ПРИМЕНЕНИЕ БЕТА-БЛОКАТОРА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМАНГИОМ Российский патент 2013 года по МПК A61K45/00 A61K31/138 A61P35/00 A61P9/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к применению бета-блокатора для изготовления лекарственного средства для лечения гемангиом, например гемангиом у младенцев.

Кроме того, раскрыт способ для лечения гемангиом с использованием настоящего изобретения.

В следующем далее тексте ссылки в квадратных скобках представляют собой ссылки, прилагаемые к цитируемым документам и публикациям, также перечисленным в ссылках после раздела "Примеры" в описании.

Предшествующий уровень техники

Капиллярные гемангиомы у младенцев (IH), гемангиомы у детей наиболее часто обнаруживаются на коже и в печени. IH капиллярные гемангиомы у младенцев (IH) представляют собой наиболее частые опухоли мягких тканей у младенцев, возникающие у 4-10% детей в возрасте до 1 года, как описано в Frieden IJ et al. "Infantile hemangiomas: current knowledge, future directions, Proceedings of a research workshop on infantile hemangiomas", Pediatr Dermatol 2005; 22:383-406 [1].

IH состоят из сложной смеси клеточных типов, включая большинство эндотелиальных клеток, ассоциированных с перицитами, дендритными клетками и тучными клетками. Эндотелиальные клетки, происходящие из пролиферирующих гемангиом, являются клональными по происхождению, как раскрыто в документе [1] и в Bielenberg D.R. et al, "Progressive growth of infantile cutaneous hemangiomas is directly correlated with hyperplasia and angiogenesis of adjacent epidermis and inversely correlated with expression of the endogenous angiogenesis inhibitor", INF-beta. Int. J. Oncol.; 14:401-408 [10], Boye E, et al. Clonality and altered behaviour of endothelial cells from hemangiomas. J Clin Invest 2001; 107:745-52 [9], свидетельствуя о том, что гемангиомы возникают в результате клональной экспансии эндотелиальных клеток-предшественников, которые могут происходить из кроветворной стволовой клетки, как раскрыто в [1].

IH эндотелиальные клетки демонстрируют отличительный молекулярный фенотип, характеризующийся иммуногистохимической позитивностью в документе [1]: индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO) и LYVE-1 являются позитивными в ранней фазе IH и утрачиваются во время созревания до фенотипа кровеносных сосудов, переносчик глюкозы 1 (Glut-1), Lewis Y Ag (Le Y), FcRyll, мерозин, CCR6 и CD15.

Регуляторы роста и инволюции IH до сих пор плохо изучены, но продемонстрировано, что во время их фазы роста задействованы два основных проангиогенных фактора: основной фактор роста фибробластов (bFGF) и фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), которые присутствуют in situ, но также в крови и моче, как раскрыто в документе [1] и в Mancini A.J. et al, "Proliferation and apoptosis within juvenile capillary hemangiomas", A.m. J. Dermatopathol. 1996; 18:505-514 [11].

Кроме того, гибридизация in situ с рецептором VEGF (VEGF-R) в пролиферативной IH продемонстрировала, что VEGF-R равномерно распространен в гемангиоме и не собирается в кровеносных сосудах.

Гистологические исследования продемонстрировали, что во время фазы роста IH эндотелиальные клетки и интерстициальные клетки находятся в состоянии пролиферации (окрашивание MIB1 является выраженно положительным), как раскрыто в Mancini et al. Proliferation and apoptosis within juvenile capillary hemangiomas. Am J Dermatopathol 1996; 18:505-14 [10], а с другой стороны, во время фазы инволюции клетки демонстрируют маркеры апоптоза, как раскрыто в [10] и Razon M.J. et al, "Increased apoptosis coincides with onset of involution in infantile hemangioma", Microcirculation 1998; 5:189-195 [11]. Одна из гипотез для объяснения апоптоза эндотелиальных клеток в капиллярных гемангиомах представляет собой экспрессию ICAM-1 на клеточной поверхности, но альтернативная возможность может представлять собой утрату стимулирующих факторов, таких как VEGF [1].

Адренергическая система представляет собой основной регулятор сердечной и сосудистой функции. Капиллярные эндотелиальные клетки экспрессируют бета-2-адренергические рецепторы, как раскрыто в D'Angelo G. et al. "cAMP-dependant protein kinase inhibits the mitogenic action of vascular endothelial growth factor and fibroblast growth factor in capillary endothelial cells by blocking Raf activation", J. Cell Biochem. 1997; 67:353-366 [13], которые модулируют высвобождение NO, вызывая зависимую от эндотелия вазодилатацию. Кроме того, бета-адренергические рецепторы относятся к семейству связанных с G-белком рецепторов, и при их активации адренергическими катехоламинами они могут способствовать серии внутриклеточных путей передачи сигнала, как раскрыто в Laccarino G, et al. Ischemic neoangiogenesis enhanced by beta2-adrenergic receptors overexpression: a novel role for the endothelial adrenergic system. Circ Res 2005; 97:1182-1189 [12] и [13]. Стимуляция бета-рецептора может вызывать модуляцию путей передачи сигнала для ангиогенных факторов, таких как VEGF или bFGF, как раскрыто в [13]. Продемонстрировано, что увеличение уровней сАМР (циклический аденозинмонофосфат) ингибирует вызванную VEGF и bFGF пролиферацию эндотелиальных клеток. Фармакологические или опосредованные бета-адренергическими рецепторами увеличения сАМР блокируют митоген-индуцируемую активацию сигнального пути МАРK (митоген-активируемая протеинкиназа), приводя к блокированию активности Raf-1 путем увеличения активности РKА (протеинкиназы A) [13].

Кроме того, продемонстрировано, что бета-блокада может индуцировать апоптоз культивируемых капиллярных эндотелиальных клеток, как раскрыто в Sommers Smith S.K. et al, "Beta blockade induces apoptosis in cultured capillary endothelial cells", In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 2002; 38:298-304 [14].

Несмотря на их доброкачественное самоограничивающееся развитие, обычная IH изредка ответственна во время своей пролиферативной фазы за локальные осложнения, такие как изъязвление или кровоизлияние. Так называемая «тревожная» IH, раскрытая, например в Enjolras O. et al. "Management of alarming hemangiomas in infancy: a review of 25 cases", Pediatrics 1990; 85:491-8 [4], может нарушать жизненные или сенсорные функции, особенно тогда, когда она представлена соответственно в верхних дыхательных путях и глазничных областях.

Кроме того, IH вызывает по меньшей мере временное косметическое уродство, которое запускает психологические осложнения сначала у родителей, а позже и у пораженных детей, как раскрыто в документе [1] и в Tanner J.L. et al, "Growing up with a facial hemangioma: parent and child coping and adaptation, Pediatrics", 1998; 101:446-452 [2].

Системно вводимые или вводимые внутрь поврежденных тканей кортикостероиды используются в качестве средств лечения первой линии защиты при проблемных поражениях во время пролиферативной фазы, как раскрыто в Bennett ML et al. Oral corticosteroid use is effective for cutaneous hemangiomas, An evidence-based evaluation, Arch. Dermatol. 2001; 137:1208-13 [3].

Тем не менее даже при высоких дозировках (от 2 до 5 мг/кг массы тела/сутки) степень ответа на лечение варьирует от 30 до 60%, как раскрыто в документах [1], [3] и [4]. Побочные эффекты обычно являются временными и ограниченными, такими как «кушингоидное лицо», раздражительность, подавление роста, но могут вызывать более опасную гипертрофическую миокардиопатию.

Другие возможности лечения включают интерферон альфа-2a и 2b (от 40 до 50% полного ответа при введении дозы 1-3 мЕ/м²/сутки) (миллион единиц на м²), но при этом есть сообщения о риске нейротоксичности у детей в возрасте до 1 года, как раскрыто в документах [1] и [5]; также используют винкристин благодаря его антимитотическим свойствам, как раскрыто в документе [1], однако его хорошо известными недостатками являются периферическая невропатия, констипация и гематологическая токсичность.

Кроме того, новые антиангиогенные факторы, такие как авастатин, противопоказаны маленьким детям ввиду их побочных эффектов.

Кроме того, поскольку большая часть пациентов, получающих лечение, представляют собой младенцев или маленьких детей, толерантность пациентов к известным соединениям приобретает большую важность.

Таким образом, имеется потребность в более эффективных и менее токсичных соединений для лечения IH, в частности капиллярных гемангиом у младенцев. Настоящее изобретение удовлетворяет этим и другим потребностям.

Описание изобретения

Пропранолол представляет собой хорошо переносимый неселективный бета-блокатор, обычно используемый у детей младшего возраста при кардиологических показаниях, как раскрыто в Villain Е et al в Low incidence of cardiac events with beta-blocking therapy in children with long QT syndrome, Eur. Heart J. 2004; 25:1405-11 [6], в Fritz K.I. et al. Effect of beta-blockade on symptomatic dexamethasone-induced hypertrophic obstructive cardiomyopathy in premature infants: three case reports and literature review. J Perinatol 1998; 18:38-44 [7], и в Kilian K. в Hypertension in neonates causes and treatments, J.Perinat Neonatal Nurs. 2003; 17:65-74 [8]. Но для этого бета-блокатора и бета-блокаторов в целом никогда не проводились эксперименты, а также не раскрыто применение в лечении гемангиом.

Авторы настоящего изобретения впервые провели эксперименты и обнаружили, что бета-блокаторы могут быть весьма эффективными для контроля роста IH и даже для лечения IH. Наблюдения и результаты экспериментов приведены в настоящей заявке на изобретение.

Соответственно в первом аспекте настоящего изобретения предложено применение бета-блокатора для изготовления лекарственного средства для лечения гемангиом.

"Бета-блокатор" также относится здесь к агенту, блокирующему бета-рецептор, агенту, блокирующему бета-адренергический рецептор, бета-блокирующему агенту, бета-блокатору или агенту, блокирующему бета-адренергический рецептор, или любому другому обозначению, указывающему на химическое вещество, которое ингибирует связывание агонистов, как природных, так и искусственных, с бета-адренергическими рецепторами любого типа (бета-1, бета-2, бета-3 или другие).

В соответствии с настоящим изобретением бета-блокатор может представлять собой неселективный бета-блокатор, бета-1-селективный бета-блокатор, смесь альфа-1/бета-адренергических антагонистов, бета-2-селективный бета-блокатор. Бета-блокатор также может представлять собой смесь двух или более чем двух бета-блокаторов.

Примеры бета-блокатора, который может быть использован в настоящем изобретении, раскрыты в Goodman and Gilman's the pharmacological basis of therapeutics, eleventh edition, chapter 10, pp 271-295, 2006 [19].

Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением когда используют неселективный бета-блокатор, тогда он может быть выбран, например, из группы, содержащей алпренолол, буциндолол, картеолол, карведилол, лабеталол, левобунолол, медроксалол, мепиндолол, метипранолол, надолол, окспренолол, пенбутолол, пиндолол, пропафенон (пропафенон представляет собой лекарственное средство, блокирующее натриевые каналы, которое также представляет собой антагонист бета-адренергического рецептора), пропранолол, соталол, тимолол или их фармацевтически приемлемые соли. Может быть использована их смесь.

Когда бета-1-селективный бета-блокатор используют в соответствии с настоящим изобретением, тогда он может быть выбран, например, из группы, содержащей ацебутолол, атенолол, бетаксолол, бисопролол, целипролол, эсмолол, метопролол, небиволол.

Бета-блокатор также может обладать собственной симпатомиметической активностью, как ацебутолол, бетаксолол, картеолол, карведилол, лабеталол, окспренолол, пенбутолол, пиндолол, пропранолол.

Предпочтительно бета-блокатор представляет собой пропранолол или его фармацевтическую соль, например L- или D-пропранолол или их смесь. Смесь может представлять собой смесь L- и D-пропранолола в соотношении от 0:1 до 1:0, например 1:1. Фармацевтически приемлемая соль пропранолола может представлять собой пропранолол хлоргидрат или любой другой препарат пропранолола, независимо от того, изменяет ли или нет этот препарат фармакокинетические свойства или метаболизм пропранолола.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для лечения капиллярных гемангиом у младенцев.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство также может представлять собой лекарственное средство для лечения других сосудистых опухолей, например выбранных из группы, содержащей гемангиомы (т.е. эпителиоидную гемангиому, синусоидальную гемангиому, веретеноклеточную гемангиому), пучковую ангиому, гемангиоэндотелиомы (т.е. капошиформную гемангилэндотелиому), гемангиому при синдроме Гиппеля-Линдау, ангиофиброму и ангиолипому при болезни Бурневилля, пиогенную гранулому, ангиосаркомы, например саркому Капоши, распространяющиеся артериовенозные пороки, ассоциированную с опухолью пролиферацию сосудов. Ссылка M. Wassef and coll. Vascular tumours and malformations, classification, pathology and imaging. Ann Chir Plast Esth 2006; 51:263-281 [20], раскрывает анатомопатологическую классификацию этих активных пролиферативных опухолей.

Лекарственное средство может находиться в любой форме, которая может быть введена человеку или животному. Введение может быть осуществлено непосредственно, т.е. в чистой или по существу чистой форме, или после смешивания бета-блокатора с фармацевтически приемлемым носителем и/или средой.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой сироп или инъецируемый раствор.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для перорального введения, выбранное из группы, содержащей жидкий препарат, шипучую лекарственную форму для перорального введения, порошок для перорального введения, системы множества частиц, диспергируемую в ротовой полости лекарственную форму.

Например, когда лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для перорального введения, тогда оно может находиться в форме жидкого препарата, выбранного из группы, содержащей раствор, сироп, суспензию, эмульсию и капли для перорального введения. Когда лекарственное средство находится в форме шипучей лекарственной формы для перорального введения, тогда оно может находиться в форме, выбранной из группы, содержащей таблетки, гранулы, порошки. Когда лекарственное средство находится в форме порошка для перорального введения или системы множества частиц, тогда оно может находиться в форме, выбранной из группы, содержащей шарики, гранулы, мини-таблетки и микрогранулы. Когда лекарственное средство находится в лекарственной форме, диспергируемой в ротовой полости, тогда оно может находиться в форме, выбранной из группы, содержащей диспергируемые в ротовой полости таблетки, лиофилизированные облатки, тонкие пленки, жевательную таблетку, таблетку и капсулу, медицинскую жевательную резинку.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для трансбуккального и подъязычного введения, например выбранное из группы, содержащей таблетки для трансбуккального или подъязычного введения, мукоадгезивный препарат, лепешки, капли и спреи для введения через слизистую оболочку ротовой полости.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для местного трансдермального введения, например выбранное из группы, содержащей мази, крем, гель, лосьон, пластырь и пену.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для назального введения, например выбранное из группы, содержащей назальные капли, назальный спрей, назальный порошок.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для ректального введения, например суппозиторий или твердую желатиновую капсулу.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может представлять собой лекарственное средство для парентерального введения, например подкожного, внутримышечного, внутривенного введения.

Специалисту в данной области техники понятно, что используемый здесь термин "форма" относится к фармацевтическому препарату лекарственного средства для его практического применения. Например, лекарственное средство может находиться в форме, выбранной из группы, содержащей инъецируемую форму (например, в виде Avlocardyl^® 5 мг/мл), сироп (например, в виде Efferalgan^® 3%), суспензию для перорального введения (например, в виде Efferalgan^® 3%), лепешку (например, в виде Dafalgan^® 1 г), порошок (например, в виде Doliprane^® 100 мг), гранулы (например, в виде Zoltum^® 10 мг), спрей, трансдермальный пластырь (например, в виде Cordipatch^® 5 мг/24 ч) или форму для локального введения (крем, лосьон, глазные примочки) (например, в виде Dermoval creme^®, в виде лосьона Betneva^® и в виде глазных примочек Chibroxine^® соответственно).

В этих примерах бета-блокатор, например из числа вышеперечисленных бета-блокаторов, например пропранолол, может быть добавлен или может замещать активный(е) ингредиент(ы) указанных лекарственных средств.

Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой любой известный фармацевтический носитель, используемый для введения бета-блокатора человеку или животному в зависимости от субъекта. Например, этот носитель может быть выбран из группы, содержащей, например, монометокси-полиэтиленгликоль (например, в виде Viraferonpeg^®) или липосому (например, в виде Ambizome^®).

Среда может представлять собой любую известную среду, используемую для введения бета-блокатора человеку или животному. Например, эта среда может быть выбрана из группы, содержащей, например, кремофор (например, в виде Sandimmun^®) или целлюлозу (например, в виде Avlocardyl^®LP 160 мг).

Фармацевтическая форма лекарственного средства выбрана в отношении человека или животного, которого лечат. Например, для ребенка или младенца предпочтительны сироп или инъекция. Введение может быть осуществлено при помощи пипетки с градуированной массой.

В соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство может содержать фармацевтически приемлемую и эффективную дозу бета-блокатора для лечения гемангиомы. Например, лекарственное средство может содержать дозу, обеспечивающую введение от 1 до 5 мг/кг массы тела в сутки, например от 2 до 4 мг/кг массы тела/сутки.

В соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения предложен способ лечения субъекта, страдающего от гемангиом. Этот способ включает стадию введения указанному субъекту бета-блокатора.

Гемангиомы и бета-блокаторы, а также приемлемые препараты являются такими, как определено выше.

Введение может быть осуществлено с использованием любого фармацевтического средства, известного специалистам в данной области техники и приемлемого для введения бета-блокатора. Примеры вводимых форм лекарственного средства приведены выше. Например, введение может быть осуществлено путем непосредственной инъекции бета-блокатора. Этот путь введения, а также сироп безусловно является предпочтительным для младенцев.

Введение может быть определено таким образом, чтобы дать возможность для доставки фармацевтически приемлемой и эффективной дозы для лечения гемангиом. Например, введение может включать дозу от 1 до 5 мг/кг массы тела в сутки, например от 2 до 4 мг/кг массы тела в сутки. Введение может быть осуществлено одной дозой или посредством нескольких доз в сутки.

Авторы настоящей заявки на изобретение ясно экспериментально продемонстрировали сильное антиангиогенное действие при капиллярных гемангиомах у младенцев (IH) при применении бета-блокатора.

Дополнительные исследования, осуществленные авторами настоящего изобретения в отношении гемангиомы, продемонстрировали, что адренергические бета-2-рецепторы представлены на поверхности эндотелиальных клеток в гемангиоме (смотри приведенные ниже примеры). Последнее подтверждает результаты, полученные в соответствии с настоящим изобретением, обеспечивает физиопатологические объяснения и подтверждает механизм действия бета-блокаторов в объеме настоящего изобретения. Последнее также подтверждает связь между эффективностью пропранолола и его активностью в качестве бета-блокатора.

Поскольку новые антиангиогенные факторы предшествующего уровня техники, такие как авастатин, противопоказаны младенцам ввиду их побочного действия, применение пропранолола в соответствии с настоящим изобретением составляет безопасную альтернативу системно вводимым кортикостероидам и даже интерферону или винкристину.

Пропранолол представляет собой неселективный бета-блокатор, обладающий слабой собственной симпатомиметической активностью, и значительное терапевтическое действие в отношении IH может быть объяснено тремя механизмами:

1. периферическое вазоконстрикторное действие, вызывающее клеточную гипоксию, пропранолол ответственен за сужение периферических сосудов, и это действие непосредственно обнаруживается при IH, которую лечили авторы изобретения;

2. уменьшенная экспрессия генов VEGF и bFGF путем понижающей регуляции пути Raf/MAPK или пути HIF (Giatromanoloki A, Arvanitidou V, Hatzimichael A, Simopoulos C, Sivridis E [17]). Путь активации HIF-2-альфа/VEGF при кожных капиллярных гемангиомах описан у Shyu KG, Liou JY, Wang BW, Fang WJ, Chang H. Cardiovedilol prevents cardiac hypertrophy and overexpression of hypoxia-inducible factor-1 alpha and vascular endothelial growth factor in pressure-overloaded rat heart. J Biomed Sci. 2005; 12: 409-420 [18];

3. апоптоз, запускающий действие в отношении капиллярных эндотелиальных клеток.

В раскрытых далее экспериментальных результатах изменение цвета с интенсивно красного на пурпурный, ассоциирующееся с ощутимым уменьшением поражения, обнаружено у младенцев, страдающих от IH. Это действие может вызывать хроническую гипоксию гемангиомы, ответственную за остановку пролиферации эндотелиальных клеток.

Тем не менее в экспериментах, проведенных авторами изобретения, прогрессирующее улучшение IH при лечении пропранололом убедительно свидетельствует о длительном действии в отношении пролиферативных факторов роста.

Не ясно, являются ли в этом отношении мишенями для лечения сами эндотелиальные клетки или другие клетки, такие как интерстициальные клетки или тучные клетки. Третий механизм, возможно, вовлеченный в объяснение инволюции IH, представляет собой ранний апоптоз эндотелиальных клеток, вызванный бета-блокадой.

Тем не менее повторный рост гемангиомы в двух из представленных случаях, когда лечение прекращали во время пролиферативной фазы IH, не поддерживает эту гипотезу. Кроме того, во втором случае авторы изобретения не обнаружили маркеры апоптотических клеток при помощи иммуногистохимии с использованием антител к расщепленным каспазам 3 и 8.

Кроме того, применение бета-блокаторов в настоящее время широко распространено у пациентов-новорожденных или детей, имеющих хорошую толерантность к сердечным заболеваниям, таким как синдром удлинения интервала QT, как представлено в документе Villain Е. et al, "Low incidence of cardiac events with beta-blocking therapy in children with long QT syndrome", Eur. Heart J. 2004; 25:1405-1411 [6], гипертрофическая кардиомиопатия, как представлено в документе Fritz K.I. et al, "Effect of beta-blockade on symptomatic dexamethasone-induced hypertrophic obstructive cardiomyopathy in premature infants: three case reports and literature review", J. Perinatal 1998; 18:38-44 [7], или гипертензии, как представлено в документе Kilian K. et al, "Hypertension in neonates causes and treatments", J. Perinat. Neonatal Nurs 2003; 17: 65-74 [8].

Изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами в отношении к прилагающимся графическим материалам, которые не следует рассматривать как ограничивающие объем изобретения.

Краткое описание графических материалов

Фиг.1 представляет собой фотографию, демонстрирующую состояние гемангиомы после 4-недельного предварительного системного лечения стероидами, перед началом лечения пропранололом.

Фиг.2 представляет собой фотографию, демонстрирующую состояние гемангиомы через семь суток после начала лечения пропранололом в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг.3 представляет собой фотографию, демонстрирующую экспериментальные результаты в возрасте 6 месяцев, когда ребенка продолжают лечить в соответствии с настоящим изобретением и предшествующее системное лечение стероидами было прекращено 2 месяца назад.

Фиг.4 представляет собой фотографию, демонстрирующую экспериментальные результаты после 9 месяцев лечения пропранололом в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг.5 представляет собой фотографию, полученную при помощи способа иммуногистохимии, демонстрирующую, что бета-2-рецепторы экспрессируются на эндотелиальных клетках IH.

Фиг.6 представляет собой фотографию, полученную при помощи способа иммуногистохимии, демонстрирующую, что HIF-1-альфа; (красное окрашивание) экспрессируются на эндотелиальных клетках IH.

Примеры

Пример 1: первые эксперименты в соответствии с настоящим изобретением

Младенец мужского пола, представленный с IH, затрагивающей носовую пирамиду. В возрасте 2 месяцев системно вводили стероиды из-за одышки, ассоциированной с некрозом носовой перегородки и колумеллы. После лечения в течение одного месяца с использованием 3 мг/кг массы тела в сутки (мг/кг/сутки) преднизолона гемангиома стабилизировалась, но носовой некроз прогрессировал. Поскольку младенец постепенно отказывался от приема таблеток преднизолона, авторы изобретения вводили эквивалентную дозу бетаметазона в каплях (0,5 мг/кг/сутки). В возрасте 4 месяцев рост гемангиомы прекратился, и язвы внутри носа зажили.

Однако на контрольном посещении у ребенка отметили тахикардию от 180 до 200 ударов в минуту, ассоциированную с систолическим сердечным шумом. Эхография сердца продемонстрировала обструктивную гипертрофическую миокардиопатию, что свидетельствовало о необходимости уменьшения дозы бетаметазона с 3 до 2 мг/кг массы тела/сутки (мг/кг/сутки).

Авторы изобретения, таким образом, начали лечение бета-блокатором пропранололом (химическое название согласно IUPAC (Международный союз теоретической и прикладной химии): (2RS)-1-[1-метилэтил)амино]-3(нафталин-1-илокси)пропан-2-ол) в дозе 3 мг/кг/сутки. Пропранолол вводили в виде капсулы, содержащей имеющийся в продаже порошкообразный пропранолол. Через сутки после начала лечения пропранололом цвет гемангиомы изменился с интенсивного красного до пурпурного, и она смягчалась. Бетаметазон заменили на преднизолон, дозу которого постепенно уменьшали и останавливали через 6 недель после начала лечения пропранололом.

Несмотря на уменьшение системно вводимых стероидов IH продолжала демонстрировать улучшение. В возрасте 5,5 месяцев, когда прекратили введение стероидов, не обнаружили увеличения размера или цвета IH. В возрасте 14 месяцев ребенку все еще вводили пропранолол и наблюдали регресс вызванной приемом кортикостероидов гипертрофической миокардиопатии. IH была полностью плоской с присутствием только кожных телеангиэктазий на желто-оранжевом обесцвеченном кожном фоне и последствий внутриносового некроза и некроза колумеллы.

Пример 2: второй эксперимент в соответствии с настоящим изобретением

У второго младенца мужского пола из тройни, родившегося на 30-й неделе, с рождения присутствовала IH типа бляшек, охватывающая всю правую руку и правую лобно-теменную область и область верхнего века.

В возрасте одного месяца подкожный компонент развивался в 3 областях, включающих верхнее веко, околоушную область и подмышечную складку. Вследствие риска визуальной депривации введение преднизолона начинали с дозы 3 мг/кг/сутки.

Тем не менее после 2 недель лечения ситуация не контролировалась, и авторы изобретения решили увеличить дозу преднизолона до 5 мг/кг/сутки на протяжении 2 недель.

Несмотря на эту схему IH продолжала увеличиваться, и в возрасте 2 месяцев открывание века стало невозможным, правая сторона лица деформировалась огромной опухолью, как показано на Фиг.1. Дополнительно подмышечную складку занял опухолевый IH компонент, который, будучи измеренным клинически, имел диаметр 5 см.

MRI (визуализация методом ядерно-магнитного резонанса) продемонстрировала отсутствие внутримозговых аномалий, но выявила, что IH охватывала экстра- и интракональные глазничные области и обуславливала экзофтальмию. Кроме того, MRI продемонстрировала, что пародитальная IH сопровождалась компрессионным интрацервикальным компонентом, приводившим к трахеальному и пищеводному отклонению; измеренная масса в подмышечной области составляла 26 мм×45 мм×40 мм и продолжалась на вершину правого легкого.

Сердечная эхография продемонстрировала увеличенный сердечный выброс.

Дозу преднизолона уменьшали до 3 мг/кг/сутки и начинали лечение пропранололом в дозе 2 мг/кг/сутки в соответствии с настоящим изобретением.

Как у предшествующего младенца (смотри вышеприведенный пример 1), поражения смягчались лишь через 12 часов после начала лечения пропранололом.

Через семь суток произвольное открывание глаза стало возможным вследствие значительного уменьшения размера подкожного компонента гемангиомы, как изображено на представленной Фиг.2. Околоушные и подмышечные массы значительно уменьшались в размере.

Эти неожиданные результаты, полученные в настоящем изобретении, следует сравнить с результатами, представленными на Фиг.1, которая демонстрирует состояние гемангиомы перед началом лечения пропранололом и после 4 недель системного лечения стероидами в соответствии с предшествующим уровнем техники (2 недели 3 мг/кг/сутки и 2 недели 5 мг/кг/сутки).

Лечение преднизолоном постепенно уменьшали по мере того, как состояние IH продолжало улучшаться. В возрасте 3 месяцев образец после биопсии, взятый с руки, демонстрирует типичную IH. Эндотелиальные клетки демонстрировали плохое окрашивание моноклональным антителом MIB-1, свидетельствуя о слабой пролиферативной активности для IH у младенца.

Для оценки возможной проаптотической роли пропранолола осуществляли иммуногистохимический анализ с использованием моноклональных антител против расщепленной каспазы-3 и 8 (Ozyme, Saint Quentin en Yvelines, France), но положительное иммуноокрашивание не продемонстрировано [15].

Лечение преднизолоном прекращали в возрасте 4 месяцев без какого-либо возобновления симптомов, но 3-суточное прерывание лечения пропранололом привело к умеренному увеличению размера гемангиомы в области верхнего века и околоушной области.

Возобновление лечения пропранололом в дозе 2 мг/кг/сутки было успешным только через 24 часа.

В возрасте 6 месяцев открывание глаза было удовлетворительным, и не было отмечено каких-либо существенных визуальных нарушений, околоушные и подмышечные подкожные компоненты гемангиом не пальпировались, и IH значительно тускнела на лице и руках.

На Фиг.3 представлена фотография, демонстрирующая эти экспериментальные результаты в возрасте 6 месяцев, когда ребенок все еще продолжал получать 2 мг/кг/сутки пропранолола, но системное введение стероидов было прекращено 2 месяца назад. Не был отмечен подкожный компонент гемангиомы, и кожный компонент значительно обесцвечивался. Кроме того, ребенок не страдал от какого-либо визуального нарушения.

В возрасте 9 месяцев лечение прекращали без какого-либо повторного роста IH, как представлено на фотографии на Фиг.4.

Пример 3: третий эксперимент в соответствии с настоящим изобретением

У младенца женского пола имела место правая периокулярная IH, впервые отмеченная в возрасте 3 недель и локализованная во внутреннем углу глазной щели. В возрасте 2 месяцев подкожный компонент IH распространялся в глазной орбите и ограничивал открывание верхнего века.

Доплеровская ультрасонография продемонстрировала IH в диаметре 32 мм и толщиной 12 мм.

После получения согласия от родителей девочку лечили пропранололом в дозе 2 мг/кг/сутки. Отмечали уплощение поражения через 12 часов, а затем прогрессирующее улучшение.

Контрольная ультрасонография, проводившаяся через 7 суток после начала лечения пропранололом, продемонстрировала уменьшение размера IH: 21 мм в диметре по сравнению с 32 мм и 6 мм толщиной по сравнению с 12 мм, без каких-либо гемодинамических модификаций.

Введение пропранолола прекращали через один месяц, но отметили новое увеличение размера IH, свидетельствующее о необходимости возобновления лечения.

В возрасте 7 месяцев IH становилась плоской и обесцвечивалась, и ультрасонография не могла идентифицировать какой-либо подкожный компонент.

Пропранолол прекращали в возрасте 8 месяцев без какого-либо возобновления симптомов гемангиомы.

Семь других детей, страдающих от гемангиомы, лечили пропранололом и получили аналогичные результаты. При применении настоящего изобретения неудач при лечении не обнаружено. Результаты такого типа никогда ранее не достигались в предшествующем уровне техники, например с использованием терапии кортикостероидами или интерфероном.

Таким образом, эти примеры ясно демонстрируют, что пропранолол обладает сильным антиангиогенным действием при IH. Поскольку новые антиангиогенные факторы, такие как авастатин, противопоказаны младенцам из-за их побочных действий, пропранолол может представлять приемлемую безопасную альтернативу системно вводимым кортикостероидам и даже интерферону или винкристину.

Пример 4: Комментарии и дополнительные экспериментальные результаты

Авторы изобретения по счастливому стечению обстоятельств обнаружили, что пропранолол, представляющий собой хорошо переносимый неселективный бета-блокатор, обычно используемый у младенцев по кардиологическим показаниям, может контролировать фазу роста IH, как сообщали Leaute-Labreze С, Dumas de la Roque E, Hubiche T, Boralevi F, Thambo JB. Propranolol for severe hemangiomas of infancy. New Engl J Med 2008, 358; 24:2650-51 [16]. Возможное объяснение асимметричного соотношения между полами и того, что активация пути HIF-2-альфа и последующая сверхэкспрессия VEGF клетками эндотелия вовлечены в патогенез кожных капиллярных гемангиом (Giatromanolaki et al, The HIF-2alpha/VEGF pathway activation in cutaneous capillary haemangiomas. Pathology 2005:149-51 [17]). Неожиданно, исследуя бета-блокаторы для лечения сердечной гипертрофии, Shyu et al. выявил, что кардиведилол обращает уровень белка и мРНК HIF-1-альфа и VEGF до базовых значений (Shyu et al., Cardiovedilol prevents cardiac hypertrophy and overexpression of hypoxia-inducible factor-1 alpha and vascular endothelial growth factor in pressure-overloaded rat heart. J Biomed Sci. 2005; 12:409-420 [18]). Дальнейшие исследования проводили в поисках ангиогенного каскада ниже бета-адренергических рецепторов in vivo и in vitro в IH и возможных генетических детерминант, влияющих на фенотип IH.

Гистология и иммуногистохимия

Образцы биопсии кожи погружали в парафин, нарезали на срезы толщиной 5 мкм и окрашивали гематоксилином-эозином для оценки общей морфологии. Для визуализации присутствия альфа-2-адренергического рецептора и уровня экспрессии HIF-1-альфа срезы инкубировали соответственно с моноклональным кроличьим антителом против человеческого альфа-2-адренергического рецептора 1:100 (PA1-20659, ABR, Golden, USA) или моноклональным мышиным антителом против человеческого HIF-1-альфа 1:1000 (ab8366, abeam, Cambridge, UK) в течение ночи при 4°C. В качестве вторичной системы авторы изобретения использовали систему на основе пероксидазы хрена Envision (K4002, K4000 Dako, Trappes, France), которая усиливает чувствительность окрашивания, направленного против кроличьего антитела против альфа-2-адренергического рецептора и мышиного антитела против HIF-1-альфа. Срезы окрашивали аминоэтилкарбамидом (K3461, Dako, Trappes, France) и затем окрашивали гематоксилином.

Предварительные иммуногистохимические результаты продемонстрировали, что бета-2-рецепторы (Фиг.5) экспрессируются на эндотелиальных клетках IH. HIF-1-альфа (Фиг.6) также экспрессировался на эндотелиальных клетках IH, как обнаружено недавно.

Перечень ссылок

Предложено применение бета-блокатора для изготовления лекарственного средства для лечения гемангиом, например гемангиом у младенцев. Бета-блокатор может представлять собой алпренолол, буциндолол, картеолол, карведилол, лабеталол, левобунолол, медроксалол, мепиндолол, метипранолол, надолол, окспренолол, пенбутолол, пиндолол, пропафенон, пропранолол, соталол, тимолол, их фармацевтически приемлемые соли и их смесь. Показано снижение пролиферативной активности гемангиом младенцев под действием неселективного бета-блокатора пропранолола, уменьшение размера, уплощение и обесцвечивание гемангиом. Неудач при лечении, заявленном в изобретении, не обнаружено, в отличие от применения альтернативы - известных кортикостероидов, интерферона или винкристина, как правило, используемых для лечения гемангиом. Выявлено антиангиогенное действие бета-блокатора при гемангиомах и что бета-2-адренорецепторы экспрессируются на эндотелиальных клетках гемангиом. 18 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр.

1. Применение бета-блокатора для изготовления лекарственного средства для лечения гемангиом.

2. Применение по п.1, где бета-блокатор выбран из группы, содержащей неселективный бета-блокатор, бета-1-селективный бета-блокатор, смесь альфа-1/бета-адренергических антагонистов, бета-2-селективный бета-блокатор и смесь двух или более бета-блокаторов.

3. Применение по п.1, где бета-блокатор представляет собой неселективный бета-блокатор.

4. Применение по п.3, где неселективный бета-блокатор выбран из группы, содержащей алпренолол, буциндолол, картеолол, карведилол, лабеталол, левобунолол, медроксалол, мепиндолол, метипранолол, надолол, окспренолол, пенбутолол, пиндолол, пропафенон, пропранолол, соталол, тимолол, их фармацевтически приемлемые соли и их смесь.

5. Применение по п.1, где бета-блокатор представляет собой бета-1 селективный бета-блокатор.

6. Применение по п.5, где бета-1 селективный бета-блокатор выбран, например, из группы, содержащей ацебутолол, атенолол, бетаксолол, бисопролол, целипролол, эсмолол, метопролол, небиволол.

7. Применение по п.1, где бета-блокатор обладает собственной симпатомиметической активностью.

8. Применение по п.7, где бета-блокатор выбран из группы, содержащей ацебутолол, бетаксолол, картеолол, карведилол, лабеталол, окспренолол, пенбутолол, пиндолол, пропранолол.

9. Применение по п.1, где указанный бета-блокатор представляет собой пропранолол или его фармацевтически приемлемую соль.

10. Применение по п.1, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для лечения капиллярных гемангиом и/или капиллярных гемангиом у младенцев.

11. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой сироп или инъецируемый раствор.

12. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для перорального введения, выбранное из группы, содержащей жидкий препарат, шипучую лекарственную форму для перорального введения, порошок для перорального введения, систему в виде множества частиц, лекарственную форму, диспергирующуюся в ротовой полости.

13. Применение по п.12, где лекарственное средство для перорального введения представляет собой жидкий препарат, выбранный из группы, содержащей раствор, сироп, суспензию, эмульсию и капли для перорального введения.

14. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для трансбуккального и подъязычного путей введения.

15. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для местного трансдермального введения.

16. Применение по п.15, где лекарственное средство для местного введения выбрано из группы, содержащей мази, крем, гель, лосьон, пластырь, пену.

17. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для назального введения.

18. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для ректального введения.

19. Применение по любому из пп.1-10, где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство для парентерального введения.