СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФОРМЫ ТЯЖЕСТИ ВЫЗВАННОГО ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА-БАРР ОСТРОГО ИНФЕКЦИОННОГО МОНОНУКЛЕОЗА У ДЕТЕЙ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к детским инфекционным болезням, может быть использовано для диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

В последние годы повсеместно регистрируется повышение заболеваемости инфекционным мононуклеозом. По данным Роспотреб-надзора по Ростовской области показатель заболеваемости инфекционным мононуклеозом в Ростовской области в 2000 г. составлял 3,79, а в 2010 г. - уже 30,64 на 100 тыс. детского населения (федеральное статистическое наблюдение - форма №2 «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях»),

Инфекционный мононуклеоз - заболевание, характеризующееся лихорадкой, увеличением лимфатических узлов, поражением ротоглотки, гепатоспленомегалией и появлением в периферической крови атипичных мононуклеаров. Наиболее патогномоничным этиологическим агентом данного заболевания является вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ). Инфекционный мононуклеоз, вызванный ВЭБ, может иметь острое и хроническое течение (Инфекционные болезни у детей: учебное пособие / Э.Н.Симованьян и др.; под ред. Симованьян Э.Н. - Изд. 2-е, доп. и перераб. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2011. С.630).

У больных острым инфекционным мононуклеозом характерными клиническими признаками являются острое начало, фебрильная лихорадка, выраженная интоксикация, острый тонзиллит, гепатоспленомегалия, лимфоаденопатия (Перадзе Х.Д. «Клинико-лабораторные особенности острых и хронических форм Эпштейна-Барр вирусной инфекции (инфекционного мононуклеоза) у подростков и лиц молодого возраста», Автореф. дис. … канд. мед. наук, Санкт-Петербург, 2004, с.8).

Различают легкую, среднетяжелую, тяжелую формы вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза (Инфекционные болезни у детей: учебник для педиатрических факультетов медицинских вузов/под ред. проф. В.Н.Тимченко. - 3-е изд., испр. и доп. - Спб.: СпецЛит, 2008. С.228). В литературе описано большое количество наблюдений среднетяжелых и тяжелых форм Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза, которые чаще всего обусловливают переход в хроническое течение, при этом имеются сведения о летальных исходах вследствие разрыва селезенки, стеноза гортани и поражения центральной нервной системы (Инфекционные болезни у детей: учебник для педиатрических факультетов медицинских вузов / под ред. проф. В.Н.Тимченко. - 3-е изд., испр. и доп. - Спб.: СпецЛит, 2008. С.228).

Поэтому очень важно своевременно диагностировать среднетяжелую и тяжелую формы тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр, для назначения адекватного лечения и предупреждения неблагоприятных последствий.

Проведенный поиск по научно-медицинской и патентной литературе выявил различные способы диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

В монографии Тимченко В.Н. (Инфекционные болезни у детей: учебник для педиатрических факультетов медицинских вузов/под ред. проф. В.Н.Тимченко. - 3-е изд., испр. и доп. - Спб.: СпецЛит, 2008. С.228) описан способ определения формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза на основании анализа клинических критериев. При условии, что температура тела больного выше 38,5°С, имеют место головная боль, снижение аппетита, недомогание, значительное затруднение носового дыхания, отечность лица, значительное увеличение размеров лимфатических узлов шеи, печени и селезенки, лакунарный тонзиллит, гипертрофия небных миндалин 2-3 степени, жалобы на боль в горле при глотании, диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

При условии, что температура тела больного 39,6°С и более, имеют место вялость, адинамия, рвота, головная боль, анорексия, одутловатость и пастозность лица, отсутствие носового дыхания, значительное увеличение лимфатических узлов шеи, тяжелый лакунарный тонзиллит, выраженная гепатоспленомегалия, диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Недостатком этого способа является его низкая достоверность, обусловленная отсутствием четких клинических критериев, что не позволяет достоверно диагностировать формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Патентом РФ №2172956 (2001 г., БИПМ №24) защищен «Способ диагностики тяжелых форм инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр у детей». Способ предусматривает определение в сыворотке крови специфических иммунных комплексов с данным ДНК-содержащим вирусом по увеличению активности экзогенного комплемента при одновременном внесении его в реакцию со специфическими антителами (СИК-1) или вирусом Эпштейна-Барр (СИК-2) с дальнейшим расчетом по формуле активности иммунных комплексов и дифференцировку тяжелых форм от легких по наличию в крови специфических иммунных комплексов СИК-1 более 0,10 относительных единиц или СИК-2 более 0,20 относительных единиц.

Недостатком способа является недостаточная его достоверность, так как невозможно с его помощью дифференцированно диагностировать тяжелую и среднетяжелую формы заболевания.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является защищенный патентом РФ №2360255 (2009 г., БИПМ №18) «Способ прогнозирования тяжести инфекционного мононуклеоза различной этиологии у детей», в котором описан способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей, предусматривающий исследование цитокинов в сыворотке крови больного. Способ осуществляют следующим образом: с помощью метода сэндвич-варианта твердофазного иммунофер-ментного анализа с использованием коммерческих тест-систем производства Санкт - Петербургской фирмы ООО «Цитокин» в сыворотке крови больного исследуют цитокины: ИЛ-2, ИЛ-6 и ИЛ-8 и определяют их концентрацию. При получении следующих показателей при первом обследовании (с 1 по 3 день болезни) при ИЛ-6 ниже 160 пг/мл, ИЛ-8 ниже 200 пг/мл, ИЛ-2 ниже 20 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза; при уровне сывороточных цитокинов в начале заболевания (с 1 по 3 день болезни) ИЛ-6 выше 1075 пг/мл, ИЛ-8 выше 910 пг/мл,. ИЛ-2 выше 70 пг/мл диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр хронического инфекционного мононуклеоза в стадии реактивации.

Недостатком прототипа являются недостаточная достоверность и ограниченные функциональные возможности способа, обусловленные возможностью диагностики у больных с вызванным вирусом Эпштейна-Барр острым инфекционным мононуклеозом только среднетяжелой формы заболевания, хотя именно тяжелая форма чаще всего приводит к неблагоприятным последствиям, в том числе к хронизации процесса.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа диагностики, позволяющего диагностировать тяжелую и среднетяжелую формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей.

Техническим результатом изобретения, представляющим собой характеристику технического явления или эффекта, объективно проявляющегося при осуществлении заявляемого способа, является повышение достоверности и расширение функциональных возможностей диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей.

Технический результат достигается тем, что у ребенка с вызванным вирусом Эпштейна-Барр острым инфекционным мононуклеозом исследуют цитокины в сыворотке крови. В сыворотке крови определяют концентрации интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и рецепторного антагониста интерлейкина-1β (РА ИЛ-1β). При выполнении условия (ИЛ-1β)≥20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)≤1197 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза. При выполнении условия (ИЛ-1β)<20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)>1197 пг/мл диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Подробное описание способа.

У пациента производят забор крови из локтевой вены утром натощак в количестве 3,0 мл в пластмассовую пробирку. Затем известным методом (www.ascmed.web.ur.ru/info/hormones/methods.htm) получают сыворотку крови.

С помощью набора реагентов А-8766 для иммуноферментного определения концентрации интерлейкина-1 бета (ИЛ-1β) в сыворотке крови человека «ИНТЕРЛЕЙКИН-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определяют концентрацию ИЛ-1β.

С помощью набора реагентов А-8764 для иммуноферментного определения концентрации рецепторного антагониста интерлейкина-1 бета (РА ИЛ-1β) в сыворотке крови человека «РЕЦЕПТОРНЫЙ АНТОГОНИСТ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определяют концентрацию РА ИЛ-1β.

При выполнении условия (ИЛ-1β)≥20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)≤1197 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

При выполнении условия (ИЛ-1β)<20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)>1197 пг/мл диагностируют тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Практическая реализуемость предлагаемого способа иллюстрируется примерами из клинической практики:

Пример 1: больная Ю., 4 лет, история болезни №1029, поступила в детское инфекционное отделение муниципального лечебно-профилактического учреждения здравоохранения (МЛПУЗ) «Городская больница №1 им. Семашко Н.А.» г.Ростова-на-Дону на 4-й день болезни с жалобами на повышение температуры тела до фебрильных цифр, боль при глотании, затрудненное носовое дыхание, «храп» во сне, вялость, сонливость, снижении аппетита.

Объективно при поступлении: общее состояние ребенка средней тяжести. Температура тела - 38,6°С. Отмечалось затруднение носового дыхания. Кожные покровы бледные без патологических элементов. Слизистая ротоглотки была гиперемирована, по ходу лакун небных миндалин желтоватого цвета налеты, которые легко снимались шпателем без кровоточивости. Пальпировались подчелюстные лимфоузлы - умеренно-болезненные до 2,0 см, задне - и переднешейные - безболезненные до 1,5 см в виде «цепочки», не спаянные между собой и окружающими тканями, кожа над ними была не изменена. Печень пальпировалась на 2 см ниже реберной дуги, селезенка - на 1 см.

В крови больного были выявлены маркеры ВЭБ инфекции: anti-VEB-VCA IgM, ДНК ВЭБ, что в совокупности с клинической картиной свидетельствовало о наличии вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Для уточнения диагноза и определения формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза больному было проведено исследование цитокинов в сыворотке крови согласно заявляемому способу.

У больного произвели забор крови из локтевой вены утром натощак в количестве 3,0 мл в пластмассовую пробирку. Затем известным методом (www.ascmed.web.ur.ru/info/hormones/methods.htm) получили сыворотку крови.

С помощью набора реагентов А-8766 для иммуноферментного определения концентрации интерлейкина-1 бета в сыворотке крови человека «ИНТЕРЛЕЙКИН-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определили концентрацию интерлейкина-1β (ИЛ-1β). Был получен следующий результат: (ИЛ-1β)=32 пг/мл.

С помощью набора реагентов А-8764 для иммуноферментного определения концентрации рецепторного антагониста интерлейкина-1 бета в сыворотке крови человека «РЕЦЕПТОРНЫЙ АНТАГОНИСТ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определили концентрацию рецепторного антагониста интерлейкина-1β (РА ИЛ-1β). Был получен следующий результат: (РА ИЛ-1β)=720 пг/мл.

Поскольку было выполнено условие: (ИЛ-1β)=32>20 (пг/мл) и (РА ИЛ-1β)=720<1197 (пг/мл), ребенку был поставлен окончательный диагноз: острый инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр, среднетяжелая форма.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагностики формы тяжести заболевания.

Пример 2: больной Д., 5 лет, история болезни №857, поступил в детское инфекционное отделение МЛПУЗ «Городская больница №1 им. Семашко Н.А.» г.Ростова-на-Дону на 3-й день болезни с жалобами на повышение температуры тела до фебрильных цифр, боль при глотании, выраженное затруднение носового дыхания, «храп» во сне, вялость, сонливость, снижении аппетита.

Объективно при поступлении: общее состояние тяжелое. Температура тела - 39,7°С. Отмечались вялость, «храпящее» дыхание с открытым ртом. Кожные покровы бледные без патологических элементов, отмечалась пастозность лица. Слизистая ротоглотки ярко гиперемирована, гипертрофированные миндалины полностью покрыты желтоватого цвета налетами, легко снимающиеся шпателем без кровоточивости. Подчелюстные лимфоузлы болезненные до 2,5 см, задне - и переднешейные безболезненные спаяны в «пакеты», кожа над ними не изменена, паховые до 1,0 см, безболезненные. Печень пальпировалась на 6 см ниже реберной дуги, селезенка - на 4 см.

В крови больного были выявлены маркеры ВЭБ инфекции: anti-VEB-VCA IgM, anti-VEB-EA IgG, ДНК ВЭБ, что в совокупности с клинической картиной свидетельствовало о наличии вызванного вирусом Энштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Для уточнения диагноза и определения формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза больному было проведено исследование цитокинов в сыворотке крови согласно заявляемому способу.

У больного произвели забор крови из локтевой вены утром натощак в количестве 3,0 мл в пластмассовую пробирку. Затем известным методом (www.ascmed.web.ur.ru/info/hormones/methods.htm) получили сыворотку крови.

С помощью набора реагентов А-8766 для иммуноферментного определения концентрации интерлейкина-1 бета в сыворотке крови человека «ИНТЕРЛЕЙКИН-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определили концентрацию интерлейкина-1β (ИЛ-1β). Был получен следующий результат: (ИЛ-1β)=12 пг/мл.

С помощью набора реагентов А-8764 для иммуноферментного определения концентрации рецепторного антагониста интерлейкина-1 бета в сыворотке крови человека «РЕЦЕПТОРНЫЙ АНТАГОНИСТ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 бета-ИФА-БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-бест», г.Новосибирск, по методике, описанной в пункте 2.1 инструкции по применению, определили концентрацию рецепторного антагониста интерлейкина-1β (РА ИЛ-1β). Был получен следующий результат: (РА ИЛ-1β)=2120 пг/мл.

Поскольку было выполнено условие: (ИЛ-1β)=12<20 (пг/мл) и (РА ИЛ-1β)=2120>1197 (пг/мл), ребенку был поставлен окончательный диагноз: острый инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр, тяжелая форма.

Больному было назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагностики формы тяжести заболевания.

В 6-м детском инфекционном отделении МЛПУЗ «Городская больница №1 им. Н.А.Семашко» нами с помощью предлагаемого способа было обследовано 50 детей. У 31 ребенка была диагностирована среднетяжелая форма, у 19 - тяжелая форма вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза. Всем детям в зависимости от формы тяжести заболевания было назначено соответствующее лечение, результаты которого во всех случаях подтвердили достоверность диагностирования согласно заявляемому способу формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей с высокой степенью достоверности позволяет диагностировать среднетяжелую и тяжелую формы тяжести острого инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна-Барр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детским инфекционным болезням, и может быть использовано для диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей. Сущность способа: у больного ребенка исследуют сыворотку крови, в которой определяют концентрацию цитокинов: интерлейкина-1β (ИЛ-1β), пг/мл и рецепторного антагониста интерлейкина-1β (РА ИЛ-1β), пг/мл. При выполнении условия (ИЛ-1β)>20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)≤1197 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза. Предлагаемый способ с высокой степенью достоверности позволяет диагностировать формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза. 2 пр.

Способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза у детей, предусматривающий исследование цитокинов в сыворотке крови больного, отличающийся тем, что определяют концентрации интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и рецепторного антагониста интерлейкина-1β (РА ИЛ-1β) и при выполнении условия (ИЛ-1β)≥20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)≤1197 пг/мл диагностируют среднетяжелую форму, при выполнении условия (ИЛ-1β)<20 пг/мл и (РА ИЛ-1β)>1197 пг/мл - тяжелую форму вызванного вирусом Эпштейна-Барр острого инфекционного мононуклеоза.