СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/00 A61K31/04 A61P31/04 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может найти применение в различных областях практической медицины для лечения гнойных ран.

Известно, что раневой процесс представляет собой сложный комплекс реакций, развивающихся в организме в ответ на повреждение тканей, который можно подразделить на три последовательно протекающие фазы: гнойно-некротическая фаза (I фаза), характеризующаяся наличием некротических тканей и гнойного содержимого в ране; фаза регенерации (грануляции) (II фаза) - очищение раны от гнойно-некротического содержимого и образование в ней грануляционной ткани, постепенно восполняющей полость раны; фаза эпителизации раневой поверхности и реорганизация рубца (III фаза) [Раны и раневая инфекция. Под ред. М.И.Кузина, Б.М.Костюченко. М., Медицина, изд. 2-е перераб. и доп., 1991. - 608 с.].

Правильно выбранный алгоритм лечения, эффективность которого зависит от оптимального подбора средств терапии с учетом фазы раневого процесса, позволяет быстро ликвидировать острый гнойный процесс, подавить оставшихся в ране микроорганизмов или предупредить реинфицирование раневой поверхности, ускорить эпителизацию и, как следствие, сократить сроки пребывания больных в стационаре.

В настоящее время современные способы лечения гнойных ран предусматривают использование лекарственных препаратов в зависимости от задач терапии с учетом фазы раневого процесса.

Однако, несмотря на успехи клинической медицины и фармакологической науки, проблема лечения гнойных ран не перестает быть актуальной, поскольку вопросы эффективного лечения с учетом фазы раневого процесса решаются не всегда успешно, а применение антимикробных препаратов в отношении антибиотикорезистентной персистирующей микрофлоры неэффективно, что приводит к развитию микробных биопленок, устойчивых к терапевтическим воздействиям и рецидивированию воспалительного процесса в ране с развитием гнойно-септических осложнений.

Известные способы обработки раневой поверхности в гнойно-некротической фазе (I фаза раневого процесса) заключаются в том, что после хирургической обработки раны на ее поверхность накладывают повязки с лекарственным средством, обладающим широким спектром антимикробного действия, осмотическими свойствами и проявляющим противовоспалительное и обезболивающее действие («Левомеколь», «Левосил», «Диоксиколь» и др.) [Блатун Л.А., Светухин A.M., Пальцин А.А., Ляпунов Н.А., Агафонов В.А. Клинико-лабораторная эффективность современных мазей на полиэтилен-гликолевой основе при лечении гнойных ран. // Антибиотики и химиотерапия, 1999. - №7, - С.25-31].

Известные, традиционно применяемые в клинической практике, способы обработки раневой поверхности в фазе регенерации (II фаза) заключаются в наложении на раневую поверхность повязки с мазью на гидрофильной или гидрофобной эмульсионной основе, которая оказывает слабое осмотическое действие, защищает грануляционную ткань от механического повреждения и действия других отрицательных факторов, подавляет в ране остающихся в небольшом количестве микроорганизмов, предотвращает вторичное инфицирование и стимулирует регенеративные процессы в ране (метилурациловая мазь, «Бетадин», «Эксальб», «Метилдоксициллин» и др.) [Блатун Л.А. Флегмоны и абсцессы - современные возможности лечения. // Лечащий врач, 2002. - №2. - С.30-40].

Способы лечения гнойных ран в III фазе совпадают со способами лечения гнойных ран в фазе регенерации (II фаза раневого процесса) [Багирова В.Л., Демина Н.Б., Кулиниченко Н.А. Мази. Современный взгляд на лекарственную форму. // Фармация. - 2002. - №2. - С.24-26].

Известен способ лечения гнойных ран с применением многокомпонентных мазей на гидрофильной основе («Левомеколь», «Левосин», «Диоксиколь» и др.), где в качестве гидрофильной основы используется смесь полиэтиленоксидов разной молекулярной массы (ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 4:1) [Даценко Б.М., Шалимов О.О., Безуглая Е.П. Теория и практика местного лечения гнойных ран. Киев, 1995. - С.238-260].

Однако известный способ лечения проводится без учета фаз раневого процесса, в связи с чем является не эффективным в фазы регенерации и эпителизации из-за того, что применение мази на основе смеси полиэтиленоксидов пересушивает раневую поверхность (за счет сильного осмотического эффекта) и не влияет на процессы регенерации в ране. Лечение указанным способом не дает желаемого результата еще потому, что процессу регенерации раневой поверхности препятствует развитие хронического воспалительного процесса, поскольку антимикробные препараты, традиционно входящие в состав мази, не оказывают антиперсистентного эффекта на микроорганизмы и не подавляют образование ими биопленок, что приводит к формированию очага хронической персистирующей инфекции и возникновению гнойно-септических осложнений у пациентов.

Известен способ лечения гнойных ран с учетом фаз раневого процесса, включающий хирургическую обработку раневой поверхности и последующее наложение повязки с лекарственными средствами на раневую поверхность: в гнойно-некротическую фазу применяют мази, обладающие высокими осмотическими свойствами («Левомеколь», «Левосин», «Диоксиколь» и др.), а в фазы регенерации и эпителизации - многокомпонентные мази, стимулирующие процессы регенерации в ране (метилурациловая мазь, «Бетадин», «Эксальб», «Метилдоксициллин» и др.) [Блатун Л.А. Флегмоны и абсцессы - современные возможности лечения. // Лечащий врач, 2002. - №2. - С.30-40].

К недостаткам известного способа можно отнести то, что антимикробные препараты, входящие в состав мазей, традиционно применяемые для лечения гнойных ран в I, II и III фазы раневого процесса, не оказывают антиперсистентного эффекта на микроорганизмы, в связи, с чем формируется очаг хронической персистирующей инфекции, препятствующий процессу регенерации в ране вследствие вялотекущего воспалительного процесса.

Наиболее близким к заявляемому способу по совокупности существенных признаков является способ лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей микробной этиологии, включающий хирургическую обработку раны (вскрытие гнойного очага, эвакуацию гноя, некрэктомию, промывание раны раствором антисептика) и наложение на область поражения повязки, пропитанной антибактериальной мазью на гидрофильной основе полиэтиленоксида. В состав мази входит 0,2 г ципрофлоксацина, 5 ME окситоцина, 19,05 г полиэтиленоксида-1500, 76,2 г полиэтиленоксида-400 (патент РФ №2306947, МПК А61K 38/11, А61K 31/47, А61K 31/765, А61Р 31/04, А61В 17/00, 2007).

Недостатками известного способа является ограничение применения мазей на основе смеси полиэтиленоксидов в фазы регенерации и эпителизации ран (II и III фазы), поскольку они пересушивают раневую поверхность за счет высоких осмотических свойств, ухудшая процессы регенерации, и не обладают регенеративной активностью, что увеличивает сроки заживления ран вследствие более длительного течения II и III фаз раневого процесса.

Задачей заявляемого изобретения является повышение эффективности лечения гнойных ран за счет усиления регенеративных процессов в ране во II и III фазы раневого процесса и предотвращения возникновения персистирующей инфекции.

Поставленная задача достигается за счет того, что в способе лечения гнойных ран в эксперименте путем хирургической обработки и последующего наложения повязки с лекарственными средствами на раневую поверхность, в фазы регенерации и эпителизации на раневую поверхность накладывают повязку, пропитанную мазью следующего состава, мас.%:

кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25

ципрофлоксацин - 0,2

окситоцин - 4,55

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что заявляемый способ за счет потенцирования регенеративного и антиперсистентного действия препаратов, предотвращает возникновение персистирующей инфекции, позволяет ускорить регенеративные процессы во II и III фазах раневого процесса и, следовательно, снижает время нахождения больного в стационаре.

Применение заявляемого способа расширяет арсенал средств и методов лечения, применяемых при лечении гнойных ран.

Отличительным признаком предложенного способа является наложение в фазы регенерации и эпителизации (II и III фазы) повязки, пропитанной мазью следующего состава, мас.%:

кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25

ципрофлоксацин - 0,2

окситоцин - 4,55

Кремнийорганический глицерогидрогель («Силативит») - вещество с химической формулой Si(C₃H₇O₃)₄·6С₃Н₈О₃·24Н₂О (Патент РФ 2255939, МКИ C07F 7/04, 2005 г. Рег. №1075114) (патентообладатель - Институт органического синтеза им. И.Я.Постовского Уральского отделения РАН, г. Екатеринбург), представляющее собой гелеобразную полупрозрачную массу белого цвета, без запаха. Обладает ранозаживляющей, регенерирующей, противовоспалительной, противоотечной и антиоксидантной активностью, высокой транскутанной проводимостью различных лекарственных веществ, способностью предохранять ткани от высыхания и отеков, повышать их оксигенацию, структурной совместимостью с липидной составляющей клеточных мембран. При этом не оказывает какого-либо побочного отрицательного действия, стабильно, удобно при хранении и хорошо смывается, хорошо растворяется в 95% спирте и воде и легко передает коже включенные в него лекарственные вещества.

Ципрофлоксацин (1-циклопропил-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-7-(1-пиперазинил)-3-хинолин карбоновой кислоты гидрохлорид моногидрат) относится к монофторхинолонам с широким антибактериальным спектром, включающим грамположительных и грамотрицательных возбудителей гнойных процессов. Производители: Ципролет (Dr. Reddy s, Индия), ципробай, цифран и т.д. Выпускается в таблетированных (250 мг, 500 мг) и инъекционных (2% растворы) формах.

Окситоцин - пептидный гормон задней доли гипофиза (нонапептид), получаемый синтетическим путем, молекулярный вес 1007,2. Производители: химический завод «Гедеон Рихтер» (Венгрия), завод эндокринных препаратов (Москва). Выпускается в ампулах по 1 мл, содержащих 5 ME окситоцина.

Известно применение окситоцина в сочетании с антибиотиками при лечении гнойных заболеваний мягких тканей [Курлаев П.П. Экспериментально-клиническое обоснование применения окситоцина в комплексной антибактериальной терапии гнойных заболеваний мягких тканей: Автореф. канд. мед. наук. - Пермь, 1986 - 24 с.], для стимуляции репаративных процессов в ране [Гавриленко В.Г. Клиническое обоснование применения окситоцина в комплексном лечении диабетических гнойно-некротических поражений стоп: Автореф. канд. мед. наук. - Оренбург, 1999 - 25 с.].

Известно, что окситоцин потенцирует ингибирующее влияние ципрофлоксацина на персистентный потенциал бактериальных патогенов и увеличивает антибактериальную активность антимикробного препарата в отношении возбудителей острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей [Бухарин О.В., Скоробогатых Ю.И., Курлаев П.П. Экспериментальное обоснование эффективности сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином. // Журн. микробиол. 2007. №5, с.70-73].

При гнойно-воспалительных заболеваниях наиболее часто хронизации инфекционного процесса способствует увеличение антилизоцимного признака микроорганизмов возбудителей гнойного раневого процесса, а благодаря образованию ими биопленок увеличивается устойчивость патогенов к действию антибиотиков, антисептиков и факторов естественной защиты организма человека [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: - Медицина; Екатеринбург: Уро РАН, 1999. С.195-231; Lewis K. Persister Cells and the Riddle of Biofilm survival. // Biochemistry, 2005. V.70, No.2. P.267-274].

Авторами экспериментально установлено потенцирование подавляющего эффекта на биопленкообразование и антилизоцимную активность популяции микроорганизмов возбудителей гнойного раневого процесса и стимуляции регенеративных процессов в ткани при использовании комбинации ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем.

На первом этапе исследования оценивали антимикробную активность ципрофлоксацина, окситоцина, кремнийорганического глицерогидрогеля и сочетанного влияния ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем при помощи метода лунок в толще агара [Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. Учеб. для студентов биолог. спец. унтов. 4-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1986. С.160] на штаммах бактерий, наиболее часто встречающихся при гнойном раневом процессе: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosae (по 40 штаммов каждого вида).

Оценивали антимикробное действие ципрофлоксацина (200 мг), окситоцина (5 ME), кремнийорганического глицерогидрогеля и их комбинации, представляющую собой мазь следующего состава, мас.%: кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2 и окситоцин - 4,55. Мазь готовили следующим образом: кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревали на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужали до 37°С, а затем добавляли 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл). Конечная концентрация ципрофлоксацина в мази (200 мг/г) соответствовало рекомендуемой разовой дозе препарата [Vidal 2011. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России // Издательство: АстраФармСервис, 2011. 1728 с.] и окситоцина - минимальной среднетерапевтической дозе 5 ME [Зак В.И., Курлаев П.П. Местное лечение постинъекционных абсцессов комбинацией окситоцина и антибиотиков // Хирургия. - 1985. - №5. - C.112-115].

Установлено, что наиболее выраженное антимикробное действие (угнетение роста 100% исследуемых штаммов бактерий) отмечено при сочетании влияния ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем. Ципрофлоксацин обладал антимикробной активностью в отношении 75% исследуемых штаммов микроорганизмов, кремнийорганический глицерогидрогель - 30% штаммов бактерий, а окситоцин не проявлял антимикробной активности.

На следующем этапе, для определения влияния ципрофлоксацина, окситоцина, кремнийорганического глицерогидрогеля и сочетанного влияния ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем на антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов, были проведены эксперименты in vitro также на штаммах бактерий видов S. aureus, E. coli, P. aeruginosae (по 40 штаммов каждого вида).

Ципрофлоксацин, окситоцин, кремнийорганический глицерогидрогель и приготовленную мазь вносили в питательный бульон в соотношении 1:10 (НПО «Питательные среды», Махачкала), инокулировали исследуемыми штаммами бактерий и культивировали в течение 9-10 часов (до момента перехода штаммов микроорганизмов из логарифмической в стационарную фазу роста популяции). В качестве контроля использовали смесь питательного бульона с изотоническим раствором хлорида натрия и плацебо окситоцина.

Затем полученные бульонные культуры бактерий центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, клетки двукратно отмывали 0,85% раствором хлорида натрия и рассевали на плотном питательном агаре (НПО «Питательные среды», Махачкала).

Антилизоцимную активность (АЛА) и способность к образованию биопленок бактерий (БПО) определяли фотометрическим методом [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. - М.: Медицина, 1999. - С.88-89; O'Toole G.F., Kaplan H.B., Kolter R. Biofilm formation as micribial development. Ann Rev Microbiol, 2000; 54: с.49-79].

О влиянии ципрофлоксацина, окситоцина, кремнийорганического глицерогидрогеля и сочетанного влияния ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем на антилизоцимную активность и биопленкообразование штаммов бактерий S. aureus, E. coli и Р.aeraginosae судили по изменению соотношения штаммов бактерий с низкими, средними и высокими значениями антилизоцимной активности и способности к формированию биопленок. Для выявления статистически значимых различий в сравниваемых группах использовали непараметрический критерий Вилкоксона [Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высшая Школа, 1990. - С.128-134].

Результаты влияния ципрофлоксацина, окситоцина, кремнийорганического глицерогидрогеля и сочетанного влияния ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем на антилизоцимную активность и биопленкообразование штаммов бактерий S. aureus, E. coli и Р.aeruginosae представлены на диаграммах (фиг.1 и 2).

На фиг.1 отображено влияние окситоцина-плацебо, кремнийорганического глицерогидрогеля, окситоцина, ципрофлоксацина и сочетания ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем на антилизоцимную активность бактерий, где по горизонтали обозначено в числителе: 1 - S. aureus, 2 - E.coli, 3 - Р.aeruginosae, а в знаменателе: 1 - контроль (АЛА бактерий до воздействия препаратов), 2 - АЛА после воздействия окситоцина-плацебо, 3 - АЛА после воздействия кремнийорганического глицерогидрогеля, 4 - АЛА после воздействия окситоцина, 5 - АЛА после воздействия ципрофлоксацина, 6 - АЛА после воздействия сочетания ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем.

По вертикали обозначен % бактерий. В столбцах белым цветом обозначены низкие значения АЛА (0-0,8 мкг/мл*ОП), косой штриховкой - средние значения АЛА (0,81-1,5 мкг/мл*ОП), черным цветом - высокие значения АЛА (более 1,5 мкг/мл*ОП).

Как видно из представленных диаграмм, в контроле АЛА исследуемых групп бактерий варьировала: 10% культур S. aureus обладали низкими значениями АЛА, 55% - средними, а 35% - высокими; 15% культур E.coli обладали низкими значениями АЛА, 65% - средними, 20% - высокими; 10% культур Р.aeruginosae обладали низкими значениями АЛА, 65% - средними и 25% - высокими значениями АЛА.

Анализ полученных данных показал, что плацебо-окситоцин не оказывал влияние на АЛА исследуемых бактерий.

Среди всех воздействующих препаратов наиболее выраженное снижение АЛА микроорганизмов вызывало сочетание ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем (столбцы 1/6, 2/6 и 3/6) (р<0,05), под действием которого большинство (от 90% до 100% бактерий) штаммов S. aureus, E.coli и Р.aeruginosae проявляли низкие значения АЛА, а высокие значения АЛА у бактерий отсутствовали.

На фиг.2 отображено влияние окситоцина-плацебо, кремнийорганического глицерогидрогеля, окситоцина, ципрофлоксацина и сочетания ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем на биопленкообразование бактерий, где по горизонтали обозначено в числителе: 1 - контроль (БПО бактерий до воздействия препаратов), 2 - БПО после воздействия окситоцина-плацебо, 3 - БПО после воздействия кремнийорганического глицерогидрогеля, 4 - БПО после воздействия окситоцина, 5 - БПО после воздействия ципрофлоксацина, 6 - БПО после воздействия сочетания ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем.

По вертикали обозначен % бактерий. В столбцах белым цветом обозначены низкие значения БПО (0,2 ед. OD и менее), косой штриховкой - средние значения БПО (0,21-0,4 ед. OD), черным цветом - высокие значения БПО (более 0,4 ед. OD).

Способность к образованию биопленок среди исследуемых микроорганизмов в контроле также различалось: у S. aureus 20% штаммов обладали низкими значениями БПО, 45% - средними, а 35% - высокими значениями БПО; у E.coli 10% штаммов проявляли низкие значения БПО, 60% - средние, а 30% - высокие значения БПО; у Р.aeruginosae 20% штаммов обладали низкими значениями БПО, 60% - средними, а 20% - высокими значениями БПО.

Анализ полученных данных показал, что плацебо-окситоцин не оказывал влияние на БПО исследуемых бактерий.

Среди всех воздействующих препаратов наиболее выраженное снижение БПО исследуемых микроорганизмов вызывало сочетание ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем (столбцы 1/6, 2/6 и 3/6) (р<0,05), под действием которого большинство (от 85±9,0% до 95±5,0% бактерий) штаммов S. aureus, E.coli и Р.aeruginosae проявляли низкие значения БПО, а высокие значения БПО у бактерий отсутствовали.

Эксперименты in vivo проводили на 48 белых беспородных крысах-самцах массой 150 г - 200 г, у которых моделировали гнойную рану. Условия содержания и кормления животных были одинаковыми.

Модель инфицированной раны у крыс создавалась следующим образом: после иссечения кожного лоскута в лопаточной области 2×2 см (400 мм²) до мышечного слоя, проводилось раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера. Раны экспериментальных животных инфицировали штаммом S.aureus 25923 АТСС, изолированным от пациента с гнойным процессом мягких тканей в количестве 10⁹ КОЕ/мл. Операция проводилась под баночным наркозом в нестерильных условиях.

Для проведения эксперимента животные были разделены на три группы.

Во всех трех группах лечение раны начинали при наличии признаков острого гнойного воспаления (гиперемия краев раны, наличие воспалительного отека, гнойный налет, гнойный секрет раны) и осуществляли его на первой фазе раневого процесса традиционными методами путем хирургической обработки раны (вскрытие гнойного очага, эвакуацию гноя, некрэктомию, промывание раны раствором антисептика) и наложения на раневую поверхность повязки с мазью «Левомеколь» один раз в сутки до появления признаков начала фазы регенерации, критериями которой являлись: отсутствие гнойно-некротического отделяемого из раны, образование грануляций и появление краевой эпителизации раны.

В фазы регенерации и эпителизации на раневую поверхность один раз в сутки накладывали повязку:

1) 1 группа - с мазью «Метилдоксициллин» в дозе 1 мг на рану;

2) 2 группа - с комбинацией ципрофлоксацина с окситоцином на основе смеси полиэтиленоксидов (патент РФ №2306947, МПК А61K 38/11, А61K 31/47, А61K 31/765, А61Р 31/04, А61В 17/00, 2007), в дозе 1 мг на рану;

3) 3 группа - с мазью на основе кремнийорганического глицерогидрогеля следующего состава, мас.%: кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2 и окситоцин - 4,55, в дозе 1 мг на рану.

Мазь на основе кремнийорганического глицерогидрогеля готовили следующим образом: кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревали на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужали до 37°С, а затем добавляли 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл).

Состав мази (мас.%): кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25; ципрофлоксацин - 0,2; окситоцин - 4,55.

Курс лечения длился в зависимости от скорости заживления раны.

Декапитацию животных с последующим проведением гистологических исследований ткани регенерата проводили не менее трех раз в каждую из фаз раневого процесса, начиная с 3 суток с момента нанесения раны.

Расплавленный струп вместе с раневым отделяемым удаляли, оставшиеся ткани регенерата вместе с окружающей интактной кожей иссекали секторально, фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-1 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. Процент уменьшения площади раны находили по формуле

где S - площадь предыдущего измерения (в мм²);

S_n - площадь данного измерения (в мм²);

S_t - число дней между измерениями.

Статистическую обработку проводили с вычислением критерия Стьюдента.

Сравнительные результаты лечения трех групп крыс с гнойными ранами мягких тканей представлены в таблице.

Как видно из полученных данных, сроки обнаружения признаков наступления II фазы раневого процесса не отличались во всех сравниваемых группах.

На фазах регенерации и эпителизации гнойных ран у животных признаки вторичного инфицирования раны выявлены у 58% крыс в I группе и лишь в 8,3% случаев во II и III группах.

Численность макрофагов и фибробластов, отражающих регенеративные процессы, происходящие в ране, были достоверно выше у крыс III группы, в сравнении с I и II группой. В результате проведенного лечения гнойных ран у животных III группы полное заживление раны происходило быстрее (на 16,4±0,7 сутки от начала лечения), чем у крыс I и II сравниваемых групп (соответственно на 20,4±2,5 и 21,4±2,5 сутки от начала лечения).

Таким образом, лечение гнойных ран с применением в фазах регенерации и эпителизации новой мази на основе кремнийорганического глицерогидрогеля способствовало стимуляции регенерационных процессов в ткани и приводило к более быстрому заживлению раны: на 4 дня раньше, чем при традиционном лечении мазью «Метилдоксициллин» и на 5 дней раньше, чем при лечении с применением комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на основе смеси полиэтиленоксидов.

Способ осуществляется следующим образом:

1. Под общим эфирным наркозом у белых беспородных крыс в лопаточной области наносят кожную рану до мышцы размером 2×2 см (400 мм²) и производят раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера. На рану пипеткой наносят 0,2 мл взвеси S. aureus, разведенной до 10⁹ КОЕ/мл;

2. В гнойно-некротическую фазу раневого процесса при наличии признаков острого гнойного воспаления (гиперемия краев раны, наличие воспалительного отека, гнойный налет, гнойный секрет раны) осуществляют лечение раны традиционными способами, заключающимися в хирургической обработке (вскрытие гнойного очага, эвакуацию гноя, некрэктомию, промывание раны раствором антисептика) и последующем наложении на раневую поверхность повязки с лекарственным средством, обладающим широким спектром антимикробного действия, осмотическими свойствами и проявляющим противовоспалительное и обезболивающее действие («Левомеколь», «Левосил», «Диоксиколь» и др.). Повязку наносят один раз в сутки до появления признаков начала фазы регенерации. Наступление фазы регенерации определяют по критериям: отсутствие гнойно-некротического отделяемого из раны, образование грануляций и появление краевой эпителизации раны;

3. Готовят мазь следующего состава (мас.%): кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25; ципрофлоксацин - 0,2; окситоцин - 4,55. Для этого кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревают на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужают до 37°С, а затем добавляют 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл);

4. При наступлении фазы регенерации на рану накладывают повязку с полученной мазью на сутки;

5. Перевязки проводят ежедневно до заживления раневой поверхности, о котором судят по наличию полной эпителизации поверхности раны.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1

Лабораторное животное №15.

Под общим эфирным наркозом у белой беспородной крысы в лопаточной области наносили кожную рану до мышцы размером 2×2 см (400 мм²) и производили раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера. На рану пипеткой наносили 0,2 мл взвеси S. aureus, разведенной до 10⁹ КОЕ/мл.

В I фазу раневого процесса, когда рана принимала признаки острого гнойного воспаления (гиперемия краев раны, наличие воспалительного отека, гнойный налет, гнойный секрет раны), начинали лечение раны традиционным способом, заключающимся в хирургической обработке и последующем наложении на раневую поверхность повязки с мазью на водорастворимой основе «Левомеколь» один раз в сутки.

Бактериологическое исследование гнойно-некротической фазы раневого процесса проводили на 3 день от начала лечения. Определяли показатель микробной обсемененности раны (ПМО), антилизоцимную активность (АЛА) и биопленкообразование (БП) штамма S. aureus.

На 3 сутки показатель микробной обсемененности стафилококка составлял 5*10⁷ КОЕ/мл, антилизоцимная активность S. aureus была 1,53 мкг/мл*ОП, способность к образованию биопленок - 0,58 ед. ОП.

Лечение проводили до появления признаков начала фазы регенерации. Наступление фазы регенерации определяли по критериям: отсутствие гнойно-некротического отделяемого из раны, образование грануляций и появление краевой эпителизации раны.

Фаза регенерации наступила на 7 сутки от начала лечения. В это время отмечалась небольшая отечность тканей, под краями раны имелось небольшое количество гнойного содержимого, наблюдалась краевая эпителизация раны.

Бактериологическое исследование раны на 7 сутки показало наличие стафилококка в ране, численность которого уменьшилась в сравнении с начальными данными (5*10⁵ КОЕ/мл), но факторы персистенции и способность к образованию биопленок увеличились и составили соответственно 1,0 мкг/мл*ОП и 1,1 ед. ОП.

С наступлением фазы регенерации (7 сутки с начала лечения) на раневую поверхность накладывают повязку, пропитанную мазью следующего состава (мас.%): кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2 и окситоцин - 4,55.

Мазь готовили следующим образом: кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревали на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужали до 37°С, а затем добавляли 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл).

Повязку меняли ежедневно, 1 раз в день.

На 10 сутки при площади раны, составляющей 65%, был проведен контрольный бактериологический посев. Рост S. aureus в ране отсутствовал.

Завершение эпителизации раневой поверхности отмечено к 16 суткам.

Пример 2

Лабораторное животное №24.

Под общим эфирным наркозом у белой беспородной крысы в лопаточной области наносили кожную рану до мышцы размером 2×2 см (400 мм²) и производили раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера. На рану пипеткой наносили 0,2 мл взвеси S. aureus, разведенной до 10⁹ КОЕ/мл.

В I фазу раневого процесса, когда рана принимала признаки острого гнойного воспаления (гиперемия краев раны, наличие воспалительного отека, гнойный налет, гнойный секрет раны) начинали лечение раны традиционным способом, заключающимся в хирургической обработке и последующем наложении на раневую поверхность повязки с мазью «Диоксиколь» один раз в сутки.

При бактериологическом обследовании раны в гнойно-некротическую фазу на 3 сутки ПМО стафилококка составил 1*10⁵ КОЕ/мл, АЛА - 1,57 мкг/мл*ОП, БПО - 0,53 ед. ОП.

Фаза регенерации наступила на 6 сутки: отмечалась небольшая отечность тканей, под краями раны имелось небольшое количество гнойного содержимого, наблюдалась краевая эпителизация раны.

При бактериологическом исследовании раны на 6-е сутки отмечалось незначительное снижение ПМО S. aureus (1*10⁴ КОЕ/мл) и увеличение значений АЛА и БП S. aureus (2 мкг/мл*ОП, - 1,05 ед. соответственно).

С наступлением фазы регенерации (6 сутки с начала лечения) на раневую поверхность накладывали повязку, пропитанную мазью следующего состава (мас.%): кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2 и окситоцин - 4,55.

Мазь готовили следующим образом: кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревали на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужали до 37°С, а затем добавляли 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл).

Повязку меняли ежедневно, 1 раз в день.

На 10 сутки, при площади раны, составляющей 65%, был проведен контрольный бактериологический посев. Рост S. aureus в ране отсутствовал.

Завершение эпителизации раневой поверхности отмечено на 15 сутки от начала лечения.

Пример 3

Лабораторное животное №30.

Под общим эфирным наркозом у белой беспородной крысы в лопаточной области наносили кожную рану до мышцы размером 2×2 см (400 мм²) и производили раздавливание краев раны и мышцы зажимом Кохера. На рану пипеткой наносили 0,2 мл взвеси S. aureus, разведенной до 10⁹ КОЕ/мл.

В I фазу раневого процесса, когда рана принимала признаки острого гнойного воспаления (гиперемия краев раны, наличие воспалительного отека, гнойный налет, гнойный секрет раны) начинали лечение раны традиционным способом, заключающимся в хирургической обработке и последующем наложении на раневую поверхность повязки, пропитанной мазью «Синтомицин» один раз в сутки.

При бактериологическом обследовании раны на 3 сутки ПМО стафилококка составил 1*10⁷ КОЕ/мл, АЛА - 1,71 мкг/мл*ОП, БПО - 0,67 ед. ОП.

Фаза регенерации наступила на 9 сутки: отмечалась небольшая отечность тканей, под краями раны имелось небольшое количество гнойного содержимого, наблюдалась краевая эпителизация раны.

Бактериологическое обследование на 9 сутки показало снижение ПМО S. aureus (1*10⁵ КОЕ/мл) и увеличение АЛА и БПО стафилококка (2,1 мкг/мл*ОП, - 1,3 ед. ОП соответственно).

С наступлением фазы регенерации (9 сутки с начала лечения) на раневую поверхность накладывали повязку, пропитанную мазью следующего состава (мас.%): кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2 и окситоцин - 4,55.

Мазь готовили следующим образом: кремнийорганический глицерогидрогель в количестве 95,25 г прогревали на водяной бане при 50°С до образования однородной прозрачной массы в течение 20 минут, остужали 40 минут до 37°С, а затем добавляли 4 мл 5% ципрофлоксацина (0,2 г) и 1 мл окситоцина (5 МЕ/мл).

Повязку меняли ежедневно, 1 раз в день.

Начато лечение путем наложения повязок с новой мазью на основе комбинации ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем.

На 13 сутки при площади раны, составляющей 70%, был проведен контрольный бактериологический посев. Рост S. aureus в ране отсутствовал.

Завершение эпителизации раневой поверхности получено на 18 сутки от начала лечения.

Предлагаемый способ лечения гнойных ран в эксперименте позволяет ускорить регенеративные процессы во II и III фазах раневого процесса, предотвратить возникновение персистирующей инфекции и гнойно-септических осложнений и, следовательно, снизить сроки лечения. Применение заявляемого способа расширяет арсенал средств и методов лечения, применяемых при лечении гнойных ран.

Таблица Сравнительные результаты лечения крыс с гнойными ранами мягких тканей. Фразы раневого процесса Группы крыс
Показатели группа 1 (n-12) группа 2 (n=12) группа 3 (n=12) I фаза (гнойно-некротическая) Высеваемость микрофлоры на 3-5 день лечения (число крыс) 3 3 3 ПМО бактерий 1*10⁵-1*10⁷ КОЕ/мл 1*10⁵-1*10⁷ КОЕ/мл 1*10⁵-1*10⁷ КОЕ/мл АЛА бактерий 1,54 мкг/мл*ОП 1,43 мкг/мл*ОП 1,49 мкг/мл*ОП Способность к образованию биопленок бактерий 0,6 ед. ОП 0,59 ед. ОП 0,6 ед. ОП Сроки очищения ран от начала лечения (сутки) 7,8±0,8 7,8±0,8 7,8±0,8 Сроки нормализации показателей периферической крови (дни) 4,2±0,5 4,2±0,5 4,2±0,5 Сроки появления краевой эпителизации (дни) 8,9±0,8 8,9±0,8 8,9±0,8 II и III фазы (регенерации иэпителизации) Присоединения вторичной инфекции (% крыс) 58,3% 8,3%* 8,3%* ПМО бактерий 1*10⁵ КОЕ/мл 1*10¹-1*10² КОЕ/мл 1*10¹-1*10² КОЕ/мл АЛА бактерий 2,02 мкг/мл*ОП 0,61 мкг/мл*ОП 0,57 мкг/мл*ОП Способность к формированию биопленок бактерий 0,69 ед. ОП 0,27 ед. ОП 0,23 ед. ОП Макрофаги (абс.) в условных полях зрения 3,7±0,8 10,8±1,9* 16,6±4,1* Фибробласты (малодифференцированные), % 1,7±0,2 2,7±0,1* 3,9±0,2* Пролиферирующие эпидермоциты единич. клетки + + Сроки полного заживления раны (дни) 21,4±2,5 20,4±2,5 16,4±0,7* Примечание: * - р<0,01 по сравнению с основной группой

Изобретение относится к области медицины. Способ заключается в том, что в фазы регенерации и эпителизации на раневую поверхность накладывают повязку, пропитанную мазью следующего состава, мас.%: кремнийорганический глицерогидрогель - 95,25, ципрофлоксацин - 0,2, окситоцин - 4,55. Способ позволяет ускорить регенеративные процессы во II и III фазах раневого процесса, предотвратить возникновение персистирующей инфекции и гнойно-септических осложнений, сократить сроки лечения. 2 ил., 3 пр., 1 табл.

Способ лечения гнойных ран в эксперименте путем хирургической обработки и последующего наложения повязки с лекарственными средствами на раневую поверхность, отличающийся тем, что в фазы регенерации и эпителизации на раневую поверхность накладывают повязку, пропитанную мазью следующего состава, мас.%:
кремнийорганический глицерогидрогель 95,25 ципрофлоксацин 0,2 окситоцин 4,55