФН-γ в 2,3 раза, и показатель стал соответствовать значению контрольной группы 18,85±4,0 пг/мл. Диагностически значимым признан уровень ИФН-γ больше 35 пг/мл. При значениях показателя ИФН-γ менее 35 пг/мл активность иммунологических процессов заметно снижается на фоне адекватной терапии АИТ тирегормонами. Чувствительность и специфичность показателя при этом составляют соответственно 80 и 81%. Концентрация органоспецифических антител к тиропероксидазе (AT-ТПО) несмотря на тенденцию к снижению оставалась высокой - 544,70±42,72 ед/л и 401,31±49,73 ед/л. Значения ТТГ сыворотки крови через 6 месяцев лечения соответствовали верхнепограничным уровням.

Таблица 2
Уровни ИФН-γ (пг/мл) у здоровых и пациентов с аутоиммунным тиреоидитомКонтрольная группа (n=18)Пациенты с аутоиммунным тиреоидитомДо лечения (n=32)Через 1 месяц лечения (n=25)Через 6 месяцев лечения (n=25)18,85±4,0038,72±8,34*28,40±4,4017,15±2,20**Пояснения: * - достоверные отличия от данных контрольной группы;
** - достоверные отличия от группы АИТ до лечения

Способ осуществляется следующим образом.

У больных с АИТ после клинического и лабораторного обследования, до лечения забирают не менее 5 мл крови из локтевой вены и оставляют до образования кровяного сгустка. Образовавшийся сгусток отбрасывают, а в оставшейся сыворотке крови определяют концентрацию ИФН-γ методом твердофазного иммуноферментного анализа с тест-системами ЗАО «Вектор Бест», ТТГ определяли иммуноферментным методом наборами реагентов «Алкор Био» г.Санкт-Петербург. Определение АТ-ТПО определяли методом ИФА тест-системой ЗАО «Протеиновый контур». Полученные данные использовались для оценки эффективности проводимого лечения и выбора препаратов для терапии.

Пример 1. Пациентка К. 38 лет наблюдалась в эндокринном отделении с диагнозом аутоиммунный тиреоидит, атрофический вариант, гипотиреоз. При поступлении уровень AT-ТПО составлял 500 ед/л; ТТГ 17,6 мМе/л и ИФН-γ 55,4 пг/мл. После назначения лечения L-тироксином в дозе 100 мкг/сут в течение 1 месяца показатели AT-ТПО и ТТГ сохранялись высокими - соответственно 470 ед/л и 16,4 мМе/л. Однако уровень ИФН-γ снизился до 20,7 пг/мл. Прием препарата был продолжен. Через 6 месяцев контрольного исследования показатель AT-ТПО оставался высоким - 420 ед/л; ТТГ снизился до 3,6 мМе/л, тогда как ИФН-γ составил 16,5 пг/мл. Лечение АИТ L-тироксином в дозе 100 мкг/сут признано эффективным.

Пример 2. В отделение поступила пациентка М. 47 лет с диагнозом аутоиммунный тиреоидит, гипертрофический вариант, гипотиреоз. Диагноз подтвержден повышением аутоантител к тиреопероксидазе до 270 ед/л, высоким уровнем тиреотропного гормона 12,7 мМе/л. Показатель ИФН-γ составлял 108,6 пг/мл. Через 1 месяц лечения L-тироксином в дозе 100 мкг/мл уровень ИФН-γ снизился до 56,8 пг/мл. Клинические проявления гипотиреоза при этом полностью купированы не были. Повторное исследование показателя ИФН-γ еще через 1 месяц лечения обнаружило значение 55,4 пг/мл. Уровень ТТГ сыворотки крови составлял 5,5 мМе/л. Терапия L-тироксином была заменена на тиреокомб по 1 т/сут. Лечение препаратом в течение месяца привело к снижению содержания ИФН-γ до 29,6 пг/мл. Уровень ТТГ снизился до 2,3 мМе/л. Клинические признаки гипотиреоза отсутствовали.

Таким образом, нам удалось разработать способ «Использование интерферона-гамма в качестве критерия эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита», который не имеет аналогов.

Предложенный способ позволяет:

1. Оценить наличие иммунных нарушений при АИТ до терапии и в процессе терапии.

2. Свидетельствует о восстановлении нормального иммунного реагирования организма в процессе лечения тиреоидными гормонами

3. Метод экономичен, реагенты доступны, и результат можно получить быстро.

Изобретение относится к области медицины и диагностики, в частности к области эндокринологии. Предложен способ оценки эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита включает определение в сыворотке крови белковых молекул, а именно интерферона-гамма (ИФН-γ). Через 1 месяц после лечения определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-γ) иммуноферментным методом. При его содержании менее 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как эффективное, а при содержании более 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как неэффективное и корректируют дозу лечебного препарата или меняют препарат. Способ обладает высокой специфичностью (81%) и чувствительностью (80%) и позволяет с достаточно большой точностью оценить эффективность лечения аутоиммунного тиреоидита. Способ прост, доступен, информативен и экономичен и не имеет аналогов. 2 табл.

Способ оценки эффективности лечения аутоиммунного тиреоидита, включающий определение в сыворотке крови белков, отличающийся тем, что через 1 месяц после лечения определяют содержание интерферона-гамма (ИФН-γ) иммуноферментным методом и при его содержании менее 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как эффективное, а при содержании более 35 пг/мл оценивают проводимое лечение как неэффективное и корректируют дозу лечебного препарата или меняют препарат.