CD19-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СРЕДСТВА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2013 года по МПК C07K16/18 A61K39/395 C07K16/46 C12N15/13 A61P35/00 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение раскрывает CD19-связывающие средства, представляющие антитело или антигенсвязывающий фрагмент, включающие аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, которые связываются с человеческим CD19 с константой диссоциации, равной или меньшей 1×10^-7М. Аминокислотные последовательности представлены в описании. Раскрыты нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую и/или легкую цепь антитела или антигенсвязывающего фрагмента, и конъюгат лиганд-лекарственное соединение или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для лечения CD19-ассоциированного нарушения у субъекта-млекопитающего, выбранного из группы, включающей CD19-экспрессирующий рак, хронический лейкоз, В-клеточную лимфому, множественную миелому и ряд других онкозаболеваний. Конъюгат для лечения нарушения у субъекта-млекопитающего используют в эффективном количестве. Использование предлагаемых антител или конъюгата позволит повысить выживаемость пациентов с раковыми опухолями, экспрессирующими CD19, а также при лечении иммунопатологического заболевания. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 26 ил., 8 пр.

1. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связываются с человеческим CD19 и включают аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичную консенсусной последовательности SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33; и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичную консенсусной последовательности SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 35, при этом антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с CD19 с константой диссоциации, равной или меньшей чем 1×10^-7 М.

2. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность (а) CDR1 (SEQ ID NO: 46), CDR2 (SEQ ID NO: 47) или CDR3 (SEQ ID NO: 48).

3. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность (а) CDR1 (SEQ ID NO: 49), CDR2 (SEQ ID NO: 50) или CDR3 (SEQ ID NO: 51).

4. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где консенсусная аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 29.

5. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.3, где консенсусная аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 30.

6. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.

7. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.

8. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.

9. Антитело по п.1, включающее константную область IgG человека.

10. Антитело по п.3, включающее константную область IgG человека.

11. Антитело по п.9, в котором изотипом константной области IgG является IgG1, IgG2 или IgG1V1.

12. Антитело по п.10, в котором изотипом константной области IgG является IgG1, IgG2 или IgG1V1.

13. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-12, где антитело является конъюгированным.

14. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь и/или легкую цепь антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11.

15. Конъюгат лиганд-лекарственное соединение для лечения CD19-ассоциированного нарушения у субъекта-млекопитающего, имеющий следующую формулу:

или его фармацевтически приемлемая соль или сольват,
где L является лиганд-единицей, где лиганд-единица является антителом или антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.1-13; и
(LU-D) является группой линкерная единица - единица лекарственного соединения, в которой
LU является линкерной единицей и
D является единицей лекарственного соединения, обладающей цитотоксической или цитостатической активностью в отношении клеток-мишеней; и
p является целым числом от 1 до приблизительно 20.

16. Конъюгат лиганд-лекарственное соединение по п.15, имеющий формулу

где mAb представляет собой моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.

17. Конъюгат лиганд-лекарственное соединение по п.16, в котором единица лекарственного соединения имеет формулу D_E, D_F или D_Z:



или его фармацевтически приемлемая соль или сольват, где независимо в каждом положении:
R² является C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом;
R³ является H, C₁-C₂₀ алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, карбоциклом, -C₁-C₂₀алкилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкинилен(карбоциклом), арилом, -C₁-C₂₀алкилен(арилом), -C₂-C₂₀алкенилен(арилом), -C₂-C₂₀алкинилен(арилом), гетероциклом, -C₁-C₂₀алкилен(гетероциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(гетероциклом) или -C₂-C₂₀алкинилен(гетероциклом);
R⁴ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, карбоциклом, -C₁-C₂₀алкилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкинилен(карбоциклом), арилом, -C₁-C₂₀алкилен(арилом), -C₂-C₂₀алкенилен(арилом), -C₂-C₂₀алкинилен(арилом), гетероциклом, -C₁-C₂₀алкилен(гетероциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(гетероциклом) или -C₂-C₂₀алкинилен(гетероциклом);
R⁵ является H или C₁-C₈алкилом;
или R⁴ и R⁵ вместе формируют карбоциклическое кольцо и имеют формулу
-(CR^aR^b)_s-, в которой R^a и R^b независимо являются H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом или карбоциклом и s равно 1, 3, 4, 5 или 6;
R⁶ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом;
R⁷ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, карбоциклом,
-C₁-C₂₀алкилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкинилен(карбоциклом), арилом, -C₁-C₂₀алкилен(арилом), -C₂-C₂₀алкенилен(арилом), -C₂-C₂₀алкинилен(арилом), гетероциклом, -C₁-C₂₀алкилен(гетероциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(гетероциклом) или -C₂-C₂₀алкинилен(гетероциклом);
каждый R⁸ независимо является H, OH, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, -O-(C₁-C₂₀алкилом), -O-(C₂-C₂₀алкенилом), -O-(C₁-C₂₀алкинилом) или карбоциклом;
R⁹ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом;
R²⁴ является арилом, гетероциклом или карбоциклом;
R²⁵ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, карбоциклом, -O-(C₁-C₂₀алкилом), -O-(C₂-C₂₀алкенилом), -O-(C₂-C₂₀алкинилом) или
OR¹⁸, в котором R¹⁸ является H, защитной группой гидроксила или прямой связью, где OR¹⁸ представляет собой =O;
R²⁶ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом, арилом, гетероциклом или карбоциклом;
R¹⁰ является арилом или гетероциклом;
Z является O, S, NH или NR¹², в котором R¹² является C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом;
R¹¹ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, карбоциклом, -C₁-C₂₀алкилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(карбоциклом), -C₂-C₂₀алкинилен(карбоциклом), арилом, -C₁-C₂₀алкилен(арилом), -C₂-C₂₀алкенилен(арилом), -C₂-C₂₀алкинилен(арилом), гетероциклом, -C₁-C₂₀алкилен(гетероциклом), -C₂-C₂₀алкенилен(гетероциклом), -C₂-C₂₀алкинилен(гетероциклом), -(R¹³O)_m-R¹⁴ или -(R¹³O)_m-CH(R¹⁵)₂;
m является целым числом от 1 до 1000;
R¹³ является C₂-C₂₀алкиленом, C₂-C₂₀алкениленом или C₂-C₂₀алкиниленом;
R¹⁴ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом или C₂-C₂₀алкинилом; при каждом появлении R¹⁵ независимо является H, COOH, (CH₂)_n-N(R¹⁶)₂, -(CH₂)_n-SO₃H, -(CH₂)_n-SO₃-C₁-C₂₀алкилом, -(CH₂)_n-SO₃-C₂-C₂₀алкенилом или -(CH₂)_n-SO₃-C₂-C₂₀алкинилом;
при каждом появлении R¹⁶ независимо является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом или -(CH₂)_n-COOH;
n является целым числом от 0 до 6;
R²⁷ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, O-(C₁-C₂₀алкилом), -O-(C₂-C₂₀алкенилом), -O-(C₂-C₂₀алкинилом), галогеном, -NO₂, -COOH или -C(O)OR²⁸, в котором R²⁸ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, арилом, гетероциклом, -(CH₂CH₂O)_r-H, -(CH₂CH₂O)_r-CH₃ или (CH₂CH₂O)_r-CH₂CH₂C(O)OH; где r является целым числом от 1 до 10; и
Х является -(CR²⁹ ₂)_I-, в котором R²⁹ является H, C₁-C₂₀алкилом, C₂-C₂₀алкенилом, C₂-C₂₀алкинилом, а I является целым числом от 0 до 10; где указанный алкильный, алкенильный, алкинильный, алкиленовый, алкениленовый, алкиниленовый, арильный, карбоциклический и гетероциклический радикалы либо отдельно, либо как часть другой группы необязательно замещены.

18. Конъюгат лиганд-лекарственное соединение по п.16, где СВ19-ассоциированное нарушение выбрано из группы, включающей СВ19-экспрессирующий рак, хронический лейкоз, лимфому или множественную миелому; например, острый лимфобластный лейкоз В-клеточного типа, хронический миелоцитарный лейкоз, хронический лимфолейкоз, неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина, В-клеточную лимфому или диффузную В-крупноклеточную лимфому.