Настоящая заявка заявляет преимущество Временной Заявки США № 60/853166, поданной 19 октября 2006 года, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.
В настоящей заявке представлены некоторые гетероарильные соединения, композиции, включающие эффективное количество одного или нескольких таких соединений, и способы лечения или профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, метаболических состояний и состояний, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования киназного пути, включающие введение эффективного количества гетероарильного соединения пациенту, нуждающемуся в этом.
Связь между аномальным фосфорилированием белка и причиной или последствием заболеваний известна уже 20 лет. Следовательно, протеинкиназы стали представлять собой очень важную группу мишеней для лекарственных средств. См. Cohen, Nature, 1: 309-315 (2002). Различные ингибиторы протеинкиназ нашли клиническое применение для лечения широкого ряда заболеваний, таких как рак и хронические воспалительные заболевания, включая диабет и удар. См. Cohen, Eur. J. Biochem., 268:5001-5010 (2001).
Протеинкиназы представляют собой большое и разнообразное семейство ферментов, которые катализируют фосфорилирование белка и играют критическую роль в передаче сигнала в клетках. Протеинкиназы могут проявлять положительное или отрицательное регуляторное действие, в зависимости от их целевого белка. Протеинкиназы участвуют в специфических сигнальных путях, которые регулируют клеточную функцию, таких как, но не ограничиваясь этим, метаболизм, развитие клеточного цикла, клеточная адгезия, функция сосудов, апоптоз и ангиогенез. Нарушение клеточной сигнальной активности связывают со многими заболеваниями, наиболее характерные из которых включают рак и диабет. Регуляция сигнальной трансдукции цитокинами и связь сигнальных молекул с протоонкогенами и генами супрессии опухоли является в достаточной степени документально подтвержденной. Аналогично этому, была продемонстрирована связь между диабетом и связанным с ним состоянием и нарушением регуляции уровня протеинкиназ. См., например, Sridhar et al. Pharmaceutical Research, 17(11): 1345-1353 (2000). Вирусные инфекции и связанные с ними состояния также связывают с регуляцией протеинкиназ. Park et al Cell 101 (7): 777-787 (2000).
Протеинкиназы можно подразделить на широкие группы на основании идентичности аминокислоты(аминокислот), на которую они нацелены (серин/треонин, тирозин, лизин и гистидин). Например, тирозинкиназы включают тирозинкиназы, которые являются рецепторами (RTK), такие как факторы роста, и тирозинкиназы не-рецепторного типа, такие как семейство src киназ. Также существуют протеинкиназы двойной специфичности, мишенью которых является как тирозин, так и серин/треонин, такие как циклин-зависимые киназы (CDK) и митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK).
Протеинкиназа C (PKC) представляет собой семейство сериновых/треониновых киназ, которые играют центральную роль в клеточной сигнальной трансдукции. Irie et al, 2005, The Chemical Record 5:185-195. PKC изоферменты участвуют в промотировании опухоли, а также в других различных биологических событиях и, соответственно, являются привлекательными мишенями для лечения рака и других расстройств, как было указано. Одним таким PKC изоферментом, который активируется посредством промоторов опухоли, является PKCθ. PKC изоферменты также экспрессируются в эпителиальных клетках желудочно-кишечного тракта, особенно кишечника. Farhadi et al, 2006, J. Pharm. Exp. Ther. 316: 1-7. Соответственно, считается, что средства, которые модулируют PCK активность, должны быть полезными в качестве терапевтических средств от желудочно-кишечных расстройств, таких как рак и воспалительное заболевание кишечника.
mTOR (мишень рапамицина в организме млекопитающих), которую также называют FRAP, RAFTI или SEPT, представляет собой состоящую из 2549 аминокислот Ser/Thr протеинкиназу, которая, как было показано, является одним из наиболее критических белков в PI3K/Akt пути, который регулирует клеточный рост и пролиферацию. Georgakis and Younes, 2006, Expert Rev. Anticancer Ther. (5(7,): 131-140. Поскольку PI3K и Akt участвуют в регуляции некоторых клеточных функций, могут иметь место токсические эффекты, связанные с ингибированием этих киназ, что делает ингибирование mTOR также наиболее привлекательным подходом. Три ингибитора mTOR в настоящее время находятся в стадии клинических испытаний для лечения рака. Это CCI-779 (рак почек, рак молочной железы, лимфома коры головного мозга, различные глиобластомы и метастатическая меланома), RAD001 (резистентные солидные опухоли, запущенные гематологические опухоли, GIST и запущенный немелкоклеточный рак легкого) и AP23573 (солидные опухоли, гематологические злокачественные заболевания и саркома). Предклинический успех этих соединений демонстрирует полезность ингибиторов mTOR в лечении рака и необходимость в дополнительных соединениях, обладающих активностью ингибирования mTOR.
Поскольку протеинкиназы регулируют почти каждый клеточный процесс, включая метаболизм, клеточную пролиферацию, клеточную дифференциацию и клеточное выживание, они являются привлекательными мишенями для терапевтического вмешательства при различных болезненных состояниях. Например, контроль клеточного цикла и ангиогенез, в которых протеинкиназы играют центральную роль, представляют собой клеточные процессы, связанные с различными болезненными состояниями, такими как, но не ограничиваясь этим, рак, воспалительные заболевания, аномальный ангиогенез и связанные с этим заболевания, атеросклероз, дегенерация желтого пятна, диабет, ожирение и боль.
Протеинкиназы стали привлекательными мишенями для лечения рака. Fabbro et al., Pharmacology & Tharapeutics 93:79-98 (2002). Было сделано предположение, что участие протеинкиназ в развитии злокачественных заболеваний человека может происходить одним из следующих путей: (1) геномные перестройки (например, BCR-ABL в хроническом миелогенном лейкозе), (2) мутации, приводящие к конститутивно активной киназной активности, такой как острый миелогенный лейкоз и желудочно-кишечные опухоли, (3) нарушение регуляции киназной активности посредством активации онкогенов или потери опухоле-супрессорных функций, например, как при типах рака с онкогенным RAS, (4) нарушение регуляции киназной активности посредством сверхэкспрессии, как в случае EGFR, и (5) эктопическая экспрессия факторов роста, которые способствуют развитию и поддержанию неопластического фенотипа. Fabbro et al., Pharmacology & Tharapeutics 93:79-98 (2002).
При выяснении запутанных путей протеинкиназы и сложности взаимосвязи и взаимодействия между различными протеинкиназами и киназными путями важное значение имеет разработка фармацевтических средств, способных действовать как модуляторы, регуляторы или ингибиторы протеинкиназы, которые обладают благоприятным действием на различные киназы или различные киназные пути. Соответственно, остается потребность в новых модуляторах киназ.
Цитирование или указание какого-либо ссылочного документа в Разделе 2 настоящей заявке не следует рассматривать как допущение, что этот ссылочный документ является известным из уровня техники аналогом настоящей заявки.
3. Краткое описание изобретения
В настоящей заявке представлены соединения, имеющие следующую формулу (I):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры и пролекарства, где R1, R2, L, X, Y, Z, Q, A и B имеют значения, определенные в настоящей заявке.
Соединения формулы (I), или их фармацевтически приемлемые соли, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры или пролекарства (каждые из которых указаны в настоящей заявке как "Гетероарильные соединения") являются полезными для лечения или профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, метаболических состояний и состояний, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования киназного пути, в одном варианте воплощения изобретения - PKCθ или mTOR пути.
Кроме того, в настоящей заявке представлены композиции, включающие эффективное количество гетероарильного соединения, и композиции, включающие эффективное количество гетероарильного соединения и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. Композиции являются полезными для лечения или профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, метаболических состояний и состояний, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования киназного пути, в одном варианте воплощения изобретения - PKCθ или mTOR пути.
Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, метаболических состояний и состояний, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования киназного пути, в одном варианте воплощения изобретения - PKCθ или mTOR пути, включающие введение эффективного количества гетероарильного соединения пациенту, нуждающемуся в таком лечении или профилактике.
Представленные варианты воплощения изобретения будут более понятны при обращении к подробному описанию и примерам, которые предназначены для иллюстрации неограничивающих вариантов воплощения изобретения.
4. Подробное описание изобретения
4.1 Определения
Группа "C1-8алкил" представляет собой насыщенный линейный или разветвленный нециклический углеводород, содержащий от 1 до 8 атомов углерода. Репрезентативные группы -(C1-8алкил) включают -метил, -этил, -н-пропил, -н-бутил, -н-пентил, -н-гексил, -н-гептил и -н-октил; тогда как насыщенные разветвленные алкилы включают -изопропил, -втор-бутил, -изобутил, -трет-бутил, -изопентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2,3-диметилбутил и т.п. Группа -(C1-8алкил) может быть замещенной или незамещенной. Например, C1-8алкильная группа может быть замещена фенилом с образованием бензильной группы.
Гуппа C2-8алкенил" представляет собой линейный или разветвленный нециклический углеводород, содержащий от 2 до 8 атомов углерода и включающий, по меньшей мере, одну углерод-углеродную двойную связь. Репрезентативные линейные и разветвленные (C2-8)алкенилы включают -винил, -аллил, -1-бутенил, -2-бутенил, -изобутиленил, -1-пентенил, -2-пентенил, -3-метил-1-бутенил, -2-метил-2-бутенил, -2,3-диметил-2-бутенил, -1-гексенил, -2-гексенил, -3-гексенил, -1-гептенил, -2-гептенил, -3-гептенил, -1-октенил, -2-октенил, -3-октенил и т.п. Двойная связь алкенильной группы может быть несопряженной или сопряженной с другой ненасыщенной группой. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной.
Группа "C2-8алкинил" представляет собой линейный или разветвленный нециклический углеводород, содержащий от 2 до 8 атомов углерода и включающий, по меньшей мере, одну углерод-углеродную тройную связь. Репрезентативные линейные и разветвленные -(C2-8)алкинилы включают -ацетиленил, -пропинил, -1-бутинил, -2-бутинил, -1-пентинил, -2-пентинил, -3-метил-1-бутинил, -4-пентинил, -1-гексинил, -2-гексинил, -5-гексинил, -1-гептинил, -2-гептинил, -6-гептинил, -1-октинил, -2-октинил, -7-октинил и т.п. Алкинильная группа может быть незамещенной или замещенной.
Термины "галоген" и "гало" означают фтор, хлор, бром и йод.
Группа "арил" представляет собой ненасыщенную ароматическую карбоциклическую группу, состоящую из 6-14 атомов углерода, включающую одно кольцо (например, фенил) или несколько конденсированных колец (например, нафтил или антрил). Конкретные арилы включают фенил, бифенил, нафтил и т.п. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной.
Группа "гетероарил" представляет собой арильную кольцевую систему, содержащую от одного до четырех гетероатомов (например, O, S или N) в качестве кольцевых атомов в гетероароматической кольцевой системе, где остальные атомы представляют собой атомы углерода. Подходящие гетероатомы включают кислород, серу и азот. В некоторых вариантах воплощения изобретения, гетероциклическая кольцевая система является моноциклической или бициклической. Неограничивающие примеры включают ароматические группы, выбранные из следующих:
где Q представляет собой CH2, CH=CH, O, S или NH. Другие репрезентативные примеры гетероарильных групп включают, но не ограничиваются этим, бензофуранил, бензотиенил, индолил, бензопиразолил, кумаринил, фуранил, изотиазолил, имидазолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, тиофенил, пиримидинил, изохинолинил, хинолинил, пиридинил, пирролил, пиразолил, 1H-индолил, 1H-индазолил, бензо[d]тиазолил и пиразинил. Следующие репрезентативные примеры гетероарильных групп включают группы, присутствующие в соединениях, раскрываемых в настоящей заявке. Гетероарилы могут быть связаны по любому кольцевому атому (т.е. по любому атому углерода или гетероатому гетероарильного кольца). Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной. В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильная группа представляет собой C3-10гетероарильную группу.
Группа "циклоалкил" представляет собой насыщенное или ненасыщенное неароматическое карбоциклическое кольцо. Репрезентативные циклоалкильные группы включают, но не ограничиваются этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентадиенил, циклогексил, циклогексенил, 1,3-циклогексадиенил, 1,4-циклогексадиенил, циклогептил, 1,3-циклогептадиенил, 1,3,5-циклогептатриенил, циклооктил и циклооктадиенил. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В одном варианте воплощения изобретения, циклоалкильная группа представляет собой C3-8циклоалкильную группу.
Группа "гетероциклоалкил" представляет собой неароматический циклоалкил, в котором от одного до четырех кольцевых атомов углерода независимо замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из O, S и N. Репрезентативные примеры гетероциклоалкильной группы включают, но не ограничиваются этим, морфолинил, пирролил, пирролидинил, тиенил, фуранил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, триазолил, пиперизинил, изотиазолил, изоксазолил, (1,4)-диоксан, (1,3)-диоксолан, 4,5-дигидро-1H-имидазолил и тетразолил. Гетероциклоалкилы также могут быть связаны по любому кольцевому атому (т.е. по любому атому углерода или гетероатому гетероциклического кольца). Гетероциклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В одном варианте воплощения изобретения гетероциклоалкил представляет собой 3-7-членный гетероциклоалкил.
Когда указано, что группы, описанные в настоящей заявке, являются "замещенными или незамещенными", то в случае, когда они являются замещенными, они могут быть замещены одним или несколькими любыми заместителями. Примеры заместителей включают заместители, которые можно найти в иллюстративных соединениях и вариантах воплощения изобретения, раскрываемых в настоящей заявке, а также галоген (например, хлор, йод, бром, или фтор); C1-8 алкил; C2-8 алкенил; C2-8 алкинил; гидроксил; C1-8 алкоксил; амино; нитро; тиол; тиоэфир; имин; циано; амидо; фосфонато; фосфин; карбоксил; карбамоил; карбамат; ацеталь; мочевину; тиокарбонил; сульфонил; сульфонамид; сульфинил; кетон; альдегид; сложный эфир; ацетил; ацетокси; кислород (=О); галогеналкил (например, трифторметил); замещенный аминоацил и аминоалкил; карбоциклический циклоалкил, который может быть моноциклическим или конденсированным или неконденсированным полициклическим (например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, или циклогексил), или гетероциклоалкил, который может быть моноциклическим или конденсированным или неконденсированным полициклическим (например, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, фуранил, или тиазинил); карбоциклический или гетероциклический, моноциклический или конденсированный или неконденсированный полициклический арил (например, фенил, нафтил, пирролил, индолил, фуранил, тиенил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, пиразолил, пиридинил, хинолинил, изохинолинил, акридинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил, бензимидазолил, бензотиенил, или бензофуранил); амино (первичный, вторичный, или третичный); -О-низший алкил; -O-арил; арил; арил-низший алкил; CO2CH3; CONH2; OCH2CONH2; NH2; N(C1-4алкил)2; NHC(O)C1-4алкил; SO2NH2; SO2C1-4алкил; OCHF2; CF3; OCF3; и такие группы также могут быть, необязательно, замещенными конденсированной кольцевой структурой или мостиком, например, -OCH2O- или -О-низший алкилен-O-. Эти заместители, необязательно, могут быть дополнительно замещены заместителем, выбранным из таких групп.
Как он используется в настоящей заявке, термин "фармацевтически приемлемая соль(соли)" относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты или основания, включая неорганическую кислоту и основание и органическую кислоту и основание. Подходящие фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли гетероарильных соединений включают, но не ограничиваются этим, соли металлов, полученные из алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка, или органические соли, полученные из лизина, N,N'-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглумина (N-метилглюкамин) и прокаина. Подходящие нетоксичные кислоты включают, но не ограничиваются этим, неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, альгиновая, антраниловая, бензолсульфоновая, бензойная, камфорсульфоновая, лимонная, этенсульфоновая, муравьиная, фумаровая, фуранкарбоновая, галактуроновая, глюконовая, глюкуроновая, глутаминовая, гликолевая, бромистоводородная, хлористоводородная, изетионовая, молочная, малеиновая, яблочная, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памовая, пантотеновая, фенилуксусная, фосфорная, пропионовая, салициловая, стеариновая, янтарная, сульфаниловая, серная, винная кислота и п-толуолсульфоновая кислота. Конкретные нетоксичные кислоты включают хлористоводородную, бромистоводородную, фосфорную, серную и метансульфоновую кислоты. Примеры конкретных солей, таким образом, включают гидрохлоридные и мезилатные соли. Другие соли хорошо известны из уровня техники, см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990) или Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19' eds., Mack Publishing, Easton PA (1995).
Как он используется в настоящей заявке, термин "полиморф(полиморфы)" и родственные термины в настоящей заявке относятся к твердым формам гетероарильных соединений, имеющим разные физические свойства как результат порядка расположения молекул в кристаллической решетке. Разница в физических свойствах, которую демонстрируют твердые формы, влияет на фармацевтические параметры, такие как стабильность при хранении, прессуемость и плотность (важные для формулирования композиций и изготовления продукта), и скорости растворения (важный фактор в определении биодоступности). Разница в стабильности может быть результатом изменений способности к химическому взаимодействию (например, дифференциальное окисление, например, лекарственная форма обесцвечивается намного быстрее, когда она состоит из одной твердой формы, чем когда она состоит из другой твердой формы) или механических изменений (например, таблетки крошатся при хранении, поскольку кинетически предпочтительный полиморф преобразуется в термодинамически более стабильную твердую форму), или и того и другого (например, таблетки одной твердой формы являются более подверженными разрушению в условиях высокой влажности). Как результат различий в растворимости/растворении, в крайнем случае, некоторые переходы твердых форм могут привести к отсутствию активности, а в другом крайнем случае, к токсичности. Кроме того, физические свойства кристалла могут иметь важное значение при обработке, например, одна твердая форма может более легко образовывать сольваты, или может быть труднее осуществлять фильтрацию этой формы и промывку для удаления из нее примесей (т.е. форма и распределение по размеру частиц могут быть разными у разных твердых форм).
Как это используется в настоящей заявке и если не указано иное, термин "клатрат" означает гетероарильное соединение или его соль в форме кристаллической решетки, которая включает пространственные образования (например, каналы), которые содержат “гостевую” молекулу (например, растворитель или воду), захваченную в них, или кристаллическую решетку, в которой гетероарильное соединение является “гостевой” молекулой.
Как он использован в настоящей заявке и если не указано иное, термин "гидрат" означает гетероарильное соединение или его соль, которые, кроме того, включают стехиометрическое или нестехиометрическое количество воды, связанной посредством нековалентных межмолекулярных сил.
Как он использован в настоящей заявке и если не указано иное, термин "сольват" означает гетероарильное соединение или его соль, которые, кроме того, включают стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя, связанного посредством нековалентных межмолекулярных сил.
Как он использован в настоящей заявке и если не указано иное, термин "пролекарство" означает производное гетероарильного соединения, которое может гидролизоваться, окисляться или каким-либо иным образом реагировать в биологических условиях (in vitro или in vivo) с образованием активного соединения, в частности, гетероарильного соединения. Примеры продекарств включают, но не ограничиваются этим, производные и метаболиты гетероарильного соединения, которые включают биогидролизуемые группы, такие как биогидролизуемые амиды, биогидролизуемые сложные эфиры, биогидролизуемые карбаматы, биогидролизуемые карбонаты, биогидролизуемые уреиды и биогидролизуемые фосфатные аналоги. В некоторых вариантах воплощения изобретения, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые эфиры карбоновых кислот. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем этерификации любой из карбоновокислотных групп, присутствующих в молекуле. Пролекарства, как правило, могут быть получены с использованием хорошо известных способов, таких как способы, описанные в Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) и Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).
Как он использован в настоящей заявке и если не указано иное, термин "стереоизомер" или "стереоизомерно чистый" означает один стереоизомер гетероарильного соединения, который, по существу, не содержит других стереоизомеров этого соединения. Например, стереоизомерно чистое соединение, содержащее один хиральный центр, по существу, не содержит противоположный энантиомер этого соединения. Стереоизомерно чистое соединение, содержащее два хиральных центра, по существу, не содержит другие диастереомеры этого соединения. Типичное стереоизомерно чистое соединение включает больше чем около 80% мас. одного стереоизомера этого соединения и меньше чем около 20% мас. других стереоизомеров этого соединения, больше чем около 90% мас. одного стереоизомера этого соединения и меньше чем около 10% мас. других стереоизомеров этого соединения, больше чем около 95% мас. одного стереоизомера этого соединения и меньше чем около 5% мас. других стереоизомеров этого соединения, или больше чем около 97% мас. одного стереоизомера этого соединения и меньше чем около 3% мас. других стереоизомеров этого соединения. Гетероарильные соединения могут содержать хиральные центры и могут существовать в виде рацематов, индивидуальных энантиомеров или диастереомеров и их смесей. Все такие изомерные формы охватываются вариантами воплощения изобретения, раскрытыми в настоящей заявке, включая их смеси.
Различные гетероарильные соединения содержат один или несколько хиральных центров и могут существовать в виде рацемических смесей энантиомеров, смесей диастереомеров или энантиомерно или оптически чистых соединений. Использование стереоизомерно чистых форм таких гетероарильных соединений, а также использование смесей таких форм охватывается вариантами воплощения изобретения, раскрытыми в настоящей заявке. Например, смеси, включающие равные или неравные количества энантиомеров конкретного гетероарильного соединения, можно использовать в способах и композициях, раскрываемых в настоящей заявке. Эти изомеры могут быть получены путем асимметричного синтеза, или их можно разделить с использованием стандартных способов, таких как хиральные колонки или хиральные агенты разделения. См., например, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S.Н., et al, Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); и Wilen, S.Н., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E. L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).
Следует также указать, что гетероарильные соединения могут включать E и Z изомеры или их смесь, а также цис и транс изомеры или их смесь. В некоторых вариантах воплощения изобретения, гетероарильные соединения выделяют в виде либо E либо Z изомера. В других вариантах воплощения изобретения, гетероарильные соединения представляют собой смесь E и Z изомеров.
Термин "эффективное количество" в связи с гетероарильным соединением может означать количество, которое может лечить или предотвратить заболевание, раскрытое в настоящей заявке, такое как рак, воспалительные состояния, иммунологические состояния, метаболические состояния или состояния, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования киназного пути, в одном варианте воплощения изобретения - PKCθ или mTOR пути.
Термин "пациент" включает животное, включая, но не ограничиваясь этим, животное, такое как корова, обезьяна, лошадь, овца, свинья, курица, индюк, перепел, кошка, собака, мышь, крыса, кролик или морская свинка, в одном варианте воплощения изобретения - млекопитающее, в другом варианте воплощения изобретения - человек.
4.2 ГЕТЕРОАРИЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
В настоящей заявке представлены гетероарильные соединения формулы (I):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
X, Y и Z, в каждом случае, независимо представляют собой N или CR3, где, по меньшей мере, один из X, Y и Z представляет собой N и, по меньшей мере, один из X, Y и Z представляет собой CR3;
-A-B-Q-, взятые вместе, образуют -CHR4C(O)NH-, -C(O)CHR4NH-, -C(O)NH-, -CH2C(O)O-, -C(O)CH2O-, -C(O)O- или C(O)NR3;
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил;
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил;
R3 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклоалкил, -NHR4 или -N(R4)2; и
R4 в каждом случае независимо представляет собой замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -CH2C(O)NH-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)CH2NH-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -CH2C(O)O-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)CH2O-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)O-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NR3-.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых Y представляет собой CR3.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых X и Z представляют собой N и Y представляет собой CR3.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых X и Z представляют собой CH и Y представляет собой N.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых Y и Z представляют собой CH и X представляет собой N.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых X и Y представляют собой CH и Z представляет собой N.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляют собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-, X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил, L представляет собой простую связь и R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-, X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, L представляет собой простую связь и R2 представляет собой замещенный или незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-, X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-, X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) представляют собой такие соединения, в которых -A-B-Q-, взятые вместе, образуют -C(O)NH-, X и Z представляют собой N и Y представляет собой CH, R1 представляет собой замещенный фенил, L представляет собой простую связь и R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Z оба представляют собой N, и Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный замещенным или незамещенным арилом или замещенным или незамещенным гетероарилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Z оба представляют собой N, и Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой фенил, нафтил, инданил или бифенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из группы, включающей замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Z оба представляют собой N, и Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой фенил, нафтил или бифенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из C1-4алкила, амино, аминоC1-12алкила, галогена, гидрокси, гидроксиC1-4алкила, C1-4алкилоксиC1-4алкила, -CF3, C1-12алкокси, арилокси, арилC1-12алкокси, -CN, -OCF3, -CORg, -COORg, -CONRgRh, -NRgCORh, -SO2Rg, -SO3Rg или -SO2NRgRh, где каждый Rg и Rh независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, C1-4алкила, C3-6циклоалкила, арила, арилC1-6алкила, гетероарила или гетероарилC1-6алкила; или A представляет собой 5-6-членное моноциклическое гетероароматическое кольцо, содержащее от одного, двух, трех или четырех гетероатомов, независимо выбраных из группы, состоящей из N, O и S, при этом такое моноциклическое гетероароматическое кольцо необязательно замещено одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из C1-6алкила, амино, аминоC1-12алкила, галогена, гидрокси, гидроксиC1-4алкила, C1-4алкилоксиC1-4алкила, C1-12алкокси, арилокси, арил C1-12алкокси, -CN, -CF3, -OCF3, -CORi, -COORi, -CONRiRj, -NRiCORj, -NRiSO2RJ, -SO2Ri, -SO3Ri или -SO2NRiRj, где каждый Ri и Rj независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, C1-4алкила, C3-6циклоалкила, арила, арилC1-6алкила, гетероарила или гетероарилC1-6алкила; или A представляет собой 8-10-членное бициклическое гетероароматическое кольцо, содержащее один, два, три или четыре гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, и, необязательно, может быть замещено одним, двумя или тремя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из C1-6алкила, амино, аминоC1-12алкила, галогена, гидрокси, гидроксиC1-4алкила, C1-4алкилоксиC1-4алкила, C1-12алкокси, арилокси, арилC1-12алкокси, -CN, -CF3, -OCF3, -CORk, -COORk, -CОNRkRl, -NRkCORl, -NRkSO2Rl, -SO2Rk, -SO3Rk или -SO2NRkRl, где каждый Rk и Rl независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, C1-4алкила, C3-6циклоалкила, арила, арилC1-6алкила, гетероарила или гетероарилC1-6алкила, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный замещенным или незамещенным арилом или замещенным или незамещенным гетероарилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Y оба представляют собой N, и Z представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный гетероарил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный метил, незамещенный этил, незамещенный пропил или ацетамид.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Y оба представляют собой N, и Z представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный гетероарил, и R2 представляет собой ацетамид.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X представляет собой N, и Y и Z оба представляют собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой (2,5'-би-1H-бензимидазол)-5-карбоксамид и R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где один из X и Z представляет собой CH, а другой представляет собой N, Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой незамещенный пиридин, и R2 представляет собой H, метил или замещенный этил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Z оба представляют собой N, и Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NH-, R1 представляет собой H, C1-6алкил, C2-8алкенил, арил или циклоалкил, и L представляет собой NH.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где X и Z оба представляют собой N, и Y представляет собой CH, -A-B-Q- представляет собой -C(O)NR3-, R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный фенил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил, и L представляет собой NH.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают соединения, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный оксазолидинон.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (I) не включают одно или несколько из следующих соединений: 1,7-дигидро-2-фенил-8H-пурин-8-он, 1,2-дигидро-3-фенил-6H-имидазо[4,5-e]-1,2,4-триазин-6-он, 1,3-дигидро-6-(4-пиридинил)-2H-имидазо[4,5-b]пиридин-2-он, 6-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-1,3-дигидро-1-[(1S)-1-фенилэтил]-2H-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он, 3-[2,3-дигидро-2-оксо-3-(4-пиридинилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил]-бензамид, 1-[2-(диметиламино)этил]-1,3-дигидро-6-(3,4,5-триметоксифенил)-2H-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он, N-[5-(1,1-диметилэтил)-2-метоксифенил]-N'-[4-(1,2,3,4-тетрагидро-2-оксопиридо[2,3-b]пиразин-7-ил)-1-нафталинел]мочевину, N-[4-(2,3-дигидро-2-оксо-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-6-ил)-1-нафталенил]-N'-[5-(1,1-диметилэтил)-2-метоксифенил]мочевину, 1,3-дигидро-5-фенил-2H-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он, 1,3-дигидро-5-фенокси-2H-имидазо[4,5-b]пиридин-2-он, 1,3-дигидро-1-метил-6-фенил-2H-имидазо[4,5-b]пиридин-2-он, 1,3-дигидро-5-(1H-имидазол-1-ил)2H-имидазо[4,5-b]пиридин-2-он, 6-(2,3-дигидро-2-оксо-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-6-ил)-8-метил-2(1H)-хинолинон и 7,8-дигидро-8-оксо-2-фенил-9H-пурин-9-уксусную кислоту.
В некоторых вариантах воплощения изобретения, условия, указанные выше в отношении гетероарильных соединений формулы (I), также применимы к гетероарильным соединениям формул (II)-(VIII), где это является подходящим.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (II):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
Y представляет собой N или CR3;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил;
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил;
R3 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклоалкил, -NHR4 или -N(R4)2; и
R4 в каждом случае независимо представляет собой замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляют собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых Y представляет собой CH.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (II) не включают соединения, где Y представляет собой CH, L представляет собой простую связь, R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный замещенным или незамещенным арилом или замещенным или незамещенным гетероарилом.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (III):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляют собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (III) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (IV):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляют собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (IV) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (V):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (V) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (VI):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VI) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (VII):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляют собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В следующем варианте воплощения изобретения представлены гетероарильные соединения следующей формулы (VIII):
и их фармацевтически приемлемые соли, полиморфы, клатраты, сольваты, гидраты, стереоизомеры, энантиомеры и пролекарства,
где
L представляет собой простую связь, NH или O;
R1 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный C2-8алкенил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; и
R2 представляет собой H, замещенный или незамещенный C1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В одном варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляет собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный арил, такой как замещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил или замещенный или незамещенный нафтил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, такой как замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол, или замещенный или незамещенный тиофен.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой метил или этил, замещенный замещенным или незамещенным арилом, замещенным или незамещенным гетероарилом, замещенным или незамещенным циклоалкилом, или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой замещенный или незамещенный арил, такой как замещенный или незамещенный фенил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R2 представляет собой Н.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых L представляет собой простую связь.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой незамещенный C1-8алкил.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой C1-8алкил, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из алкокси, амино, гидрокси, циклоалкила или гетероциклоалкила.
В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильные соединения формулы (VIII) представляют собой такие соединения, в которых R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил, и R2 представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил.
Репрезентативные гетероарильные соединения представлены в Таблице 1.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
216
217
218
219
220
221
222
223
224
225
226
227
228
229
230
231
232
233
234
235
236
237
238
239
240
241
242
243
244
245
246
247
248
249
250
251
252
253
254
255
256
257
258
259
260
261
262
263
264
265
266
267
4.3 СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕТЕРОАРИЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Гетероарильные соединения могут быть получены специалистами с использованием традиционных методов органического синтеза и коммерчески доступных веществ. В качестве примера, но без ограничения, гетероарильные соединения можно получить, как показано на Схемах 1-12, которые представлены ниже, а также в примерах, которые представлены в разделе 5.1. Следует указать, что специалист в данной области сможет модифицировать процедуры, описанные в иллюстративных схемах и примерах, чтобы выйти на желаемый продукт.
Схема 1
Схема 2
Схема 3
Схема 4
Схема 5
Схема 6
Схема 7
Схема 8
Схема 9
Схема 10
Схема 11
Схема 12
Фармацевтически приемлемые соли гетероарильных соединений могут быть образованы традиционными и известными способами, такими как взаимодействие гетероарильного соединения с подходящей кислотой, как раскрыто выше. Такие соли типично образуются с высоким выходом при умеренных температурах, и их часто получают просто путем выделения соединения из подходящей кислотной промывки на конечной стадии синтеза. Солеобразующую кислоту можно растворить в подходящем органическлм растворителе или водно-органическом растворителе, таком как спирт, кетон или сложный эфир. С другой стороны, когда желательно получить гетероарильное соединение в форме свободного основания, его можно выделить на конечной стадии щелочной промывки, в соответствии с известными способами. Например, типичный способ получения гидрохлоридной соли включает растворение свободного основания в подходящем растворителе и тщательную сушку раствора, например, над молекулярными ситами, перед барботированием через этот раствор газообразного хлористого водорода.
4.4 СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
Гетероарильные соединения, описанные в настоящей заявке, можно использовать в качестве фармацевтических средств для лечения или профилактики заболеваний животных или человека. Кроме того, гетероарильные соединения, описанные в настоящей заявке, являются активными против киназ (например, протеинкиназ), включая киназы, которые принимают участие в таких состояниях, как рак, воспалительные состояния, иммунологические состояния, нейродегенеративные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и метаболические состояния. Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что гетероарильные соединения являются эффективными для лечения и профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, нейродегенеративных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и метаболических состояний, благодаря их способности модулировать (например, ингибировать) киназы, которые вовлечены в этиологию этих состояний. Соответственно, в настоящей заявке обеспечиваются различные применения гетероарильных соединений, включая лечение или профилактику заболеваний, указанных ниже. Способы, обеспечиваемые в настоящей заявке, включают введение эффективного количества одного или нескольких гетероарильных соединений пациенту, нуждающемуся в этом.
Репрезентативные иммунологические состояния, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, рассеянный склероз, обыкновенную волчанку, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, миастению гравис, болезнь Грейва и диабет (например, диабет типа I).
Репрезентативные воспалительные состояния, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, псориаз, астму и аллергический ринит, бронхит, хроническое обструктивное легочное заболевание, кистозный фиброз, воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженной толстой кишки, болезнь Крона, слизистый колит, язвенный колит, диабет (например, диабет типа I и диабет типа II) и ожирение.
Репрезентативные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, рестеноз, удар, инфаркт миокарда или ишемическое поражение сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или головного мозга.
Репрезентативные метаболические состояния, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, ожирение и диабет (например, диабет типа II).
Репрезентативные нейродегенеративные заболевания, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, болезнь Гентингтона, болезнь Альцгеймера и ВИЧ-индуцированный энцефалит.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики резистентности к инсулину. В некоторых вариантах воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики резистентности к инсулину, которая приводит к диабету (например, диабету типа II).
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики синдрома X или метаболического синдрома.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики диабета.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики диабета типа II, диабета типа I, медленно развивающегося диабета типа I, несахарного диабета (например, нейрогенного несахарного диабета, нефрогенного несахарного диабета, дипсогенного несахарного диабета или гестагенного несахарного диабета), сахарного диабета, гестационного сахарного диабета, поликистозного синдрома яичников, диабета взрослых, юношеского диабета, инсулин-зависимого диабета, инсулин-независимого диабета, диабета, вызванного неправильным питанием, кетозного диабета, пред-диабетического состояния (например, нарушенного метаболизма глюкозы), связанного с кистозным фиброзом диабета, гемохроматоз- и кетоз-резистентного диабета.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики фиброзных заболеваний и расстройств. В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики идиопатического фиброза легких, миелофиброза, фиброза печени, стеатофиброза и стеатогепатита.
Репрезентативные типы рака, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают но не ограничиваются этим, рак головы, шеи, глаза, полости рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, грудной клетки, кости, легкого, толстой кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почки, печени, поджелудочной железы и головного мозга или центральной нервной системы. Гетероарильные соединения также полезны для лечения или профилактики солидных опухолей и опухолей крови и кости.
Конкретные типы рака, охватываемые способами, обеспечиваемыми в настоящей заявке, включают рак, связанный с PKCθ, mTOR, Syk и Tyk2 киназами и их мутантами или изоформами.
Другие типы рака, охватываемые способами, обеспечиваемыми в настоящей заявке, включают рак, связанный с путями следующих киназ: IKK1, PKA, Akt, PKC (все изоформы), Aurora, Abα, c-Raf, PI3K (все изоформы), ATM, ATX, DNA-PK и Yes.
Более конкретно, рак и связанные с ним расстройства, лечение или профилактику которых можно осуществлять с использованием способов и композиций, обеспечиваемых в настоящей заявке, включают но не ограничиваются этим, следующие: лейкозы, такие как, но не ограничиваясь этим, острый лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острые миелоцитарные лейкозы, такие как миелобластный, промиелоцитарный, миеломоноцитарный, моноцитарный лейкозы, эритролейкоз и миелодиспластический синдром (или их симптом, такой как анемия, тромбоцитопения, нейтропения, бицитопения или панцитопения), резистентная анемия (RA), RA с кольцевидными сидеробластами (RARS), RA с избытком бластов (RAEB), RAEB в трансформации (RAEB-T), прелейкоз и хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML), хронические лейкозы, такие как, но не ограничиваясь этим, хронический миелоцитарный (гранулоцитарный) лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, волосисто-клеточный лейкоз; полицитемия vera; лимфомы, такие как, но не ограничиваясь этим, болезнь Ходжкина, неходжкинская болезнь; множественные миеломы, такие как, но не ограничиваясь этим, вялотекущая множественная миелома, несекреторная миелома, остеосклеротическая миелома, плазматитоклеточный лейкоз, одиночная плазмацитома и экстрамедуллярная плазмацитома; макроглобулинемия Вальденстрома; моноклональная гаммопатия неопределенного значения; доброкачественная моноклональная гаммопатия; болезнь тяжелой цепи; саркомы кости и соединительных тканей, такие как, но не ограничиваясь этим, саркома кости, остеосаркома, хондросаркома, саркома Эвинга, злокачественная гигантоклеточная опухоль, фибросаркома кости, хордома, периостеальная саркома, саркомы мягких тканей, ангиосаркома (гемангиосаркома), фибросаркома, саркома Капоши, лейомиосаркома, липосаркома, лимфангиосаркома, метастатические типы рака, неврилеммона, рабдомиосаркома, синовиальная саркома; опухоли головного мозга, такие как, но не ограничиваясь этим, глиома, астроцитома, глиома ствола головного мозга, эпендимома, олигодендроглиома, не-глиальная опухоль, слуховая невринома, краниофарингиома, медуллобластома, менингиома, пинеоцитома, пинеобластома, первичная лимфома головного мозга; рак молочной железы, в том числе, но не ограничиваясь этим, аденокарцинома, лобулярная (мелкоклеточная) карцинома, интрадуктальная карцинома, медуллярный рак молочной железы, муцинозный рак молочной железы, тубулярный рак молочной железы, папиллярный рак молочной железы, первичный рак, болезнь Педжета и воспалительный рак молочной железы; рак надпочечников, такой как, но не ограничиваясь этим, феохромоцитомная и адренокортикальная карцинома; рак щитовидной железы, такой как, но не ограничиваясь этим, папиллярный или фолликулярный рак щитовидной железы, медуллярный рак щитовидной железы и анапластический рак щитовидной железы; рак поджелудочной железы, такой как, но не ограничиваясь этим, инсулинома, гастринома, глюкагонома, випома, соматостатин-секретирующая опухоль и карциноидная или инсулярно-клеточная опухоль; гипофизарные раковые заболевания, такие как, но не ограничиваясь этим, болезнь Кушига, пролактин-секретирующая опухоль, акромегалия и несахарный диабет; раковые заболевания глаз, такие как, но не ограничиваясь этим, окулярная меланома, такая как меланома радужной оболочки, хороидальная меланома и циллиарная меланома и ретинобластома; вагинальные раковые заболевания, такие как сквамозно-клеточная карцинома, аденокарцинома и меланома; рак вульвы, такой как сквамозно-клеточная карцинома, меланома, аденокарцинома, базально-клеточная карцинома, саркома и болезнь Педжета; цервикальные раковые заболевания, такие как, но не ограничиваясь этим, сквамозно-клеточная карцинома и аденокарцинома; раковые заболевания матки, такие как, но не ограничиваясь этим, эндометриальная карцинома и саркома матки; раковые заболевания яичников, такие как, но не ограничиваясь этим, эпителиальная карцинома яичников, пограничная опухоль, опухоль зародышевых клеток и стромальная опухоль; раковые заболевания пищевода, такие как, но не ограничиваясь этим, сквамозный рак, аденокарцинома, аденокистозная карцинома, мукоэпидермоидная карцинома, аденосквамозная карцинома, саркома, меланома, плазмацитома, веррукозная карцинома и овсяновидно-клеточная (мелкоклеточная) карцинома; раковые заболевания желудка, такие как, но не ограничиваясь этим, аденокарцинома, грибовидно разрастающаяся (полиpоидная), язвенная, поверхностно разрастающаяся, диффузно разрастающаяся, злокачественная лимфома, липосаркома, фибросаркома и карциносаркома; раковые заболевания толстой кишки; раковые заболевания прямой кишки; раковые заболевания печени, такие как, но не ограничиваясь этим, гепатоклеточная карцинома и гепатобластома, раковые заболевания желчного пузыря, такие как аденокарцинома; холангиокарциномы, такие как, но не ограничиваясь этим, папиллярная, нодулярная и диффузная; раковые заболевания легких, такие как немелкоклеточный рак легкого, сквамозно-клеточная карцинома (эпидермоидная карцинома), аденокарцинома, крупно-клеточная карцинома и мелко-клеточный рак легкого; тестикулярные раковые заболевания, такие как, но не ограничиваясь этим, герминальная опухоль, семинома, анапластическая, классическая (типичная), сперматоцитная, не-семиномная, эмбриональная карцинома, тератомa карцинома, хориокарцинома (yolk-sac опухоль), раковые заболевания предстательной железы, такие как, но не ограничиваясь этим, аденокарцинома, лейомиосаркома и рабдомиосаркома; раковые заболевания полового члена; раковые заболевания полости рта, такие как, но не ограничиваясь этим, сквамозно-клеточная карцинома; базальные раковые заболевания; раковые заболевания слюнных желез, такие как, но не ограничиваясь этим, аденокарцинома, мукоэпидермоидная карцинома и адено-кистозная карцинома; раковые заболевания глотки, такие как, но не ограничиваясь этим, сквамозно-клеточный рак и веррукозный рак; раковые заболевания кожи, такие как, но не ограничиваясь этим, базально-клеточная карцинома, сквамозно-клеточная карцинома и меланома, поверхностно разрастающаяся меланома, нодулярная меланома, злокачественное лентиго, акральная лентигинозная меланома; раковые заболевания почек, такие как, но не ограничиваясь этим, ренально-клеточный рак, аденокарцинома, гипернефрома, фибросаркома, транзиторно-клеточный рак (почечной лоханки и/ или мочеточника); опухоль Вильмса; раковые заболевания мочевого пузыря, такие как, но не ограничиваясь этим, транзиторно-клеточная карцинома, сквамозно-клеточный рак, аденокарцинома, карциносаркома. Кроме того, раковые заболевания включают миксосаркому, остеогенную саркому, эндотелиосаркому, лимфангио-эндотелиосаркому, мезотелиому, синовиому, гемангиобластому, эпителиальную карциному, цистаденокарциному, бронхогенную карциному, карциному потовых желез, карциному сальных желез, папиллярную карциному и папиллярные аденокарциномы (обзор таких расстройств см. в Fishman et al., 1985, Medicine, 2d Ed., J. B. Lippincott Co., Philadelphia and Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., United States of America).
Соответственно, способы и композиции, которые обеспечиваются в настоящей заявке, также являются полезными для лечения или профилактики различных раковых заболеваний или других аномальных пролиферативных заболеваний, включая (но не ограничиваясь этим) следующие: карцинома, включая карциному мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, почки, печени, легкого, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы и кожи; включая сквамозно-клеточную карциному; гематопоэтические опухоли лимфоидного происхождения, включая лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый лимфoбластный лейкоз, B-клеточную лимфому, T-клеточную лимфому, лимфому Беркеттса; гематопоэтические опухоли миелоидного происхождения, включая острый и хронический миелогенный лейкоз и промиелоцитарный лейкоз; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому и рабдомиосаркому; другие опухоли, включая меланому, семиному, тетратокарциному, нейробластому и глиому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, различные глиобластомы, нейробластому, глиому и шванномы; солидные и кровяные опухоли; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросафкому, рабдомиоскараму и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, xenoderma pegmentosum, кератоактантому, семиному, тиреоидный фолликулярный рак и тератокарциному. Также предусматривается, что раковые заболевания, вызванные аберрациями при апоптозе, также можно лечить с использованием способов и композиций, раскрываемых в настоящей заявке. Такие раковые заболевания могут включать, но не ограничиваются этим, фолликулярные лимфомы, карциномы с p53 мутациями, гормоно-зависимые опухоли молочной железы, предстательной железы и яичника и предраковые поражения, такие как наследственный аденоматозный полипоз и миелодиспластические синдромы. В конкретных вариантах воплощения изобретения, осуществляют лечение или профилактику злокачественных или диспролиферативных изменений (таких как метаплазии и дисплазии) или гиперпролиферативных расстройств яичника, мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, легкого, кожи, поджелудочной железы, почки или матки. В других конкретных вариантах воплощения изобретения, осуществляют лечение или профилактику саркомы, меланомы или лейкоза.
В конкретном варианте воплощения изобретения способы и композиции, представленные в настоящей заявке, также являются полезными для лечения, профилактики или оказания помощи при различных типах лимфом (т.е. гетерогенной группы новообразований, возникающих в ретикулоэндотелиальной и лимфaтической системах), таких как не-ходжкинская лимфома (NHL) (т.е. злокачественная моноклональная пролиферация лимфоидных клеток на участках иммуной системы, включая лимфатические узлы, костный мозг, селезенку, печень и желудочно-кишечный тракт). NHL, для лечения или профилактики которых гетероарильные соединения являются полезными, включают, но не ограничиваются этим, лимфому коры головного мозга, MCL, лимфоцитарную лимфому промежуточной дифференциации, промежуточную лимфоцитарную лимфому, ILL, диффузную недифференцированную лимфоцитарную лимфому, PDL, центроцитарную лимфому, диффузную мелкоклеточную лимфому, DSCCL, фолликулярную лимфому и любой тип лимфом коры головного мозга, которые можно различить под микроскопом (нодулярная, диффузная, бластная лимфома и лимфома области мантии).
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются также способы и композиции, полезные для введения пациентам, нуждающимся в трансплантации костного мозга для лечения злокачественного заболевания (например, пациентам, страдающим острым лимфоцитарным лейкозом, острым миелогенным лейкозом, хроническим миелогенным лейкозом, хроническим лимфоцитарным лейкозом, миелодиспластическим синдромом ("предлейкоз"), синдромом моносомии 7, не-ходжкинской лимфомой, нейробластомой, опухолями головного мозга, множественной миеломой, тестикулярными опухолями зародышевых клеток, раком молочной железы, раком легкого, раком яичников, меланомой, глиомой, саркомой или другими солидными опухолями), пациентам, нуждающимся в трансплантации костного мозга для лечения незлокачественного заболевания (например, пациентам, страдающим гематологическими расстройствами, врожденным иммунодефицитом, мукополисахаридозом, липидозом, остеопорозом, гистиоцитозом клеток Лангерганса, синдром Леша-Найхана или гликогеновые болезни), пациентам, проходящим курс химиотерапии или радиационной терапии, пациентам, готовящимся к прохождению курса химиотерапии или радиационной терапии, пациентам, которые ранее проходили курс химиотерапии или радиационной терапии.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения миелопролиферативных расстройств или миелодиспластических синдромов, включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества гетероарильного соединения или композиции, включающей такое соединение. В некоторых вариантах воплощения изобретения, миелопролиферативное расстройство представляет собой истинную эритремию; первичную тромбоцитемию; хронический миелогенный лейкоз; острый или хронический гранулоцитарный лейкоз; острый или хронический миеломоноцитарный лейкоз; миелофибро-эритролейкоз; или ангиогенную миелоидную метаплазию.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения рака или опухолей, резистентных к другим ингибиторам киназы, таким как лечение иматиниб мезилатом (STI-571 или Gleevec™), включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества гетероарильного соединения или композиции, включающей такое соединение. В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения лейкозов, включая, но не ограничиваясь этим, желудочно-кишечную стромальную опухоль (GIST), острый лимфоцитарный лейкоз или хронический миелоцитарный лейкоз, резистентные к лечению иматиниб мезилатом (STI-571 или Gleevec™), включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества гетероарильного соединения или композиции, включающей такое соединение.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, которые связаны с ингибированием PKCθ или mTOR. Конкретные заболевания, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования PKCθ или mTOR, включают, но не ограничиваются этим, ревматоидный артрит; ревматоидный спондилит; остеоартрит; подагру; астму, бронхит; аллергический ринит; хроническое обструктивное легочное заболевание; кистозный фиброз; воспалительное заболевание кишечника; синдром раздраженной толстой кишки; слизистый колит; язвенный колит; болезнь Крона; болезнь Гентингтона; гастрит; эзофагит; гепатит; панкреатит; нефрит; рассеянный склероз; красную волчанку; диабет типа II; ожирение; атеросклероз; рестеноз после ангиопластики; гипертрофию левого желудочка сердца; инфаркт миокарда; удар; ишемическое поражение сердца, легкого, кишечника, почки, печени, поджелудочной железы, селезенки и головного мозга; острое или хроническое отторжение трансплантата органа; сохранение органа для трансплантации; органную недостаточность или потеря органа (например, включая, но не ограничиваясь этим, являющиеся результатом ишемического-реперфузионного поражения, травмы, сильного травматического повреждения, автомобильной аварии, переломов или отказа трансплантата); заболевание трансплантат-против-хозяина; эндотоксический шок; полиорганную недостаточность; псориаз; ожог, вызванный огнем, химикатами или радиацией; экзему; дерматит; кожный трансплантат; ишемию; ишемические состояния, связанные с хирургическим вмешательством или травматическими повреждениями (например, в результате автомобильной аварии, огнестрельного ранения или перелома конечностей); эпилепсию; болезнь Альцгеймера; болезнь Паркинсона; иммунный ответ на бактериальную или вирусную инфекцию; кахексию; ангиогенные и пролиферативные заболевания; солидные опухоли; и раковые заболевания различных тканей, таких как толстой кишки, прямой кишки, предстательной железы, печени, легкого, бронхов, поджелудочной железы, головного мозга, головы, шеи, желудка, кожи, почки, шейки матки, крови, глотки, пищевода, полости рта, гортани, мочевого пузыря, яичника или матки.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики лейкоза (т.е. злокачественных опухолей кровообразующих тканей), включая, но не ограничиваясь этим, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз, острый лимфoбластный лейкоз, острый миелогенный лейкоз и острый миелобластный лейкоз. Лейкоз может быть рецидивирующим, стойким или резистентным к традиционной терапии. Термин "рецидивирующий" относится к ситуации, когда у пациентов, у которых наблюдалась ремиссия лейкоза после терапии, снова появлялись лейкозные клетки в костном мозге и снижалось количество нормальных клеток крови. Термин "стойкий или резистентный" относится к обстоятельству, когда у пациентов, даже после интенсивной терапии, имеются остаточные лейкозные клетки в их костном мозге.
Различные типы рака описаны во Временной Заявке США № 60/380842, поданной 17 мая 2002 года, полное содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки (см., например, Section 2.2. Types of Cancers). Конкретные раковые заболевания включают, но не ограничиваются этим, лейкозы, такие как хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелоцитарный лейкоз, острый лимфoбластный лейкоз, острый миелогенный лейкоз и острый миелобластный лейкоз; запущенные злокачественные заболевания, амилоидоз, нейробластому, менингиому, гемангиоперицитому, множественные метастазы головного мозга, мультиформные глиобластомы, глиобластома, глиому ствола головного мозга, злокачественную опухоль головного мозга с плохим прогнозом, злокачественную глиому, редицивирующую злокачественную глиому, анапластическую астроцитому, анапластическую олигодендроглиому, нейроэндокринную опухоль, ректальную аденокарциному, колоректальный рак Dukes C & D, неоперабельную колоректальную карциному, метастатическую гепатоклеточную карциному, саркому Капоши, кариотипичный острый миелобластный лейкоз, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, кожную T-клеточную лимфому, кожную B-клеточную лимфому, диффузную крупно-B-клеточную лимфому, фолликулярную лимфому низкой степени, злокачественную меланому, злокачественную мезотелиому, злокачественный плевральный эффузионный мезотелиомный синдром, перитонеальную карциному, папиллярную серозную карциному, гинекологическую саркому, саркому мягких тканей, склеродерму, кожный васкулит, гистиоцитоз клеток Лангерганса, лейомиосаркому, фибродисплазию с прогрессирующим окостенением, гормоно-резистентный рак предстательной железы, саркому мягких тканей с высоким риском после резекции, неоперабельную гепатоклеточную карциному, макроглобулинемию Вальденстрома, медленно развивающуюся миелому, безболезненную миелому, рак фаллопиевых труб, андроген-независимый рак предстательной железы, андроген-зависимый не-метастатический рак предстательной железы стадии IV, нечувствительный к гормонотерапии рак предстательной железы, нечувствительный к химиотерапии рак предстательной железы, папиллярную карциному щитовидной железы, фолликулярную карциному щитовидной железы, медуллярную карциному щитовидной железы и лейомиому. В одном варианте воплощения изобретения, рак является первичным или метастатическим. В другом варианте воплощения изобретения, рак является рецидивирующим, стойким или резистентным к химиотерапии или радиационной терапии; в частности, резистентным к талидомиду.
Кроме того, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения пациентов, которых ранее лечили от рака, но которые не отвечают на стандартную терапию, а также которых ранее не лечили. Также в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения пациентов, независимо от возраста пациента, хотя некоторые раковые заболевания наиболее распространены в некоторых возрастных группах. Также, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения пациентов, перенесших операцию в качестве метода лечения определенного рака, а также пациентов, у которых не было операции. Поскольку пациенты, страдающие раком, имеют гетерогенные клинические проявления и различный клинический результат, лечение, предписываемое разным пациентам, может быть разным, в зависимости от прогнозов для этих пациентов. Специалист в данной области может легко определить, без излишнего экспериментирования, конкретные дополнительные средства, тип операции и типы нелекарственной стандартной терапии, которые можно эффективно использовать для лечения конкретного пациента, страдающего раком.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства (например, рака или опухоли), которые связаны с ингибированием IKK1, PKA, Akt, PKC (все изоформы), Aurora, Ab1, c-Raf, PI3K (все изоформы), ATM, ATX, DNA-PK, Syk, PI3K или Yes.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, которые связаны с ингибированием mTOR, которые включают, не ограничиваясь этим, опухолевые синдромы, являющиеся результатом, непосредственно или опосредованно, генетических дефектов в PTEN (делеций фосфатазы и гомолога тензина в хромосоме 10), TSCl (Туберозный склероз 1), TSC2 (Туберозный склероз 2), NFl (нейрофибромин 1), AMPK (AMP-зависимая протеинкиназа STK11, серин/треонинкиназа 11) и LKB1. Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что генетические дефекты, связанные с этими белками, приводят к гиперактивации пути mTOR. Конкретные заболевания, которые можно лечить или предотвратить путем ингибирования пути mTOR, включают, но не ограничиваются этим, болезнь Cowden, синдром Cowden, Cowden-подобный синдром, синдром Bannayan-Zonana, синдром Bannayan-Riley-Ruvalcaba, болезнь Lhermitte-Duclos, эндометриальную карциному, карциному предстательной железы и злокачественную меланому, туберозный склерозный комплекс, лимфангиолейомиоматоз, нейрофибромазоз 1, наследственную гипертрофическую кардиомиопатию, синдром Peutz-jeghers, почечно-клеточную карциному и поликистозное почечное заболевание.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, которые связаны с модуляцией, например, ингибированием киназы, включающей, но не ограничиваясь этим, тирозиновую протеинкиназу (SYK), тирозиновую протеинкиназу (ZAP-70), тирозиновую протеинкиназу 2 бета (PYK2), киназу фокальной адгезии 1 (FAK), киназу B лимфоцитов (BLK), киназу гемопоэтических клеток (HCK), гомолог онкогена вируса саркомы Yamaguchi v-yes-1 (LYN), T-клеточно-специфическую тирозиновую протеинкиназу (LCK), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу (YES), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу(SRC), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу (FYN), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу (FGR), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу (FER), прото-онкогенную тирозиновую протеинкиназу (FES), C-SRC киназу, тирозиновую протеинкиназу (CYL), тирозиновую протеинкиназу (CSK), мегакариоцит-ассоциированную тирозиновую протеинкиназу (CTK), тирозиновую протеинкиназу-рецептор (EPH), Ephrin A-типа рецептор 1, Ephrin A-типа рецептор 4 (EPHA4), Ephrin B-типа рецептор 3 (EPHB3), Ephrin A-типа рецептор 8 (EPHA8), нейротрофическую тирозинкиназу-рецептор типа 1 (NTRK1), тирозиновую протеинкиназу (PTK2), syk тирозинкиназу (SRK), тирозиновую протеинкиназу (CTK), тирозиновую протеинкиназу tyro3 (TYRO3), тирозинкиназу агаммаглоблинемии брутон (BTK), тирозинкиназу лейкоцитов (LTK), тирозиновую протеинкиназу (SYK), тирозиновую протеинкиназу (STY), tek тирозинкиназу (TEK), elk тирозинкиназу (ERK), тирозинкиназу с гомологичными доменами иммуноглобулина и egf фактора (TIE), тирозиновую протеинкиназу (TKF), нейротрофическую тирозинкиназу, рецептор типа 3 (NTRK3), протеинкиназу-3 смешанного происхождения (MLK3), протеинкиназу, активируемую митогеном 4 (PRKM4), протеинкиназу, активируемую митогеном 1 (PRKMl), тирозиновую протеинкиназу (PTK7), тирозиновую протеинкиназу (EEK), минимозговой (дрозофила) гомолог (MNBH), киназу костного мозга, x-связанную (BMX), eph-подобную тирозинкиназу 1 (ETK1), макрофаг-стимулирующий рецептор 1 (MST1R), btk-ассоциированный белок, 135 кДа, лимфоцит-специфическую тирозиновую протеинкиназу (LCK), рецептор-2 фактора роста фибробластов (FGFR2), тирозиновую протеинкиназу-3 (TYK3), тирозиновую протеинкиназу (TXK), тирозиновую протеинкиназу tec (TEC), тирозиновую протеинкиназу-2 (TYK2), лиганд 1 тирозинкиназного рецептора eph (EPLG1), t-клеточную тирозинкиназу (EMT), eph тирозинкиназу 1 (EPHT1), тирозинкиназу-рецептор zona pellucida, 95 кДа (ZRK), протеинкиназу, митоген-активируемую, киназу 1 (PRKMKl), eph тирозинкиназу 3 (EPHT3), специфический для остановки роста ген-6 (GAS6), рецептор домена киназного инсерта (KDR), axl тирозинкиназу-рецептор (AXL), рецептор-1 фактора роста фибробластов (FGFR1), гомолог 2 вирусного онкогена эритробластного лейкоза птиц v-erb-b2 (ERBB2), fms-подобную тирозинкиназу-3 (FLT3), нейроэпителиальную тирозинкиназу (NEP), нейротрофическую тирозинкиназу-рецептор 3 (NTRKR3), лиганд 5 тирозинкиназного рецептора eph (EPLG5), нейротрофическую тирозинкиназу, рецептор, типа 2 (NTRK2), рецептор-подобную тирозинкиназу (RYK), b-лимфоцит-специфическую тирозинкиназу (BLK), eph тирозинкиназу 2 (EPHT2), лиганд 2 тирозинкиназного рецептора eph (EPLG2), гликогеновую болезнь VIII, лиганд 7 тирозинкиназного рецептора eph (EPLG7), janus киназу 1 (JAKl), fms тирозинкиназу-1 (FLTl), протеинкиназу, camp-зависимую, регуляторную, типа I, альфа (PRKAR1A), wee-1 тирозинкиназу (WEE1), eph-подобную тирозинкиназу 2 (ETK2), musk тирозинкиназу-рецептор, инсулиновый рецептор (INSR), janus киназу 3 (JAK3), лиганд fms тирозинкиназы-3, протеинкиназа c, бета 1 (PRKCBl), клеточно-поверхностный рецептор тирозинкиназного типа (HER3), janus киназу 2 (JAK2), киназу 1 Hm домена (LIMKl), фосфатазу 1 двойной специфичности (DUSP1), киназу гемопоэтических клеток (HCK), белок активирования тирозин 3-монооксигеназы/триптофан 5-монооксигеназы, eta полипептид (YWHAH), ret прото-онкоген (RET), белок активирования тирозин 3-монооксигеназы/триптофан 5-монооксигеназы, зета полипептид (YWHAZ), белок активирования тирозин 3-монооксигеназы/триптофан 5-монооксигеназы, бета полипептид (YWHAB), трансмембранную киназу гепатомы (HTK), киназу 6 map киназы, фосфатидилинозит 3-киназа, каталитическая, альфа полипептид (PIK3CA), ингибитор циклин-зависимой киназы 3 (CDKN3), диацилглицеринкиназу, дельта, 130 кДа, протеин-тирозинфосфатаза, нерецепторного типа, 13 (PTPN1 3), гомолог вирусного онкогена 1 мышиного лейкоза abelson (ABL1), диацилглицеринкиназу, альфа (DAGK1), киназу 2 фокальной адгезии, рецептор 1 эпителиального дискоидинового домена (EDDR1), киназу анапластической лимфомы (ALK), фосфатидилинозит 3-киназу, каталитическая, гамма полипептид (PIK3CG), регуляторную субъединицу фосфатидилинозит 3-киназы, (PIK3R1), киназа-1 eph гомологии (EHK1), гомолог вирусного онкогена кошачьей саркомы v-kit hardy-zuckerman 4 (KIT), рецептор-3 фактора роста фибробластов (FGFR3), сосудистый эндотелиальный фактор роста c (VEGFC), рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), онкоген (TRK), связанный с рецептором фактора роста белок-7 (GRB7), активатор белка ras p21 (RASA2), met прото-онкоген (MET), src-подобный адаптер (SLA), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), рецептор фактор роста сосудистого эндотелия (VEGFR), рецептор фактора роста нервов (NGFR), рецептор тробоцитарного фактора роста (PDGFR), рецептор бета тробоцитарного фактора роста (PDGFRB), имеющую двойную специфичность регулируемую тирозин-(Y)-фосфорилированием киназу 2 (DYRK2), имеющую двойную специфичность регулируемую тирозин-(Y)-фосфорилированием киназу 3 (DYRK3), имеющую двойную специфичность регулируемую тирозин-(Y)-фосфорилированием киназу 4 (DYRK4), имеющую двойную специфичность регулируемую тирозин-(Y)-фосфорилированием киназу 1A (DYRK1A), имеющую двойную специфичность регулируемую тирозин-(Y)-фосфорилированием киназу 1B (DYRK1B), CDC-подобную киназу 1 (CLKl), тирозиновую протеинкиназу STY, CDC-подобную киназу 4 (CLK4), CDC-подобную киназу 2 (CLK2) или CDC-подобную киназу 3 (CLK3).
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, которые связаны с модуляцией, например, ингибированием серин/треонинкиназ или родственных молекул, включая, но не ограничиваясь этим, Akt/протеинкиназу B, протеинкиназу A (PKA), CK2, циклин-зависимую киназу 7 (CDK7), сериновую/треониновую протеинкиназу rac, сериновую-треониновую протеинкиназу n (PKN), сериновую/треониновую протеинкиназу 2 (STK2), zipper протеинкиназу (ZPK), тирозиновую протеинкиназу (STY), тирозинкиназу агаммаглоблинемии bruton (BTK), mkn28 киназу, протеинкиназу, x-связанную (PRKX), elk тирозинкиназу (ERK), рибосомальную протеин s6 киназу, 90 кДа, полипептид 3 (RPS6KA3), гликогеновую болезнь VIII, связанную с летальностью протеинкиназу 1 (DAPK1), pctaire протеинкиназу 1 (PCTKl), протеинкиназу, интерферон-индуцируемую с двухцепочечной РНК (PRKR), рецептор активина a, тип II-подобная киназа 1 (ACVRLK1), протеинкиназу, camp-зависимую, каталитическую, альфа (PRKACA), протеинкиназу, y-связанную (PRKY), связанный с G-белком рецептор, киназу 2 (GPRK21), протеинкиназу c, тета формы (PRKCQ), киназу 1 lim домена (LIMK1), фосфоглицераткиназу 1 PGK1), киназу 2 lim домена (LIMK2), c-jun киназу, рецептор активина a, тип II-подобная киназа 2 (ACVRLK2), janus киназу 1 (JAK1), киназу elkl мотива (EMK1), ассоциированную с мужскими зародышевыми клетками киназу (MAK), казеинкиназу 2, альфа-прайм субъединицу (CSNK2A2), казеинкиназу 2, бета полипептид (CSNK2B), казеинкиназу 2, альфа 1 полипептид (CSNK2A1), ret прото-онкоген (RET), гематопоэтический предшественник киназу 1, консервативную спираль-петля-спираль убиквитарную киназу (CHUK), казеинкиназу 1, дельта (CSNK1D), казеинкиназу 1, эпсилон (CSNK1E), гомолог 1 вирусного онкогена мышиной тимомы v-akt (AKTl), белок опухоли p53 (TP53), протеинфосфатазу 1, регуляторную (ингибитор) субъединицу 2 (PPP1R2), онкоген pim-1 (PIM1), рецептор трасформирующего ростового фактора-бета, типа II (TGFBR2), рецептор трасформирующего ростового фактора-бета, типа I (TGFBR1), гомолог b1 вирусного онкогена мышиной саркомы v-raf (BRAF), костный морфогенетический рецептор типа II (BMPR2), гомолог 1 вирусного онкогена 3611 мышиной саркомы v-raf (ARAF1), гомолог 2 вирусного онкогена 3611 мышиной саркомы v-raf (ARAF2), протеинкиназу C (PKC), гомолог вирусного онкогена кошачей саркомы v-kit hardy-zuckerman 4 (KIT) или c-KIT рецептор (KITR).
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, которые связаны с модуляцией, например, ингибированием MAP киназы, включая, но не ограничиваясь этим, митоген-активируемой протеинкиназы 3 (MAPK3), p44erk1, p44mapk, митоген-активируемой протеинкиназы 3 (MAP киназа 3; p44), ERK1, PRKM3, P44ERK1, P44MAPK, митоген-активируемой протеинкиназы 1 (MAPK1), киназы 1 митоген-активируемой протеинкиназы (MEK1), MAP2K1 тирозиновой протеинкиназы ERK2, митоген-активируемой протеинкиназы 2, регулируемой внеклеточным сигналом киназы 2, тирозиновой протеинкиназы ERK2, митоген-активируемой протеинкиназы 2, регулируемой внеклеточным сигналом киназы 2, ERK, p38, p40, p41, ERK2, ERT1, MAPK2, PRKM1, PRKM2, P42MAPK, p41mapk, митоген-активируемой протеинкиназы 7 (MAPK7), BMK1 киназы, регулируемой внеклеточным сигналом киназы 5, BMK1, ERK4, ERK5, PRKM7, nemo-подобной киназы (NLK), возможного ортолога мышиной nemo-подобной киназы, митоген-активируемой протеинкиназы 8 (MAPK8), протеинкиназы JNK1, JNK1 бета протеинкиназы, JNK1 альфа протеинкиназы, c-Jun N-концевой киназы 1, стресс-активируемой протеинкиназы JNK1, JNK, JNK1, PRKM8, SAPK1, JNK1 A2, JNK21B1/2, митоген-активируемой протеинкиназы 10 (MAPK10), c-Jun киназы 3, JNK3 альфа протеинкиназы, c-Jun N-концевой киназы 3, стресс-активируемой протеинкиназы JNK3, стресс-активируемой протеинкиназы бета, митоген-активируемой протеинкиназы 9 (MAPK9), MAP киназы 9, c-Jun киназы 2, c-Jun N-концевой киназы 2, стресс-активируемой протеинкиназы JNK2, JNK2, JNK2A, JNK2B, PRKM9, JNK-55, JNK2BETA, p54aSAPK, JNK2ALPHA, митоген-активируемой протеинкиназы 14 (MAPK 14), p38 MAP киназы, MAP киназы Mxi2, Csaids связывающего белка, MAX-взаимодействующего белка 2, стресс-активируемой протеинкиназы 2A, p38 митоген-активируемой протеинкиназы, белка, связывающегося с цитокин-супрессивным противовоспалительным лекарственным, RK, p38, EXIP, Mxi2, CSBP1, CSBP2, CSPB1, PRKM14, PRKM15, SAPK2A, p38ALPHA, митоген-активируемой протеинкиназы 11 (MAPK11), стресс-активируемой протеинкиназы-2, стресс-активируемой протеинкиназы-2b, митоген-активируемой протеинкиназы p38-2, митоген-активируемой протеинкиназы p38бета, P38B, SAPK2, p38-2, PRKM11, SAPK2B, p38Бета, P38БЕТА2, митоген-активируемой протеинкиназы 13 (MAPK13), стресс-активируемой протеинкиназы 4, митоген-активируемой протеинкиназы p38 дельта, SAPK4, PRKM1 3, p38дельта, митоген-активируемой протеинкиназы 12 (MAPK 12), p38гамма, стресс-активируемой протеинкиназы 3, митоген-активируемой протеинкиназы 3, ERK3, ERK6, SAPK3, PRKM 12, SAPK-3, P38GAMMA, митоген-активируемой протеинкиназы 6 (MAPK6), MAP киназной изоформы p97, митоген-активируемой протеинкиназы 5, митоген-активируемой протеинкиназы 6, регулируемой внеклеточным сигналом киназы 3, регулируемой внеклеточным сигналом киназы, p97, ERK3, PRKM6, p97MAPK, митоген-активируемой протеинкиназы 4 (MAPK4), Erk3 протеинкиназы, митоген-активируемой протеинкиназы 4 (MAP киназы 4; p63), PRKM4, p63MAPK, ERK3, или регулируемой внеклеточным сигналом, киназы 8 (ERK7).
Гетероарильное соединение можно объединять с другими фармакологически активными соединениями ("второе активное вещество") в способах и композициях, описанных в настоящей заявке. Считают, что некоторые сочетания могут работать синергично при лечении конкретных типов заболеваний или расстройств, а также состояний и симптомов, связанных с такими заболеваниями или расстройствами. Гетероарильное соединение также может работать для облегчения неблагоприятных побочных эффектов, связанных с некоторыми вторыми активными веществами, и наоборот.
В способах и композициях, описанных в настоящей заявке, можно использовать одно или несколько вторых активных ингредиентов или веществ. Вторые активные вещества могут представлять собой большие молекулы (например, белки) или малые молекулы (например, синтетические неорганические, металлоорганические или органические молекулы).
Примеры больших молекул вторых активных веществ включают, но не ограничиваются этим, гематопоэтические факторы роста, цитокины и моноклональные и поликлональные антитела. Конкретные примеры активных веществ включают анти-CD40 моноклональные антитела (такие как, например, SGN-40); ингибиторы гистондеацетилазы (такие как, например, SAHA и LAQ 824); ингибиторы белка-90 теплового шока (такие как, например, 17-AAG); ингибиторы киназного рецептора инсулин-подобного ростового фактора-1; ингибиторы киназного рецептора фактора роста сосудистого эндотелия (такие как, например, PTK787); ингибиторы рецептора ростового фактора инсулина; ингибиторы ацилтрансферазы лизофосфатидиновой кислоты; ингибиторы IkB киназы; ингибиторы p38MAPK; ингибиторы EGFR (такие как, например, гефитиниб и эрлотиниб HCL); антитела к HER-2 (такие как, например, трастузумаб (Herceptin®) и пертузумаб (Omnitarg™)); антитела к VEGFR (такие как, например, бевацизумаб (Avastin™)); ингибиторы VEGFR (такие как, например, flk-1-специфические ингибиторы киназы, SU5416 и ptk787/zk222584); ингибиторы P13K (такие как, например, вортманнин); ингибиторы C-Met (такие как, например, PHA-665752); моноклональные антитела (такие как, например, ритуксимаб (Rituxan®), тозитумомаб (Bexxar®), эдреколомаб (Panorex®) и G250); и анти-TNF-α антитела. Примеры активных веществ, которые представляют собой малые молекулы, включают, но не ограничиваются этим, противораковые средства, представляющие собой малые молекулы, и антибиотики (например, кларитромицин).
Конкретные вторые активные соединения, которые можно использовать в сочетании с гетероарильным соединением, варьируют в зависимости от конкретного показания, в отношении которого необходимо лечение, профилактика или оказание помощи.
Например, для осуществления лечения, профилактики или оказания помощи при раке, вторые активные вещества включают, но не ограничиваются этим: семаксаниб; циклоспорин; этанерсепт; доксициклин; бортезомиб; активицин; акларубицин; акодазол гидрохлорид; акронин; адозелезин; альдеслейкин; альтретамин; амбомицин; аметантрон ацетат; амсакрин; анастрозол; антрамицин; аспарагиназу; асперлин; азацитидин; азетепа; азотомицин; батимастат; бензодепа; бикалутамид; бисантрен гидрохлорид; биснафид димезилат; бизелезин; блеомицин сульфат; бреквинар натрий; бропиримин; бусульфан; кактинoмицин; калустерон; карацемид; карбетимер; карбоплатин; кармустин; карубицин гидрохлорид; карцелезин; цедефингол; целекоксиб; хлорамбуцил; циролемицин; цисплатин; кладрибин; кристанол мезилат; циклофосфамид; цитарабин; дакарбазин; дактиномицин; даунорубицин гидрохлорид; децитабин; дексормаплатин; дезагуанин; дезагуанин мезилат; диазиквон; доцетаксел; доксорубицин; доксорубицин гидрохлорид; дролоксифен; дролоксифен цитрат; дромостанолон пропионат; дуазомицин; эдатрексат; эфлорнитин гидрохлорид; элсамитруцин; энлоплатин; эпромат; эпипропидин; эпирубицин гидрохлорид; эрбулозол; эзорубицин гидрохлорид; эстрамустин; эстрамустин натрий фосфат; этанидазол; этопозид; этопозид фосфат; этоприн; фадрозол гидрохлорид; фазарабин; фенретинид; флоксуридин; флударабин фосфат; фторурацил; флуроцитабин; фосквидон; фостриецин натрий; гемцитабин; гемцитабин гидрохлорид; гидроксимочевину; идарубицин гидрохлорид; ифосфамид; илмофозин; ипроплатин; иринотекан; иринотекан гидрохлорид; ланреотид ацетат; летрозол; лейпролид ацетат; лиарозол гидрохлорид; лометрексол натрий; ломустин; лозоксантрон гидрохлорид; мазопрокол; мэйтансин; мекслоретамин гидрохлорид; мегестрол ацетат; меленгестрол ацетат; мелфалан; меногарил; меркаптопурин; метотрексат; метотрексат натрий; метоприн; метуредепа; митиндомид; митокарцин; титохромин; митогиллин; митомальцин; митомицин; митоспер; митотан; митоксантрон гидрохлорид; микофеноловую кислоту; нокодазол; ногаламицин; ормаплатин; оксисуран; паклитаксел; пегаспаргазу; пелиомицин; пентамустин; пепломицин сульфат; перфосфамид; пипоброман; пипосульфан; пироксантрон гидрохлорид; пликaмицин; пломестан; порфимер натрий; порфиромицин; преднимустин; прокарбазин гидрохлорид; пуромицин; пуромицин гидрохлорид; пиразофурин; рибоприн; сафингол; сафингол гидрохлорид; семустин; симтразен; спарфосат натрий; спарзомицин; спирогерманий гидрохлорид; спиромустин; спироплатин; стрептонигрин; стрептозоцин; сулофенур; тализомицин; текогалан натрий; таксотер; тегафур; телоксантрон гидрохлорид; темопорфин; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепа; тиазофурин; тирапазамин; торемифен цитрат; трастолон ацетат; трицирибин фосфат; триметрексат; триметрексат глюкуронат; трипторелин; тубулозол гидрохлорид; урацил мустард; уредепа; вапреотид; вертепорфин; винбластин сульфат; винкристин сульфат; виндезин; виндезин сульфат; винепидин сульфат; винглицинат сульфат; винлеурозин сульфат; винорелбин тартрат; винрозидин сульфат; винзолидин сульфат; ворозол; зениплатин; зиностатин и зорубицин гидрохлорид.
Другие вторые средства включают, но не ограничиваются этим: 20-epi-1,25 дигидроксивитамин D3; 5-этинилурацил; абиратерон; акларубицин; ацилфульвен; адеципенол; адоцелезин; альдеслейкин; ALL-TK антагонисты; альтретамин; амбамустин; амидокс; амифостин; аминолевулиновую кислоту; амрубицин; амсакрин; анагрелид; анастрозол; андрографолид; ингибиторы ангиогенеза; антагонист D; антагонист G; антрареликс; анти-дорсализирующий морфогенетический белок-1; антиандроген, карцинома предстательной железы; антиэстроген; антинеопластон; антисмысловые олигонуклеотиды; афидиколин глицинат; модуляторы гена апоптоза; регуляторы апоптоза; апуриновую кислоту; ara-CDP-DL-PTBA; аргининдезаминазу; азулакрин; атаместан; атримустин; аксинастатин 1; аксинастатин 2; аксинастатин 3; азасетрон; азатоксин; азатирозин; производные баккатина III; баланол; батимастат; антагонисты BCR/ABL; бензохлорины; бензоилстауроспорин; бета-лактамные производные; бета-алетин; бетакламицин B; бетулиновую кислоту; ингибитор bFGF; бикалутамид; бисантрен; бисазиридинилспермин; биснафид; бистратен A; бицелезин; брефлат; бропиримин; будотитан; бутионин сульфоксимин; калципотриол; калфостин C; производные камптотецина; капецитабин; карбоксамид-амино-триазол; карбоксиамидотриазол; CaRest M3; CARN 700; ингибитор, хрящевого происхождения; карцелезин; ингибиторы казеинкиназы (ICOS); кастаноспермин; секропин B; сетрореликс; хлорины; хлорхиноксалин сульфонамид; цикапрост; цис-порфирин; кладрибин; клатромицин; аналоги кломифена; клотримазол; коллисмицин A; коллисмицин B; комбретaстатин A4; аналог комбретaстатина; конагенин; крамбесцидин 816; криснатол; криптофицин 8; производные криптофицина А; курацин A; циклопентантрахиноны; циклоплатам; ципемицин; цитарабин окфостат; цитолитический фактор; цитостатин; дакликсимаб; децитабин; дегидродидемнин B; деслорелин; дексаметазон; дексифосфамид; дексразоксан; дексверапамил; диазиквон; дидемнин B; дидокс; диэтилнорспермин; дигидро-5-азацитидин; дигидротаксол-9; диоксамицин; дифенил спиромустин; доцетаксел; докозанол; доласетрон; доксифлуридин; доксорубицин; дролоксифен; дронабинол; дуокармицин SA; эбселен; экомустин; эделфосин; эдреколомаб; эфлорнитин; элемен; эмитефур; эпирубицин; эпристерид; аналог эстрамустина; агонисты эстрогена; антагонисты эстрогена; этанидазол; этопозид фосфат; эксеместан; фадрозол; фазарабин; фенретинид; филграстим; финастерид; флавопиридол; флезеластин; флуaстерон; флударабин; фтордауноруницин гидрохлорид; форфенимекс; форместан; фостриецин; фотемустин; гадолиний тексафирин; галлий нитрат; галоцитабин; ганиреликс; ингибиторы желатиназы; гемцитабин; ингибиторы глутатиона; гепсульфам; герегулин; гексаметилен бисацетамид; гиперицин; ибандроновую кислоту; идарубицин; идоксифен; идрамантон; илмофосин; иломастат; иматиниб (Gleevec®), имиквимод; пептидные иммуностимуляторы; ингибитор инсулино-подобного рецептора ростового фактора-1; агонисты интерферона; интерфероны; интерлейкины; иобенгуан; йододоксорубицин; ипомеанол-4; иропласт; ирсогладин; изобенгазол; изогомогаликондрин B; итасетрон; иасплакинолид; кахалалид F; ламелларин-N триацетат; ланреотид; лейнaмицин; ленограстим; лентинан сульфат; лептолстатин; летрозол; фактор ингибирования лейкоза; лейкоцит альфа интерферон; лейпролид+эстроген+прогестерон; лейпрорелин; левамизол; лиарозол; аналог линейного полиамина; липофильный дисахаридный пептид; липофильные соединения платины; лиссоклинамид 7; лобаплатин; ломбрицин; лометрексол; лонидамин; лозоксантрон; локсорибин; луртотекан; лютециум тексафирин; лизофиллин; литические пептиды; мейтанзин; манностатин A; маримастат; мазопрокол; маспин; ингибиторы матрилизина; ингибиторы металлопротеиназы матрикса; меногарил; мербарон; метерелин; метиониназу; метоклопрамид; ингибитор MIF; мифепристон; милтефосин; миримостим; митогуазон; митолактол; аналоги митомицина; митонафид; митотоксиновый фактор роста фибробластов-сапорин; митоксантрон; мофаротен; молграмостим; Erbitux, человеческий хорионический гонадотропин; монофосфорил липид A+sk клеточной оболочки миобактерий; мопидамол; горчичное противораковое средство; микапероксид B; экстракт микобактериальных клеточных оболочек; мириапорон; N-ацетилданалид; N-замещенные бензамиды; нафарелин; нагрестип; налоксон+пентазоцин; навапин; нафтерпин; нартограстим; недаплатин; неморубицин; неридроновую кислоту; нилутамид; низамицин; модуляторы оксида азота; нитроксид антиоксидант; нитруллин; облимерсен (Genasense®); O6-бензилгуанин; октеотид; окиценон; олигонуклеотиды; онапристон; ондасетрон; ондасетрон; орацин; пероральный индуктор цитокинов; ормаплатин; осатерон; оксалиплатин; оксауномицин; паклитаксел; аналоги паклитаксела; производные паклитаксела; палауамин; пальмитоилризоксин; памидроновую кислоту; панакситриол; паномифен; парабактин; пацеллиптин; пегаспаргазу; пелдезин; пентосан полисульфат натрий; пентостатин; пентрозол; перфлуброн; перфосфамид; пириллиловый спирт; феназиномицин; фенилацетат; ингибиторы фосфатазы; пицибанил; пилокарпин гидрохлорид; пирарубицин; пиритрексим; плацетин A; плацетин B; ингибитор активатора плазминогена; комплекс платины; соединения платины; платинум-комплекс триамина; порфимер натрий; порфиромицин; преднизон; пропил бис-акридон; простагландин J2; ингибиторы протеасомы; иммуномодулятор на основе белка А; ингибитор протеинкиназы C; ингибиторы протеинкиназы C, на основе микроводорослей; ингибиторы протеинтирозинфосфатазы; ингибиторы пуриннуклеозидфосфорилазы; пурпурины; пиразолoакридин; конъюгат пиридооксилированного гемоглобина и полиоксиэтилена; антагонисты raf; ралтитрексед; рамосетрон; ингибиторы фарнезилпротеинтрансферазы ras; ингибиторы ras; ингибитор ras-GAP; ретеллиптин деметилированный; рений Re 186 этидронат; ризоксин; рибозимы; RII ретинамид; рохитукин; ромуртид; роквинимекс; рубигинон B1; рубоксил; сафингол; сайнтопин; SarCNU; саркофитол A; сарграмостим; Sdi 1 миметики; семустин; ингибитор старения 1; смысловые олигонуклеотиды; ингибиторы сигнальной трансдукции; сизофиран; собузоксан; натрия борокаптат; натрия фенилацетат; солверол; соматомедин-связывающий белок; сонермин; спарфосиновую кислоту; спикaмицин D; спиромустин; спленопептин; спонгистатин 1; скваламин; стипиамид; ингибиторы стромелизина; сульфинозин; суперактивный вазоактивный кишечный пептидный антагонист; сурадиста; сурамин; свайнсонин; таллимустин; тамоксифен метйодид; тауромустин; тазаротен; текогалан натрий; тегафур; теллурапирилиум; ингибиторы теломеразы; темопорфин; тенипозид; тетрахлорлекаоксид; тетразомин; талибластин; тиокоралин; тромбопоэтин; тромбопоэтиновый миметик; тималфазин; агонист рецептора типопоэтина; тимотринан; тироид-стимулирующий гормон; этилэтиопурпурин олова; тирапазамин; титаноцен бихлорид; топсентин; торемифен; ингибиторы трансляции; третиноин; триацетилуридин; трицирибин; триметрексат; трипторелин; трописетрон; туростерид; ингибиторы тирозинкиназы; тирфостины; ингибиторы UBC; убенимекс; фактор ингибирования роста из мочеполового синуса; антагонисты рецептора урокиназы; вапреотид; вариолин B; веларезол; верамин; вердинс; вертепорфин; винорелбин; винксалтин; витаксин; ворозол; занотерон; зениплатин; зиласкорб и зиностатин стималамер.
Конкретные вторые активные вещества включают, но не ограничиваются этим, 2-метоксиэстрадиол, теломестатин, индукторы апоптоза в клетках множественной миеломы (такие как, например, TRAIL), бортезомиб, статины, семаксаниб, циклоспорин, этанерсепт, доксициклин, бортезомиб, облимерсен (Genasense®), ремикаде, доцетаксел, целекоксиб, мелфалан, дексаметазон (Decadron®), стероиды, гемцитабин, цисплатинум, темозоломид, этопозид, циклофосфамид, темодар, карбоплатин, прокарбазин, глиадел, тамоксифен, топотекан, метотрексат, Arisa®, таксол, таксотер, фторурацил, лейковорин, иринотекан, кселода, CPT-11, интерферон альфа, пегилированный интерферон альфа (например, PEG INTRON-A), капецитабин, цисплатин, тиотепа, флударабин, карбоплатин, липосомальный даунорубицин, цитарабин, доксетаксол, пацилитаксел, винбластин, IL-2, GM-CSF, дакарбазин, винорелбин, золендроновую кислоту, пальмитронат, биаксин, бусульфан, преднизон, бисфосфонат, мышьяковый триоксид, винкристин, доксорубицин (Doxil®), паклитаксел, ганцикловир, адриамицин, эстрамустин натрий фосфат (Emcyt®), сулиндак и этопозид.
Также, примеры конкретных вторых средств в соответствии с показаниями, в связи с которыми необходимо лечение, профилактика или оказание помощи, можно найти в следующих ссылочных документах, которые все включены в настоящую заявку во всей их полноте: Патенты США №№ 6281230 и 5635517; Патентные заявки США №№ 10/411649, 10/483213, 10/411656, 10/693794, 10/699154 и 10/981189; и Временные патентные заявки США №№ 60/554923, 60/565172, 60/626975, 60/630599, 60/631870 и 60/533862.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, традиционные терапевтические средства, используемые для лечения или профилактики боли, такие как антидепрессанты, противосудорожные средства, гипотензивные средства, аксиолитические средства, блокаторы кальциевых каналов, миорелаксанты, ненаркотические аналгетики, опиоидные аналгетики, противовоспалительные средства, ингибиторы cox-2, иммуномодуляторы, агонисты или антагонисты альфа-адренергического рецептора, иммуносупрессивные средства, кортикостероиды, гипербарический кислород, кетамин, другие анестетики, антагонисты NMDA и другие терапевтические средства, которые можно найти, например, в Physician's Desk Reference 2003. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим, ацетат салициловой кислоты (Aspirin®), целекоксиб (Celebrex®), Enbrel®, кетамин, габапентин (Neurontin®), фенитоин (Dilantin®), карбамазепин (Tegretol®), оксакарбазепин (Trileptal®), валпроевую кислоту (Depakene®), морфин сульфат, гидроморфон, преднизон, гризеофульвин, пентониум, алендронат, дифенгидрамид, гуанетидин, кеторолак (Acular®), тирокальцитонин, диметилсульфоксид (DMSO), клонидин (Catapress®), бретилиум, кетансерин, розерпин, дроперидол, атропин, фентоламин, бупивакаин, лидокаин, ацетаминофен, нортриптилин (Pamelor®), амитриптилин (Elavil®), имипрамин (Tofranil®), доксепин (Sinequan®), кломипрамин (Anafranil®), флуоксетин (Prozac®), сертралин (Zoloft®), нефазодон (Serzone®), венлафаксин (Effexor®), тразодон (Desyrel®), бупропион (Wellbutrin®), мексилетин, нифедипин, пропранолол, трамадол, ламотригин, зиконотид, кетамин, декстрометорфан, бензодиазепины, баклофен, тизанидин и феноксибензамин.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, стероид, светосенсибилизатор, интегрин, антиоксидант, интерферон, ксантиновое производное, гормон роста, нейротрофический фактор, регулятор неоваскуляризации, анти-VEGF антитело, простагландин, антибиотик, фитоэстроген, противовоспалительное соединение или соединение против ангиогенеза, или сочетание таких средств. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим, вертепорфин, пурлитин, ангиостатический стероид, rhuFab, интерферон-2y, пентоксифиллин, этиопурпурин олова, мотексафин лютециум, 9-фтор-l1,21-дигидрокси-16,17-1-метилэтилидинбис(окси)прегна-l,4-диен-3,20-дион, латанопрост (см. Патент США № 6225348), тетрациклин и его производные, рифамицин и его производные, макролиды, метронидазол (Патенты США №№ 6218369 и 6015803), генистеин, генистин, 6'-OMaI генистин, 6'-0-Ac генистин, даидзеин, даидзин, 6'-OMaI даидзин, 6'-0-Ac даидзин, глицитеин, глицитин, 6'-О-MaI глицитин, биоханин A, формононетин (Патент США № 6001368), триамцинолон ацетомид, дексаметазон (Патент США № 5770589), талидомид, глутатион (Патент США № 5632984), основной фактор роста фибробластов (bFGF), трансформирующий фактор роста b (TGF-b), нейротрофический фактор головного мозга (BDNF), фактор активатора плазминогена типа 2 (PAI-2), EYE101 (Eyetech Pharmaceuticals), LY333531 (Eli Lilly), Miravant и RETISERT имплантат (Bausch & Lomb). Все ссылки, указанные выше, включены в настоящую заявку по всей их полноте посредством ссылки.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, кератолитические средства, ретиноиды, α-оксикислоты, антибиотики, коллаген, токсин ботулинума, интерферон и иммуномодуляторные средства. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим, 5-фторурацил, мазопрокол, трихлоруксусную кислоту, салициловую кислоту, молочную кислоту, лактат аммония, мочевину, третиноинизотретиноин, антибиотики, коллаген, токсин ботулинума, интерферон, кортикостероид, трансретиноевую кислоту и коллагены, такие как человеческий плацентальный коллаген, плацентальный коллаген животного происхождения, Dermalogen, AlloDerm, Fascia, Cymetra, Autologen, Zyderm, Zyplast, Resoplast и Isolagen.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, антикоагулянты, диуретики, сердечные гликозиды, блокаторы кальциевых каналов, вазодилататоры, аналоги простациклина, антагонисты эндотелина, ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ингибиторы PDE V), ингибиторы эндопептидазы, средства, снижающие уровень липидов, ингибиторы тромбоксана и другие терапевтические средства, известные как снижающие легочное артериальное давление. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим, варфарин (Coumadin®), диуретик, сердечный гликозид, дигоксин-кислород, дилтиазем, нифедипин, вазодилататор, такой как простациклин (например, простагландин 12 (PGI2), эпопростенол (EPO, Floran®), трепростинил (Remodulin®), оксид азота (NO), босентан (Tracleer®), алмодипин, эпопростенол (Floran®), трепростинил (Remodulin®), простациклин, тадалафил (Cialis®), симвастатин (Zocor®), омапатрилат (Vanlev®), ирбесартан (Avapro®), правастатин (Pravachol®), дигоксин, L-аргинин, илопрост, бетапрост и силденафил (Viagra®).
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, антрациклин, платину, алкилирующее средство, облимерсен (Genasense®), цисплатинум, циклофосфамид, темодар, карбоплатин, прокарбазин, глиадел, тамоксифен, топотекан, метотрексат, таксотер, иринотекан, капецитабин, цисплатин, тиотепа, флударабин, карбоплатин, липосомальный даунорубицин, цитарабин, доксетаксол, пацилитаксел, винбластин, IL-2, GM-CSF, дакарбазин, винорелбин, золедроновую кислоту, палмитронат, биаксин, бусульфан, преднизон, бисфосфонат, триоксид мышьяка, винкристин, доксорубицин (Doxil®), паклитаксел, ганцикловир, адриамицин, блеомицин, гиалуронидазу, митомицин C, мепакрин, тиотепа, тетрациклин и гемцитабин.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, хлорквин, хинин, хинидин, пириметамин, сульфадиазин, доксициклин, клиндамицин, мефлоквин, галофантрин, примаквин, гидроксихлорквин, прогванил, атоваквон, азитромицин, сурамин, пентамидин, меларсопрол, нифуртимокс, бензнидазол, амфотерицин B, соединения пятивалентной сурьмы (например, стибоглюкуронат натрия), интерфереон гамма, итраконазол, сочетание мертвых промастиготных форм и BCG, лейковорин, кортикостероиды, сульфонамид, спирaмицин, IgG (серология), триметоприм и сульфаметоксазол.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим: актибиотики (терапевтические или профилактические), такие как, но не ограничиваясь этим, ампициллин, кларитромицин, тетрациклин, пенициллин, ceфалоспорины, стрептомицин, канамицин и эритромицин; противовирусные средства, такие как, но не ограничиваясь этим, амантадин, римантадин, aцикловир и рибавирин; иммуноглобулин; плазму; иммуностимулирующие лекарственные средства, такие как, но не ограничиваясь этим, левамизол и изопринозин; биологические средства, такие как, но не ограничиваясь этим, гаммаглобулин, фактор переноса, интерлейкины и интерфероны; гормоны, такие как, но не ограничиваясь этим, тимус; и другие иммунологические средства, такие как, но не ограничиваясь этим, стимуляторы B-клеток (например, BAFF/BlyS), цитокины (например, IL-2, IL-4 и IL-5), факторы роста (например, TGF-y), антитела (например, анти-CD40 и IgM), олигонуклеотиды, содержащие неметилированные CpG мотивы, и вакцины (например, противовирусная и противоопухолевая пептидная вакцина).
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим: агонист или антагонист допамина, такой как, но не ограничиваясь этим, леводопа, 1-DOPA, кокаин, α-метилтирозин, резерпин, тетрабеназин, бензотропин, паргилин, фенодолпам мезилат, каберголин, прамипексол дигидрохлорид, ропинорол, амантадин гидрохлорид, селегилин гидрохлорид, карбидопа, перголид мезилат, Sinemet CR и Symmetrel; ингибитор MAO, такой как, но не ограничиваясь этим, ипрониазид, хлоргилин, фенелзин и изокарбоксазид; ингибитор COMT, такой как, но не ограничиваясь этим, толкапон и энтакапон; ингибитор холинэстеразы, такой как, но не ограничиваясь этим, физостигмин салицилат, физостигмин сульфат, физостигмин бромид, меостигмин бромид, неостигмин метилсульфат, амбеноним хлорид, эдрофониум хлорид, такрин, пралидоксим хлорид, обидоксим хлорид, тримедоксим бромид, диацетил моноксим, эндрофониум, пиридостигмин и димекариум; противовоспалительное средство, такое как, но не ограничиваясь этим, напроксен натрий, диклофенак натрий, диклофенак калий, целекоксиб, сулиндак, оксапрозин, дифлунизал, этодолак, мелоксикам, ибупрофен, кетопрофен, набуметон, рефекоксиб, метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, соли золота, Rho-D ИммуноГлобулин, микофенилат мофетил, циклоспорин, азатиоприн, такролимус, базиликсимаб, даклизумаб, салициловую кислоту, ацетилсалициловую кислоту, метилсалицилат, дифлунизал, салсалат, олсалазин, сульфасалазин, ацетаминофен, индометацин, сулиндак, мефенамовую кислоту, меклофенамат натрий, толметин, кеторолак, диклофенак, флурбипрофен, оксапрозин, пироксикам, мелоксикам, ампироксикам, дроксикам, пивоксикам, теноксикам, фенилбутазон, оксифенбутазон, антипирин, аминопирин, апазон, зилеутон, ауротиоглюкозу, золото натрийтиомалат, ауранофин, метотрексат, колхицин, аллопуринол, пробенецид, сульфинпиразон и бензбромарон или бетаметазон и другие глюкокортикоиды; и противорвотное средство, такое как, но не ограничиваясь этим, метоклопромид, домперидон, прохлорперазин, прометазин, хлорпромазин, триметобензамид, ондансетрон, гранисетрон, гидроксизин, ацетиллейцин моноэтаноламин, ализаприд, азасетрон, бензхинамид, биэтанаутин, бромоприд, буклизин, клебоприд, циклизин, дименгидринат, дифенидол, доласетрон, меклизин, металлатал, метопимазин, набилон, оксиперндил, пипамазин, скополамин, сулпирид, тетрагидроканнабинол, триэтилперазин, тиопроперазин, трописетрон и смесь таких средств.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, иммуномодуляторы, иммуносупрессивные средства, гипотензивные средства, противосудорожные средства, фибринолитические средства, средства против агрегации тромбоцитов, антипсихотические средства, антидепрессанты, бензодиазепины, буспирон, амантадин и другие известные или традиционные средства, используемые для пациентов с поражением/повреждением ЦНС и соответствующими синдромами. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим: стероиды (например, глюкокортикоиды, такие как, но не ограничиваясь этим, метилпреднизолон, дексаметазон и бетаметазон); противовоспалительное средство, включая, но не ограничиваясь этим, напроксен натрий, диклофенак натрий, диклофенак калий, целекоксиб, сулиндак, оксапрозин, дифлунизал, этодолак, мелоксикам, ибупрофен, кетопрофен, набуметон, рефекоксиб, метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, соли золота, RHo-D ИммуноГлобулин, микофенилат мофетил, циклоспорин, азатиоприн, такролимус, базиликсимаб, даклизумаб, салициловую кислоту, ацетилсалициловую кислоту, метилсалицилат, дифлунизал, салсалат, олсалазин, сульфасалазин, ацетаминофен, индометацин, сулиндак, мефенамовую кислоту, меклофенамат натрий, толметин, кеторолак, диклофенак, флурбинпрофен, оксапрозин, пироксикам, мелоксикам, ампироксикам, дроксикам, пивоксикам, теноксикам, фенилбутазон, оксифенбутазон, антипирин, аминопирин, апазон, зилеутон, ауротиоглюкозу, золото натрийтиомалат, ауранофин, метотрексат, колхицин, аллопуринол, пробенецид, сульфинпиразон и бензбромарон; аналог cAMP, включая, но не ограничиваясь этим, db-cAMP; средство, включающее лекарственное средство на основе метилфенидата, которое включает 1-трео-метилфенидат, d-трео-метилфенидат, dl-трео-метилфенидат, l-эритро-метилфенидат, d-эритро-метилфенидат, dl-эритро-метилфенидат и смесь таких средств; и диуретик, такой как, но не ограничиваясь этим, маннит, фуросемид, глицерин и мочевина.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим, трициклический антидепрессант, селективный ингибитор повторного поглощения серотонина, противоэпилептическое средство (габапентин, прегабалин, карбамазепин, оксакарбазепин, левитирацетам, топирамат), средство против аритмии, блокатор натриевых каналов, селективный ингибитор медиатора воспаления, опиоидное средство, второе иммуномодулирующее соединение, агент сочетания и другие известные или традиционные средства, используемые в лечении длительным сном. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются этим, Нейронтин, оксиконтин, морфин, топирамат, амитриптилин, нортриптилин, карбамазепин, Леводопа, L-DOPA, кокаин, α-метилтирозин, резерпин, тетрабеназин, бензотропин, паргилин, фенодолпам мезилат, каберголин, прамипексол дигидрохлорид, ропинорол, амантадин гидрохлорид, селегилин гидрохлорид, карбидопа, перголид мезилат, Синемет CR, Симметрел, ипрониазид, хлоргилин, фенелзин, изокарбоксазид, толкапоне, энтакапоне, физостигмин салицилат, физостигмин сульфат, физостигмин бромид, меостигмин бромид, неостигмин метилсульфат, амбеноним хлорид, эндрофониум хлорид, такрин, пралидоксим хлорид, обидоксим хлорид, тримедоксим бромид, диацетил моноксим, эндрофониум, пиридостигмин, демекариум, напроксен натрий, диклофенак натрий, диклофенак калий, целекоксиб, сулиндак, оксапрозин, дифлунизал, этодолак, мелоксикам, ибупрофен, кетопрофен, набуметон, рефекоксиб, метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, соли золота, RHo-D ИммуноГлобулин, микофенилат мофетил, циклоспорин, азатиоприн, такролимус, базиликсимаб, даклизумаб, салициловую кислоту, ацетилсалициловую кислоту, метилсалицилат, дифлунизал, салсалат, олсалазин, сульфасалазин, ацетаминофен, индометацин, сулиндак, мефенамовую кислоту, меклофенамат натрий, толметин, кеторолак, диклофенак, флурбипрофен, оксапрозин, пироксикам, мелоксикам, ампироксикам, дроксикам, пивоксикам, теноксикам, фенилбутазон, оксифенбутазон, антипирин, аминопирин, апазон, зилеутон, ауротиоглюкозу, золото натрийтиомалат, ауранофин, метотрексат, колхицин, аллопуринол, пробенецид, сульфинпиразон, бензбромарон, бетаметазон и другие глюкокортикоиды, метоклопромид, домперидон, прохлорперазин, прометазин, хлорпромазин, триметобензамид, ондансетрон, гранисетрон, гидроксизин, ацетиллейцин моноэтаноламин, ализаприд, азасетрон, бензхинамид, биэтанаутин, бромоприд, буклизин, клебоприд, циклизин, дименгидринат, дифенидол, доласетрон, меклизин, металлатал, метопимазин, набилон, оксиперндил, пипамазин, скополамин, сулпирид, тетрагидроканнабинол, триэтилперазин, тиопроперазин, трописетрон и смесь таких средств.
Примеры дополнительных вторых активных средств включают, но не ограничиваются этим: интерлейкины, такие как IL-2 (включая recombinant IL-II ("rIL2") и канарипокс IL-2), IL-10, IL-12 и IL-18; интерфероны, такие как интерферон альфа-2a, интерферон альфа-2b, интерферон альфа-nl, интерферон альфа-n3, интерферон бета-Ia и интерферон гамма-Ib; и G-CSF; гидроксимочевину; бутираты или производные бутиратов; оксид азота; HEMOXIN™ (NIPRISAN™; см. Патент США № 5800819); антагонисты каналов Gardos, такие как клотримазол и триарилметановые производные; Дефероксамин; белок C; и трансфузии крови, или заменителя крови, такие как Hemospan™ или Hemospan™ PS (Sangart).
Введение гетероарильного соединения и второго активного средства пациенту можно осуществлять одновременно или последовательно, одним и тем же или разными путями введения. Является ли подходящим конкретный путь введения, используемый для конкретного активного средства, зависит от активного средства как такового (например, можно ли его вводить перорально без его разложения до поступления в кровоток) и от заболевания, которое лечат. Предпочтительным путем введения для гетероарильных соединений является пероральный. Предпочтительные пути введения для вторых активных средств или ингредиентов по настоящему изобретению известны специалистам в данной области. См., например, Physicians' Desk Reference, 1755-1760 (56th ed., 2002).
В одном варианте воплощения изобретения, второе активное средство вводят внутривенно или подкожно. В другом варианте воплощения изобретения, второе активное средство вводят внутривенно или подкожно один или два раза в день в количестве, включающем от около 1 до около 1000 мг, от около 5 до около 500 мг, от около 10 до около 350 мг, или от около 50 до около 200 мг. Конкретное количество второго активного средства зависит от конкретного средства, которое используют, от типа заболевания, которое лечат или при котором оказывают помощь, тяжести и стадии заболевания и от количества(количеств) гетероарильного соединения и любого необязательного дополнительного активного средства, одновременно вводимых пациенту.
Кроме того, в настоящей заявке обеспечиваются способы снижения, лечения и/или профилактики неблагоприятных или нежелательных эффектов, связанных с традиционной терапией, включая, но не ограничиваясь этим, хирургическую операцию, химиотерапию, радиационную терапию, гормонотерапию, биотерапию и иммунотерапию. Гетероарильные соединения и другие активные ингредиенты можно вводить пациенту до, в процессе или после проявления неблагоприятных эффектов, связанных с традиционной терапией.
4.5 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И ПУТИ ВВЕДЕНИЯ
Гетероарильные соединения можно вводить пациенту перорально или парентерально в традиционной лекарственной форме, такой как капсулы, микрокапсулы, таблетки, гранулы, порошок, драже, пилюли, суппозитории, препараты для инъекций, суспензии и сиропы. Подходящие композиции можно получить традиционными способами с использованием традиционных органических или неорганических добавок, таких как эксципиент (например, сахароза, крахмал, маннит, сорбит, лактоза, глюкоза, целлюлоза, тальк, фосфат кальция или карбонат кальция), связующее (например, целлюлоза, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, полипропилпирролидон, поливинилпирролидон, желатин, аравийская камедь, полиэтиленгликоль, сахароза или крахмал), разрыхлитель (например, крахмал, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилкрахмал, низко-замещенная гидроксипропилцеллюлоза, бикарбонат натрия, фосфат кальция или цитрат кальция), смазывающее вещество (например, стеарат магния, светлая безводная кремневая кислота, тальк или лаурилсульфат натрия), отдушка (например, лимонная кислота, ментол, глицин или порошкообразная апельсиновая отдушка), консервант (например, бензоат натрия, бисульфит натрия, метилпарабен или пропилпарабен), стабилизатор (например, лимонная кислота, цитрат натрия или уксусная кислота), суспендирующее вещество (например, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или стеарат алюминия), диспергирующее вещество (например, гидроксипропилметилцеллюлоза), разбавитель (например, вода) и восковая основа (например, масло какао, вазелин или полиэтиленгликоль). Эффективное количество гетероарильного соединения в фармацевтической композиции может быть на уровне, который даст желаемый эффект; например, от около 0,005 мг/кг массы тела пациента до около 10 мг/кг массы тела пациента в стандартной дозируемой лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.
Доза гетероарильного соединения для введения пациенту варьирует в достаточно широких пределах, и ее определяет лечащий врач. Как правило, гетероарильные соединения можно вводить пациенту от одного до четырех раз в день при дозе от около 0,005 мг/кг массы тела пациента до около 10 мг/кг массы тела пациента, дозы выше указанных пределов могут быть соответствующим образом подобраны в зависимости от возраста, массы тела и медицинского состояния пациента и от типа введения. В одном варианте воплощения изобретения, доза составляет от около 0,01 мг/кг массы тела пациента до около 5 мг/кг массы тела пациента, от около 0,05 мг/кг массы тела пациента до около 1 мг/кг массы тела пациента, от около 0,1 мг/кг массы тела пациента до около 0,75 мг/кг массы тела пациента или от около 0,25 мг/кг массы тела пациента до около 0,5 мг/кг массы тела пациента. В одном варианте воплощения изобретения, вводят одну дозу в день. В данном случае, количество вводимого гетероарильного соединения зависит от таких факторов, как растворимость активного компонента, используемая композиция и путь введения.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройств, включающие введение от около 0,375 мг/день до около 750 мг/день, от около 0,75 мг/день до около 375 мг/день, от около 3,75 мг/день до около 75 мг/день, от около 7,5 мг/день до около 55 мг/день или от около 18 мг/день до около 37 мг/день гетероарильного соединения пациенту, нуждающемуся в этом.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются способы лечения или профилактики заболевания или расстройства, включающие введение от около 1 мг/день до около 1200 мг/день, от около 10 мг/день до около 1200 мг/день, от около 100 мг/день до около 1200 мг/день, от около 400 мг/день до около 1200 мг/день, от около 600 мг/день до около 1200 мг/день, от около 400 мг/день до около 800 мг/день или от около 600 мг/день до около 800 мг/день гетероарильного соединения пациенту, нуждающемуся в этом. В конкретном варианте воплощения изобретения, способы, раскрытые в настоящей заявке, включают введение 400 мг/день, 600 мг/день или 800 мг/день гетероарильного соединения пациенту, нуждающемуся в этом.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечивается стандартная лекарственная форма, которая включают от около 1 мг до 200 мг, от около 35 мг до около 1400 мг, от около 125 мг до около 1000 мг, от около 250 мг до около 1000 мг или от около 500 мг до около 1000 мг гетероарильного соединения.
В конкретном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечивается стандартная лекарственная форма, включающая около 100 мг или 400 мг гетероарильного соединения.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечивается стандартная лекарственная форма, которая включает 1 мг, 5 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг, 30 мг, 35 мг, 50 мг, 70 мг, 100 мг, 125 мг, 140 мг, 175 мг, 200 мг, 250 мг, 280 мг, 350 мг, 500 мг, 560 мг, 700 мг, 750 мг, 1000 мг или 1400 мг гетероарильного соединения.
Гетероарильное соединение можно вводить один, два, три, четыре или более раз в день. В конкретном варианте воплощения изобретения, дозы 600 мг или меньше вводят в виде разовой суточной дозы, а дозы более чем 600 мг вводят два раза в день в количестве, равном половине общей суточной дозы.
Гетероарильное соединение можно вводить перорально в целях удобства. В одном варианте воплощения изобретения, при пероральном введении, гетероарильное соединение вводят вместе с пищей и водой. В другом варианте воплощения изобретения, гетероарильное соединение диспергируют в воде или соке (например, яблочном соке или апельсиновом соке) и вводят перорально в виде суспензии.
Гетероарильное соединение также можно вводить внутрикожным, внутримышечным, интраперитонеальным, чрескожным, внутривенным, подкожным, интраназальным, эпидуральным, сублингвальным, интрацеребральным, интравагинальным, чрескожным, ректальным путем, путем введения через слизистую, путем ингаляции или местным путем в уши, нос, глаза или на кожу. Способ введения зависит от выбора лечащего врача и частично зависит от медицинского состояния.
В одном варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются капсулы, содержащие гетероарильное соединение без дополнительного носителя, эксципиента или наполнителя.
В другом варианте воплощения изобретения, в настоящей заявке обеспечиваются композиции, включающие эффективное количество гетероарильного соединения и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель, где фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель может включать эксципиент, разбавитель или смесь таких веществ. В одном варианте воплощения изобретения, композиция представляет собой фармацевтическую композицию.
Композиции могут быть в форме таблеток, жевательных таблеток, капсул, растворов, парентеральных растворов, драже, суппозиториев и суспензий и т.п. Композиции могут быть сформулированы таким образом, чтобы они содержали суточную дозу или удобную для введения фракцию суточной дозы в стандартной лекарственной форме, которая может представлять собой одну таблетку или капсулу или удобный для введения объем жидкости. В одном варианте воплощения изобретения, растворы получают из водорастворимых солей, таких как гидрохлоридная соль. Как правило, все композиции получают в соответствии со способами, известными в фармацевтической химии. Капсулы можно получить путем смешивания гетероарильного соединения с подходящим носителем или разбавителем и введения нужного количества смеси в капсулы. Обычные носители и разбавители включают, но не ограничиваются этим, инертные порошкообразные вещества, такие как крахмал самых разных видов, порошкообразная целлюлоза, в частности, кристаллическая и микрокристаллическая целлюлоза, сахара, такие как фруктоза, маннит и сахароза, мука из хлебных злаков и подобные пищевые порошки.
Таблетки можно получить путем прямого прессования, путем мокрого гранулирования, или путем сухого гранулирования. Их композиции обычно включают разбавители, связующие, смазывающие вещества и разрыхлители, а также соединение. Типичные разбавители включают, например, различные типы крахмала, лактозу, маннит, каолин, фосфат или сульфат кальция, неорганические соли, такие как хлорид натрия и порошкообразный сахар. Также полезными являются порошкообразные производные целлюлозы. В одном варианте воплощения изобретения, фармацевтическая композиция не содержит лактозу. Типичные связующие для таблеток включают такие вещества, как крахмал, желатин и сахара, такие как лактоза, фруктоза, глюкоза и т.п. Также удобными для использования являются природные и синтетические смолы, включая аравийскую камедь, альгинаты, метилцеллюлозу, поливинилпирролидин и т.п. Полиэтиленгликоль, этилцеллюлоза и воски также могут служить в качестве связующих.
Смазывающее вещество может быть необходимым в композиции таблеток для предотвращения прилипания таблеток и штампа к форме. Смазывающее вещество может быть выбрано из таких агентов скольжения, как тальк, стеарат магния и кальция, стеариновая кислота и гидрированные растительные масла. Разрыхлители для таблеток представляют собой вещества, которые разбухают при смачивании с разрушением таблетки и высвобождением соединения. Они включают крахмалы, глины, производные целлюлозы, вещества на основе водорослей и смолы. Более конкретно, можно использовать, например, кукурузный и картофельный крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, древесную целлюлозу, порошкообразную природную губку, катионо-обменные смолы, альгиновую кислоту, гуаровую смолу, цитрусовую пульпу и карбоксиметилцеллюлозу, а также лаурилсульфат натрия. Таблетки могут иметь сахарное покрытие в качестве отдушки и уплотнителя, или могут иметь пленочное покрытие, нанесенное при помощи пленкообразующего защитного вещества, для модификации свойств растворимости таблетки. Композиции также могут быть сформулированы в виде жевательных таблеток, например, с использованием в композиции таких веществ, как маннит.
Когда желательно введение гетероарильного соединения в виде суппозитория, можно использовать типичные основы. Масло какао представляет собой традиционную основу для суппозиториев, которую можно модифицировать путем добавления восков для небольшого повышения температуры плавления. Широко используют смешиваемые с водой основы для суппозиториев, включающие, в частности, полиэтиленгликоли различной молекулярной массы.
Эффект гетероарильного соединения может быть замедленным или пролонгированным путем обеспечения подходящей композиции. Например, можно получить медленно растворяющиеся гранулированные частицы гетероарильного соединения и включить в таблетку или капсулу, или в виде имплантируемого устройства медленного высвобождения. Способ также включает получение гранулированных частиц, которые имеют несколько разных скоростей растворения, и заполнения капсул смесью этих гранулированных частиц. Таблетки или капсулы могут иметь пленочное покрытие, стойкое к растворению в течение определенного периода времени. Даже парентеральные препараты можно сделать долгодействующими путем растворения или суспендирования гетероарильного соединения в масляных или эмульгированных наполнителях, которые делают возможным медленное распределение в сыворотку.
5. ПРИМЕРЫ
Следующие примеры представлены в целях иллюстрации, а не для ограничения.
5.1 Примеры синтеза
Общая процедура A.
В сосуд из толстого боросиликатного стекла (5-10 мл) добавляли 2-амино-3,5-дибром-пиразин, желательный амин и диизопропилэтиламин в н-бутаноле. Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновой реактор и облучали при 220°C в течение 3600 сек. Раствор конденсировали при пониженном давлении, растворяли в этилацетате, промывали насыщенным солевым раствором, разделяли, экстрагировали этилацетатом (2×), органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали до получения неочищенного продукта.
Общая процедура B.
Субстрат (1 экв.) и бороновую кислоту (1,2 экв.) растворяли в ДМФА (15 мл). Через раствор барботировали азот в течение 2 минут. Добавляли подходящее основание в воде (5 мл) и Pd катализатор (0,1 экв.). Раствор затем нагревали до 85-95°C в атмосфере азота. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, раствор конденсировали при пониженном давлении. Полученное вещество разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит или сильной струей пропускали через доступную для использования экстракционную колонну Bakerbond SPE с SiOH. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура B.
Бромид, желаемую бороновую кислоту, Pd катализатор, водный раствор основания (1 M) и диоксан нагревали вместе в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 20 минут. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния и затем концентрировали.
Общая процедура B2.
Субстрат (1 экв.) и бороновую кислоту (1,2 экв.) растворяли в ДМФА (10 мл). Через раствор барботировали азот в течение 2 минут. Добавляли раствор подходящего основания в воде (5 мл) и Pd катализатор (0,1 экв.). Полученный раствор затем нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 15 минут. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, раствор конденсировали при пониженном давлении. Полученное вещество разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура B3.
Субстрат (1 экв.) и бороновую кислоту (1,2 экв.) растворяли в ДМФА (10 мл). Через раствор барботировали азот в течение 2 минут. Карбонат натрия (1M) (5 мл), ацетонитрил (5 мл) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (0,05 экв.). Раствор затем нагревали вместе в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 15 минут. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, раствор конденсировали при пониженном давлении. Полученное вещество разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура C.
Бромид, желаемую бороновую кислоту (или сложный эфир бороновой кислоты) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий (II) в дихлорметане объединяли в ДМФА. Фосфат калия растворяли в воде и добавляли к реакционной смеси и оставляли для перемешивания при 100°C в течение 16 часов. Реакционный раствор конденсировали при пониженном давлении и разбавляли 10% метанолом в этилацетате и сильной струей пропускали через доступную для использования экстракционную колонну Bakerbond SPE с SiOH. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура D1.
В сосуд из толстого боросиликатного стекла (5-10 мл) добавляли субстрат и 1,1'-карбонилдиимидазол в ТГФ. Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновой реактор и облучали при 180°C в течение 3600 сек. Реакционный раствор конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура D2.
В сосуд из толстого боросиликатного стекла (5-10 мл) добавляли субстрат, мочевину и диметилформамид. Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновой реактор и облучали при 220°C в течение 2700 сек. Раствор конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
Общая процедура E.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламина (см. Пример 5.C) и желаемого амина в этаноле (4 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов.
Общая процедура E1.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 26.E) и желаемого амина (или соли амина и триэтиламина) в этаноле нагревали в микроволновом реакторе Emrys при 150°C в течение 4 часов. Продукт выделяли при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O+0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через экстракционную колонну с твердой фазой Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Продукт выделяли из колонны с использованием 2M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме с получением продукта в виде белого твердого вещества.
Общая процедура F.
Субстрат (1 экв.) и триэтиламин (20 экв.) растворяли в метаноле (3,0 мл) в герметично закрытой пробирке и перемешивали в течение 5 минут. Добавляли гидразин (4,0 экв.) и реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 18 часов. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, раствор конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта.
5.1.1 ПРИМЕР 1: СИНТЕЗ 1-(4-МЕТОКСИБЕНЗИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-N2-(4-метоксибензил)пиразин-2,3-диамин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (3,0 г, 11,95 ммоль) и 4-метоксибензиламин (2,13 г, 15,53 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (30-100% этилацетат в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (1,75 г, 47% выход). MS (ESI) m/z 311,2 [M+1]+.
B. (3-Амино-6-(5-хинолил)пиразин-2-ил)[(4-метоксифенил)метил]амин.
6-Бром-N2-(4-метоксибензил)пиразин-2,3-диамин (0,928 г, 3,00 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,675 г, 3,9 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,306 г, 0,265 ммоль), карбонат калия (1,10 г, 7,95 ммоль), воду (7 мл) и диметилформамид (35 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане) с последующим растиранием в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,165 г, 15% выход). MS (ESI) m/z 358,3 [M+1]+.
C. 1-(4-Метоксибензил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(3-Амино-6-(5-хинолил)пиразин-2-ил)[(4-метоксифенил)метил]амин (0,200 г, 0,560 ммоль) и мочевину (0,67 г, 1,12 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,180 г, 84% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,88 (м, 1H), 8,47 (д, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,12 (д, 2H), 7,86 (м, 1H), 7,56 (д, 1H), 7,46 (м, 1H), 7,38 (д, 2H), 6,91 (д, 2H), 5,07 (с, 2H), 3,78 (с, 3H); МS (ESI) m/z 384,4 [М+1]+.
5.1.2 ПРИМЕР 2: СИНТЕЗ (R)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-6-Бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием (R)-α-метилбензиламина (2,28 мл, 17,93 ммоль), 2-амино-3,5-дибромпиразина (3,00 г, 11,96 ммоль) и n-BuOH (30 мл), как описано в Общей Процедуре A. Неочищенное соединение очищали при помощи хроматографии на силикагеле (20%-30% EtOAc в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с последующим растиранием в порошок из метанола с водой, обрабатывая при этом ультразвуком, с получением 1,92 г (6,54 ммоль, 55%) (R)-6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 294,0 [M+1]+.
B. (R)-N2-(1-Фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
Указанное в заголовке соединение получали путем растворения (R)-6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (1,00 г, 3,37 ммоль) в чистой муравьиной кислоте (15 мл) и добавления 10% Pd/C (0,34 ммоль). Этот раствор продували газообразным водородом при 1 атм и перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. По завершении этой процедуры реакционную смесь фильтровали через целит и концентрировали. Неочищенное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (0-10% метанола в дихлорметане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с получением 0,65 г (3,03 ммоль, 90%) (R)-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 215,4 [M+1]+.
C. (R)-1-(1-Фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием (R)-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (0,65 г, 3,03 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (0,62 г, 3,79 ммоль) и тетрагидрофурана (10 мл), как описано в Общей Процедуре D1. После охлаждения до комнатной температуры летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенное масло очищали с использованием хроматографии на силикагеле (10-70% EtOAc в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с получением 0,10 г (0,42 ммоль, 40%) (R)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 12,08 (с, 1H), 7,89 (с, 1H), 7,43 (д, 2H), 7,33 (т, 2H), 7,26 (т, 1H), 5,67 (дд, 1H), 1,94 (д, 3H); МS (ESI) m/z 241,3 [М+1]+.
5.1.3 ПРИМЕР 3: СИНТЕЗ (S)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-6-Бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием (S)-α-метилбензиламина (2,28 мл, 17,93 ммоль), 2-амино-3,5-дибромпиразина (3,00 г, 11,96 ммоль) и n-BuOH (30 мл), как описано в Общей Процедуре A. Неочищенную молекулу очищали при помощи хроматографии на силикагеле (20-30% EtOAc в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с последующим растиранием в порошок из метанола с водой, обрабатывая при этом ультразвуком, с получением 1,52 г (5,18 ммоль, 43%) (S)-6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 294,0 [M+1]+.
B. (S)-N2-(1-Фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
Указанное в заголовке соединение получали путем растворения (S)-6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (1,00 г, 3,37 ммоль) в чистой муравьиной кислоте (15 мл) и добавления 10% Pd/C (0,34 ммоль). Этот раствор продували газообразным водородом при 1 атм и перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. По завершении этой процедуры реакционную смесь фильтровали через целит и концентрировали. Неочищенное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (0-10% метанола в дихлорметане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с получением 0,47 г (2,19 ммоль, 65%) (S)-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 215,4 [M+1]+.
C. (S)-1-(1-Фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием (S)-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (0,40 г, 1,87 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (0,38 г, 2,33 ммоль) и тетрагидрофурана (7 мл), как описано в Общей Процедуре D1. После охлаждения до комнатной температуры летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенное масло очищали с использованием хроматографии на силикагеле (10-70% EtOAc в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с получением 0,18 г (0,74 ммоль, 40%) (S)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 12,08 (с, 1H), 7,89 (с, 1H), 7,43 (д, 2H), 7,33 (т, 2H), 7,26 (т, IH), 5,67 (дд, 1H), 1,94 (д, 3H); МS (ESI) m/z 241,3 [М+1]+.
5.1.4 ПРИМЕР 4: СИНТЕЗ 5-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 5-(5-Хинолил)пиразин-2,3-диамин.
(3-Амино-6-(5-хинолил)пиразин-2-ил)[(4-метокси-фенил)метил]амин (см. Пример 1.B) (0,210 г, 0,588 ммоль) растворяли в трифторуксусной кислоте/дихлорметане (2 мл:2 мл) с использованием PS-тиофенола в качестве акцептора. Раствор нагревали до 70°C в герметично закрытой пробирке в течение двух часов и затем концентрировали при пониженном давлении и разбавляли метанолом. Раствор метанола/продукта фильтровали через экстракционную колонну с твердой фазой Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Добавляли дополнительное количество воды к элюированному соединению до образования осадка. Осадок отфильтровывали и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,080 г, 57% выход). MS (ESI) m/z 238,1 [M+1]+.
B. 5-(Хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-(5-Хинолил)пиразин-2,3-диамин (0,080 г, 0,337 ммоль) и мочевину (0,061 г, 1,01 ммоль) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре D2. Добавляли по порциям воду в реакционный сосуд, чтобы вызвать осаждение продукта. Образовавшийся осадок отфильтровывали и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,055 г, 62% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,89 (шир.с, 2H), 8,94 (д, 1H), 8,56 (д, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,10 (д, 1H), 7,84 (т, 1H), 7,72 (д, 1H), 7,54 (дд, 1H). МS (EСI) m/z 264,2 [М+1].
5.1.5 ПРИМЕР 5: СИНТЕЗ 1-(2-ГИДРОКСИЭТИЛ)-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин.
5-Бромпиразин-2-амин (5,7 г, 33 ммоль), 5-изопропил-2-метоксибензолбороновую кислоту (6,4 г, 33 ммоль), тетракис (трифенилфосфин)палладий(0) (1,9 г, 1,6 ммоль) и карбонат натрия (99 мл, 99 ммоль) и диоксан (300 мл) нагревали вместе при 90°C в течение 16 часов. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния и затем концентрировали. Осуществляли очистку остатка при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-60% этилацетат в гексане) с получением масла (4,1 г, 51% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,36 (д, J=1,2, 1H), 8,00 (д, J=1,2, 1H), 7,46 (д, J=2,4, 1H), 7,20 (дд, J=8,1, 2,1, 1H), 7,00 (д, J=8,1, 1Н), 3,83 (с, 3H), 2,86-2,93 (м, 1H), 1,25 (д, J=6,9, 6Н); МS (ESI) m/z 244,4 [М+1]+.
B. 3-Бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин.
5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (4,1 г, 16,8 ммоль) растворяли в DMSO (20 мл) и перемешивали на водяной бане. Добавляли N-бромсукцинимид (3,6 г, 20,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Эмульгированное твердое вещество отфильтровывали. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и затем концентрировали. Осуществляли очистку остатка при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-60% этилацетата в гексане) с получением твердого вещества рыжевато-коричневого цвета (4 г, 74% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 8,47 (с, 1H), 7,48 (д, J=2,3, 1H), 7,22 (дд, J=8,6, 2,3, 1H), 7,05 (д, J=8,6, 1H), 6,78 (с, 2H), 3,82 (с, 3H), 2,86-2,93 (м, 1H), 1,20 (д, J=6,8, 6H); МS (ESI) m/z 322,0, 324,1 [М+1]+.
C. N-бис-Boc-3-Бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин.
3-Бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (1 г, 3,1 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (1,6 г, 8 ммоль), 4-диметиламинопиридин (38 мг, 0,3 ммоль) и ацетонитрил (15 мл) нагревали до 50°C в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали и осуществляли очистку остатка при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-40% этилацетата в гексане) с получением желтого масла (1,6 г, 99% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6) δ 9,09 (с, 1H), 7,65 (д, J=2,4, 1H), 7,42 (дд, J=9,0, 2,7, 1H), 7,18 (д, J=8,1 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H), 2,86-2,93 (м, 1H), 1,40 (с, 18H), 1,22 (д, J=6,8, 6Н). МS (ESI) m/z 424,5 [М+1]+.
D. 1-(2-Гидроксиэтил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидро-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (150 мг, 0,29 ммоль), 2-гидроксиэтиламин (0,177 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (20 мг, 21% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,90 (с, 1H), 8,28(с, 1H), 7,50 (д, J=2,3, 1H), 7,21 (дд, J=8,5, 2,4, 1H), 7,02 (д, J=8,4, 1H), 4,81 (т, J=6,0, 1H), 3,87 (т, J=6,0, 2H), 3,76 (с, 3H), 3,70 (кв., J=5,9, 2H), 2,85 (с, 1H), 1,16 (д, J=6,8, 6H); МS (ESI) m/z 329,3 [М+1]+.
5.1.6 ПРИМЕР 6: СИНТЕЗ 1-((R)-1,2-ДИМЕТИЛПРОПИЛ)-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-((R)-1,2-Диметилпропил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидро-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль) и (R)-1,2-диметилпропиламин (0,336 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (36 мг, 35% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,96 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,58 (д, J=2,3, 1H), 7,26 (дд, J=8,7, 2,2, 1H), 7,08 (д, J=8,4,1H), 4,11 (дкв., J=9,6, 6,9, 1H), 3,82 (с, 3H), 2,86-2,94 (м, 1H), 2,39-2,47 (м, 1H), 1,55 (д, J=6,8, 3H), 1,22 (д, J=7,0, 6H), 1,02 (д, J=6,8, 3H), 0,77 (д, J=6,6, 3H); МS (ESI) m/z 355,4 [М+1]*.
5.1.7 ПРИМЕР 7: СИНТЕЗ 6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1-(S)-ТЕТРАГИДРОФУРАН-3-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(S)-тетрагидро-фуран-3-ил-1,3-дигидро-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), (S)-3-аминотетрагидрофуран в форме тозилатной соли (0,75 г, 2,9 ммоль), триэтиламин (1 мл) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (44 мг, 43% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,92 (с, 1H), 8,37(с, 1H), 7,61 (д, J=2,5, 1H), 7,20 (дд, J=8,7, 2,2, 1H), 7,02 (д, J=8,6, 1H), 3,85-3,97 (м, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,85 (дт, J=13,7, 6,9, 1H), 2,46-2,52 (м, 1H), 2,20-2,28 (м, 1H), 1,17 (д, J=7,0, 6H); МS (ESI) m/z 355,5 [М+1]+.
5.1.8 ПРИМЕР 8: СИНТЕЗ 1-((S)-1,2-ДИМЕТИЛПРОПИЛ)-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-((S)-1,2-Диметилпропил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидро-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), (S)-1,2-диметилпропиламин (0,336 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (56 мг, 55% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,97 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,58 (д, J=2,3, 1H), 7,26 (дд, J=8,6, 2,5, 1H), 7,08 (д, J=8,6, 1H), 4,10 (дкв., J=9,5, 7,0, 1H), 3,82 (с, 3H), 2,87-2,94 (м, 1H), 2,43 (м, 1H), 1,55 (д, J=7,0, 3H), 1,22 (д, J=6,8, 6H), 1,02 (д, J=6,6, 3H), 0,77 (д, J=6,6, 3H). МS (ESI) m/z 355,4 [М+1]+.
5.1.9 ПРИМЕР 9: СИНТЕЗ 6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1-(R)-ТЕТРАГИДРОФУРАН-3-ил-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(R)-тетрагидрофуран-3-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), (R)-3-аминотетрагидрофуран в форме тозилатной соли (0,75 г, 2,9 ммоль), триэтиламин (1 мл) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (31 мг, 30% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,96 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,61 (д, J=2,5, 1H), 7,19 (дд, J=8,9, 2,4, 1H), 7,02 (д, J=8,6, 1H), 4,96-5,03 (м, 1H), 4,16 (кв., J=7,5, 1H), 3,85-3,97 (м, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,82-2,89 (м, 1H), 2,46-2,50 (м, 1H), 2,20-2,28 (м, 1H), 1,17 (д, J=6,8, 6H); МS (ESI) m/z 355,5 [М+1]+.
5.1.10 ПРИМЕР 10: СИНТЕЗ 1-ЦИКЛОПЕНТИЛМЕТИЛ-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-Циклопентилметил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), циклопентилметиламин (0,287 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (77 мг, 75% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6) δ 11,98(с, lH), 8,36 (с, 1H), 7,60 (д, J=2,5,1H), 7,26 (дд, J=8,7, 2,6, 1H), 7,08 (д, J=8,5, 1H), 3,82 (с, 3H), 3,78 (д, J=7,4, 2H), 2,45 (д, J=7,1, 1H), 1,58-1,70 (м, 4H), 1,53 (д, J=9,3, 2H), 1,38 (д, J=4,4, 2H), 1,22 (д, J=6,9, 6H); МS (ESI) m/z 367,5 [М+1]+.
5.1.11 ПРИМЕР 11: СИНТЕЗ 1-ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-Циклогексилметил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), циклогексилметиламин (0,287 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (76 мг, 74% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6,) δ 11,97 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,60 (д, J=2,5, 1H), 7,26 (дд, J=8,7, 2,6, 1H), 7,08 (д, J=8,5, 1H), 3,82 (с, 3H), 3,71 (д, J=7,4, 2H),2,90 (д, J=7,1, 1H), 1,90(м, 1H), 1,5-1,7 (м, 5H), 1,0-1,3 (м, 11H); МS (ESI) m/z 381,3 [М+1]+.
5.1.12 ПРИМЕР 12: СИНТЕЗ 1-(2,2-ДИМЕТИЛПРОПИЛ)-6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-(2,2-Диметилпропил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
N-Бис-Boc-3-бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), 2,2-диметилпропиламин (0,341 мл, 2,9 ммоль) и этанол (4 мл) нагревали в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (69 мг, 67% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,96 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 7,58 (д, J=2,5, 1H), 7,19 (дд, J=8,8, 2,3, 1H), 7,01 (д, J=8,4, 1H), 3,76 (с, 3H), 3,61 (с, 2H), 1,15 (д, J=7,0, 6H), 0,96 (с, 9H); МS (ESI) m/z 355,4 [М+l]+.
5.1.13 ПРИМЕР 13: СИНТЕЗ 1-ИЗОПРОПИЛ-6-(3-ИЗОПРОПИЛ-ФЕНИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 5-Бром-3-изопропил-пиразин-2,3-диамин. 2-Амино-3,5-дибромпиразин (0,9 г, 3,5 ммоль) и изопропиламин (1 г, 18 ммоль) нагревали вместе до 150°C в течение 16 часов. Промежуточный продукт очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-60% этилацетата в гексане) с получением масла темного цвета (0,56 г, 69% выход). MS (ESI) m/z 233,1 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-изопропил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
К 5-бром-3-изопропил-пиразин-2,3-диамину добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (0,86 г, 5,3 ммоль) и DMSO (3 мл) и затем нагревали в микроволновом реакторе Emrys при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и затем осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (370 мг, 60% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 12,1 (с, 1H), 8,01 (с, 1H), 4,55 (кв., J=6,8, 1H), 1,46 (д, J=6,8, 6H); МS (ESI) m/z 259,1 [М+1]+.
C. 1-изопропил-6-(3-изопропилфенил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
6-Бром-1-изопропил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он (65 мг, 0,4 ммоль), 3-изопропилфенилбороновую кислоту (0,92 мг, 0,4 ммоль), тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0) (42 мг, 0,036 ммоль) и карбонат натрия (2,1 мл, 1M, 2,1 ммоль) и диоксан (6 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (24 мг, 23% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, (400 МГц, ДМСO-d6) δ 11,96 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 7,78 (с, 1H), 7,81 (д, J=6,8,1Н), 7,40 (т, J=7,7, 1H), 7,28 (д, J=7,5, 1H), 4,66 (кв., J=6,9, 1H), 2,98 (кв., J=6,9,1H), 1,55 (д, J=6,9, 6H), 1,25 (д, J=6,9, 6H); МS (ESI) m/z 297,3 [М+1]+.
5.1.14 ПРИМЕР 14: СИНТЕЗ (R)-1-(2-ГИДРОКСИ-1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-2-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,0 г, 3,98 ммоль) и (R)-(-)-2-фенилглицинол (1,09 г, 7,96 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (40-100% этилацетата/гексан, 25M колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,700 г, 57% выход). MS (ESI) m/z 309,2 [M+1]+, 31 1,2[M+2]+.
B. (R)-2-(3-Амино-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол.
(R)-2-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол (0,700 г, 2,26 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,431 г, 2,48 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)-палладий (0,287 г, 0,226 ммоль), карбонат калия (1,24 г, 9,04 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (35 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (40-100% этилацетата/гексан, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,546 г, 67% выход). MS (ESI) m/z 358,3 [M+1]+.
C. (R)-1-(2-Гидрокси-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(R)-2-(3-Амино-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол (0,546 г, 1,53 ммоль) и мочевину (0,183 г, 3,05 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,150 г, 26% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,94 (с, 1H), 8,56 (д, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,14 (д, 1H), 7,85 (м, 2H), 7,51 (т, 3H), 7,39 (м, 3H), 5,65 (м, 1H), 4,76 (т, IH), 4,14 (с, 3H); МS (ESI) m/z 384,3 [М+1]+.
5.1.15 ПРИМЕР 15: СИНТЕЗ (S)-1-(2-ГИДРОКСИ-1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-2-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,0 г, 3,98 ммоль) и (S)-(+)-2-фенилглицинол (1,09 г, 7,96 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (40-100% этилацетата/гексан, 25M колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,882 г, 72% выход). MS (ESI) m/z 309,2 [M+1]+, 311,2[M+2]+.
B. (S)-2-(3-Амино-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол.
(S)-2-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол (0,882 г, 2,26 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,544 г, 2,48 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)-палладий (0,331 г, 0,287 ммоль), карбонат калия (1,25 г, 9,08 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола/дихлорметан, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,524 г, 51% выход). MS (ESI) m/z 358,3 [M+1]+.
C. (S)-1-(2-Гидрокси-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(S)-2-(3-Амино-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламино)-2-фенилэтанол (0,524 г, 1,46 ммоль) и мочевину (0,176 г, 2,93 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,103 г, 18% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,95 (м, 1H), 8,56 (д, 1H), 8,28 (с, 1H), 8,16 (д, 1H), 7,86 (м, 2H), 7,51 (т, 3H), 7,39 (м, 3H), 5,67 (м, 1H), 4,76 (т, 1H), 4,12 (м, 2H); МS (ESI) m/z 384,4 [М+l]+.
5.1.16 ПРИМЕР 16: СИНТЕЗ 1-(ДИФЕНИЛМЕТИЛ)-6-(5-ХИНОЛИЛ)-4-ИМИДАЗОЛИНО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. (3-Амино-6-бромпиразин-2-ил)(дифенилметил)амин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,0 г, 3,98 ммоль) и аминодифенилметан (1,82 г, 10,0 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (5-70% этилацетата в гексане, 25M колонка) с получением указанного в заголовке соединения (1,00 г, 71% выход). MS (ESI) m/z 355,3 [M+1]+, 357,3[M+2]+.
B. (3-Амино-6-(5-хинолил)пиразин-2-ил)(дифенилметил)амин.
(3-Амино-6-бромпиразин-2-ил)(дифенилметил)амин (1,0 г, 2,82 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,537 г, 3,1 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,325 г, 0,282 ммоль), карбонат калия (1,55 г, 11,28 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (35 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (10-100% этилацетата/гексан, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,539 г, 47% выход). MS (ESI) m/z 404,6 [M+1]+.
C. 1-(Дифенилметил)-6-(5-хинолил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он.
(3-Амино-6-(5-хинолил)пиразин-2-ил)(дифенилметил)амин (0,539 г, 1,33 ммоль) и мочевину (0,160 г, 2,67 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с метанолом:этилацетатом (1:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,195 г, 34% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,84 (м, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,09 (м, 2H), 7,82 (т, 1H), 7,70 (д, 1H), 6,96 (с, 1H), 4,25 (м, 1H); МS (ESI) m/z 430,3 [М+1]+.
5.1.17 ПРИМЕР 17: СИНТЕЗ (S)-1-(1-ФЕНИЛПРОПИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-6-бром-N2-(1-фенилпропил)пиразин-2,3-диамин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,0 г, 3,98 ммоль) и (S)-(-)-α-этилбензиламин (2,15 г, 15,93 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (10-80% этилацетата/гексан, 25S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,560 г, 47% выход). MS (ESI) m/z 307,4 [M+1]+, 309,4[M+2]+.
B. (S)-N2-(1-фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин.
(S)-6-Бром-N2-(1-фенилпропил)пиразин-2,3-диамин (0,560 г, 1,83 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,348 г, 2,01 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,211 г, 0,183 ммоль), карбонат калия (1,01 г, 7,32 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанол/дихлорметан, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,500 г, 77% выход). MS (ESI) m/z 356,3 [M+1]+.
C. (S)-1-(1-Фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(S)-N2-(1-Фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин (0,500 г, 1,40 ммоль) и мочевину (0,170 г, 2,81 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,195 г, 36% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,89 (д, 1H), 8,44 (д, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,12 (д, 1H), 7,87 (т, 1H), 7,76 (д, 1H), 7,51 (м, 3H), 7,34 (м, 2H), 5,50 (дд, 1H), 0,981 (т, 3H), 2,39 (м, 2H); МS (ESI) m/z 382,5 [М+1]+.
5.1.18 ПРИМЕР 18: СИНТЕЗ (R)-1-(1-ФЕНИЛПРОПИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-b]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-6-бром-N2-(1-фенилпропил)пиразин-2,3-диамин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,0 г, 3,98 ммоль) и (R)-(+)-α-этилбензиламин (2,15 г, 15,93 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (10-80% этилацетата/гексан, 25S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,440 г, 36% выход). MS (ESI) m/z 307,4 [M+1]+, 309,4[M+2]+.
B. (R)-N2-(1-фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин.
(R)-6-Бром-N2-(1-фенилпропил)пиразин-2,3-диамин (0,440 г, 1,43 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,273 г, 1,58 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,165 г, 0,143 ммоль), карбонат калия (0,789 г, 5,72 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанол/дихлорметан, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,476 г, 93% выход). MS (ESI) m/z 356,4 [M+1]+.
C. (R)-1-(1-Фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(R)-N2-(1-Фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин (0,476 г, 1,34 ммоль) и мочевину (0,160 г, 2,68 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,105 г, 20% выход). lH ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,89 (д, 1H), 8,44 (д, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,12 (д, 1H), 7,87 (т, 1H), 7,76 (д, 1H), 7,51 (м, 3H), 7,34 (м, 2H), 5,50 (дд, 1H), 0,981 (т, 3H), 2,39 (м, 2H); МС (EСI) m/z 382 [М+1]+.
5.1.19 ПРИМЕР 19: СИНТЕЗ 6-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-3-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-3-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
N-Бис-Boc-3-Бром-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиразин-2-иламин (см. Пример 5.C) (150 мг, 0,29 ммоль), гидрохлорид тетрагидропиран-3-иламина (0,395 г, 2,9 ммоль) и триэтиламин (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой E. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с 50% метанолом в H2O с получением белого твердого вещества (53 мг, 50% выход). lH ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6) δ 12,04 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 7,65 (д, J=2,5, 1H), 7,27 (дд, J=8,4, 2,3, 1H), 7,09 (д, J=8,5, 1H), 4,30-4,41 (м, 1H), 4,05 (т, J=10,7, 1H), 3,86-3,95 (м, 2H), 3,83 (с, 3H), 2,93 (дд, J=13,8, 6,8, 1H), 1,23 (д, J=6,9, 6H), 2,60 (дд, J=12,1, 5,2,1H), 1,93-2,02 (м, 1H), 1,77 (с, 2H); МS (ESI) m/z 369,0 [М+1]+.
5.1.20 ПРИМЕР 20: СИНТЕЗ (S)-1-МЕТИЛ-3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-5-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-6-Бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием (S)-6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (см. Пример 3.A) (0,50 г, 1,71 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (0,35 г, 2,13 ммоль) и тетрагидрофурана (7 мл), как описано в Общей Процедуре Dl. Неочищенное вещество растворяли в метаноле (5 мл) и продукт растирали в порошок с H2O, обрабатывая при этом ультразвуком. Образовавшийся осадок отфильтровывали и сушили в вакуумной печи в течение ночи с получением 0,34 г (1,07 ммоль, 62%) (S)-6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она. MS (ESI) m/z 319,4 [M+1]+.
B. (S)-5-Бром-1-метил-3-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К раствору (S)-6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (0,300 г, 0,943 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляли карбонат цезия (избыточное количество) с последующим добавлением диметилсульфата (0,130 г, 1,03 ммоль). Раствор нагревали до 55°C в пробирке с завинчивающимся колпачком. Через час раствор фильтровали для удаления солей карбоната цезия. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении и неочищенный продукт подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (5-50% этилацетата/гексан) с получением указанного в заголовке соединения (0,306 г, 83% выход). lH ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6) δ 7,99 (с, 1H), 7,57 (д, 2H), 7,32 (м, 3H), 5,77 (кв, 1H), 3,42 (с, 3H), 2,04 (д, 3H); 13C ЯМР (75 МГц, CHCl3) δ 52,6 (C=O); МS (ESI) m/z 333,3 [М+1]+, 335,3 [М+2]+.
C. (S)-1-Метил-3-(1-фенилэтил)-5-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(S)-5-Бром-1-метил-3-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,276 г, 0,831 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,158 г, 0,914 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,096 г, 0,083 ммоль), карбонат калия (0,458 г, 3,32 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B и очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила/вода, 60 мл/минута) с получением указанного в заголовке соединения (0,130 г, 43% выход). lH ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,86 (д, 1H), 8,36 (д, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,10 (д, 1H), 7,85 (т, 1H), 7,74 (д, 1H), 7,51 (д, 2H), 7,41 (м, 1H), 7,33 (м, 3H), 5,85 (кв, 1H), 3,53 (с, 3H), 2,01 (д, 3H); МS (ESI) 10 m/z 382,4 [М+1]+.
5.1.21 ПРИМЕР 21: СИНТЕЗ (R)-1-МЕТИЛ-3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-5-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-5-Бром-1-метил-3-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К раствору (R)-6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (0,360 г, 1,13 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляли карбонат цезия (избыточное количество) с последующим добавлением диметилсульфата (0,150 г, 1,13 ммоль). Раствор нагревали до 55°C в пробирке с завинчивающимся колпачком. Через час раствор фильтровали для удаления солей карбоната цезия. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении и неочищенный продукт подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (5-50% этилацетата/гексан) с получением указанного в заголовке соединения (0,306 г, 83% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 7,99 (с, 1H), 7,57 (д, 2H), 7,32 (м, 3H), 5,77 (кв, 1H), 3,42 (с, 3H), 2,04 (д, 3H); 13C ЯМР (75 МГц, CHCl3) δ 52,6 (C=O); МS (ESI) m/z 333,3 [М+1]+, 335,3 [М+2]+.
B. (R)-1-Метил-3-(1-фенилэтил)-5-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(R)-5-Бром-1-метил-3-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,283 г, 0,849 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,161 г, 0,933 ммоль), тетракис(трифенил фосфин)палладий (0,161 г, 0,933 ммоль), карбонат калия (0,468 г, 3,39 ммоль), воду (8 мл) и диметилформамид (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B и очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрил/вода, 60 мл/минута) с получением указанного в заголовке соединения (0,137 г, 42% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,86 (д, 1H), 8,36 (д, 1H), 8,24 (с, 1H), 8,10 (д, 1H), 7,85 (т, 1H), 7,75 (д, 1H), 7,51 (д, 2H), 7,41 (м, 1H), 7,34 (м, 3H), 5,85 (кв, 1H), 3,53 (с, 3H), 2,01 (д, 3H); МS (ESI) m/z 382,4 [М+1]+.
5.1.22 ПРИМЕР 22: СИНТЕЗ 1-ЦИКЛОПЕНТИЛМЕТИЛ-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. Хинолин-5-ил трифторметансульфонат.
Хинолин-5-ол (5 г, 34 ммоль) растворяли в пиридине (5,6 мл, 69 ммоль) и дихлорметане (100 мл). Раствор охлаждали на ледяной бане, при этом добавляли через шприц трифторметансульфоновый ангидрид (7 мл, 41 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут и затем реакцию гасили водой. Реакционную смесь экстрагировали насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над сульфатом магния и затем концентрировали. Полученный остаток очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-60% этилацетата в гексане) с получением продукта в виде желтого масла (9,5 г, 100% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 9,10 (дд, J=4,4, 1,6, 1H), 8,42 (дт, J=8,4, 1,2, 1H), 8,21 (дт, J=8,8, 0,8, 1H), 7,93 (дд, J=8,0, 1H),7,82 (м, 2H); МS (ESI) m/z 278,0 [М+1]+.
B. 5-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)хинолин.
Хинолин-5-илтрифторметансульфонат (9,5 г, 34 ммоль), бис(пинаколато)дибор (18,2 г, 51 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]палладий(II) дихлорметан (753 мг, 1 ммоль), триэтиламин (14 мл, 102 ммоль) и диоксан (100 мл) нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали и полученный остаток очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-60% этилацетата в гексане) с получением продукта в виде желтого масла (7,0 г, 80% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d6) δ 9,00 (д, J=9,3, 1H), 8,93 (дд, J=4,1, 1,9, 1H), 8,15 (д, J=8,2, 1H), 8,06 (дд, J=6,9, 1,4, 1H), 7,78 (дд, J=8,5, 6,9, 1H), 7,61 (дд, J=8,5, 4,1, 1H), 1,39 (с, 12H); МS (ESI) m/z 256,4 [М+1]+.
C. 5-(Хинолин-5-ил)пиразин-2-амин.
Раствор 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)хинолина (5,5 г, 21 ммоль), 5-бромпиразин-2-амина (3,8 г, 21 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (1,2 г, 1 ммоль) и карбоната натрия (63 мл, 1M, 63 ммоль) в диоксане (240 мл) нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 16 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали и экстрагировали при помощи EtOAc и воды. Эмульсию, которая образовалась в процессе экстракции, фильтровали и затем сушили с получением красноватого твердого вещества (3,2 г, 67% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 8,93 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,60 (д, J=8,5, 1H), 8,24 (д, J=1,4, 1H), 8,03-8,08 (м, 2H), 7,85 (м, 1H); МS (ESI) m/z 223,2 [М+1]+.
D. 3-Бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-амин.
Раствор 5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-амина (1,1 г, 5 ммоль) и N-бромсукцинимида (882 мг, 5 ммоль) в ДМФА (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (300 мл) и затем фильтровали через целит. Фильтрат доводили до pH 8 насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и затем разбавляли при помощи EtOAc (100 мл). Смесь перемешивали в течение 2 часов и образовавшийся твердый осадок отфильтровывали, промывали при помощи EtOAc и затем сушили в вакууме с получением оранжевого твердого вещества (300 мг, 20% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d 6) δ 8,94 (д, J=3,2, 1H), 8,56 (д, J=8,4, 1H), 8,33 (с, 1H), 7,83 (д, J=7,2, 1H), 7,73 2(д, J=6,8, 1H), 7,57 (дд, J=8,8, 4,0, 1H), 6,98 (с, 2H); МS (ESI) m/z 301,4 [М+1]+.
E. N-Бис-Boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламин.
3-Бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-амин (1,5 г, 5,0 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (2,7 г, 12,5 ммоль), 4-диметиламинопиридин (61 мг, 0,5 ммоль) и ацетонитрил (15 мл) нагревали до 50°C в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали и полученный остаток очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением желтого твердого вещества (2,4 г, 96% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 9,08 (с, 1H), 9,02 (дд, J=4,1, 1,4, 1H), 8,49 (д, J=8,5, 1H), 8,25 (д, J=8,0,1H), 7,91-8,02 (м, 2H), 7,68 (дд, J=8,7, 4,3, 1H), 1,43 (с, 18H); МS (ESI) m/z 501,3 [М+1]+.
F. 1-Циклопентилметил-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (150 мг, 0,29 ммоль), гидрохлорида циклопентилметиламина (268 мг, 2 ммоль) и триэтиламина в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 25 мг (36% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 8,96 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,54-8,61 (м, 2H), 8,12 (д, J=8,2, 1H), 7,77-7,90 (м, 2H), 7,47-7,59 (м, 2H), 3,11-3,19 (м, 2H), 1,98-2,12 (м, 1H), 1,67-1,77 (м, 2H), 1,49-1,65 (м, 4H), 1,15-1,30 (м, 2H); МS (ESI) m/z 346,4 [М+1]+.
5.1.23 ПРИМЕР 23: СИНТЕЗ 1-[1-(2-ФТОРФЕНИЛ)ЭТИЛ]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(2-Фторфенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(2-фторфенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 55 мг (36% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 12,27 (с, 1H), 8,94 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,33 (д, J=8,0, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,2, 1H), 7,81-7,91 (м, 1H), 7,72-7,78 (м, 1H), 7,60-7,69 (м, 1H), 7,37-7,49 (м, 2H), 7,17-7,26 (м, 2H), 5,94 (кв., J=7,1, 1H), 1,90 (д, J=7,1, 3H); МS (ESI) m/z 386,0 [М+1]+.
5.1.24 ПРИМЕР 24: СИНТЕЗ 1-[1-(4-ФТОРФЕНИЛ)ЭТИЛ]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(4-Фторфенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(4-фторфенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 75 мг (49% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (300 МГц, ДМСO-d 6) δ 12,29 (с, 1H), 8,91-9,01 (м, 1H), 8,32 (д, J=8,5, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,2, 1H), 7,80-7,91 (м, 1H), 7,72-7,79 (м, 1H), 7,41-7,53 (м, 3H), 7,19 (т, J=8,9, 2H), 5,72 (кв, J=7,2, 1H), 1,91 (д, J=7,1, 3H); МS (ESI) m/z 385,9 [М+1]+.
5.1.25 ПРИМЕР 25: СИНТЕЗ 1-[1-(3-ФТОРФЕНИЛ)ЭТИЛ]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(3-Фторфенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(3-фторфенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 53 мг (69% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДМСO-d 6) δ 8,93 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,31-8,34 (м, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,4, 1H), 7,82-7,86 (м, 1H), 7,75 (дд, J=7,1, 1,3, 1H), 7,39-7,44 (м, 2H), 7,23-7,31 (м, 2H), 7,13-7,19 (м, 1H), 5,73 (кв, J=7,4, 1H), 1,91 (д, J=7,2, 3H); МS (ESI) m/z 386,1 [М+1]+.
5.1.26 ПРИМЕР 26: СИНТЕЗ 1-[1-(3-МЕТОКСИФЕНИЛ)ЭТИЛ]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(3-Метоксифенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(3-метоксифенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 44 мг (38% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДMCO-d 6) δ 8,93 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,35-8,38 (м, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,4, 1H), 7,82-7,86 (м, 1H), 7,76 (дд, J=7,1, 1,3, 1H), 7,42 (дд, J=8,6, 4,1, 1H), 7,26-7,31 (м, 1H), 6,97-7,00 (м, 2H), 6,87-6,91 (м, 1H), 5,67 (кв, J=7,3, 1H), 3,68 (с, 3H), 1,92 (д, J=7,2, 3H); MS (ESI) m/z 398,4 [М+1]+.
5.1.27 ПРИМЕР 27: СИНТЕЗ 1-[1-(4-МЕТОКСИФЕНИЛ)ЭТИЛ]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(4-Метоксифенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(4-метоксифенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 44 мг (38% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДMCO-d 6) δ 12,24 (с, 1H), 8,94 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,33-8,36 (м, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,4, 1H), 7,85 (дд, J=8,4, 7,2, 1H), 7,75 (дд, J=7,2, 1,2, 1H), 7,44 (дд, J=8,6, 4,1, 1H), 7,35-7,38 (м, 2H), 6,90-6,94 (м, 2H), 5,67 (кв, J=7,2,1H), 3,74 (с, 3H), 1,91 (д, J=7,2, 3H); MS (ESI) m/z 397,9 [М+1]+.
5.1.28 ПРИМЕР 28: СИНТЕЗ 6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1-(ТЕТРАГИДРО-ПИРАН-3-ИЛ)-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 6-Хинолин-5-ил-1-(тетрагидро-пиран-3-ил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль), гидрохлорида тетрагидро-пиран-3-иламина (278 мг, 2 ммоль) и триэтиламина (1 мл) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 21 мг (21% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДMSO-d 6) δ 12,22 (с, 1H), 8,96 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,61 (д, J=8,0, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,4, 1H), 7,87 (дд, J=8,4, 7,0, 1H), 7,78 (дд, J=7,1, 1,3, 1H), 7,58 (дд, J=8,6, 4,1, 1H), 4,31-4,39 (м, 1H), 3,89-3,99 (м, 2H), 3,82 (дд, J=11, 0,4, 0,1H), 3,21 (тд, J=11,6, 2,8, 1H), 2,54 (д, J=4,7, 1H), 1,99 (д, J=12,1, 1H), 1,63-1,75 (м, 2H); MS (ESI) m/z 348,4 [М+1]+.
5.1.29 ПРИМЕР 29: СИНТЕЗ 1-((1S,4S)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-((1S,4S)-4-Гидроксициклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль), гидрохлорида (1S,4S)-4-аминоциклогексанола (278 мг, 2 ммоль) и триэтиламина (1 мл) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 50 мг (35% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДMSO-d 6) δ 12,16 (с, 1H), 8,96 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,58-8,62 (м, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,4, 1H), 7,85-7,89 (м, 1H), 7,78 (дд, J=7,2, 1,2, 1H), 7,57 (дд, J=8,8, 4,1, 1H), 4,62 (д, J=4,5, 1H), 4,21 (тт, J=12,3, 4,3, 1H), 3,33-3,39 (м, 1H), 2,27-2,38 (м, 2H), 1,91 (д, J=10,9, 2H), 1,81 (д, J=11,7, 2H), 1,24-1,34 (м, 2H); МS (ESI) m/z 362,0 [М+1]+.
5.1.30 ПРИМЕР 30: СИНТЕЗ 1-((1R,4R)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль), гидрохлорида (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (278 мг, 2 ммоль) и триэтиламина (1 мл) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 55 мг (38% выход) белого твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, ДMSO-d 6) δ 12,13 (с, 1H), 8,95 (дд, J=4,2,1, 7, 1H), 8,66 (дд, J=8,8, 1,3, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,4, 1H), 7,84-7,88 (м, 1H), 7,77-7,80 (м, 1H), 7,55 (дд, J=8,8, 4,1, 1H), 4,18-4,28 (м, 2H), 3,83 (с, 1H), 2,64-2,75 (м, 2H), 1,76 (д, J=12,3, 2H), 1,47-1,58 (м, 4H); MS (ESI) m/z 362,4 [М+1]+.
5.1.31 ПРИМЕР 31: СИНТЕЗ 6-(5-ИЗОХИНОЛИЛ)-1-(ФЕНИЛЭТИЛ)-4-ИМИДАЗОЛИНО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 6-Бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
α-Метилбензиламин (1,3 мл, 10,21 ммоль) добавляли к 2-амино-3,5-дибромпиразину (2,00 г, 7,97 ммоль) в n-BuOH (10 мл) и полученную смесь нагревали при 220°C в течение 4500 секунд в микроволновом реакторе Emrys Optimizer. Реакционную смесь конденсировали до получения коричневого масла. Очистка с использованием колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (10-80% EtOAc в гексане) давала 1,65 г (5,62 ммоль, 71%) 6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 293,0 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1,1'-Карбонилдиимидазол (1,14 г, 7,04 ммоль) добавляли к 6-бром-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамину (1,65 г, 5,63 ммоль) и растворяли в ТГФ (15 мл). Полученную смесь нагревали в течение 3600 секунд при 180°C в микроволновом реакторе Emrys Optimizer. Реакционную смесь конденсировали до получения коричневого масла. Осуществляли поглощение неочищенного масла в минимальное количество метанола и, обрабатывая при этом ультразвуком, добавляли воду, чтобы вызвать осаждение. Образовавшееся твердое вещество собирали фильтрованием и сушили в вакуумной печи в течение ночи с получением 1,54 г (4,83 ммоль, 86%) указанного в заголовке соединения. MS (ESI) m/z 319,1 [M+1]+.
C. 6-(5-изохинолил)-1-(фенилэтил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (0,5 г, 1,567 ммоль), изохинолин-5-бороновой кислоты (0,4 г, 2,35 ммоль), фосфата калия (1,6 г, 7,8 ммоль) и комплекса [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия (II) с метиленхлоридом (0,13 г, 0,16 ммоль) в диметилформамиде (10 мл) нагревали при 130°C в течение 1 часа в микроволновом реакторе Emrys Optimizer. Реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией (SiO2, 20-100% этилацетата в гексане). Полученное вещество подвергали дополнительной очистке с использованием колоночной хроматографии (SiO2, 2% метанола в метиленхлориде). Чистые фракции объединяли, растворитель удаляли при пониженном давлении и образовавшееся твердое вещество подвергали ультразвуковой обработке в присутствии ацетонитрила. Образовавшийся осадок отфильтровывали и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения с чистотой 99,9% (33,7 мг, 6%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 9,29 (с, 1H), 8,32 (д, J=6,2, 1H), 8,18 (ушир.с, 2H), 7,93 (дд, J=7,1, 1,2 1H), 7,82 (д, J=6,1, 1H), 7,78 (дд, J=8,2, 7,2, 1H), 7,51 (д, J=6,6, 2H), 7,34 (м, 3H), 5,83 (кв, J=7,22, 1H), 2,03 (д, J=7,22, 3H); MS (ESI) m/z 368,1 [М+1]+.
5.1.32 ПРИМЕР 32: СИНТЕЗ 1-[1-(4-ХЛОРФЕНИЛ)этил]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(4-Хлорфенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(4-хлорфенил)этиламина (278 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 49 мг (42% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMSO-d6) δ 12,29 (с, 1H), 8,94 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,29 (дд, J=9,2, 1,2, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,2, 1H), 7,84 (дд, J=8,4, 7,2,1H), 7,75 (дд, J=7,1, 1,3, 1H), 7,40-7,46 (м, 5H), 5,68-5,74 (м, 1H), 1,90 (д, J=7,2, 3H); MS (ESI) m/z 402,3 [М+1]+.
5.1.33 ПРИМЕР 33: СИНТЕЗ 1-[1-(4-МЕТАНСУЛЬФОНИЛФЕНИЛ)этил]-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-[1-(4-Метансульфонилфенил)этил]-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(4-метансульфонилфенил)этиламина (400 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 33 мг (37% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMSO-d6) δ 12,31 (с, 1H), 8,88 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,26-8,29 (м, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,06 (д, J=8,4, 1H), 7,89 (дт, J=8,6, 2,0, 2H), 7,78-7,83 (м, 1H), 7,71 (дд, J=7,1, 1,3, 1H), 7,66 (д, J=8,4, 2H), 7,40 (дд, J=8,6, 4,1, 1H), 5,78 (кв, J=7,3, 1H), 3,18 (с, 3H), 1,92 (д, J=7,2, 3H); MS (ESI) m/z 446,4 [М+1]+.
5.1.34 ПРИМЕР 34: СИНТЕЗ 1-(1-ПИРИДИН-4-ИЛЭТИЛ)-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-(1-Пиридин-4-ил-этил)-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b] пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-пиридин-4-илэтиламина (250 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 15 мг (20% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMSO-d6) δ 12,30 (с, 1H), 8,87 (д, J=3,9, 1H), 8,52 (д, J=6,1, 2H), 8,20 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,05 (д, J=8,4, 1H), 7,79 (т, J=7,7, 1H), 7,70 (д, J=7,0, 1H), 7,37 (д, J=6,1, 2H), 7,33 (дд, J=8,7, 4,2, 1H), 5,69 (д, J=7,2, 1H), 1,86 (д, J=7,2, 3H); MS (ESI) m/z 369,4 [М+1]+.
5.1.35 ПРИМЕР 35: СИНТЕЗ 5-МЕТИЛ-1-((S)-1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Метилпиразин-2-иламин.
К раствору, содержащему 6-хлор-2-пиразинамин (5,0 г, 38,75 ммоль) в 1,4-диоксане (70 мл), добавляли [1,3-бис(дифенилфосфино]Ni(II)Cl2 (2,10 г, 38,76 ммоль) с последующим добавлением по каплям диметилцинка в толуоле (38,75 мл, 2,0 M, 77,50 ммоль) в течение 15 минут. Раствор оставляли для перемешивания при 105°C в течение 16 часов. Раствор затем конденсировали при пониженном давлении, разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит для удаления солей никеля. Полученную суспензию очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-8% метанола в дихлорметане) с получением указанного в заголовке соединения в виде оранжевого твердого вещества (1,18 г, 28% выход). MS (ESI) m/z 110,3 [M+1]+.
B. 3,5-Дибром-6-метилпиразин-2-иламин.
6-Метилпиразин-2-иламин (1,18 г, 10,82 ммоль) и пиридин (1,79 г, 22,72 ммоль) объединяли в хлороформе (100 мл) при температуре окружающей среды. Затем добавляли по каплям бром (3,63 г, 22,72 ммоль) в хлороформе (5 мл) в течение 5 минут. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, как показал анализ ТСХ, реакционный раствор переносили в делительную воронку и органический слой промывали два раза водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,70 г, 95% выход). MS (ESI) m/z 268,0 [M+2]+.
C. (S)-6-Бром-5-метил-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибром-6-метилпиразин-2-иламин (1,45 г, 5,45 ммоль) и (S)-(-)-α-метилбензиламин (1,65 г, 13,62 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (5-75% этилацетата в гексане, 40M колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,975 г, 65% выход). MS (ESI) m/z 309,4 [M+2]+.
D. 5-Метил-N2-((S)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин.
Раствор (S)-6-бром-5-метил-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамина (0,975 г, 3,19 ммоль), хинолин-5-бороновой кислоты (0,606 г, 3,50 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,368 г, 0,319 ммоль) и карбоната калия (1,76 г, 12,76 ммоль) в воде (8 мл) и диметилформамиде (30 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане, 40M колонка). Полученное твердое вещество растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,200 г, 18% выход). MS (ESI) m/z 356,5 [M+1]+.
E. 5-Метил-1-((S)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-Метил-N2-((S)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин (0,200 г, 0,563 ммоль) и мочевину (0,067 г, 1,12 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2 и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане, 25M колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,063 г, 30% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMSO-d6) δ 12,10 (шир.с, 1H), 8,92 (дд, 1H), 8,10 (д, 2H), 7,84 (м, 2H), 7,62 (д, 1H), 7,41 (м, 1H), 7,30 (м, 6H), 5,63 (кв, 1H), 3,32 (с, 2H), 1,85 (д, 3H); MS (ESI) m/z 382,5 [М+1]+.
5.1.36 ПРИМЕР 36: СИНТЕЗ 5-МЕТИЛ-1-((R)-1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-6-Бром-5-метил-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибром-6-метилпиразин-2-иламин (см. Пример 35.B) (0,900 г, 3,38 ммоль) и (R)-(+)-α-метилбензиламин (1,63 г, 13,52 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (5-80% этилацетата в гексане, 40S колонка) с получением указанного в заголовке соединения (0,534 г, 52% выход). MS (ESI) m/z 309,4 [M+2]+.
B. 5-Метил-N2-((R)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин.
(R)-6-Бром-5-метил-N2-(1-фенилэтил)пиразин-2,3-диамин (0,534 г, 1,74 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,331 г, 1,91 ммоль), тетракис(трифенилфосфин) палладий (0,20 г, 0,175 ммоль) и карбонат калия (0,96 г, 6,96 ммоль) в воде (4 мл) и диметилформамиде (15 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B и осуществляли очистку при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане, 40M колонка) и полученное твердое вещество растирали в порошок с водой/метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,42 г, 67% выход). MS (ESI) m/z 356,4 [M+1]+.
C. 5-Метил-1-((R)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-Метил-N2-((R)-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиразин-2,3-диамин (0,418 г, 1,11 ммоль) и мочевину (0,141 г, 2,35 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и разбавляли метанолом и растирали в порошок с водой, обрабатывая при этом ультразвуком. Образовавшийся осадок отфильтровывали и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0,142 г, 32% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO) δ 12,10 (шир.с, 1H), 8,92 (дд, 1H), 8,10 (д, 2H), 7,84 (м, 2H), 7,62 (д, 1H), 7,41 (м, 1H), 7,30 (м, 6H), 5,63 (кв, 1H), 3,32 (с, 2H), 1,85 (д, 3H). MS (ESI) m/z 382,5 [М+1]+.
5.1.37 ПРИМЕР 37: СИНТЕЗ 1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-4-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 31.B) (0,50 г, 1,57 ммоль), 4-хинолинбороновой кислоты (0,27 г, 1,89 ммоль), карбоната калия (1,00 г, 4,71 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,13 г, 0,16 ммоль), диметилформамида (7 мл) и воды (4 мл), как описано в Общей Процедуре B. Неочищенное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (20-70% EtOAc в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с получением 0,1 г (0,27 ммоль, 17%) 1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она. 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,91 (д, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,09 (м, 2H), 7,81 (м, 1H), 7,63 (д, 2H), 7,53 (м, 2H), 7,34 (м, 2H), 5,83 (м, 1H), 2,03 (д, 3H); MS (ESI) m/z 368,4 [М+1]+; т.пл. 252-254°C.
5.1.38 ПРИМЕР 38: СИНТЕЗ 6-(2-ФТОРФЕНИЛ)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(2-Фторфенил)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 31.B) (0,125 г, 0,393 ммоль), 2-фторфенилбороновой кислоты (0,065 г, 0,470 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(II)-продукта присоединения дихлорметана (0,032 г, 0,039 ммоль) и фосфата калия (0,333 г, 1,57 ммоль) в воде (0,6 мл) и диметилформамиде (2 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C и очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрил/вода, 60 мл/мин) с получением указанного в заголовке соединения (0,050 г, 38% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMSO-d6) δ 12,10 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (т, 1H), 7,45 (т, 3H), 7,37 (м, 3H), 7,30 (м, 1H), 5,77 (кв, 1H), 2,00 (д, 3H), MS (ESI) m/z 335,1 [М+1]+.
5.1.39 ПРИМЕР 39: СИНТЕЗ 1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-6-ИЛ)-1Н-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4,4,5,5-Тетраметил-2-(6-хинолил)-1,3,2-диоксаборолан.
К суспензии 6-бромхинолина (0,9 г, 4,35 ммоль), бис(пинаколато)дибора (8,85 г, 34,8 ммоль) и ацетата калия (2,56 г, 5,22 ммоль) в ДМФА (50 мл) добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлор-палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (355 мг, 0,435 ммоль) и реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Emrys Optimizer при 1000C в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией (SiO2, 20-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (1,1 г, 99% выход). MS (ESI) m/z 256,5 [M+1]+.
B. 1-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-6-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 35.B) (0,5 г, 1,567 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-(6-хинолил)-1,3,2-диоксаборолана (0,6 г, 2,35 ммоль), фосфата калия (1,6 г, 7,8 ммоль) и [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II)-продукта присоединения дихлорметана (0,13 г, 0,16 ммоль) в смеси 10:1 ДМФА:вода (10 мл) нагревали при 130°C в течение 1 часа в микроволновом реакторе Emrys Optimizer. Реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали с использованием колоночной хроматографии (SiO2, 1:1 н-гексан:этилацетат). Последующая очистка с использованием колоночной хроматографии (SiO2, 2% метанола в метиленхлориде) с последующим пропусканием через колонку C18 с использованием ацетонитрила в качестве элюента давала указанное в заголовке соединение с чистотой 98,9% (3 мг, 0,5%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,84 (дд, J=4,3, 1,6, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,53 (д, J=7,9, 1H), 8,46 (д, J=7,2, 1H), 8,41 (дд, J=8,9, 2,2, 1H), 8,11 (д, J=8,8, 1H), 7,59 (ушир. с, 3H), 7,35 (т, J=7,7, 2H), 7,28 (т, J=7,2, 1H), 5,87 (кв J=7,4, 1H), 2,03 (д, J=7,4, 3H); MS (ESI) m/z 368,3 [М+1]+.
5.1.40 ПРИМЕР 40: СИНТЕЗ 1-ПИПЕРИДИН-4-ИЛМЕТИЛ-6-ХИНОЛИН-5-ИЛ-1,3-ДИГИДРОИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 1-Пиперидин-4-илметил-6-хинолин-5-ил-1,3-дигидроимидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и трет-бутил 4-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилата (400 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2. Реакционную смесь растирали в порошок со смесью 1:1 DMSO:метанол с получением 19 мг (26% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,94 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,59-8,61 (м, 1H), 8,10 (с, 1H), 8,08 (д, J=7,2, 1H), 7,82-7,86 (м, 1H), 7,73 (дд, J=7,2, 1,2, 1H), 7,51 (дд, J=8,8, 4,1, 1H), 3,68 (д, J=6,8, 1H), 2,96-3,04 (м, 2H), 1,94-2,04 (м, 1H), 1,56-1,64 (м, 2H), 1,12-1,24 (м, 2H); MS (ESI) m/z 405,5 [М+1]+.
5.1.41 ПРИМЕР 41: СИНТЕЗ 1-(1-(ПИРИДИН-2-ИЛ)ЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Пиридин-2-ил)этанамин.
2-Ацетилпиридин (0,5 г, 4,1 ммоль), карбонат калия (1,7 г, 12,3 ммоль), гидрохлорид гидроксиламина (342 мг, 5 ммоль) и метанол (10 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов, затем реакционную смесь фильтровали. К фильтрату добавляли цинковую пыль (1,3 г, 21 ммоль) и хлорид аммония (1,1 г, 21 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и сушили с получением 300 мг (60% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 8,47 (д, J=4,9, 1H), 7,73 (тд, J=7,7, 1,9, 1H), 7,45 (д, J=7,7, 1H), 7,20 (ддд, J=7,5, 4,9, 1,1, 1H), 3,98 (кв, J=6,0, 1H), 1,27 (д, J=6,6, 3H); MS (ESI) m/z 123,6 [М+1]+.
B. 1-(1-(Пиридин-2-ил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(пиридин-2-ил)этанамина (250 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 53 мг (48% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,27 (с, 1H), 8,88 (дд, J=4,1, 1,6, 1H), 8,50-8,52 (м, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,16 (д, J=8,4, 1H), 8,06 (д, J=8,4, 1H), 7,79-7,84 (м, 2H), 7,71-7,73 (д, J=7,5, 1H), 7,48 (д, J=8,5,1H), 7,30-7,36 (м, 2H), 5,72-5,77 (дд, J=9,0, 1H), 1,94 (д, J=9,0, 3H); MS (ESI) m/z 369,5 [М+1]+.
5.1.42 ПРИМЕР 42: СИНТЕЗ 1-(1-(ПИРИДИН-3-ИЛ)ЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Пиридин-3-ил)этанамин.
3-Ацетилпиридин (0,5 г, 4,1 ммоль), карбонат калия (1,7 г, 12,3 ммоль), гидрохлорид гидроксиламина (342 мг, 5 ммоль) и метанол (10 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов, затем реакционную смесь фильтровали. К фильтрату добавляли цинковую пыль (1,3 г, 21 ммоль) и хлорид аммония (1,1 г, 21 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. К реакционной смеси добавляли воду (10 мл) и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и сушили с получением 300 мг (60% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 8,52 (д, J=4,9, 1H), 8,32 (тд, J=7,7, 1,9, 1H), 7,68 (д, J=7,7, 1H), 7,28 (ддд, J=7,5, 4,9, 1,1, 1H), 4,6 (кв, J=6,0, 1H), 1,25 (д J=6,6, 3H); MS (ESI)m/z 123,4 [М+1]+.
B. 1-(1-(Пиридин-3-ил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и 1-(пиридин-3-ил)этанамина (250 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 15 мг (14% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,29 (с, 1H), 8,93 (м, 1H), 8,60 (д, J=2,0, 1H), 8,52-8,54 (д, J=6,0, 1H), 8,30 (д, J=10,0, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,09 (д, J=10,5, 1H), 7,82-7,86 (м, 2H), 7,73 (д, J=8,5, 1H), 7,38-7,46 (м, 2H), 5,75-5,81 (дд, J=9,0, 1H), 1,94 (д, J=9,5, 3H); MS (ESI) m/z 369,5 [М+1]+.
5.1.43 ПРИМЕР 43: СИНТЕЗ 1-((1S,4S)-4-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. ((1S,4S)-4-Аминоциклогексил)метанол.
К ((1S,4S)-4-(Дибензиламино)циклогексил)метанолу (2 г, 6,5 ммоль) добавляли метанол (50 мл) и 10% Pd/C (100 мг). Реакционную смесь встряхивали в гидрогенизаторе Парра с газообразным водородом (40 ф/кв.дюйм (2,812 кг/см2)) в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит и затем концентрировали до получения масла. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 4,49 (с, 1H), 3,25 (с, 2H), 2,81 (с, 1H), 1,38 (м, 8H); MS (ESI) m/z 130,3 [М+1]+.
B. 1-((1S,4S)-4-(Гидроксиметил)циклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор N-бис-boc-3-бром-5-(хинолин-5-ил)пиразин-2-иламина (см. Пример 22.E) (150 мг, 0,29 ммоль) и ((1S,4S)-4-аминоциклогексил)метанола (250 мг, 2 ммоль) в этаноле (4 мл) подвергали взаимодействию и очищали в соответствии с Общей Процедурой E2 с получением 40 мг (36% выход) белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,14 (с, 1H), 8,96 (дд, J=4,2, 1,7, 1H), 8,69 (д, J=8,0, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,21 (д, J=8,4, 1H), 7,84-7,88 (м, 1H), 7,78-7,80 (м, 1H), 7,58 (дд, J=8,8, 4,1, 1H), 8,06 (т, J=5,6, 1H), 4,24 (дт, J=8,0, 4,4, 1H), 3,50-3,41 (м, 2H), 3,16 (д, J=5,2, 1H), 2,31-2,48 (м, 2H), 1,79-1,85 (м, 2H), 1,71 (шир.с, 1H), 1,45-1,62 (м, 4H); MS (ESI) m/z 376,4 [M+1]+.
5.1.44 ПРИМЕР 44: СИНТЕЗ 6-(3-(МЕТИЛСУЛЬФОНИЛ)ФЕНИЛ)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(3-(Метилсульфонил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 31.B) (0,13 г, 0,40 ммоль), (3-метилсульфонилфенил)бороновую кислоту (0,094 г, 0,47 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,032 г, 0,039 ммоль) и фосфат калия (0,333 г, 1,57 ммоль) растворяли в воде (0,6 мл) и ДМФА (4 мл), подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C и очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила/вода, 60 мл/минута) с получением указанного в заголовке соединения (0,038 г, 0,1 ммоль, 24% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,23 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,37 (д, 1H), 7,97 (д, 1H), 7,79 (т, 1H), 7,57 (д, 2H), 7,38 (2, т), 7,29 (м, 1H), 5,75 (м, 1H), 3,29 (д, 3H), 2,00 (д, 3H); MS (ESI) m/z 395,4 [М+1]+ .
5.1.45 ПРИМЕР 45: СИНТЕЗ 3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-5-ХИНОЛИН-5-ИЛ-3H-ОКСАЗОЛO[4,5-B]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. 5-(Хинолин-5-ил)пиразин-2-амин.
Хинолин-5-илбороновую кислоту (2,0 г, 11,5 ммоль), 5-бромпиразин-2-амин (2,0 г, 11,5 ммоль)), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (252 мг, 0,34 ммоль), 1M карбоната натрия (35 мл, 35 ммоль) и диоксан (120 мл) нагревали вместе до 100°C в течение 2 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали до получения пасты и затем растирали в порошок с водой. Остаток фильтровали и промывали водой с получением темно-бурого твердого вещества (2,2 г, 90% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,93 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,60 (д, J=7,8, 1H), 8,24 (д, J=1,6, 1H), 8,05 (м, 2H), 7,81 (м, 1H), 7,69 (д, J=5,9, 1H), 7,53 (дд, J=8,6, 4,3, 1H), 6,69 (с, 2H); MS (ESI) m/z 223,3 [М+1]+.
B. 5-Хинолин-5-ил-1H-пиразин-2-он.
5-(Хинолин-5-ил)пиразин-2-амин (2,2 г, 10 ммоль) и нитрит натрия (1,4 г, 20 ммоль) добавляли вместе и охлаждали на ледяной бане. К смеси добавляли концентрированную серную кислоту (6 мл). Реакционную смесь медленно нагревали до 50°C на водяной бане в течение 30 минут. Реакционную смесь выливали в измельченный лед (50 г) и pH доводили до 7 при помощи 1M NaOH. Образовавшееся твердое вещество фильтровали, промывали водой и затем сушили с получением твердого вещества рыжевато-коричневого цвета, (1,4 г, 65% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,93 (дд, J=4,3, 1,6, 1H), 8,53 (д, J=8,6, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,06 (д, J=8,6, 1H), 7,81 (м, 2H), 7,69 (д, J=6,2, 1H), 7,54 (дд, J=8,6, 3,9, 1H); MS (ESI) m/z 224,4 [М+1]+.
C. 3-Бром-5-хинолин-5-ил-1H-пиразин-2-он.
5-Хинолин-5-ил-1H-пиразин-2-он (600 мг, 2,6 ммоль), N-бромсукцинимид (480 мг, 2,6 ммоль) и ДМФА (7 мл) перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем растирали в порошок с водой. Смесь фильтровали, промывали водой и затем сушили с получением твердого вещества рыжевато-коричневого цвета (380 мг, 47% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,88 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 8,69 (д, J=8,6, 1H), 7,92 (м, 2H), 7,74 (дд, J=8,4, 7,2, 1H), 7,58 (дд, J=7,0, 1,2, 1H), 7,52 (дд, 7=8,6, 4,3, 1H); MS (ESI) m/z 304,0 [М+1]+.
D. 3-(1-Фенил-этиламино)-5-хинолин-5-ил-1H-пиразин-2-он.
3-Бром-5-хинолин-5-ил-1Н-пиразин-2-он (0,82 г, 2,7 ммоль), 1-фенилэтанамин (394 мг, 3,3 ммоль) и диизопропилэтиламин (2 мл) нагревали вместе до 130°C в течение 16 часов. Реакционную смесь растирали в порошок с водой и EtOAc с получением твердого вещества. Смесь фильтровали и сушили с получением темно-коричневого твердого вещества (0,74 г, 80% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,94 (с, 1H), 8,83 (с, 1H), 8,29 (д, J=9,0, 1H), 7,95 (д, J=8,6, 1H), 7,70 (т, J=7,6, 1H), 7,60 (д, J=7,4, 1H), 7,55 (д, J=7,0, 1H), 7,36 (д, J=3,9, 3H), 7,28 (дд, J=7,8, 3,5, 1H), 7,18 (дд, J=8,2, 3,9, 1H), 6,86 (с, 1H), 5,03 (м, 1H), 1,50 (д, J=6,6, 3H); MS (ESI) m/z 343,1 [М+1]+.
E. 3-(1-Фенил-этил)-S-хинолин-5-ил-3H-оксазоло[4,5-b]пиразин-2-он.
3-(1-Фенил-этиламино)-5-хинолин-5-ил-1H-пиразин-2-он (50 мг, 0,15 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (470 мг, 1,5 ммоль) и диоксан (5 мл) нагревали вместе в трубке высокого давления до 150°C в течение 20 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывали при помощи EtOAc и затем концентрировали. Осуществляли очистку остатка при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (28 мг, 52% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 9,73 (дд, J=4,1, 1,8, 1H), 9,11 (с, 1H), 9,09 (д, J=8,2, 1H), 8,93 (д, J=8,6, 1H), 8,66 (м, 1H), 8,58 (дд, J=7,2, 1,4, 1H), 8,31 (м, 2H), 8,26 (дд, J=8,6, 4,3, 1H), 8,17 (м, 2H), 6,43 (кв, J=7,0, 1H), 2,71 (д, J=7,0, 3H); MS (ESI) m/z 369,4 [М+1]+.
5.1.46 ПРИМЕР 46: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-ИЗОПРОПИЛ-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (4-Бромфенокси)триизопропилсилан.
4-Бромфенол (5,5 г, 32 ммоль), имидазол (5,4 г, 80 ммоль) и дихлорметан (200 мл) перемешивали в атмосфере азота. Добавляли триизопропилсилилхлорид (8,1 мл, 38 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь экстрагировали водой, 1М раствором гидроксида натрия и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением бесцветного масла (10 г, 100% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 7,42 (д, J=9,0, 2H), 6,83 (д, J=9,0, 2H), 1,23 (дкв, J=14,7, 7,3, 3H), 1,05 (д, J=7,4, 18H).
B. Триизопропил(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенокси)силан.
(4-Бромфенокси)триизопропилсилан (10 г, 32 ммоль), бис(пинаколато)дибор (8,1 г, 32 ммоль), ацетат калия (9,4 г, 96 ммоль) и диоксан (200 мл) добавляли вместе и дегазировали в вакууме. Добавляли дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,7 г, 0,96 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 100°C в атмосфере азота в течение 20 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через целит и промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и полученное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-20% этилацетата в гексане) с получением бесцветного масла (10,1 г, 84% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 7,58 (д, J=8,6, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 1,27 (с, 15H), 1,05 (д, J=7,4, 18H).
C. 5-(4-(Триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин.
Триизопропил(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенокси)силан (1,1 г, 2,9 ммоль), 5-бромпиразин-2-амин (507 мг, 2,9 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (64 мг, 0,087 ммоль), 1M карбонат натрия (8,7 мл, 8,7 ммоль) и диоксан (10 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (0,8 г, 80% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,42 (с, 1H), 7,92 (с, 1H), 7,80 (д, J=8,6, 2H), 6,90 (д, J=8,6, 2H), 6,45 (с, 2H), 1,26 (кв, J=7,4, 7,2, 3H), 1,08 (д, J=7,4, 18H); MS (ESI) m/z 344,4 [М+1]+.
D. 3-Бром-5-(4-(триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин.
5-(4-(Триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин (1,6 г, 4,7 ммоль), N-бромсукцинимид (830 мг, 4,7 ммоль) и диметилформамид (10 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением темного твердого вещества (1,1 г, 56% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,51 (с, 1H), 7,78 (д, J=8,6, 2H), 6,93 (д, J=9,0, 2H), 6,75 (с, 2H), 1,21-1,31 (м, 3H), 1,08 (д, J=7,0, 18H); MS (ESI) m/z 422,4 [М+1]+.
E. 3-Бром-N,N-бис-boc-5-(4-(триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин.
3-Бром-5-(4-(триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин (1,1 г, 2,6 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (2,8 г, 13 ммоль), 4-диметиламинопиридин (32 мг, 0,26 ммоль) и ацетонитрил (30 мл) нагревали вместе до 50°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-20% этилацетата в гексане) с получением темного масла (1,6 г, 99% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 9,29 (с, 1H), 8,22 (д, J=8,6, 2H), 7,42 (д, J=8,6, 2H), 1,38 (с, 18H), 1,20-1,30 (м, 3H), 1,04 (д, J=7,4, 18H).
F. 4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол.
3-Бром-N,N-бис-boc-5-(4-(триизопропилсилилокси)фенил)пиразин-2-амин (1,6 г, 2,6 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (20 мл) и добавляли тетрабутиламмонийфторид (0,68 г, 2,6 ммоль). После того как исходное вещество было полностью израсходовано (отслеживали при помощи ТСХ), реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (1,1 г, 92% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 9,13 (с, 1H), 8,02 (д, J=8,6, 2H), 6,93 (д, J=8,6, 2H), 1,38 (с, 18H).
G. 6-(4-Гидроксифенил)-1-изопропил-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (150 мг, 0,32 ммоль), изопропиламин (0,272 мл, 3,2 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с водой и простым эфиром. Твердое вещество фильтровали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (14 мг, 16% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,88 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,83-7,88 (м, 2H), 6,85-6,89 (м, 2H), 4,60-4,69 (м, 1H), 1,55 (д, J=6,6, 6H); MS (ESI) m/z 271,3 [М+1]+; т.пл. 323-324°C.
5.1.47 ПРИМЕР 47: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОПЕНТИЛМЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклопентилметил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (150 мг, 0,32 ммоль), гидрохлорид циклопропилметиламина (438 мг, 3,2 ммоль), триэтиламин (0,5 мл) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с водой и простым эфиром. Твердое вещество фильтровали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (25 мг, 25% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,91 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,84 (с, 2H), 6,86 (с, 2H), 3,79 (с, 2H), 1,65 (с, 5H), 1,52 (с, 2H), 1,34 (с, 2H); MS (ESI) m/z 311,3 [М+1]+; т.пл. 296-297°C.
5.1.48 ПРИМЕР 48: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-ИЗОБУТИЛ-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-изобутил-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (150 мг, 0,32 ммоль), 2-метилпропан-1-амин (0,317 мл, 3,2 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с водой и простым эфиром. Твердое вещество фильтровали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (21 мг, 23% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,83-7,86 (м, 2H), 6,84-6,88 (м, 2H), 3,68 (д, J=7,4, 2H), 2,24 (дт, J=13,7, 6,8, 1H), 0,92 (д, J=6,6, 6H); MS (ESI) m/z 285,5 [М+1]+; т.пл. 290-291°C.
5.1.49 ПРИМЕР 49: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-3-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОН
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-3-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (150 мг, 0,32 ммоль), (тетрагидро-2H-пиран-3-ил)метанамин (368 мг, 3,2 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с водой и простым эфиром. Твердое вещество фильтровали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (25 мг, 24% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,94 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,6, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 3,73-3,82 (м, 3H), 3,69 (ддд, J=11,1, 3,7, 3,5, 1H), 3,35-3,40 (м, 1H), 3,25 (дд, J=11,3, 9,0, 1H), 2,10-2,18 (м, 1H), 1,74(с, IH), 1,63 (д, J=3,9, 1H), 1,39-1,49 (м, 1H), 1,26-1,35 (м, 1H); MS (ESI) m/z 327,5 [М+1]+; т.пл. 271-272°C.
5.1.50 ПРИМЕР 50: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (226 мг, 0,48 ммоль), циклогексилметанамин (629 мг, 4,8 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с водой и простым эфиром. Твердое вещество фильтровали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (45 мг, 29% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,84 (д, J=8,6, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 3,71 (д, J=7,4, 2H), 1,89 (с, 1H), 1,58-1,69 (м, 6H), 1,17 (т, J=8,4, 3H), 0,98-1,08 (м, 2H); MS (ESI) m/z 325,4 [М+1]+; т.пл. 302-303°C.
5.1.51 ПРИМЕР 51: 5-(3-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-3-(2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1H-имидазо[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОН
A. 6-Хлор-N-(2-метоксифенил)-3-нитропиридин-2-амин.
2,6-Дихлор-3-нитропиридин (3,0 г, 15,54 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (50 мл) и охлаждали до -78°C. Добавляли по каплям раствор o-анизидина (1,91 г, 15,54 ммоль) и диизопропиламина (2,10 г, 16,31 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 16 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и распределяли между водой и этилацетатом (3×), органические слои объединяли и сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Твердое вещество растирали в порошок с этилацетатом/гексаном и образовавшийся осадок фильтровали с получением указанного в заголовке соединения (3,53 г, 81%). MS (ESI) m/z 280,1 [M+1]+.
B. 3-(6-(2-Метоксифениламино)-5-нитропиридин-2-ил)фенол.
6-Хлор-N-(2-метоксифенил)-3-нитропиридин-2-амин (2,03 г, 7,27 ммоль), 3-гидроксифенилбороновую кислоту (1,50 г, 10,90 ммоль), ацетат палладия(II) (0,489 г, 0,727 ммоль), 1,1'-(бис(ди-трет-бутил)фосфин)ферроцен (0,344 г, 0,727 ммоль) и фосфат калия (4,62 г, 21,81 ммоль) объединяли в диоксане и нагревали до 98°C в атмосфере азота в течение 16 часов. После того как исходное вещество было полностью израсходовано (отслеживали при помощи ТСХ), реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (10-40% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (1,48 г, 59%). MS (ESI) m/z 338,4 [M+1]+.
C. 3-(5-Амино-6-(2-метоксифениламино)пиридин-2-ил)фенол.
3-(6-(2-Метоксифенил-амино)-5-нитропиридин-2-ил)фенол (1,48 г, 4,39 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (120 мл). Затем добавляли порошок железа (0,489 г, 8,78 ммоль) и раствор нагревали до 80°C. Реакцию отслеживали методом тонкослойной хроматографии на расходование исходного вещества. Через 2 часа раствор охлаждали, фильтровали через целит и конденсировали при пониженном давлении. Полученное масло распределяли между раствором бикарбоната натрия и этилацетатом (3×). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,15 г, 85%). MS (ESI) m/z 308,4 [M+1]+.
D. 5-(3-Гидроксифенил)-3-(2-метоксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он.
3-(5-Амино-6-(2-метоксифениламино)пиридин-2-ил)фенол (1,08 г, 3,51 ммоль) и мочевину (0,528 г, 8,79 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C. Неочищенный продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (5-65% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 39 мин) с получением указанного в заголовке соединения (0,056 г, 5%). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,28 (с, 1H), 9,43 (с, 1H), 7,51 (т, J=8,1, 2H), 7,42 (т, J=8,1, 2H), 7,23 (м, 3H), 7,12 (м, 2H), 6,70 (д, J=7,80, 1H), 3,73 (с, 3H); MS (ESI) m/z 334,0 [М+1]+; т.пл. 240-242°C.
5.1.52 ПРИМЕР 52: СИНТЕЗ 4-(3-(3-МЕТОКСИБЕНЗИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРООКСАЗОЛO[5,4-B]ПИРАЗИН-5-ил)-N-МЕТИЛБЕНЗАМИДА
A. Метил 4-(5-аминопиразин-2-ил)бензоат.
4-(Метоксикарбонил)фенилбороновую кислоту (1,8 г, 9,7 ммоль), 5-бромпиразин-2-амин (1,8 г, 9,7 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (213 мг, 0,29 ммоль), 1M карбоната натрия (29 мл, 29 ммоль) и диоксан (100 мл) нагревали вместе до 100°C в течение 16 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь фильтровали через целит и затем добавляли водой и этилацетатом с получением a твердого вещества. Твердое вещество фильтровали и сушили с получением черного твердого вещества (1,1 г, 50% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,63 (с, 1H), 8,07 (с, 2H), 7,99 (с, 3H), 6,78 (с, 2H), 3,86 (с, 3H); MS (ESI) m/z 230,4 [М+1]+.
B. 4-(5-Гидроксипиразин-2-ил)бензойная кислота.
Метил 4-(5-аминопиразин-2-ил)бензоат (1,1 г, 4,8 ммоль) и нитрит натрия (6,6 г, 9,6 ммоль) объединяли и охлаждали на ледяной бане. К смеси добавляли концентрированную серную кислоту (6 мл). Реакционную смесь медленно нагревали до 50°C на водяной банев течение 30 минут. Реакционную смесь выливали в измельченный лед (50 г) и водную смесь доводили до pH 7 при помощи 1М гидроксида натрия. Образовавшееся твердое вещество фильтровали, промывали водой и затем сушили с получением продукта в виде рыжевато-коричневого твердого вещества (0,4 г, 36% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,20 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,05 (д, J=8,2, 2H), 7,87 (д,J=7,8, 2H); MS (ESI) m/z 217,1 [М+1]+.
C. 4-(5-Гидроксипиразин-2-ил)-N-метилбензамид.
4-(5-Гидроксипиразин-2-ил)бензойную кислоту (0,4 г, 1,8 ммоль), метиламингидрохлорид (149 мг, 2,2 ммоль), гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N'N'-тетраметилурония (824 мг, 2,2 ммоль), триэтиламин (0,8 мл, 1 ммоль) и диметилформамид (20 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (250 мг, 59% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,46 (кв., J=4,4, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,13 (м, 1H), 7,93-7,99 (м, 2H), 7,86-7,91 (м, 2H), 2,79 (д, J=4,7, 3H); MS (ESI) m/z 230,4 [М+1]+.
D. 4-(6-Бром-5-гидроксипиразин-2-ил)-N-метилбензамид.
Раствор 4-(5-гидроксипиразин-2-ил)-N-метилбензамида (250 мг, 1,1 ммоль) и N-бромсукцинимида (233 мг, 1,3 ммоль) в ДМФА (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (195 мг, 58% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,49 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 7,90 (с, 4H), 2,79 (д, J=3,9, 3H); MS (ESI) m/z 308,1 [М+1]+.
E. 4-(5-Гидрокси-6-(3-метоксибензиламино)пиразин-2-ил)-N-метилбензамид.
4-(6-Бром-5-гидроксипиразин-2-ил)-N-метилбензамид (195 мг, 0,63 ммоль), 3-метоксибензиламин (130 мг, 0,95 ммоль), диизопропилэтиламин (2 мл) и диметилсульфоксид (1 мл) нагревали вместе до 130°C в течение 16 часов. Реакционную смесь растирали в порошок с водой и этилацетатом с получением твердого вещества. Смесь фильтровали и сушили с получением темно-коричневого твердого вещества (101 мг, 44% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,40 (с, 1H), 7,88 (д, J=7,8, 3H), 7,78-7,84 (м, 2H), 7,31 (с, 1H), 7,22 (т, J=7,6, 1H), 6,97-7,03 (м, 2H), 6,78 (д, J=7,8, 1H), 4,56 (с, 2H), 3,71 (с, 3H), 2,77-2,81 (м, 3H); MS (ESI) m/z 365,3 [М+1]+.
F. 4-(3-(3-Метоксибензил)-2-оксо-2,3-дигидрооксазолo[5,4-b]пиразин-5-ил)-N-метилбензамид.
4-(5-Гидрокси-6-(3-метоксибензиламино)пиразин-2-ил)-N-метилбензамид (100 мг, 0,27 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (445 мг, 2,7 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали вместе в герметично закрытой пробирке до 150°C в течение 16 часов. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали с получением белого твердого вещества (27 мг, 25% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,71 (с, 1H), 8,51-8,59 (м, 1H), 8,15 (д, J=8,5, 2H), 7,95 (д, J=8,5, 2H), 7,26-7,33 (м, 1H), 7,04-7,12 (м, 2H), 6,89 (дд, J=7,8, 2,9, 1H), 5,07 (с, 2H), 3,74 (с, 3H), 2,81 (д, J=4,4, 3H); MS (ESI) m/z 391,0 [М+1]+; т.пл. 168-169°C.
5.1.53 ПРИМЕР 53: СИНТЕЗ 1-ЦИКЛОПЕНТИЛ-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-Циклопентил-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-Boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,43 ммоль), циклопентиламин (365 мг, 4,3 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в этилацетате) с получением белого твердого вещества (46 мг, 36% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 9,70 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,84 (д, J=8,8, 2H), 6,86 (д, J=8,5, 2H), 4,75-4,86 (м, 1H), 2,14-2,28 (м, 2H), 1,90-2,04 (м, 4H), 1,60-1,73 (м, 2H); MS (ESI) m/z 297,3 [М+1]+; т.пл. 299-301°C.
5.1.54 ПРИМЕР 54: СИНТЕЗ 1-ЦИКЛОГЕКСИЛ-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-Циклогексил-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,43 ммоль), циклогексиламин (425 мг, 4,3 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в этилацетате) с получением белого твердого вещества (50 мг, 37% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,5, 2H), 6,87 (д, J=8,5, 2H), 4,24 (т, J=11,9, 1H), 2,25-2,39 (м, 2H), 1,76-1,90 (м, 6H), 1,30-1,43 (м, 2H); MS (ESI) m/z 311,5 [М+1]+; мp 318-320°C.
5.1.55 ПРИМЕР 55: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 6-Бром-N2-(циклогексилметил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (5,0 г, 19,92 ммоль) и циклогексилметанамин (3,25 мл, 24,90 ммоль) растворяли в н-бутаноле (120 мл). К смеси добавляли диизопропилэтиламин (8,34 мл, 47,88 ммоль) и перемешиваемую реакционную смесь нагревали при 130°C в течение 2 дней. После того как исходное вещество было полностью израсходовано (отслеживали при помощи ЖХМС), реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полутвердое масло растворяли в этилацетате и растирали в порошок из гексана, обрабатывая при этом ультразвуком. Осадок отфильтровывали с получением указанного в заголовке соединения (4,85 г, 86%). MS (ESI) m/z 285,0 [M]+, 287,2 [M+2]+
B. 6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-N2-(циклогексилметил)пиразин-2,3-диамин (4,85 г, 17,01 ммоль) растворяли в ТГФ (50 мл), добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (3,45 г, 21,26 ммоль) и реакционный раствор распределяли в 4 разных сосуда. Каждую фракцию нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 30 минут. Прореагировавшие фракции объединяли и конденсировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество растворяли в минимальном количестве ДМФА и осаждали при помощи деионизированной воды, обрабатывая при этом ультразвуком. Отфильтрованный продукт сушили в вакуумной печи при 60°C в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (4,72 г, 89%). MS (ESI) m/z 311,3 [M]+, 313,5 [M+2]+
C. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (200 мг, 0,64 ммоль), (4-аминокарбонилфенил)бороновую кислоту (128 мг, 0,77 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (53 мг, 0,06 ммоль) и фосфат калия (550 мг, 2,58 ммоль) в ДМФА (15 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (35 мг, 15% выход) в виде белого рыхлого порошка. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,18 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,19 (д, J=8,7, 2H), 8,06 (д, J=8,7, 2H), 7,51 (с, 2H), 3,82 (д, J=8,7, 2H), 1,98 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 352,2 [М+1]+; т.пл. 293-295°C.
5.1.56 ПРИМЕР 56: СИНТЕЗ МЕТИЛ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗОАТА
A. Метил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (1,0 г, 3,22 ммоль), (4-метоксикарбонилфенил)бороновую кислоту (0,77 г, 3,87 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (263 мг, 0,32 ммоль) и фосфат калия (2,73 г, 12,88 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (360 мг, 31% выход) в виде белого рыхлого порошка. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,23 (с, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,27 (д, J=8,7,2H), 8,15 (д, J=8,7, 2H), 3,83 (д, J=6,9, 2H), 1,99 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 367,2 [М+1]+; т.пл. 253-255°C.
5.1.57 ПРИМЕР 57: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(ПИРИДИН-4-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(пиридин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,250 г, 0,80 ммоль), пиридин-4-бороновую кислоту (0,118 г, 0,96 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном(1:1) (0,065 г, 0,08 ммоль), фосфат калия (0,678 г, 3,2 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали и перекристаллизовывали из метанола с получением (0,057 г, 23% выход). 1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,62 (м, 3H), 8,08 (м, 2H), 3,87 (д, J=7,5, 2H), 2,01 (м, 1H), 1,75 (м, 5H), 1,28 (м, 6H); MS (ESI) m/z 310,4 [М+1]+; т.пл. 267-269°C.
5.1.58 ПРИМЕР 58: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)-N-МЕТИЛБЕНЗАМИДА
A. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-метилбензамид.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (200 мг, 0,64 ммоль), [4-(N-метиламинокарбонил)фенил]бороновую кислоту (139 мг, 0,77 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]палладий(II).дихлорметан (53 мг, 0,06 ммоль) и фосфат калия (550 мг, 2,58 ммоль) в ДМФА (15 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (85 мг, 36% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,18 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,58 (с, 1H), 8,19 (д, J=8,4, 2H), 8,02 (д, J=8,4, 2H), 3,83 (д, J=6,9, 2H), 2,89 (с, 3H), 2,00 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 366,3 [М+1]+; т.пл. 273-275°C.
5.1.59 ПРИМЕР 59: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-(гидроксиметил)фенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (200 мг, 0,64 ммоль), 4-(гидроксиметил)фенилбороновую кислоту (118 мг, 0,77 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (53 мг, 0,06 ммоль) и фосфат калия (550 мг, 2,58 ммоль) в ДМФА (15 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Образовавшееся твердое вещество собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (66 мг, 30% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) 12,01 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 7,97 (д, J=8,4, 2H), 7,42 (д, J=8,4, 2H), 5,22 (т, J=5,6, 1H), 4,53 (д, J=8,4, 2H), 3,73 (J=5,6, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,67 (м, 5H), 1,17 (м, 5H); MS (ESI) m/z 339,1 [М+1]+; т.пл. 275-277°C
5.1.60 ПРИМЕР 60: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(ПИРИДИН-3-ил)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-Она
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(пиридин-3-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,250 г, 0,80 ммоль) и пиридин-3-бороновую кислоту (0,098 г, 0,80 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (0,028 г, 0,004 ммоль), карбонат натрия (4,5 мл, 1M в воде) и ацетонитрил (4,5 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B3. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме с получением (0,069 г, 28% выход). 1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 9,15 (д, J=2,1, 1H), 8,54 (м, 1H), 8,47 (м, 2H), 7,55 (м, 2H), 3,85 (д, J=7,2, 2H), 2,03 (м, 1H), 1,74 (м, 5H) 1,27 (м, 5H); MS (ESI) m/z 310,4 [М+1]+; т.пл. 205°C.
5.1.61 ПРИМЕР 61: СИНТЕЗ 3-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗОНИТРИЛА
A. 3-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (1,0 г, 3,22 ммоль), 3-цианофенилбороновую кислоту (0,57 г, 3,87 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (263 мг, 0,32 ммоль) и фосфат калия (2,73 г, 12,88 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Образовавшееся твердое вещество собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (164 мг, 16% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,23 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,46 (д, J=7,8, 1H), 7,95 (д, J=7,2, 1H), 7,78 (д, J=7,2, 2H), 3,82 (д, J=8,4, 2H), 1,98 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 334,2 [М+1]+; т.пл. 228-230 °C.
5.1.62 ПРИМЕР 62: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1Н-ИНДОЛ-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(1H-индол-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,250 г, 0,80 ммоль), индол-5-бороновую кислоту (0,155 г, 0,96 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,092 г, 0,08 ммоль), бикарбонат натрия (0,268 г, 3,2 ммоль), воду (2 мл) и диметиловый эфир этиленгликоля (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Продукт осаждали из реакционной смеси и фильтровали и сушили с получением (0,048 г, 17% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 11,9 (с, 1H), 11,2 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,79 (дд, J=1,5, 8,4, 2H), 7,50 (д, J=8,4, 1H), 7,40 (м, 1H), 6,52 (с, 1H), 3,76 (д, J=6,9, 1H), 1,93 (м, 1H), 1,69 (м, 5H), 1,18 (м, 5H); MS (ESI) m/z 348,4 [М+1]+; т.пл. 343-346°C.
5.1.63 ПРИМЕР 63: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)-N-ИЗОПРОПИЛБЕНЗАМИДА
A. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензойная кислота.
Раствор метил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоата (см. Пример 56.A) (350 мг, 0,95 ммоль) в 1 н. растворе гидроксида лития (4,5 мл) и тетрагидрофуране (4,5 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 19 часов. После того как реакция завершалась, летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток обрабатывали при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и подвергали ультразвуковой обработке. Образовавшийся осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (300 мг, 90% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS (ESI) m/z 353,3 [M+1]+.
B. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-изопропилбензамид.
4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензойную кислоту (150 мг, 0,42 ммоль), диизопропилэтиламин (47 мкл, 0,55 ммоль) и гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)фосфония (243 мг, 0,55 ммоль) в ДМФА (3 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 19 часов. Неочищенный продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Образовавшееся твердое вещество собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (42 мг, 25% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,18 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,35 (д, J=7,5, 1H), 8,20 (д, J=8,4, 2H), 8,03 (д, J=8,4, 2H), 4,20 (м, 1H), 3,83 (д, J=8,9, 1H), 2,01 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,25 (д, J=9,0, 6H), 1,16 (м, 5H); MS (ESI)m/z 394,2 [М+1]+; т.пл. 264-268°С.
1.64 ПРИМЕР 64: СИНТЕЗ 1-(2-ГИДРОКСИЭТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(2-Гидроксиэтил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,43 ммоль), этаноламин (262 мг, 4,3 ммоль) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с 10% метанолом в воде с получением белого твердого вещества (50 мг, 42% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 9,68 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,8, 2H), 6,86 (д, J=8,8, 2H), 4,88 (т, J=5,9, 1H), 3,93 (т, J=5,8, 4H), 3,76 (кв., J=6,1, 4H); MS (ESI) m/z 273,3 [М+1]+; т.пл. 308-310°C.
5.1.65 ПРИМЕР 65: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1H-ИНДОЛ-6-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(1H-индол-6-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,250 г, 0,80 ммоль), индол-6-бороновую кислоту (0,155 г, 0,96 ммоль), тетракис (трифенилфосфин)палладий(0) (0,092 г, 0,08 ммоль), бикарбонат натрия (0,268 г, 3,2 ммоль), воду (2 мл) и диметиловый эфир этиленгликоля (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Продукт осаждали из реакционной смеси и фильтровали и сушили с получением (0,088 г, 32% выход). 1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 11,94 (с, 1H), 11,27 (с, 1H), 8,46 (с, 1H), 8,06 (с, 1H), 7,68 (дд, J=15,0, 8,4, 2H), 7,42 (м, 1H) 6,46 (с, 1H) 3,76 (д, J=7,2, 1H) 1,93 (м, 1H) 1,69 (м, 5H) 1,18 (м, 5H); MS (ESI) m/z 348,4 [М+1]+; т.пл. 359-363°C.
5.1.66 ПРИМЕР 66: СИНТЕЗ 3-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 3-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (500 мг, 1,6 ммоль), 3-аминокарбонилфенилбороновую кислоту (318 мг, 1,93 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (131 мг, 0,16 ммоль) и фосфат калия (1,35 г, 6,4 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (272 мг, 48% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,06 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 8,16 (д, J=8,4, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,89 (д, J=7,4, 1H), 7,58 (т, J=8,0, 1H), 7,45 (с, 1H), 3,74 (д, J=7,2, 2H), 1,91 (м, 1H), 1,67 (м, 5H), 1,17 (м, 5H); MS (ESI) m/z 352,2 [М+1]+.
5.1.67 ПРИМЕР 67: СИНТЕЗ 6-(4-(АМИНОМЕТИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензилкарбамат.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (200 мг, 0,64 ммоль), [4-(N-boc-аминометил)фенил]бороновую кислоту (195 мг, 0,77 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (53 мг, 0,06 ммоль) и фосфат калия (550 мг, 2,58 ммоль) в ДМФА (15 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Этот продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки или анализа. MS (ESI) m/z 438,1 [M+1]+.
B. 6-(4-(Аминометил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
трет-Бутил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензилкарбамат обрабатывали при помощи TFA (2 мл) в метиленхлориде (2 мл) в течение 4 часов при комнатной температуре. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема и обрабатывали карбонатом калия (1,75 M). Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (42 мг, 19% выход от двух стадий) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 8,33 (с, 1H), 7,91 (д, J=8,0, 2H), 7,40 (д, J=8,4, 2H), 7,75 (с, 2H), 3,68 (д, J=7,2, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,65 (м, 5H), 1,16 (м, 5H); MS (ESI) m/z 339,1 [М+1]+.
5.1.68 ПРИМЕР 68: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1-МЕТИЛПИПЕРИДИН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил пиридин-4-илметилкарбамат.
К 4-(аминометил)пиридину (1,08 г, 10 ммоль) добавляли 2-пропанол (20 мл), добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (2,4 г, 11 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали до получения масла и использовали без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 209,3 [M+1]+.
B. 4-((трет-бутоксикарбониламино)метил)-1-метилпиридиниййодид.
К трет-бутилпиридин-4-илметилкарбамату (2,08 г, 10 ммоль) добавляли ацетонитрил (8 мл) с последующим добавлением йодметана (0,94 мл, 15 ммоль). Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 100°C в течение 10 минут. Реакционную смесь концентрировали до получения остатка пурпурного цвета и использовали без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 223,4 [M+1]+.
C. (1-Метилпиперидин-4-ил)метанамин гидрохлорид.
4-((трет-Бутоксикарбониламино)метил)-1-метилпиридиниййодид (3,5 г, 10 ммоль) растворяли в метаноле (200 мл) и добавляли оксид платины (IV) (200 мг). Реакционную смесь встряхивали в гидрогенизаторе Парра под давлением водорода 40 ф/кв.дюйм (2,812 кг/см2) в течение 20 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до получения масла. Полученное масло обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диоксане с получением амина. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с 20% метанола в этилацетате с получением белого твердого вещества (1,2 г, 75% выход от 3 стадий). MS (ESI) m/z 128,9 [M+1]+.
D. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((1-метилпиперидин-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,43 ммоль), гидрохлорид (1-метилпиперидин-4-ил)метанамина (262 мг, 4,3 ммоль), триэтиламин (1 мл) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с 10% метанолом в воде с получением белого твердого вещества (50 мг, 37% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 9,69 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 7,84 (д, J=8,6, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 3,74 (д, J=7,4, 2H), 2,72 (д, J=11,3, 2H), 2,11 (с, 3H), 1,74-1,85 (м, 3H), 1,58 (д, J=10,9, 2H), 1,22-1,33 (м, 2H); MS (ESI) m/z 340,1 [М+1]+; т.пл. 292-294°C.
5.1.69 ПРИМЕР 69: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗОНИТРИЛА
A. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-5-ил)бензонитрил.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,500 г, 1,61 ммоль), 4-цианофенилбороновую кислоту (0,283 г, 1,93 ммоль), комплекс бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,132 г, 0,161 ммоль), фосфат калия (1,37 г, 6,44 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали и сушили в вакууме с получением продукта (0,144 г, 27% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,60 (с, 1H) 8,23 (д, J=7,2, 2H), 7,95 (д, J=8,0, 2H), 3,72 (д, J=7,2, 2H), 3,85 (д, J=7,2, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,67 (м, 5H) 1,18 (м, 5H); MS (ESI) m/z 334,4 [М+1]+; т.пл. 255-257°C.
5.1.70 ПРИМЕР 70: СИНТЕЗ 1-((1S,4S)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-((1S,4S)-4-Гидроксициклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,43 ммоль), гидрохлорид (1S,4S)-4-аминоциклогексанола (0,65 г, 4,3 ммоль), триэтиламин (1 мл) и этанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с 10% раствором метанола в воде с получением белого твердого вещества (50 мг, 37% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,88 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,88 (д, J=8,6, 2H), 6,83-6,87 (м, 2H), 4,46 (с, 1H), 4,23 (т, J=12,1, 1H), 3,90 (с, 1H), 2,74-2,84 (м, 2H), 1,82 (д, J=14,8, 2H), 1,54-1,61 (м, 2H), 1,49(д, J=18,0, 2H); MS (ESI) m/z 327,1 [М+1]+; т.пл. 328-338°C.
5.1.71 ПРИМЕР 71: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(ПИРИДИН-2-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(пиридин-2-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,200 г, 0,643 ммоль) 2-(триметилстаннил)пиридин (0,101 г, 1,93 ммоль), йодид меди(I) (0,008 г, 0,01 ммоль) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) добавляли к триэтиламину (5 мл). Полученный раствор подвергали взаимодействию в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 30 минут. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали и сушили в вакууме с получением (0,032 г, 16% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,85 (с, 1H), 8,60 (д, J=4, 1H), 8,29 (д, J=8,0, 1H), 7,94(м, 1H), 7,40 (м, 1H), 3,87(д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,74 (м, 5H), 1,28 (м, 5H); MS (ESI) m/z 334,4 [М+1]+; т.пл. 194-196°С.
5.1.72 ПРИМЕР 72: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)-N-ЭТИЛБЕНЗАМИДА
A. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-этилбензамид.
4-[3-(Циклогексилметил)-2-оксо-4-имидазолино[4,5-e]пиразин-5-ил]бензойную кислоту (см. Пример 63.A.) (150 мг, 0,42 ммоль), этиламин (2,0M в MeOH, 276 мкл, 0,55 ммоль) и гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)фосфония (243 мг, 0,55 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 19 часов. Неочищенный продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали приблизительно до одной трети исходного объема, обрабатывали при помощи 1,75 M карбоната калия. Желаемый продукт собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (8 мг, 5% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,18 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,35 (д, J=7,5, 1H), 8,20 (д, J=8,4, 2H), 8,03 (д, J=8,4, 2H), 4,20 (м, 1H), 3,83 (д, 7=8,9, 1H), 2,01 (м, 2H), 1,76 (м, 5H), 1,25 (м, 3H), 1,16 (м, 5H); MS (ESI) m/z 380,1 [М+1]+.
5.1.73 ПРИМЕР 73: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-(2-гидроксипропан-2-ил)фенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Метил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат (см. Пример 56.A) (0,075 г, 0,205 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (5 мл) и охлаждали до -78°C. Добавляли метилмагнийбромид (1,4M в толуоле/тетрагидрофуране, 0,410 мл, 0,410 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 3 часов. Реакция не была завершена, и добавляли дополнительное количество метилмагнийбромида (1,4M в толуоле/тетрагидрофуране, 0,410 мл, 0,410 ммоль). По прошествии еще 2 часов реакцию гасили водой и экстрагировали метиленхлоридом. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 40 мин). Фракции, содержащие желаемое вещество, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в горячем DMSO и добавляли воду, чтобы вызвать осаждение. Твердое вещество фильтровали и промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,055 г, 0,150 ммоль, 73% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,01 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 7,93 (д, J=8,6, 2H), 7,57 (д, J=8,6, 2H), 4,95-5,14 (м, 1H), 3,73 (д, J=7,0, 2H), 1,84-1,96 (м, 1H), 1,54-1,72 (м, 5H), 1,45 (с, 6H), 1,12-1,22 (м, 3H), 0,98-1,09 (м, 2H); MS (ESI) m/z 367,3 [М+1]+; т.пл. 226-228°C.
5.1.74 ПРИМЕР 74: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИ-2-МЕТИЛФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-гидрокси-2-метилфенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,96 ммоль), 4-гидрокси-2-метилфенилбороновую кислоту (0,175 г, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (78 мг, 0,096 ммоль) и фосфат калия (814 мг, 3,84 ммоль) в ДМФА (20 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и нейтрализовали при помощи насыщенного раствора бикарбоната натрия. Продукт экстрагировали этилацетатом и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (152 мг, 47% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,95 (с, 1H), 9,52 (с, 1H), 7,92 (с, 1H), 7,21 (д, J=8,2, 1H), 6,64-6,75 (м, 2H), 3,66 (д, J=7,4, 2H), 2,28 (с, 3H), 1,81-1,94 (м, 1H), 1,54-1,70 (м, 5H), 1,09-1,19 (м, 3H), 0,93-1,05 (м, 2H); MS (ESI) m/z 339,3 [М+1]+; т.пл. 212-214°C.
5.1.75 ПРИМЕР 75: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ
A. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензойная кислота.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,96 ммоль), 4-карбоксифенилбороновую кислоту (0,192 г, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (79 мг, 0,096 ммоль) и фосфат калия (814 мг, 3,84 ммоль) в ДМФА (20 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемое вещество, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в горячем DMSO и добавляли воду, чтобы вызвать осаждение. Твердое вещество фильтровали и промывали водой и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0,047 г, 14% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,58 (с, 1H), 8,14 (д, J= 8,4, 2H), 8,03 (д, J=8,4, 2H), 3,74 (д, J=7,4, 2H), 1,86-1,97 (м, 1H), 1,54-1,72 (м, 6H), 1,13-1,23 (м, 4H), 0,99-1,10 (м, 2H); MS (ESI) m/z 353,3 [М+1]+; т.пл. >350°C.
5.1.76 ПРИМЕР 76: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(2-МЕТОКСИЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-В]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(2-метоксиэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,4 ммоль), 2-метоксиэтиламин (0,27 г, 4 ммоль) и N,N-диметилформамид (4 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (35 мг, 29% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 5 11,95 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,6, 2H), 6,86 (д, J=9,0, 2H), 4,04 (т, J=5,7, 2H), 3,73 (т, J=5,7, 2H), 3,26 (с, 3H); MS (ESI) m/z 287,5 [М+1]+; т.пл. 236-237°C.
5.1.77 ПРИМЕР 77: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(3-МЕТОКСИПРОПИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(3-метоксипропил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (200 мг, 0,4 ммоль), 3-метоксипропиламин (0,44 г, 4 ммоль) и N-метилпирролидинон (4 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (83 мг, 66% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,86 (д, J=9,0, 2H), 6,86 (д, J=9,0, 2H), 3,93 (т, J=7,0, 2H), 3,39 (т, J=6,1, 2H), 3,19 (с, 3H), 1,95-2,02 (м, 2H); MS (ESI) m/z 301,5 [М+1]+; т.пл. 208-210°C.
5.1.78 ПРИМЕР 78: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-4-(3-МЕТОКСИБЕНЗИЛ)-3,4-ДИГИДРОПИРАЗИНO[2,3-B]ПИРАЗИН-2(1H)-ОНа
A. 6-Бром-4-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (1,0 г, 4 ммоль) растворяли в ацетонитриле (6 мл) и добавляли бромуксусный ангидрид (1,0 г, 4 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°C в течение 16 часов. К реакционной смеси добавляли 3-метоксибензиламин (1,6 г, 12 ммоль) и продолжали нагревание при 50°C в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом с последующим фильтрованием с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (0,45 г, 32% выход). MS (ESI) m/z 350,9 [M+1]+.
B. 6-(4-Гидроксифенил)-4-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.
4-Гидроксифенилбороновую кислоту (196 мг, 1,4 ммоль), 6-бром-4-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он (450 мг, 1,3 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (28 мг, 0,04 ммоль), 1M карбоната натрия (4 мл, 4 ммоль) и диоксан (8 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 120°C в течение 10 минут. Реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат доводили до pH 7 при помощи насыщенного раствора хлорида аммония и затем давали выстояться в течение 1 часа. Осажденное твердое вещество фильтровали и затем растирали в порошок в 10% диметилсульфоксиде и метаноле с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (102 мг, 21% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,23 (с, 1H), 9,65 (с, 1H), 7,96 (с, 1H), 7,82 (д, J=8,6, 2H), 7,26 (с, 1H), 7,00 (д, J=1,6, 2H), 6,78-6,87 (м, 3H), 4,79 (с, 2H), 4,06 (с, 2H), 3,71 (с, 3H); MS (ESI) m/z 363,3 [М+1]+; т.пл. 282-283°C.
5.1.79 ПРИМЕР 79: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), 2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этанамин (0,28 г, 2 ммоль) и N-метилпирролидинон (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (45 мг, 62% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,84 (д, J=8,6, 2H), 6,86 (д, J=8,6, 2H), 3,91 (т, J=7,0, 2H), 3,79-3,85 (м, 2H), 3,21 (тд, J=11,7, 2,0, 2H), 1,67-1,75 (м, 4H), 1,44-1,53 (м, 1H), 1,15-1,25 (м, 2H); MS (ESI) m/z 341,0 [М+1]+; т.пл. 276-277°C.
5.1.80 ПРИМЕР 80: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-ФЕНЕТИЛ-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-Она
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-фенетил-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), фенетиламин (0,26 г, 2 ммоль) и N-метилпирролидинон (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (36 мг, 51% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,88 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,33 (с, 1H), 7,83 (д, J=9,0, 2H), 7,19-7,27 (м, 5H), 7,17 (д, J=1,0, 1H), 6,87 (д, J=9,0, 2H), 4,12 (т, J=7,2, 2H), 3,11 (т, J=7,2, 2H); MS (ESI) m/z 333,3 [М+1]+; т.пл. 283-284°C
5.1.81 ПРИМЕР 81: СИНТЕЗ 1-((1R,4R)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), гидрохлорид (1R,4R)-4-аминоциклогексанола (0,32 г, 2 ммоль), триэтиламин (0,5 мл) и N-метилпирролидинон (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (33 мг, 49% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,6, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 4,69 (д, J=4,3, 1H), 4,22 (т, J=12,3, 1H), 3,54 (д, J=4,7, 1H), 2,35-2,47 (м, 2H), 1,96 (д, J=11,3, 2H), 1,76 (д, J=11,7, 2H), 1,28-1,39 (м, 2H); MS (ESI) m/z 327,4 [М+1]+; т.пл. 348-350°C.
5.1.82 ПРИМЕР 82: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (E)-4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-((диметиламино)метилен)бензамид.
4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид (см. Пример 55.C) (0,456 г, 1,30 ммоль) добавляли к диметилформамиддиметилацеталю (50 мл) и нагревали до 85°C в течение 18 часов. Продукт осаждали из реакционной смеси и фильтровали и сушили с получением (0,209 г, 40% выход). MS (ESI) m/z 407,5 [M+1]+.
B. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Гидразин (0,452 мл, 14,4 ммоль) добавляли по каплям к раствору (E)-4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-((диметиламино)метилен)бензамида (0,209 г, 0,514 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме с получением (0,020 г, 10% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,49 (с, 1H) 8,39 (с, 1H), 8,16 (м, 4H), 3,87 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,74 (м, 5H) 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 334,4 [М+1]+; т.пл. 336-338°C.
5.1.83 ПРИМЕР 83: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-ФЕНИЛ-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-фенил-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (150 мг, 0,48 ммоль), фенилбороновую кислоту (71 мг, 0,58 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (40 мг, 0,05 ммоль) и фосфат калия (407 мг, 1,92 ммоль) в ДМФА (10 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл), нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (22 мг, 15% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,03 (с, 1H), 8,49 (с, 1H), 8,02 (д, J=8,8, 2H), 7,49 (т, J=7,6, 2H), 7,40 (д, J=7,2, 1H), 3,73 (д, J=6,8, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,67 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,05 (м, 2H); MS (ESI) m/z 309,1 [М+1]+; т.пл. 253-255°C.
5.1.84 ПРИМЕР 84: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1H-ПИРАЗОЛ-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(1H-пиразол-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,80 ммоль), пиразол-4-бороновую кислоту (108 мг, 0,96 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (66 мг, 0,08 ммоль) и фосфат калия (680 мг, 3,2 ммоль) в ДМФА (10 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (93 мг, 39% выход) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 13,01 (с, 1H), 11,97 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 7,82 (с, 1H), 6,75 (с, 1H), 3,70 (д, J=7,2, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,65 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,06-1,01 (м, 2H); MS (ESI) m/z 299,1 [М+1]+; т.пл. 264-266°C.
5.1.85 ПРИМЕР 85: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1H-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(1H-пиразол-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,80 ммоль), пиразол-4-бороновую кислоту (108 мг, 0,96 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (66 мг, 0,08 ммоль) и фосфат калия (680 мг, 3,2 ммоль) в ДМФА (10 мл) и воде (1 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (17 мг, 7% выход) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДMСO-d6) δ 12,97 (с, 1H), 11,85 (с, 1H), 8,15 (м, 2H), 7,96 (с, 1H), 3,65 (д, J=5,4, 2H), 1,88 (м, 1H), 1,66-1,59 (м, 5H), 1,16 (м, 3H), 1,04-0,99 (м, 2H); MS (ESI) m/z 299,1 [М+1]+; т.пл. 246-248°C.
5.1.86 ПРИМЕР 86: СИНТЕЗ 6-(3-(1H-ТЕТРАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(3-(1H-Тетразол-5-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 3-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрила (см. Пример 61.A) (140 мг, 0,42 ммоль) в безводном толуоле (2 мл) обрабатывали при помощи азидотрибутилолова (350 мкл, 1,26 ммоль) в течение 21 часа при 110°C. Толуол удаляли при пониженном давлении. Добавляли диоксан (3 мл) и 6 н. раствор HCl (2 мл) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, неочищенный продукт растворяли в DMSO и очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл), нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (22 мг, 14% выход) в виде белого порошка. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,68 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,22 (д, J=8,4, 1H), 8,04 (д, 7=8,0, 1H), 7,69 (т, J=8,0, 1H), 3,87 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,75 (м, 4H), 1,66 (м, 1H), 1,25 (м, 3H), 1,14 (м, 2H); MS (ESI) m/z 364,2 [М+1]+; т.пл. 248-250°C.
5.1.87 ПРИМЕР 87: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-ОКСОИНДОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 5-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)индолин-2-он.
Бис(пинаколато)дибор (1,31 г, 4,71 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (385 мг, 0,47 ммоль) и ацетат калия (1,38 г, 14,1 ммоль) последовательно добавляли к раствору 5-бромoкси-индола (1,0 г, 4,71 ммоль) в метиленхлориде (25 мл), с последующим добавлением DMSO (15 мл). Неочищенную смесь разбавляли водой, экстрагировали метиленхлоридом (3×). Объединенные органические фракции промывали водой, насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в порошок с диэтиловым эфиром, подвергали ультразвуковой обработке и осадок собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (165 мг, 14%). MS (ESI) m/z 260,3 [M+1]+.
B. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-оксоиндолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (165 мг, 0,53 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)индолин-2-он (165 мг, 0,63 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (41 мг, 0,05 ммоль) и фосфат калия (450 мг, 2,12 ммоль) в ДМФА (12 мл) и воде (5 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл), нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (25 мг, 13% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,95 (с, 1H), 10,52 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,0, 2H), 6,92 (д, J=8,0, 2H), 3,72 (д, J=7,2, 2H), 3,57 (с, 2H), 1,89 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 364,2 [М+1]+; т.пл.313-316°C.
5.1.88 ПРИМЕР 88: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1Н-ИНДАЗОЛ-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(1H-индазол-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,96 ммоль), индазол-5-бороновую кислоту (0,283 г, 1,16 ммоль) и комплекс[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) с дихлорметаном (1:1) (0,082 г, 0,1 ммоль), фосфат калия (0,818 г, 3,86 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшееся твердое вещество сушили в высоком вакууме с получением продукта (0,020 г, 10% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,44 (с, 1H) 8,40 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,07 (дд, J=8,8, 1,6, 1H), 7,64 (д, J=8,8, 2H), 3,87 (д, J=7,2, 2H), 2,03 (м, 1H), 1,74 (м, 5H) 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 349,4, [М+1]+; т.пл. 311-313°C.
5.1.89 ПРИМЕР 89: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(6-МЕТОКСИПИРИДИН-3-ИЛ)-1Н-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(6-метоксипиридин-3-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,96 ммоль), 2-метоксипиридин-5-бороновую кислоту (0,177 г, 1,16 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,082 г, 0,1 ммоль), фосфат калия (0,818 г, 3,86 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшееся твердое вещество сушили в высоком вакууме с получением продукта (0,133 г, 40% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,44 (с, 1H) 8,74 (д, J=2,4, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,28 (дд, J=8,8, 2,4, 1H), 6,91 (д, J=8,8, 1H), 3,96 (с, 3H), 3,84 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,73 (м, 5H), 1,28 (м, 5H); MS (ESI) m/z 340,4 [М+1]+; т.пл. 235-237°C.
5.1.90 ПРИМЕР 90: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), тетрагидро-2H-пиран-4-амин (0,22 г, 2 ммоль) и N-метилпирролидинон (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния и концентрировали. Полученный остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества. Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (36 мг, 54% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,96 (с, 1H), 9,71 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,85 (д, J=9,0, 2H), 6,88 (д, J=8,6, 2H), 4,49 (тт, J=12,4, 4,4, 1H), 4,01 (дд, J=11,5, 3,3, 2H), 3,47 (т, J=11,1, 2H), 2,60 (тд, J=12,6, 4,5, 1H), 1,73 (дд, J=12,3, 2,9, 2H); MS (ESI) m/z 313,4 [М+1]+; т.пл. 382-383°C.
5.1.91 ПРИМЕР 91: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(ПИПЕРИДИН-4-ИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(пиперидин-4-илметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), трет-бутил 4-(аминометил)пиперидин-1-карбоксилат (0,46 г, 2 ммоль) и N-метил пирролидинон (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния и концентрировали. Остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением масла. Полученное масло обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диоксане. Реакционную смесь концентрировали и затем пропускали через ионообменную колонку Strata XC. Продукт выделяли из колонки при помощи гидроксида аммония в метаноле (5%). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество растирали в порошок с простым эфиром с получением желтого твердого вещества (56 мг, 80% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,31 (с, 1H), 7,83 (д, 7=8,6, 2H), 6,86 (д, J=9,0, 2H), 3,72 (д, J=7,0, 2H), 2,94 (д, J=12,1, 2H), 2,43 (т, J=10,7,2H), 2,00 (м, 1H), 1,55 (д, J=13,3, 2H), 1,11-1,21 (м, 2H); MS (ESI) m/z 326,1 [М+1]+; т.пл. 300°C.
5.1.92 ПРИМЕР 92: СИНТЕЗ 1-(((1R,4R)-4-АМИНОЦИКЛОГЕКСИЛ)МЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(((1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексил)метил)изоиндолин-1,3-дион.
((1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексил)метанол (5,0 г, 16 ммоль), фталимид (2,6 г, 18 ммоль) и трифенилфосфин (4,7 г, 18 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране. Добавляли диизопропилазодикарбоксилат (3,4 мл, 18 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь экстрагировали при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и этилацетатом. Водный слой нейтрализовали при помощи 1М гидроксида натрия и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением белого твердого вещества (3,1 г, 44% выход). MS (ESI) m/z 439,1 [M+1]+.
B. (1R,4R)-4-(Аминометил)-N,N-дибензилциклогексанамин.
Раствор 2-(((1R,4R)-4-(дибензиламино)циклогексил)метил)-изоиндолин-1,3-диона (1,5 г, 3,4 ммоль) и гидразингидрата (2 мл) в этаноле (10 мл) нагревали до 50°C в течение 1 часа. Реакционную смесь растирали в порошок с водой и этилацетатом с получением белого твердого вещества (0,7 г, 69% выход). MS (ESI) m/z 309,3 [M+1]+.
C. 1-(((1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (100 мг, 0,2 ммоль), (1R,4R)-4-(аминометил)-N,N-дибензилциклогексанамин (0,32 г, 2 ммоль) и N-метилпирролидинон (2 мл) нагревали на масляной бане до 150°C в течение 16 часов. Реакционную смесь экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (100 мг, 60% выход). MS (ESI) m/z 520,3 [M+1]+.
D. 1-(((1R,4R)-4-Аминоциклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
l-(((1R,4R)-4-(Дибензиламино)циклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (100 мг, 0,2 ммоль), гидроксид палладия (100 мг) и метанол (5 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 16 часов. Реакционный раствор фильтровали через целит и фильтрат концентрировали, а затем осуществляли очистку при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-40% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции пропускали через ионообменную колонку StrataXC для удаления трифторуксусной кислоты и затем выделяли путем обработки раствором 2М гидроксида аммония в метаноле. Раствор концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (17 мг, 26% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 8,26 (с, 1H), 7,81 (д, J=8,6, 2H), 6,85 (д, J=9,0, 2H), 3,67 (д, J=7,0, 2H), 2,58 (м, 1H), 1,78 (м, 3H), 1,64 (м, 2H), 1,05 (м, 4H); MS (ESI) m/z 340,5 [М+1]+; т.пл. 290°C.
5.1.93 ПРИМЕР 93: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(1-ОКСОИЗОИНДОЛИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 5-Бромизоиндолин-1-он.
Раствор метил 4-бром-2-бромметилбензоата (2,0 г, 6,5 ммоль) обрабатывали раствором аммиака в метаноле (7,0 M, 5 мл) и гидроксидом аммония (1 мл). Полученную реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяли между водой и метиленхлоридом. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт (620 мг) использовали без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 212,0 [M+1]+.
B. 5-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)изоиндолин-1-он.
Бис(пинаколато)дибор (815 мг, 3,21 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (240 мг, 0,29 ммоль) и ацетат калия (860 мг, 8,76 ммоль) последовательно добавляли к раствору 5-бромизоиндолин-1-она (620 мг, 2,92 ммоль) в метиленхлориде (15 мл), с последующим добавлением DMSO (5 мл). Полученную реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 часов. После охлаждения неочищенную смесь разбавляли водой, экстрагировали метиленхлоридом (3×); объединенные органические фракции промывали водой, насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт брали для поглощения в гексан, подвергали ультразвуковой обработке и осадок собирали фильтрованием с получением желаемого продукта (250 мг, 33%). MS (ESI) m/z 260,3 [M+1]+.
C. 1-(Циклогексилметил)-6-(1-оксоизоиндолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,80 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)изоиндолин-1-он (250 мг, 0,96 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (65 мг, 0,08 ммоль) и фосфат калия (680 мг, 3,2 ммоль) в ДМФА (25 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (51 мг, 17% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,12 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,58 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,14 (д, J=8,0, 2H), 7,76 (д, J=8,0,2H), 4,46 (с, 2H), 3,74 (д, J=7,2,2H), 1,91 (м, 1H), 1,68 (м, 4H), 1,60 (м, 1H), 1,17 (м, 3H), 1,05 (м, 2H); MS (ESI) m/z 364,2 [М+1]+; т.пл. 337-339°C.
5.1.94 ПРИМЕР 94: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-МЕТОКСИПИРИДИН-4-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-метоксипиридин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,96 ммоль), 2-метоксипиридин-4-бороновую кислоту (0,177 г, 1,16 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном(1:1) (0,082 г, 0,1 ммоль), фосфат калия (0,818 г, 3,86 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт выделяли с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-10% метанола в дихлорметане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением продукта (0,145 г, 44% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,65 (с, 1H) 8,26 (дд, J=5,6, 1,6, 1H), 7,64 (дд, J=5,6, 1,6, 1H), 7,43 (д, J=0,8, 1H), 3,90 (с, 3H), 3,74 (д, J=7,2, 2H), 1,92 (м, 1H), 2,02 (м, 1H) 1,68 (м, 5H), 1,18 (м, 5H); MS (ESI) m/z 340,4 [М+1]+; т.пл. 295-297°C.
5.1.95 ПРИМЕР 95: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(6-ГИДРОКСИПИРИДИН-3-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(6-гидроксипиридин-1-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-метоксипиридин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 94.A) (0,125 г, 0,369 ммоль) добавляли к водному 48% раствору бромистоводородной кислоты (6 мл) и нагревали до 100°C в течение 1 часа. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшееся твердое вещество сушили в высоком вакууме с получением продукта (0,008 г, 8,0% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,32 (с, 1H), 8,12 (дд, J=9,6, 2,8, 1H), 8,02 (с, 1H), 6,48 (д, J=9,2, 1H), 3,70 (д, J=7,2, 2H), 3,84 (д, J=7,2, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,65 (м, 5H), 1,19 (м, 3H), 1,05(м, 2H); MS (ESI) m/z 326 [М+1]+; т.пл. >400°C.
5.1.96 ПРИМЕР 96: СИНТЕЗ 4-(3-((1R,4R)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. (1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанол.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (5,00 г, 19,9 ммоль), (1R,4R)-4-аминоциклогексанол (4,58 г, 39,8 ммоль), диизопропилэтиламин (3,842 г, 39,8 ммоль) и н-бутанол (120 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 130°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (3,9 г, 68% выход). MS (ESI) m/z 288,2 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанол (3,90 г, 13,6 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (2,76 г, 17,0 ммоль) и тетрагидрофуран (60 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 120°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением продукта (0,884 г, 21% выход). MS (ESI) m/z 314,2 [M+1]+.
C. 4-(3-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,300 г, 0,96 ммоль), 4-карбоксамид-фенилбороновую кислоту (0,190 г, 1,15 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном(1:1) (0,082 г, 0,1 ммоль), фосфат калия (0,812 г, 3,83 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт кристаллизовали из этилацетата с получением продукта (0,302 г, 89% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,34 (с, 1H) 8,08 (д, J=8,4, 2H), 7,96 (д, 7=8,8, 2H), 7,43 (д, J=0,8, 1H), 4,41 (м, 1H), 3,74 (м, 1H), 2,66 (м, 2H), 2,12 (д, J=10,4, 2H) 1,87 (д, J=10,8, 2H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 354,4 [М+1]+; т.пл. 301-303°C.
5.1.97 ПРИМЕР 97: СИНТЕЗ 2-(4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)ФЕНИЛ)УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ
A. Метил 2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)ацетат.
В герметично закрытом сосуде раствор 2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)уксусной кислоты (650 мг, 2,47 ммоль) в метаноле (10 мл) обрабатывали концентрированной хлористоводородной кислотой (несколько капель). Полученную реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре. После того как реакция завершалась, летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт (650 мг, 100% выход) использовали без очистки на следующей стадии. MS (ESI) m/z 277,3 [M+1]+.
B. Метил 2-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)ацетат.
Бром-1-(циклогексилметил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он (200 мг, 0,64 ммоль), метил 2-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]ацетат (213 мг, 0,77 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (53 мг, 0,06 ммоль) и фосфат калия (543 мг, 2,56 ммоль) в ДМФА (20 мл) и воде (5 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (95 мг, 39 выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS (ESI) m/z 381,4 [M+1]+.
C. 2-(4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)уксусная кислота
Раствор метил 2-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)ацетата (40 мг, 0,13 ммоль) в тетрагидрофуране (1 мл) обрабатывали при помощи 1 н. раствора гидроксида лития (1 мл). Через 2 часа реакция завершалась. Тетрагидрофуран удаляли при пониженном давлении и остаток обрабатывали уксусной кислотой до pH~5. Происходило образование белого осадка, и его собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (20 мг, 55% выход).1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,38 (с, 1H), 12,02 (с, 1H) 8,47 (с, 1H), 7,96 (д, J=8,4, 2H), 7,37 (д, J=8,4, 2H), 3,73 (д, J=12, 2H), 3,62 (с, 2H), 2,08 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,15 (м, 2H); MS (ESI) m/z 367,2 [М+1]+.
5.1.98 ПРИМЕР 98: СИНТЕЗ 2-(4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)ФЕНИЛ)АЦЕТАМИДА
A. 2-(4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил) ацетамид.
Раствор метил 2-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)ацетата (см. Пример 97.B) (40 мг, 0,13 ммоль) обрабатывали раствором аммиака в метаноле (7 н., 2 мл) и гидроксидом аммония. Полученный раствор оставляли для перемешивания при комнатной температуре. После того как реакция завершалась, летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (50 мг, 47% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,01 (с, 1H), 8,46 (с, 1H), 7,94 (д, J=8,0, 2H), 7,49 (с, 1H), 7,37 (д, J=8,4 2H), 6,92 (с, 1H), 3,73 (д, J=7,2, 2H), 3,62 (с, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 366,1 [М+1]+; т.пл. 272-274°C.
5.1.99 ПРИМЕР 99: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-ОКСОИНДОЛИН-6-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(Триметилстаннил)индолин-2-он.
Раствор 6-броминдола (0,5 г, 2,35 ммоль) в безводном толуоле (30 мл) обрабатывали при помощи гексаметилдиолова (1,07 г, 3,29 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (271 мг, 0,23 ммоль) в герметично закрытой пробирке при 92°C в течение 1,5 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-30% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (265 мг, 38%). MS (ESI) m/z 298,2 [M+1]+.
B. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-оксоиндолин-6-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (100 мг, 0,32 ммоль), 6-(триметилстаннил)индолин-2-он (114 мг, 0,38 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (44 мг, 0,06 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1 часа при 115°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (29 мг, 24% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,03 (с, 1H), 10,49 (с, 1H), 8,42 (с, 1H), 7,58 (д, J=8,0,1H), 7,44 (с, 1H), 7,39 (д, J=8,0, 1H), 3,72 (д, J=7,2, 2H), 3,52 (с, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 364,0 [М+1]+; т.пл. 334-336°C.
5.1.100 ПРИМЕР 100: СИНТЕЗ 4-(3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)-3-МЕТИЛБЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ
A. 3-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензойная кислота.
Бис(пинаколато)дибор (3,07 г, 12,09 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (114 мг, 0,14 ммоль) и триэтиламин (1,95 мл, 13,95 ммоль) последовательно добавляли к раствору 4-бром-3-метилбензойной кислоты (1,0 г, 4,65 ммоль) в диоксане (15 мл). Полученную реакционную смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин, а затем нагревали при 80°C в герметично закрытой пробирке. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и маслянистый остаток распределяли между водой и этилацетатом. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (2×). Объединенные органические фракции сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт использовали без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 263,2 [M+1]+.
B. 4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-3-метилбензойная кислота.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (300 мг, 0,96 ммоль), 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензойную кислоту (303 мг, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (80 мг, 0,09 ммоль) и фосфат калия (815 мг, 3,84 ммоль) в ДМФА (25 мл) и воде (5 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (43 мг, 12% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,99 (с, 1H), 12,11 (с, 1H), 8,07 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,0, 1H), 7,53 (д, J=8,0, 1H), 3,67 (д, J=7,2, 1H), 1,88 (м, 1H), 1,64 (м,2H), 1,61 (м, 2H), 1,14 (м, 3H), 1,01 (м, 2H); MS (ESI) m/z 367,2 [М+1]+; т.пл. 244-247°C.
5.1.101 ПРИМЕР 101: СИНТЕЗ N-МЕТИЛ-4-(2-ОКСО-3-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 6-Бром-N2-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)пиразин-2,3-диамин.
В герметично закрытой пробирке раствор 5-бромпиразин-2,3-диамина (6,98 г, 2,78 ммоль), (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метанамина (4,0 г, 3,47 ммоль), диизопропилэтиламина (6,06 мл, 3,47 ммоль) в н-бутаноле (100 мл) нагревали при 120°C в течение 17 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в гексан/диэтиловый эфир и подвергали ультразвуковой обработке. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием с получением желаемого продукта (5,10 г, 64% выход). MS (ESI) m/z 289,1 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В герметично закрытой пробирке раствор 6-бром-N2-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)пиразин-2,3-диамина (5,05 г, 0,017 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (3,52 г, 0,021 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) нагревали при 95°C. Добавляли дополнительное количество 1,1'-карбонилдиимидазола (1,7 г, 10 ммоль) и реакционную смесь нагревали еще в течение 12 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в гексан/диэтиловый эфир и подвергали ультразвуковой обработке. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием, промывали гексаном и сушили в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г, 67% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS (ESI) m/z 315,9 [M+1]+.
C. N-Метил-4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (300 мг, 0,95 ммоль), [4-(N-метиламинокарбонил)фенил]бороновую кислоту (205 мг, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (80 мг, 0,09 ммоль) и фосфат калия (805 мг, 3,8 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (8 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл), нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (165 мг, 47% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,11 (с, 1H), 8,58 (с, 1H), 8,50 (д, J=4,8, 1H), 8,12 (д, J=8,4, 1H), 7,93 (д, J=8,4,1H), 3,82 (м, 2H), 3,79 (д, J=7,2, 2H), 3,25 (м, 2H), 2,14 (м, 1H), 1,57 (м, 2H), 1,31 (м, 2H); MS (ESI) m/z 368,1 [М+1]+; т.пл. 328-330°C.
5.1.102 ПРИМЕР 102: СИНТЕЗ 4-(2-ОКСО-3-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 4-(2-оксо-3-((Тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (500 мг, 1,59 ммоль), (4-аминокарбонилфенил)бороновую кислоту (317 мг, 1,92 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (130 мг, 0,16 ммоль) и фосфат калия (1,35 г, 6,36 ммоль) в ДМФА (40 мл) и воде (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (165 мг, 47% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,11 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,4, 2H), 8,03 (с, 1H), 7,97 (д, J=8,4, 2H), 7,42 (с, 1H), 3,82 (м, 2H), 3,79 (д, J=7,2, 2H), 3,25 (м, 2H), 2,14 (м, 1H), 1,57 (м, 2H), 1,32 (м, 2H); MS (ESI) m/z 354,1 [М+1]+; т.пл. 273-275°C.
5.1.103 ПРИМЕР 103: СИНТЕЗ 7-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(3-МЕТОКСИБЕНЗИЛ)-3,4-ДИГИДРОПИРАЗИНO[2,3-B]ПИРАЗИН-2(1H)-ОНа
A. Метил 2-(3,5-дибромпиразин-2-иламино)ацетат.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (2,5 г, 26 ммоль), этил глиоксалат (50% в толуоле, 8 мл, 39 ммоль), дихлорид дибутилолова (0,4 г, 1,3 ммоль) и метанол (20 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли борогидрид натрия (1,5 г, 39 ммоль) небольшими порциями. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (0,8 г, 19% выход) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 246,1 [M+1]+.
B. 7-Бром-1-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.
Метил 2-(3,5-дибромпиразин-2-иламино)ацетат (0,58 г, 1,8 ммоль), 3-метоксибензиламин (227 мкл, 1,8 ммоль), диизопропилэтиламин (1 мл) и диметилсульфоксид (1 мл) нагревали до 100°C в течение 3 дней в атмосфере азота. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили при помощи сульфата магния, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (124 мг, 20% выход) в виде розового твердого вещества. MS (ESI) m/z 349,0 [M+1]+.
C. 7-(4-Гидроксифенил)-1-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.
7-Бром-1-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он (124 мг, 0,35 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (54 мг, 0,39 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (13 мг, 0,017 ммоль), 1M карбоната натрия (1 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-100% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (49 мг, 38% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 9,56 (с, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,71 (д, J=8,6, 2H), 7,45 (с, 1H), 7,21 (т, J=7,8, 1H), 6,96 (с, 1H), 6,92 (д, J=7,8, 1H), 6,78 (д, J=8,6, 2H), 5,23 (с, 2H), 4,25 (с, 2H), 3,69 (с, 3H); MS (ESI) m/z 363,0 [M+1]+.
5.1.104 ПРИМЕР 104: СИНТЕЗ 6-(4-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Метил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (500 мг, 1,59 ммоль), 4-(метоксикарбонил)фенилбороновую кислоту (317 мг, 1,92 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (130 мг, 0,16 ммоль) и фосфат калия (1,35 г, 6,36 ммоль) в ДМФА (40 мл) и воде (10 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (180 мг, 31% выход) в виде бесцветного твердого вещества. MS (ESI) m/z 369,2 [M+1]+.
B. 6-(4-(2-Гидроксипропан-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Метил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат (0,150 г, 0,408 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (15 мл) и охлаждали до -78°C. Добавляли метилмагнийбромид (1,4M в толуол/тетрагидрофуран, 1,16 мл, 1,63 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 часов. Реакцию гасили водой и экстрагировали этилацетатом. Продукт очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 40 мин). Фракции, содержащие желаемое вещество, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в горячем DMSO и добавляли воду, чтобы вызвать осаждение. Образовавшееся твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,067 г, 45% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,02 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 7,94 (д, J=8,4, 2H), 8,03 (с, 1H), 7,56 (д, J=8,4, 2H), 3,82 (м, 2H), 3,78 (д, J=6,8, 2H), 3,25 (м, 2H), 2,14 (м, 1H), 1,57 (м, 2H), 1,45 (с, 6H), 1,32 (м, 2H); MS (ESI) m/z 369,1 [М+1]+; т.пл.212-214°C.
5.1.105 ПРИМЕР 105: СИНТЕЗ 6-(1H-ИНДОЛ-5-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(1H-Индол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо [4,5-b] пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (300 мг, 0,95 ммоль), 5-индолилбороновую кислоту (185 мг, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (80 мг, 0,09 ммоль) и фосфат калия (812 мг, 3,83 ммоль) в ДМФА (20 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (89 мг, 24% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 11,93 (с, 1H), 11,21 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,78 (дд, J=8,4, 1,6, 1H), 7,48 (д, J=8,4, 1H), 7,39 (м, 1H), 6,52 (с, 1H), 3,84 (м, 2H), 3,80 (д, J=7,2, 2H), 3,26 (т, J=10, 2H), 2,15 (м, 1H), 1,58 (м, 2H), 1,33 (м, 2H); MS (ESI) m/z 350,1 [М+1]+; т.пл. 305-308°C.
5.1.106 ПРИМЕР 106: СИНТЕЗ 6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамида (см. Пример 102.A) (300 мг, 0,84 ммоль) в ДМФА (3 мл) обрабатывали при помощи динеопентилацеталя N,N-диметилформамида (2 мл). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 1,5 часов и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Маслянистый остаток брали для поглощения в гидразин (3 мл) и добавляли уксусную кислоту (10 капель). Через 1,5 часа было определено, что реакция завершилась. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (39 мг, 12% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,09 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,22 (д, J=8,8, 1H), 8,08 (м, 4H), 3,85 (м, 2H), 3,80 (д, J=7,2,2H), 3,26 (м, 2H), 2,15 (м, 1H), 1,58 (м, 2H), 1,32 (м, 2H); MS (ESI) m/z 378,1 [М+1]+; т.пл. 342-345°C.
5.1.107 ПРИМЕР 107: СИНТЕЗ 6-(1H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 5-бром-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
5-Бром-1Н-бензо[d]имидазол (0,300 г, 1,52 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (0,397 г, 1,82 ммоль), триэтиламин (0,307 г, 3,04 ммоль) и тетрагидрофуран (10 мл) перемешивали при 25°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт выделяли с использованием хроматографии на силикагеле Biotage (0-80% этилацетата в гексане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением (0,398 г, 88% выход). MS (ESI) m/z 298 [M+1]+.
B. трет-Бутил 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
трет-Бутил 5-бром-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат (0,300 г, 1,01 ммоль), бис(пинаколато)дибор (0,283 г, 1,11 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,074 г, 0,09 ммоль), ацетат калия (0,297 г, 3,03 ммоль), дихлорметан (2 мл) и метилсульфоксид (1 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 100°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт использовали без очистки на следующей стадии (0,363 г). MS (ESI) m/z 345 [M+1]+.
C. 6-(1H-Бензо[d]имидазол-5-ил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,219 г, 0,70 ммоль), трет-бутил 5-(4,4,5-,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат (0,290 г, 0,84 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,057 г, 0,07 ммоль), фосфат калия (0,596 г, 2,81 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия и экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали и сушили в вакууме с получением (0,060 г, 20% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,44 (с, 1H) 8,26 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 7,94(дд, J=8,8, 1,6, 1H), 7,70 (с, 1H), 3,88 (д, J=7,2, 2H), 2,04 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,29 (м, 5H); MS (ESI) m/z 349 [М+1]+; т.пл. 217-220°C.
5.1.108 ПРИМЕР 108: СИНТЕЗ 4-(2-ОКСО-3-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 6-Бром-N2-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (5,05 г, 20,1 ммоль), 2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этанамин (4,00 г, 24,1 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (5,19 г, 40,2 ммоль) и н-бутанол (120 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 130°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт перекристаллизовывали из метанола с получением (5,8 г, 96% выход). MS (ESI) m/z 302,2 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-N2-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)пиразин-2,3-диамин (5,80 г, 19,3 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (3,92 г, 24,1 ммоль) и тетрагидрофуран (40 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 120°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт перекристаллизовывали из метанола с получением (5,3 г, 84% выход). MS (ESI) m/z 328,2 [M+1]+.
C. 4-(2-оксо-3-(2-(Тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,400 г, 1,22 ммоль), 4-карбоксамид-фенилбороновую кислоту (0,241 г, 1,46 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,098 г, 0,12 ммоль), фосфат калия (1,03 г, 4,88 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт кристаллизовали из дихлорметана с получением (0,400 г, 89% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,54 (с, 1H) 8,40 (с, 1H), 8,09 (д, J=8,4, 2H), 7,94 (д, J=8,4, 1H), 4,08 (т, J=6,8, 2H), 3,92 (дд, J=11, 2,3, 2,2H), 3,64 (м, 2H), 1,83 (м, 4H), 1,59 (м, 1H), 1,38 (кв., д, J=12,8, 4,4, 2H); MS (ESI) m/z 368,4 [М+1]+; т.пл. 233-236°C.
5.1.109 ПРИМЕР 109: СИНТЕЗ 6-(3-(2H-1,2,3-ТРИАЗОЛ-4-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (100 мг, 0,32 ммоль), гексаметилдиолово (150 мг, 0,45 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (37 мг, 0,032 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (100 мг, 79%). MS (ESI) m/z 309,2[M+1]+.
B. 6-(3-(2H-1,2,3-Триазол-4-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 1-(циклогексилметил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (100 мг, 0,25 ммоль), 4-(3-бромфенил)-2H-1,2,3-триазола (70 мг, 0,30 ммоль) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(II) (18 мг, 0,02 ммоль) в ДМФА (5 мл) нагревали в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4 мг, 4% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,03 (с, 1H), 10,49 (с, 1H), 8,42 (с, 1H), 7,58 (д, J=8,0, 1H), 7,44 (с, 1H), 7,39 (д, J=8,0, 1H), 3,72 (д,J=7,2, 2H), 3,52 (с, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 316,2 [М+1]+; т.пл. 299-301°C.
5.1.1 10 ПРИМЕР 110: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ИМИДАЗОЛ-1-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(1H-Имидазол-1-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 109.A) (200 мг, 0,506 ммоль), 1-(4-бромфенил)имидазол (94 мг, 0,42 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (104 мг, 0,10 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (16 мг, 10% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,11 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,24 (д, J=8,8, 2H), 7,87 (д, J=8,8,2H), 4,02 (д, J=8,8, 1H), 3,75 (д, J=8,8, 1H), 1,68 (м, 2H), 1,24 (м, 4H), 1,17 (м, 4H); MS (ESI) m/z 375,1 [М+1]+; т.пл. 284-287°C.
5.1.111 ПРИМЕР 111: СИНТЕЗ 6-(4-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((1R,4R)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанол.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (5,00 г, 19,9 ммоль), 4-аминоциклогексан-1-ол (4,58 г, 39,8 ммоль), диизопропилэтиламин (3,84 г, 39,8 ммоль) и н-бутанол (120 мл) нагревали при 130°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, конденсировали с получением (3,9 г, 68% выход). MS (ESI) m/z 288,2 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанол (3,90 г, 13,6 ммоль), и 1,1'-карбонилдиимидазол (2,76 г, 17,0 ммоль) и тетрагидрофуран (60 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 120°C в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, конденсировали с получением (0,884 г, 21% выход). MS (ESI) m/z 314,2 [M+1]+.
C. 4-(3-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо [4,5-b] пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,300 г, 0,96 ммоль), 4-карбоксамид-фенилбороновую кислоту (0,19O г, 1,15 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном(1:1) (0,082 г, 0,10 ммоль), фосфат калия (0,812 г, 3,83 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт кристаллизовали из этилацетата с получением (0,297 г, 88% выход). MS (ESI) m/z 354,4 [M+1]+.
D. (E)-N-((Диметиламино)метилeн)-4-(3-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
4-(3-((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид (0,272 г, 0,77 ммоль) и динеопентилацеталь N,N-диметилформамид (5,0 мл, 17,9 ммоль) нагревали вместе в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 100°C в течение 45 минут. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, продукт фильтровали с получением (0,249 г, 79% выход). MS (ESI) m/z 409,5 [M+1]+.
E. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(E)-N-((Диметиламино)метилен)-4-(3-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид (0,249 г, 0,61 ммоль) добавляли к уксусной кислоте (10 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли по каплям гидразин (0,548 г, 17,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 4 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, конденсировали и преобразовывали в гидрохлоридную соль при помощи этанола (300 мл) и 12M HCl (10 мл) с получением (0,010 г, 4,3% выход). lH ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,95 (с, 1H) 8,52 (с, 1H), 8,23 (д, J=6,4, 2H), 8,13 (д, J=6,4, 1H), 4,45 (м, 1H), 3,75 (м, 1H), 2,65 (кв. д, J=12,8, 2,8, 2H), 2,14 (м, 2H) 1,93 (м, 2H), 1,54 (м, 2H); MS (ESI) m/z 378,4 [М+1]+; т.пл. 303-305°C.
5.1.112 ПРИМЕР 112: СИНТЕЗ 6-(4-(2H-ТЕТРАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(2H-тетразол-5-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,300 г, 0,964 ммоль), 4-тетразолфенилбороновую кислоту (0,220 г, 1,164 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,082 г, 0,1 ммоль), фосфат калия (0,812 г, 3,83 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, нейтрализовали при помощи карбоната калия, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали и сушили в вакууме с получением (0,184 г, 51% выход). lH ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,24 (с, 1H) 8,11 (д, J=8,4, 2H), 8,04 (д, J=8,4, 2H), 3,84 (д, J=7,6, 2H), 1,73 (м, 5H), 1,27 (м, 6H); MS (ESI) m/z 349 [М+1]+; т.пл. >400°C.
5.1.113 ПРИМЕР 113: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-ГИДРОКСИПИРИДИН-4-ИЛ-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-Она
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-гидроксипиридин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-метоксипиридин-4-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 94.A) (0,120 г, 0,354 ммоль) добавляли к раствору бромистоводородной кислоты/уксусной кислоты (10 мл) и нагревали при 100°C в течение 0,5 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, конденсировали и преобразовывали в гидрохлоридную соль при помощи этанола (300 мл) и 12M HCl (10 мл) с получением (0,045 г, 39% выход). lH ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 8,70 (с, 1H) 8,05 (д, J=6,4, 2H), 7,774 (м, 2H), 3,85 (д, J=7,2, 2H), 2,01 (м, 1H), 1,75 (м, 5H), 1,28 (м, 6H); MS (ESI) m/z 326,4 [М+1]+; т.пл. 311-313°C.
5.1.114 ПРИМЕР 114: СИНТЕЗ 6-(4-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (E)-N-((Диметиламино)метилен)-4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
4-(2-Оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид (см. Пример 108.C) (0,40 г, 1,09 ммоль), динеопентилацеталь N,N-диметилформамида (10,0 мл, 35,8 ммоль) нагревали вместе при 100°C в течение 180 минут. Когда исходное вещество было полностью израсходовано, продукт фильтровали с получением (0,539 г, неочищенный продукт). MS (ESI) m/z 423,5 [M+1]+.
B. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(E)-N-((Диметиламино)метилен)-4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид (0,250 г, 0,592 ммоль) добавляли к уксусной кислоте (10 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли по каплям гидразин (0,532 г, 16,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 4 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, конденсировали и преобразовывали в гидрохлоридную соль при помощи этанола (300 мл) и 12M HCl (10 мл) с получением (0,091 г, 39% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD), δ 9,18 (с, 1H) 8,56 (с, 1H), 8,27 (м, 2H), 8,13 (м, 2H), 4,11 (т, J=7,2, 2H), 3,93 (м, 2H), 3,80 (м, 2H), 1,85 (м, 4H), 1,61 (м, 1H), 1,39 (м, 2H); MS (ESI) m/z 378,4 [М+1]+; т.пл. 263-266°C.
5.1.115 ПРИМЕР 115: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(1H-Имидазол-2-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 109.A) (200 мг, 0,506 ммоль), 1-(4-бромфенил)имидазол (94 мг, 0,42 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (104 мг, 0,10 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением желаемого продукта (5 мг, 3% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,1 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,19 (д, J=8,4, 1H), 8,07 (д, J=8,4, 1H), 7,45 (с, 1H), 3,75 (д, J=7,2, 2H), 1,91 (м, 1H), 1,68 (м, 4H), 1,60 (м, 1H), 1,85 (м, 3H), 1,06 (м, 2H); MS (ESI) m/z 375,1 [М+1]+; т.пл. 349-351°C.
5.1.116 ПРИМЕР 116: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-1,2,3-ТРИАЗОЛ-1-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-Азидо-4-бромбензол.
трет-Бутанол(8 мл) добавляли к азиду натрия (1,13 г, 17,43 ммоль) с последующим добавлением воды (1,7 мл), 4-броманилин (1 г, 5,81 ммоль) и трет-бутилнитрита (8,35 мл, 69,7 ммоль). Полученную реакционную смесь доводили до 70°C в течение 2 часов. Добавляли воду (20 мл) и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3×). Объединенные органические фракции сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (730 мг, 63% выход).
B. 1-(4-Бромфенил)-1H-1,2,3-триазол.
В герметично закрытой пробирке раствор 1-азидо-4-бромбензола и винилацетата нагревали при 100°C в течение 14 часов. После удаления летучих веществ при пониженном давлении остаток перекристаллизовывали из метанола с получением указанного в заголовке соединения (430 мг, 52%).
C. 1-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-1,2,3-триазол.
Раствор 1-(4-бромфенил)-1H-1,2,3-триазола (0,43 г, 1,91 ммоль) в безводном толуоле (30 мл) обрабатывали при помощи гексаметилдиолова (0,75 г, 2,29 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (220 мг, 0,19 ммоль) в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 2,5 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-35% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (447 мг, 76%). MS (ESI) m/z 309,2 [M+1]+.
D. 6-(4-(1H-1,2,3-Триазол-1-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 55.B) (235 мг, 0,75 ммоль), 1-(4-(триметилстаннил)фенил)-1H-1,2,3-триазола (300 мг, 0,97 ммоль) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(II) (53 мг, 0,075 ммоль) в ДМФА (10 мл) нагревали в течение 1,5 часов при 110°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали. Остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (17 мг, 6% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСO-d6) δ 12,19 (с, 1H), 8,98 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,34 (д, J=11,2, 2H), 8,13 (д, J=1,2, 2H), 8,10 (с, 1H), 3,84 (д, J=9,6, 2H), 2,0 (м, 1H), 1,78 (м, 5H), 1,27 (м, 3H), 1,15 (м, 2H); MS (ESI) m/z 375,1 [М+1]+; т.пл. 276-278°C.
5.1.117 ПРИМЕР 117: СИНТЕЗ 6-(4-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Метил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат.
6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 108.B) (0,400 г, 1,22 ммоль), 4-метоксикарбонилфенилбороновую кислоту (0,262 г, 1,46 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,098 г, 0,12 ммоль), фосфат калия (1,03 г, 4,88 ммоль), воду (2 мл) и диметилформамид (7 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-80% этилацетата в гексане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением (0,058 г, 12% выход). MS (ESI) m/z 383,4 [M+1]+.
B. 6-(4-(2-Гидроксипропан-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Метил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат (0,058 г, 0,152 ммоль) добавляли к тетрагидрофурану (5 мл) и охлаждали до -78°C. Метилмагнийбромид (3,0 M, 0,073 г, 0,61 ммоль) добавляли по каплям и реакционную смесь перемешивали и давали охладиться до
25°C в течение 18 часов. Раствор гасили метанолом, конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония, конденсировали и перекристаллизовывали из метилсульфоксида и воды с получением (0,027 г, 47% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСO-d6) δ 8,40 (с, 1H) 7,95 (д, J=8,4,2H), 7,59 (д, J=8,4,2H), 4,09 (м, 2H), 3,92 (м, 2H), 3,37 (м, 2H), 1,83 (м, 4H), 1,59 (м, 1H), 1,59 (с, 6H), 1,38 (кв.,д, J=12,4, 4,4, 2H); МS (ESI) m/z 392,4 [М+1]+; т.пл. 263-266°C.
5.1.118 ПРИМЕР 118: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-(5-МЕТИЛ-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Гидрохлорид этил-4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата.
4-(3-(Циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил (см. Пример 69.A) (0,142 г, 0,43 ммоль) добавляли к этанолу (100 мл) и охлаждали до 0°C. Газообразный хлористый водород барботировали через раствор в течение 15 минут. Раствор оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении с получением (0,182 г). MS (ESI) m/z 380,4 [M+1]+.
B. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-(5-метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Гидрохлорид этил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (0,182 г, 0,480 ммоль), уксусный гидразин (0,142 г, 1,92 ммоль) и метанол (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой F. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-80% этилацетата в гексане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением (0,488 г, 37% выход).1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,47 (с, 1H) 8,13 (дд, J=18,4, 8,4, 4H), 3,87 (д, J=7,2, 2H), 2,50 (с, 3H), 2,02 (м, 1H), 1,75 (м, 5H), 1,29 (м, 5H); МС (EСI) m/z 390,5 [М+1]+; т.пл. 315-318°C.
5.1.119 ПРИМЕР 119: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ПИРАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 3-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол.
Раствор 3-(4-бромфенил)-1Н-пиразола (0,50 г, 2,24 ммоль) в безводном толуоле (15 мл) обрабатывали при помощи гексаметилдиолова (0,88 г, 2,68 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (255 мг, 0,22 ммоль) в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 2,5 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-35% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (420 мг, 76%). MS (ESI) m/z 307,2 [M+1]+.
B. 6-(4-(1H-Пиразол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,81 ммоль), 3-(4-(триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол (212 мг, 0,68 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (57 мг, 0,081 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 110°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (28 мг, 11% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,41 (с, 1H), 8,00 (м, 4H), 7,69 (д, J=8,4, 2H), 3,85 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,74 (м, 4H), 1,67 (м, 1H), 1,25 (м, 3H), 1,13 (м, 2H); МS (ESI) m/z 375,1 [М+1]+; т.пл. 292-294°C.
5.1.120 ПРИМЕР 120: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол.
Раствор 4-(4-бромфенил)-1H-пиразол (1,0 г, 4,48 ммоль) в безводном толуоле (20 мл) обрабатывали при помощи гексаметилдиолова (1,8 г, 5,38 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (510 мг, 0,44 ммоль) в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 2,5 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-35% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (940 мг, 76%). MS (ESI) m/z 307,2 [M+1]+.
B. 6-(4-(1H-Пиразол-4-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,81 ммоль), 4-(4-(триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол (212 мг, 0,68 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (57 мг, 0,081 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 110°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (28 мг, 1 1% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,98 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,06 (м, 2H), 7,91 (м, 2H), 7,71 (с, 1H), 6,73 (с, 1H), 3,86 (д, J=7,2, 2H), 2,03 (м, 1H), 1,75 (м, 4H), 1,67 (м, 1H), 1,25 (м, 3H), 1,13 (м, 2H); MS (ESI) m/z 375,1 [М+1]+; т.пл. 305-307°C.
5.1.121 ПРИМЕР 121: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(АМИНОМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил (3-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)-1H-1,2,4-триазол-5-ил)метилкарбамат.
Гидрохлорид этил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 118.A) (0,196 г, 0,517 ммоль) и boc-глицингидразин (0,392 г, 2,07 ммоль) (0,392 г, 2,07 ммоль) и метанол (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой F. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-20% метанола в дихлорметане). Фракции, содержащие продукт, концентрировали с получением (0,099 г, 39% выход). MS (ESI) m/z 505,5 [M+1]+.
B. Гидрохлорид 6-(4-(5-(аминометил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
трет-Бутил (3-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)-1H-1,2,4-триазол-5-ил)метилкарбамат (0,099 г, 0,196 ммоль) и 4,0 M хлористого водорода в диоксане (5 мл) перемешивали при 25°C в течение 90 минут. Раствор конденсировали при пониженном давлении с получением (0,071 г, 90% выход) гидрохлоридной соли. 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,51 (с, 1H) 8,21 (д, J=8,8,4H), 8,10 (д, J=8,8, 2H), 4,31 (с, 2H), 3,86 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,75 (м, 5H), 1,28 (м, 5H); MS (ESI) m/z 405,5 [М+1]+; т.пл. 326-329°C.
5.1.122 ПРИМЕР 122: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-(5-(ТРИФТОРМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-(5-(трифторметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Гидрохлорид этил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 118.A) (0,196 г, 0,517 ммоль), трифторуксусный гидразин (0,265 г, 2,07 ммоль) и метанол (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой F. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие продукт, нейтрализовали при помощи гидроксид аммония, конденсировали и перекристаллизовывали из метилсульфоксида и воды с получением (0,019 г, 8% выход). 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,52 (с, 1H) 8,21 (д, J=8,4, 2H), 8,10 (д, J=8,4, 2H), 3,87 (д, J=7,2, 2H), 2,02 (м, 1H), 1,76 (м, 5H), 1,26 (м, 5H); MS (ESI) m/z 444,7 [М+1]+; т.пл. 303-305°C.
5.1.123 ПРИМЕР 123: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1R,4R)-4-МЕТОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил (1R,4R)-4-гидроксициклогексилкарбамат.
(1R,4R)-4-Аминоциклогексанол (2,9 г, 25 ммоль) перемешивали в 2-пропаноле (30 мл). Добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1 1 г, 50 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и продукт очищали на колонке с силикагелем (0-10% этилацетата в метаноле) с получением белого твердого вещества (4,5 г, 83% выход).
B. (1R,4R)-4-Метоксициклогексанамин гидрохлорид.
трет-Бутил (1R,4R)-4-гидроксициклогексилкарбамат (4,5 г, 21 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (100 мл) с последующим добавлением 15-краун-5 (4,4 мл, 22 ммоль) и 95% раствора гидрида натрия (0,75 г, 31 ммоль). Добавляли йодметан (1,3 мл, 21 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Образовавшееся твердое вещество очищали хроматографией на силикагеле (0-100% этилацетата в гексане) с получением метилированного продукта в виде твердого вещества. Твердое вещество обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористого водорода в диоксане в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в порошок с простым эфиром с получением твердого вещества (2,5 г, 65% выход от двух стадий).
C. 6-Бром-N2-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид (1R,4R)-4-метоксициклогексанамина (165 мг, 1 ммоль), диизопропилэтиламин (0,5 мл) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (210 мг, 70% выход). MS (ESI) m/z 303,3 [M+1]+.
D. 6-Бром-1-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он
6-бром-N2-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)пиразин-2,3-диамин (210 мг, 0,7 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (340 мг, 2 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (130 мг, 57% выход). MS (ESI) m/z 327,0 [M+1]+.
E. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (130 мг, 0,4 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (55 мг, 0,44 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (15 мг, 0,02 ммоль), 1M карбоната натрия (1 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органические слои объединяли, концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (70 мг, 52% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMCO-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,6, 2H), 6,85-6,89 (м, 2H), 4,26 (т, J=12,3, 1H), 3,23-3,32 (м, 5H), 2,35-2,46 (м, 2H), 2,15 (д, J=11,7, 2H), 1,82 (д, J=11,3, 2H), 1,24-1,35 (м, 2H); MS (ESI) m/z 341,0 [М+1]+; т.пл. 288-290°C
5.1.124 ПРИМЕР 124: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРОФУРАН-2-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((тетрагидрофуран-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(6-Бром-5-(N,N-бис-boc-амино)пиразин-2-ил)фенол (см. Пример 46.F) (466 мг, 1 ммоль), (тетрагидрофуран-2-ил)метанамин (1 г, 10 ммоль) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 4 часов. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (98 мг, 32% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMCO-d6) δ 11,95 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,83-7,88 (м, 2H), 6,84-6,90 (м, 2H), 4,29-4,36 (м, 1H), 3,94 (дд J=14,1, 7,4, 1H), 3,77-3,84 (м, 2H), 3,60-3,66 (м, 1H), 1,88-1,99 (м, 2H), 1,79-1,87 (м, 1H), 1,68-1,78 (м, 1H); MS (ESI) m/z 313,1 [М+1]+; т.пл. 256-258°C.
5.1.125 ПРИМЕР 125: СИНТЕЗ 6-(3-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 3-(3-Бромфенил)-1H-1,2,4-триазол.
В герметично закрытой пробирке, раствор 3-бромбензальдегид (1,0 г, 5,0 ммоль) обрабатывали диметилформамиддиметилацеталем (5 мл) при 100°C в течение 6 часов. После того как реакция завершалась, летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт обрабатывали при помощи гидразина (2 мл) и уксусной кислоты (10 капель) при комнатной температуре в течение 1 часа. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт сушили в высоком вакууме и использовали без дополнительной очистки на следующей стадии. MS (ESI) m/z 226,1 [M+1]+.
B. 3-(3-(Триметилстаннил)фенил)-1H-1,2,4-триазол.
Раствор 3-(3-бромфенил)-1H-1,2,4-триазола (0,5 г, 2,25 ммоль) в безводном толуоле (20 мл) обрабатывали при помощи гексаметилдиолова (0,88 г, 2,70 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (255 мг, 0,22 ммоль) в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 2,5 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением желаемого станнана (200 мг, 29%). MS (ESI) m/z 310,3[M+1]+.
C. 6-(3-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (253 мг, 0,81 ммоль), 3-(3-(триметилстаннил)фенил)-1H-1,2,4-триазол (300 мг, 0,97 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (57 мг, 0,081 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 110°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и остаток брали для поглощения в DMSO (2 мл) и нагревали при 100°C до полного растворения. После охлаждения добавляли воду и желаемый продукт осаждали из раствора. Осадок собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали водой и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (11 мг, 11% выход) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMCO-d6) δ 12,09 (с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,04 (м, 3H),7,60 (м, 1H), 3,75 (д, J=6,8, 2H), 1,93 (м, 1H), 1,68 (м, 3H), 1,59 (м, 2H), 1,18 (м, 3H), 1,07(м, 2H); MS (ESI) m/z 376,2 [М+1]+; т.пл. 305-307°C.
5.1.126 ПРИМЕР 126: СИНТЕЗ 1-((1R,4R)-4-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (1R,4R)-4-(трет-Бутоксикарбониламино)-циклогексанкарбоновая кислота
(1R,4R)-4-Аминоциклогексанкарбоновую кислоту (2 г, 14 ммоль) помещали в ТГФ (30 мл). Добавляли водный раствор гидроксида натрия (14 мл, 1M) с последующим добавлением ди-трет-бутилдикарбоната (6,7 г, 31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, водный слой подкисляли до pH 4 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученное вещество растирали в порошок с гексаном с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (1,2 г, 35% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДMCO-d6) δ 6,72 (д, J=8,1, 1H), 3,13 (м, 1H), 2,06 (м, 1H), 1,84 (м, 4H), 1,37 (с, 9H), 1,33 (м, 2H), 1,15 (м, 2H).
B. трет-Бутил (1R,4R)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат
Раствор (1R,4R)-4-(трет-бутоксикарбониламино)-циклогексанкарбоновой кислоты (1,2 г, 4,9 ммоль), изобутилхлорформиат (0,65 мл, 4,9 ммоль) и N-метилморфолина (1,6 мл, 15 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 30 минут. Добавляли борогидрид натрия (0,56 г, 15 ммоль) небольшими порциями и смесь перемешивали еще в течение 30 минут. Реакцию гасили метанолом и обрабатывали водой и этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (1,05 г, 95% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДMSO-d6) δ 6,72 (д, J=8,1, 1H),4,36 (м, 1H), 3,18 (м, 2H), 3,12 (м, 1H), 1,72 (м, 4H), 1,1 (м, 2H), 0,9 (м, 2H).
C. Гидрохлорид ((1R,4R)-4-аминоциклогексил)метанола
трет-Бутил (1R,4R)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат (0,33 г, 1,45 ммоль) помещали в 1,4-диоксан (4 мл) и добавляли раствор 1M хлористоводородной кислоты в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Растворитель удаляли, остаток обрабатывали этилацетатом, фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (0,13 г, 56% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,81 (шир.с, 3,2 (м, 2Н), 2,89 (м, 1Н), 1,92 (м, 2Н), 1,75 (м, 2Н), 1,27 (м, 3Н), 0,93 (м, 2Н).
D. ((1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексил)метанол.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (0,3 г, 1,2 ммоль), гидрохлорид ((1R,4R)-4-аминоциклогексил)метанола (0,22 г, 1,33 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,51 г, 4 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и очищали с использованием хроматографии на силикагеле (30-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,19 г, 47,7% выход). MS (ESI) m/z 301 [M+1]+.
E. ((1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексил)метил-1H-имидазол-1-карбоксилат.
((1R,4R)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино) циклогексил)метанол (0,19 г, 0,63 ммоль) и 1,1'-карбонилдиимидазол (0,13 г, 0,79 ммоль) подвергали взаимодействию в тетрагидрофуране в соответствии с Общей Процедурой Dl и очищали с использованием хроматографии на силикагеле (50-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 75% выход). MS (ESI) m/z 421 [M+1]+.
F. 1-((1R,4R)-4-(Гидроксиметил)циклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
((1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексил)метил 1H-имидазол-1-карбоксилат (0,2 г, 0,47 ммоль), 4-гидроксибензолбороновую кислоту (0,065 г, 0,47 ммоль), 4-гидроксибороновую кислоту (0,065 г, 0,47 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,038 г, 0,047 ммоль) и карбонат натрия (0,25 г, 2,35 ммоль) объединяли в 1,4-диоксан (6 мл) и воде (2 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 20 минут. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и растирали в порошок с этиловым эфиром с получением не совсем белого твердого вещества (22,4 мг, 14% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,8, 2H), 6,87 (д, J=8,8, 2H), 4,48 (т, J=5,0, 1H), 4,21 (т, J=12, 1H), 3,28 (т, J=6,2H), 2,39 (м, 2H), 1,89 (д, J=12,2H), 1,81 (д, J=12, 2H), 1,47 (м, 1H), 1,08 (м, 2H); MS (ESI) m/z 341,3 [М+1]+; т.пл. 324-326°C.
5.1.127 ПРИМЕР 127: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1S,4S)-4-МЕТОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил (1S,4S)-4-гидроксициклогексилкарбамат.
Гидрохлорид (1S,4S)-4-аминоциклогексанола (4 г, 26 ммоль) перемешивали в растворе 1М гидроксида натрия (26 мл, 26 ммоль) и 2-пропанола (30 мл). Добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (7 г, 32 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением белого твердого вещества (4,3 г, 77% выход).
B. Гидрохлорид (1S,4S)-4-метоксициклогексанамина.
трет-Бутил (1S,4S)-4-гидрокси-циклогексилкарбамат (3,8 г, 17,6 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (50 мл) с последующим добавлением 15-краун-5 (0,35 мл, 2 ммоль) и 95% раствора гидрида натрия (850 мг, 17 ммоль). Добавляли йодметан (1,2 мл, 19 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученное масло очищали хроматографией на силикагеле (0-20% этилацетата в гексане) с получением метилированного продукта в виде масла. Твердое вещество обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток растирали в порошок с простым эфиром с получением твердого вещества (2,3 г, 79% выход от 2 стадий).
C. 6-Бром-N2-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид (1S,4S)-4-метоксициклогексанамина (200 мг, 1,2 ммоль), диизопропилэтиламин (0,5 мл) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (110 мг, 36% выход). MS (ESI) m/z 301,0 [M+1]+.
D. 6-Бром-1-((1S,4S)-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-N2-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)пиразин-2,3-диамин (110 мг, 0,36 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (178 мг, 1,1 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (75 мг, 63% выход). MS (ESI) m/z 327,0 [M+1]+.
E. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (75 мг, 0,22 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (35 мг, 0,25 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (8 мг, 0,01 ммоль), 1M карбоната натрия (0,6 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и полученное вещество очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и полученный остаток растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (70 мг, 52% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,88 (с, 1H), 9,70 (с, 1Н), 8,36 (с, 1H), 7,89 (д, J=9,0, 2H), 6,86 (д, J=8,6, 2H), 4,24-4,32 (м, 1H), 3,47 (с, 1H), 3,30 (с, 3H), 2,60-2,72 (м, 2H), 2,03 (д, J=12,9, 2H), 1,47-1,57 (м, 4H); MS (ESI) m/z 341,0 [М+1]+; т.пл. 256-258°C
5.1.128 ПРИМЕР 128: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1R,4R)-4-(МЕТОКСИМЕТИЛ)ЦИКЛОГЕКСИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил (1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексилкарбамат.
Гидрид натрия (0,055 г, 2,29 ммоль, 60% мас. суспензия в минеральном масле) промывали три раза гексаном (10-мл порции) и суспендировали в безводном тетрагидрофуране (8 мл). Смесь охлаждали до 0°C в атмосфере азота. Добавляли трет-бутил (1R,4R)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат (см. Пример 126.B) (0,35 г, 1,53 ммоль) и 15-краун-5 (0,354 г, 1,6 ммоль) и смесь оставляли для перемешивания в течение 30 минут при 0°C. Добавляли по каплям метилйодид (0,227 г, 1,6 ммоль) и перемешивали при 0°C еще в течение 30 минут. Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Избыток гидрида гасили путем медленного добавления воды и смесь экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали. Полученное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (25-70% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,31 г, 83% выход). MS (ESI) m/z 244,1 [M+1]+.
B. Гидрохлорид (1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексанамина.
трет-Бутил (1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексилкарбамат (0,31 г, 1,27 ммоль) обрабатывали при помощи 1 н. раствора HCl в 1,4-диоксане (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,21 г, 92% выход). MS (ESI) m/z 144,3 [M+1]+.
C. 6-Бром-N2-((1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексил)пиразин-2,3-диамин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (0,317 г, 1,25 ммоль), гидрохлорид (1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексанамина (0,21 г, 1,16 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,45 г, 3,5 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A и очищали с использованием хроматографии на силикагеле (30-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г, 41% выход). MS (ESI) m/z 315 [M+1]+.
D. 4-(5-Амино-6-((1R,4R)-4-(метоксиметил)-циклогексиламино)пиразин-2-ил)фенол
6-Бром-N2-((1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексил)пиразин-2,3-диамин (0,15 г, 0,47 ммоль), 4-гидроксибензолбороновую кислоту (0,065 г, 0,47 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,04 г, 0,047 ммоль) и карбонат натрия (0,25 г, 2,38 ммоль) объединяли в 1,4-диоксане (3 мл) и воде (2 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 20 минут. Полученное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (10% гексана в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г, 96% выход). MS (ESI) m/z 329 [M+1]+.
E. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((1R,4R)-4-(метоксиметил)циклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 4-(5-амино-6-((1R,4R)-4-(метоксиметил)цикло-гексиламино)пиразин-2-ил)фенола (0,15 г, 0,45 ммоль) и мочевины (0,055 г, 0,91 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Растворитель удаляли и остаток очищали с использованием хроматографии на силикагеле (30% гексана в этилацетате), а затем обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и промывали водой с получением указанного в заголовке соединения (0,033 г, 20% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H),7,85 (д, J=8,4, 2H), 6,87 (д, J=8,4, 2H), 4,21 (м, 1H), 3,26 (с, 3H), 3,2 (д, J=6, 2Н), 2,37 (м, 2H), 1,84 (м, 4H), 1,65 (м, 1H), 1,13 (м, 2H); MS (ESI) m/z 355,3 [М+1]+; т.пл. 300-303°C.
5.1.129 ПРИМЕР 129: СИНТЕЗ 6-(1-МЕТИЛ-1Н-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(1-Метил-1H-пиразол-4-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,2 г, 0,63 ммоль), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (0,16 г, 0,76 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,05 г, 0,063 ммоль) и фосфат калия (0,53 г, 2,5 ммоль) объединяли в диметилформамиде (5 мл) и воде (1 мл) в герметично закрытой пробирке и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Реакционный раствор концентрировали и очищали хроматографией на силикагеле (этилацетат), а затем обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут) с получением указанного в заголовке соединения (0,018 г, 9% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,89 (с, 1H), 8,22 (с, 2H), 7,96 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,82 (д, 2H), 3,73 (д, J=7,2H), 3,25 (т, J=8, 2H), 2,12 (м, 1H), 1,55 (д, 2H), 1,3 (м, 2H); MS (ESI) m/z 315,3 [М+1]+; т.пл. 224-226°C.
5.1.130 ПРИМЕР 130: СИНТЕЗ 1-(((1R,4R)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)МЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (1R,4R)-4-Гидроксициклогексанкарбоксамид.
(1R,4R)-4-Гидроксициклогексанкарбоновую кислоту (5,4 г, 38 ммоль), хлорид аммония (2,2 г, 41 ммоль), гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (15,6 г, 41 ммоль), триэтиламин (16 мл, 113 ммоль) и ацетонитрил (80 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали и промывали ацетонитрилом. Фильтрат концентрировали и растирали в порошок с этилацетатом с получением белого твердого вещества (3,7 г, 69% выход). MS (ESI) m/z 144,1 [M+1]+.
B. Гидрохлорид (1R,4R)-4-(аминометил)циклогексанола.
(1R,4R)-4-Гидроксициклогексанкарбоксамид (1,4 г, 10 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (15 мл). Добавляли комплекс хлорборан·метилсульфид (2,1 мл, 20 ммоль) и реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 16 часов. Реакцию гасили путем медленного добавления метанола. К реакционной смеси добавляли 4 н. раствор хлористого водорода в диоксане (5 мл) и раствор концентрировали. Остаток растирали в порошок с 10% метанолом в этилацетате с получением после фильтрования белого твердого вещества (1,2 г, 75% выход). MS (ESI) m/z 303,3 [M+1]+.
C. (1R,4R)-4-((3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)циклогексанол
3,5-дибром-пиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид (1R,4R)-4-(аминометил)циклогексанола (200 мг, 1,2 ммоль), диизопропилэтиламин (1 мл) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (138 мг, 46% выход). MS (ESI) m/z 303,3 [M+1]+.
D. 6-Бром-1-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он
(1R,4R)-4-((3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)циклогексанол (138 мг, 0,45 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (223 мг, 1,4 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (125 мг, 83% выход). MS (ESI) m/z 311,3 [M+1]+.
E. 1-(((1R,4R)-4-Гидроксициклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (125 мг, 0,4 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (61 мг, 0,44 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (15 мг, 0,02 ммоль), 1M карбоната натрия (1 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и полученное вещество очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (53 мг, 35% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,91 (с, 1Н), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,82-7,86 (м, 2H), 6,85-6,89 (м, 2H), 4,49 (д, J=4,3, 1H), 3,70 (д, J=7,0, 2H), 1,80 (с, 3H), 1,66 (с, 2H), 1,07 (т, J=10,3, 4H); MS (ESI) m/z 341,5 [М+1]+; т.пл. 332-334°C.
ПРИМЕР 131: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРОФУРАН-3-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Гидрохлорид (тетрагидрофуран-3-ил)метанамин.
Раствор тетрагидрофуран-3-карбоксальдегида (50% мас. в воде, 5 мл, 25 ммоль), хлорид аммония (13 г, 25 ммоль), никель Ренея (суспензия 2 мл) в метаноле подвергали взаимодействию в аппарате Парра для встряхивания под давлением водорода 40 ф/кв.дюйм (2,812 кг/см2) в течение 16 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали до получения масла. К полученному маслу добавляли диоксан (50 мл), 1M раствор гидроксида натрия (50 мл) и ди-трет-бутилдикарбонат (5,5 г, 25 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и водой. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали до получения масла. Полученное масло очищали на колонке с силикагелем (0-20% этилацетата в гексане) с получением прозрачного масла. Полученное масло обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане. Раствор концентрировали и растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (0,33 г, 10% выход). MS (ESI) m/z 101,9 [M+1]+.
B. 6-Бром-N2-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид (тетрагидрофуран-3-ил)метанамина (0,33 г, 2,4 ммоль), диизопропилэтиламин (0,5 мл) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (140 мг, 51% выход). MS (ESI) m/z 303,3 [M+1]+.
C. 6-Бром-1-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-N2-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)пиразин-2,3-диамин (140 мг, 0,5 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (250 мг, 1,5 ммоль) и диоксан (5 мл) нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (90 мг, 60% выход). MS (ESI) m/z 299,0 [M+1]+.
D. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (90 мг, 0,3 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (50 мг, 0,36 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (11 мг, 0,017 ммоль), 1M карбоната натрия (1 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (60 мг, 64% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,96 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 7,85 (д, J=9,0, 2H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 3,86 (д, J=7,4, 2H), 3,80 (тд, J=8,1, 5,7, 1H), 3,65-3,71 (м, 1H), 3,57-3,64 (м, 2H), 2,77-2,86 (м, 1H), 1,92-2,01 (м, 1Н), 1,66-1,74 (м, 1H); MS (ESI) m/z 313,5 [М+1]+; т.пл. 256-258°C.
5.1.132 ПРИМЕР 132: СИНТЕЗ 1-(((1S,4S)4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)МЕТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (1S,4S)-4-Гидроксициклогексанкарбоксамид.
(1S,4S)-4-Гидроксициклогексанкарбоновую кислоту (5,4 г, 38 ммоль), хлорид аммония (2,2 г, 41 ммоль), O-(бензотриазол-1-ил)-N) гексафторфосфат N,N,N',N'-тетраметилурония (15,6 г, 41 ммоль), триэтиламин (16 мл, 113 ммоль) и ацетонитрил (80 мл) перемешивали вместе при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали и промывали ацетонитрилом. Фильтрат концентрировали и затем растирали в порошок с этилацетатом с получением белого твердого вещества (2,1 г, 39% выход). MS (ESI) m/z 144,1 [M+1]+.
B. Гидрохлорид (1S,4S)-4-(аминометил)циклогексанол.
(1S,4S)-4-Гидроксициклогексанкарбоксамид (1,4 г, 10 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (15 мл). Добавляли комплекс хлорборан·метилсульфид (2,1 мл, 20 ммоль) и реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 16 часов. Реакцию гасили путем медленного добавления метанола. К реакционной смеси добавляли 4 н. раствор хлористого водорода в диоксане (5 мл) и раствор концентрировали. Остаток растирали в порошок с 10% метанолом в этилацетате с получением после фильтрования белого твердого вещества (0,2 г, 10% выход). MS (ESI) m/z 130,1 [M+1]+.
C. (1S,4S)-4-((3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)циклогексанол
3,5-Дибромпиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид (1S,4S)-4-(аминометил)циклогексанола (200 мг, 1,2 ммоль), диизопропилэтиламин (1 мл) и н-бутанол (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (135 мг, 45% выход). MS (ESI) m/z 303,3 [M+1]+.
D. 6-Бром-1-(((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
(1S,4S)-4-((3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил) циклогексанол (135 мг, 0,45 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (218 мг, 1,3 ммоль) и диоксан (3 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 200°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-10% метанола в этилацетате) с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (80 мг, 44% выход). MS (ESI) m/z 311,3 [M+1]+.
E. 1-(((1S,4S)-4-Гидроксициклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (80 мг, 0,2 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (33 мг, 0,24 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (7 мг, 0,02 ммоль), 1M карбонат натрия (0,6 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (25 мг, 37% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,35 (с, 1Н), 7,85 (д, J=8,6,2H), 6,87 (д, J=8,6,2H), 4,34 (д, J=3,5, 1H), 3,75 (д, J=7,0,214), 3,71 (с, 1H), 1,95 (с, 1H), 1,56-1,66 (м, 2H), 1,34-1,46 (м, 6H); MS (ESI) m/z 341,8 [М+1]+; т.пл. 314-316°C.
5.1.133 ПРИМЕР 133: СИНТЕЗ 6-(1H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 5-бром-1H-бензо[d]имидазол-2-карбоксилат.
Раствор 5-бром-1H-бензимидазола (1,06 г, 5,38 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (1,3 г, 5,91 ммоль), триэтиламина (0,9 мл, 6,45 ммоль) и диметиламинопиридина (несколько кристаллов) в безводном тетрагидрофуране (15 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-55% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (0,85 г, 54%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 297,3 [M+1]+.
B. трет-Бутил 5-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-2-карбоксилат.
Раствор трет-бутил 5-бром-1H-бензо[d]имидазол-2-карбоксилата (500 мг, 1,68 ммоль), гексаметилдиолова (0,45 мл, 2,02 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (195 мг, 0,17 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (640 мг, 100%). MS (ESI) m/z 383,2 [M+1]+.
C. Гидрохлорид 6-(1H-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
трет-Бутил 5-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-2-карбоксилат (640 мг, 1,7 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (420 мг, 1,3 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (90 мг, 0,13 ммоль) в ДМФА (25 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и подвергали ультразвуковой обработке. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением 6-(1H-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (48 мг, 10% выход) в виде гидрохлоридной соли. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,07 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,06 (дд, J=8,0, 1,6, 1H), 7,80 (д, J=8,8, 1Н), 3,81 (м, 2H), 3,80 (д, J=7,2, 2H), 3,27 (д, J=11,6, 2H), 2,14 (м, 1H), 1,59 (м, 2H), 1,33 (м, 2H); MS (ESI) m/z 351,2 [М+1]+.
5.1.134 ПРИМЕР 134: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(МОРФОЛИНOМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-[2-Оксо-3-(2H-3,4,5,6-тетрагидропиран-4-илметил)-4-имидазолино[4,5-e]пиразин-5-ил]бензолкарбонитрил.
6-Бром-1-(2H-3,4,5,6-тетрагидропиран-4-илметил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он (0,700 г, 2,24 ммоль), 4-цианофенилбороновую кислоту, (0,395 г, 2,69 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) комплекс с дихлорметаном (1:1) (0,183 г, 0,224 ммоль), карбонат калия (1,90 г, 8,96 ммоль), диметилформамид (15 мл) и воду (5 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 100°C в течение 3 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и полученное вещество распределяли между водой и этилацетатом. Органические слои собирали, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток брали для поглощения в метанол и подвергали ультразвуковой обработке в течение 10 минут. Происходило осаждение продукта, и его отфильтровывали с получением указанного в заголовке соединения (0,497 г, 66%). MS (ESI) m/z 336,4 [M+1]+.
B. Этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат.
Раствор 4-[2-оксо-3-(2H-3,4,5,6-тетрагидропиран-4-илметил)-3-гидробензимидазол-5-ил]бензолкарбонитрила (0,497 г, 1,48 ммоль) в этаноле (100 мл) охлаждали до 0°C и барботировали через раствор газообразный хлористый водород в течение 10 минут. Полученному раствору давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученное твердое вещество использовали непосредственно на следующей стадии в виде гидрохлоридной соли (0,637 г, 95%,). MS (ESI) m/z 382 [M+1]+.
C. 6-(4-(5-(Морфолинометил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (0,20 г, 0,525 ммоль), 2-морфолинoацетогидразина (0,334 г, 2,1 ммоль) и триэтиламина (1,46 мл, 10,5 ммоль) и метанола (4 мл) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре F. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток брали для поглощения в метиленхлорид. Очистка с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-80% этилацетата в гексане) давала чистый продукт с чистотой 95,9% (0,11 г, 44%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,50 (с, 1H), 8,13 (м, 4H), 3,96 (м, 4H), 3,75 (м, 7H), 3,43 (м, 2H), 2,58 (с, 4H), 2,50 (м, 1H), 2,30 (м, 1H), 1,67 (м, 2H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 477,5 [М+1]+; т.пл. 281-283°C.
5.1.135 ПРИМЕР 135: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(3-(2-ОКСОПИРРОЛИДИН-1-ИЛ)ПРОПИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(3-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)пропил)пирролидин-2-он.
3,5-Дибром-пиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), 1-(3-аминопропил)пирролидин-2-он (426 мг, 1 ммоль) и н-бутанол (2 мл) перемешивали при 100°C в атмосфере азота в течение 3 дней. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (250 мг, 80% выход) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 315,9 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(3-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)пропил)пирролидин-2-он (250 мг, 0,8 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (387 мг, 2,4 ммоль) и диоксан (5 мл) нагревали до температуры кипения с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане) с получением прозрачного масла. MS (ESI) m/z 342,1 [M+1]+.
C. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (119 мг, 0,35 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (53 мг, 0,39 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (13 мг, 0,017 ммоль), 1M карбоната натрия (1 мл, 0,8 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и полученное вещество очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и остаток растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (69 мг, 24% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,93 (с, 1H), 9,70 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,86 (д, J=8,6, 2H), 6,86 (д, J=8,6, 2H), 3,84 (т, J=7,2, 2H), 3,35-3,39 (м, 2H), 3,25 (т, J=7,0, 2H), 2,16 (т, J=8,0, 2H), 1,94-2,02 (м, 2H), 1,86-1,93 (м, 2H); MS (ESI) m/z 354,4 [М+1]+; т.пл. 305-306°C.
5.1.136 ПРИМЕР 136: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(2-МОРФОЛИНOЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-Она
A. 6-Бром-N2-(2-морфолинoэтил)пиразин-2,3-диамин.
В герметично закрытой пробирке раствор 5-бромпиразин-2,3-диамина (5,0 г, 19,7 ммоль), 2-морфолинoэтанамина (5,14 г, 39,5 ммоль), диизопропилэтиламина (6,9 мл, 39,5 ммоль) в н-бутаноле (100 мл) нагревали при 120°C в течение 17 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в гексан и диэтиловый эфир и подвергали ультразвуковой обработке. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (5,23 г, 88%). MS (ESI) m/z 304,2 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В герметично закрытой пробирке раствор 6-бром-N2-(2-морфолинoэтил)пиразин-2,3-диамина (5,23 г, 17,2 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (4,2 г, 25,89 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) нагревали при 110°C. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток брали для поглощения в гексан и диэтиловый эфир, подвергали ультразвуковой обработке и осадок собирали фильтрованием, промывали гексаном и сушили в вакуумной печи с получением продукта (4,65 г, 82% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS (ESI) m/z 328,2[M+1]+.
C. Гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
6-Бром-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (300 мг, 0,95 ммоль), [4-(N-метиламинокарбонил)фенил]бороновую кислоту (205 мг, 1,15 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (80 мг, 0,09 ммоль) и фосфат калия (805 мг, 3,8 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (8 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и подвергали ультразвуковой обработке. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением 6-(4-гидроксифенил)-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (67 мг, 16%) в виде бесцветной твердой гидрохлоридной соли. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD-d 6) δ 8,38 (с, 1H), 8,84 (д, J=8,4, 2H), 7,44 (с, 1H), 7,39 (д, J=8,4, 2H), 4,45 (т, J=5,6, 2H); 4,07 (д, J=12,4, 2H), 3,82 (д, J=12,4, 2H), 3,69-3,64 (м, 4H); MS (ESI) m/z 342,15 [М+1]+.
5.1.137 ПРИМЕР 137: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(4-(ОКСАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 5-(4-Бромфенил)оксазол.
Раствор 2,4'-дибромацетофенона (2,5 г, 9,0 ммоль) в формамиде (40 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 2,5 часов. После охлаждения реакционную смесь выливали в воду, экстрагировали метиленхлоридом (2×), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (380 мг, 19%). MS (ESI) m/z 226,1 [M+1]+.
B. 5-(4-(Триметилстаннил)фенил)оксазол.
Раствор 5-(4-бромфенил)оксазола (380 мг, 1,70 ммоль), гексаметилдиолова (0,45 мл, 2,02 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (195 мг, 0,17 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% EtOAc в гексане) с получением желаемого продукта (250 мг, 47%). MS (ESI) m/z 305,8[M+1]+.
C. 1-(Циклогексилметил)-6-(4-(оксазол-5-ил)фенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-(4-(Триметилстаннил)фенил)оксазол (250 мг, 0,8 ммоль), 6-бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (208 мг, 0,66 ммоль), дихлорбис-(трифенилфосфин)палладий(II) (42 мг, 0,06 ммоль) в ДМФА (10 мл) подвергали взаимодействию в течение 2 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали при помощи 6 н. водного раствора гидроксида аммония (несколько капель). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и остаток брали для поглощения в воду (2 мл) и твердое вещество фильтровали и промывали водой. Образовавшееся твердое вещество сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (20 мг, 8% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,06 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,55 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,11 (д, J=8,4, 2H), 7,91 (д, J=8,4,2H), 3,74 (д, J=7,2, 2H), 1,92 (м, 1H), 1,68 (м, 3H), 1,60 (м, 2H), 1,18 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 376,2 [М+1]+.
5.1.138 ПРИМЕР 138: СИНТЕЗ 6-(2-МЕТИЛ-1H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 6-бром-2-метил-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
Раствор 6-бром-2-метил-1H-бензо[d]имидазола (1 г, 4,73 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (1,09 г, 5,21 ммоль), триэтиламина (0,72 мл, 5,67 ммоль) и N,N-диметилпиридин-4-амина (несколько кристаллов) в безводном тетрагидрофуране (15 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-55% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (0,22 г, 15%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 313,2 [M+1]+.
B. трет-Бутил 2-метил-6-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
Раствор трет-бутил 6-бром-2-метил-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилата (0,22 г, 0,70 ммоль), гексаметилдиолова (0,19 мл, 0,84 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,081 г, 0,07 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (120 мг, 44%). MS (ESI) m/z 397,3[M+1]+.
C. Гидрохлорид 6-(2-метил-1H-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
трет-Бутил 2-метил-6-(триметилстаннил)-1Н-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат (120 мг, 0,30 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (96 мг, 0,3 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (21 мг, 0,03 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель), подвергали ультразвуковой обработке и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (8 мг, 6,5% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,12 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,31 (с, 1H), 8,15 (д, J=8,4, 1H), 7,82 (д, J=8,4, 1H), 3,85 (м, 2H), 3,81 (д, J=8,0, 2H), 3,26 (т, J=11,2, 2H), 1,90 (м, 1H), 1,61 (м, 2H), 1,35-1,23 (м, 3H), 0,89-0,86 (м, 2H); MS (ESI) m/z 365,1 [М+1]+.
5.1.139 ПРИМЕР 139: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(МЕТОКСИМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(5-(Метоксиметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 134.B) (0,205 г, 0,538 ммоль), 2-метоксиацетогидразида (0,224 г, 2,15 ммоль), триэтиламина (1,5 мл, 10,8 ммоль) и метанола (4 мл) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре F. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток брали для поглощения в метиленхлорид. Очистка с использованием Biotage колоночной хроматографии (0-20% метанола в дихлорметане) давала чистый продукт 98,6% чистоты (0,076 г, 34%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,49 (с, 1H), 8,16 (м, 4H), 4,63 (с, 2H), 3,96 (м, 5H), 3,47 (с, 3H), 3,42 (м, 3H), 2,32 (м, 1H), 1,67 (м, 2H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 422,5 [М+1]+.; т.пл. 273-276°C.
5.1.140 ПРИМЕР 140: СИНТЕЗ 1-((1S,4S)-4-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ЦИКЛОГЕКСИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (1S,4S)-4-(трет-Бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновая кислота.
(1S,4S)-4-Амино-циклогексанкарбоновую кислоту (2 г, 14 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (40 мл) и добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (6,1 г, 28 ммоль) и бикарбонат натрия (4,06 г, 48 ммоль), растворенный в воде (25 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли по каплям насыщенный раствор гидросульфата калия до прекращения выделения газа. Растворитель удаляли и остаток брали для поглощения в этилацетат и промывали водой. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом магния и концентрировали в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (3,4 г, 100% выход). MS (ESI) m/z 244,4 [M+1]+.
B. трет-Бутил (1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат
(1S,4S)-4-(трет-Бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновую кислоту (3,4 г, 14 ммоль) растворяли в безводном тетрагидрофуране (20 мл) и раствор охлаждали до -10°C (баня лед/метанол). Добавляли N-метилморфолин (1,41 г, 14 ммоль) и изобутилхлорформиат (1,91 г, 14 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут. Добавляли борогидрид натрия (1,59 г, 42 ммоль) одной порцией, реакционную смесь нагревали до 0°C и добавляли по каплям метанол (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°C и гасили насыщенным раствором гидросульфата калия (5 мл), экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде масла, которое отверждалось при выстаивании (3,2 г, 100% выход). MS (ESI) m/z 230,6 [M+1]+.
C. Гидрохлорид ((1S,4S)-4-аминоциклогексил)метанола
трет-Бутил (1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат (1,0 г, 4,36 ммоль) помещали в 1,4-диоксан (4 мл) при комнатной температуре и добавляли 4 н. раствор хлористоводородной кислоты в 1,4-диоксане (3,5 мл, 13,1 ммоль) и полученный раствор перемешивали в течение ночи. Растворитель удаляли, остаток обрабатывали простым эфиром, подвергали ультразвуковой обработке и фильтровали. Образовавшееся твердое вещество сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,61 г, 84,7% выход). MS (ESI) m/z 130,1 [M+1]+.
D. ((1S,4S)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексил)метанол
2-Амино-3,5-дибромпиразин (1,53 г, 6 ммоль), гидрохлорид ((1S,4S)-4-аминоциклогексил)метанола (1,0 г, 6 ммоль) и диизопропилэтиламин (2,32 г, 18 ммоль) растворяли в н-бутаноле (3 мл) и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A. Смесь очищали с использованием хроматографии на силикагеле (30-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,42 г, 23% выход). MS (ESI) m/z 301,3 [M]+, 303,3 [M+2]+.
E. 4-(5-Амино-6-((1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексиламино)пиразин-2-ил)фенол
((1S,4S)-4-(3-Амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексил)метанол (0,42 г, 1,39 ммоль), 4-гидроксибензолбороновую кислоту (0,192 г, 1,39 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,113 г, 0,139 ммоль) и карбонат натрия (0,74 г, 6,97 ммоль) подвергали взаимодействию в 1,4-диоксане (4 мл) в соответствии с Общей Процедурой B2 и очищали с использованием хроматографии на силикагеле (50-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,175 г, 40% выход). MS (ESI) m/z 315,5 [M+1]+.
F. 1-((1S,4S)-4-(Гидроксиметил)циклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он
4-(5-Амино-6-((1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексиламино)пиразин-2-ил)фенол (0,175 г, 0,557 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (0,27 г, 1,67 ммоль) и тетрагидрофуран (3 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 120°C в течение 3 часов. Смесь охлаждали, добавляли карбонат калия (1 г, 7,2 ммоль) в метаноле (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали с получением не совсем белого твердого вещества (17,0 мг, 9% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,9 (с, 1H), 9,71 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,8, 2H), 6,86 (д, J=8,8, 2H), 4,58 (т, J=5,6, 1H), 4,23 (м, 1H), 3,64 (т, J=5,6, 2H), 1,86 (м, 2H), 1,79 (м, 2H), 1,55 (м, 4H); MS (ESI) m/z 341,3[М+1]+; т.пл. 208-210°C.
5.1.141 ПРИМЕР 141: СИНТЕЗ 6-(3-МЕТИЛ-1Н-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 4-бром-3-метил-1H-пиразол-1-карбоксилат.
4-Бром-3-метил-1Н-пиразол (0,3 г, 1,86 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат(0,65 г, 2,98 ммоль) и гидроксид натрия (0,082 г, 2,05 ммоль) помещали в 1,4-диоксан (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток обрабатывали этилацетатом и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (0,48 г, 100% выход). MS (ESI) m/z 261,3 [M]+, 263,3 [M+2]+.
B. 3-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол.
трет-Бутил 4-бром-3-метил-1H-пиразол-1-карбоксилат (0,48 г, 1,84 ммоль), бис(пинаколато)дибор (0,535 г, 2,1 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,156 г, 0,19 ммоль) и ацетат калия (0,56 г, 5,7 ммоль) помещали в герметично закрытую пробирку в DMSO (5 мл). Систему продували азотом, герметично закрывали и нагревали до 90°C в течение 18 часов. Растворитель удаляли и желаемый продукт выделяли с использованием хроматографии на силикагеле (50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 50% выход). MS (ESI) m/z 209,1 [M+1]+.
C. трет-Бутил 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-карбоксилат.
3-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (0,2 г, 0,96 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (0,4 г, 1,8 ммоль) и триэтиламин (0,18 г, 1,79 ммоль) помещали в 1,4-диоксан (5 мл) и перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение двух дней. Растворитель удаляли и желаемый продукт выделяли с использованием хроматографии на силикагеле (25% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,175 г, 59% выход). MS (ESI) m/z 309,4 [M+1]+.
D. 6-(3-Метил-1H-пиразол-4-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (0,16 г, 0,51 ммоль), трет-бутил 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-карбоксилат (0,175 г, 0,56 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,04 г, 0,05 ммоль) и фосфат калия (0,43 г, 2,05 ммоль) объединяли в ДМФА (3 мл) и воде (0,2 мл), смесь продували азотом и нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°C в течение ночи. Растворитель удаляли и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (100% этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,036 г, 22% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,77 (с, 1H), 11,87 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 7,92 (с, 1H), 3,82 (д, J=12, 2H), 3,72 (д, J=7,2, 2H), 3,23 (т, J= 10, 2H), 2,54 (с, 3H), 2,13 (м, 1H), 1,54 (д, J=12, 2H), 1,26(м, 2H); MS (ESI) m/z 315,1 [М+1]+; т.пл. 222-224°C.
5.1.142 ПРИМЕР 142: СИНТЕЗ 6-(1H-ПИРАЗОЛ-4-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(1H-Пиразол-4-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,25 г, 0,8 ммоль), пиразол-4-бороновую кислоту (0,1 г, 0,89 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,065 г, 0,08 ммоль) и фосфат калия (0,68 г, 3,2 ммоль) объединяли в ДМФА (3 мл) и воде (0,2 мл), смесь продували азотом и нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°C в течение ночи. Растворитель удаляли и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (100% этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (0,075 г, 31% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 13,06 (с, 1H), 11,88 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 8,02 (с, 1H), 3,82 (д, J=11,6, 2H), 3,74 (д, J=7,2, 2H), 3,25 (т, J=11,2, 2H), 2,12 (м, 1H), 1,54 (д, J=10,8, 2H), 1,30 (м, 2H); MS (ESI) m/z 301,3 [М+1]+; т.пл. 238-240°C.
5.1.143 ПРИМЕР 143: СИНТЕЗ 6-(2-АМИНО-1Н-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-5-бром-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
Раствор 5-бром-1H-бензимидазол-2-амина (1 г, 4,71 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (3,81 г, 17,45 ммоль), триэтиламина (1,44 мл, 10,36 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (несколько кристаллов) в безводном тетрагидрофуране (15 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% EtOAc в гексане) с получением желаемого продукта (1,690 г, 70%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) w/z 514,2 [M+1]+.
B. трет-Бутил 2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-5-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
Раствор трет-бутил 2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-5-бром-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилата (0,30 г, 0,58 ммоль), гексаметилдиолова (0,15 мл, 0,70 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,067 г, 0,06 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% EtOAc в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (120 мг, 34%). MS (ESI) m/z 598,4 [M+1]+.
C. Дигидрохлорид 6-(2-амино-1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
Раствор трет-бутил 2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-5-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилата (120 мг, 0,20 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 101.B) (63 мг, 0,2 ммоль) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(II) (14 мг, 0,02 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель), подвергали ультразвуковой обработке и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (10,2 мг, 12,7% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,54 (д, J=11,2, 2H), 12,09 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,49 (с, 1H), 7,97 (с, 1H), 7,90 (д, J=8,4, 1H), 7,44 (д, J=8,4, 1H), 3,84 (д, J=10,8, 2H), 3,79 (д, J=10,8, 2H), 3,26 (т, J=10,8, 2H), 2,13 (м, 1H), 1,58 (м, 2H), 1,35-1,23 (м, 3H); MS (ESI) m/z 366,1 [М+1]+.
5.1.144 ПРИМЕР 144: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(5-(2-Гидроксипропан-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 134.B) (0,20 г, 0,525 ммоль), 1-гидроксиизопропилгидразина (0,248 г, 2,10 ммоль), триэтиламина (1,46 мл, 10,5 ммоль) и метанола (4 мл) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре F. Раствор конденсировали при пониженном давлении и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония и затем экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,9% (15 мг, 7%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,49 (с, 1H), 8,12 (с, 4H), 3,96 (м, 4H), 3,43 (м, 4H), 2,29 (м, 1H), 1,67 (м, 8H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 436,5 [М+1]+; т.пл. 249-253°C.
5.1.145 ПРИМЕР 145: СИНТЕЗ 6-(4-(5-ИЗОПРОПИЛ-1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(5-Изопропил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 134.B) (0,20 г, 0,525 ммоль), 2-метилпропанoгидразина (0,214 г, 2,1 ммоль), триэтиламина (1,46 мл, 10,5 ммоль) и метанола (4 мл) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре F. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрил + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония и затем экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,9% (27 мг, 12%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,49 (с, 1H), 8,14 (м, 4H), 3,96 (м, 4H), 3,43 (м, 3H), 2,28 (м, 1H), 1,67 (м, 2H), 1,41 (д, J=6,4, 6H); MS (ESI) m/z 420,5 [М+1]+; т.пл. 305-308°C.
5.1.146 ПРИМЕР 146: СИНТЕЗ ГИДРОХЛОРИДА 4-(2-МЕТОКСИ-1-(2-МОРФОЛИНOЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-6-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 4-(3-(2-Морфолинoэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-(2-морфолиноэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 136.B) (500 мг, 1,52 ммоль), (4-аминокарбонилфенил)бороновую кислоту (302 мг, 1,82 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (124 мг, 0,09 ммоль) и фосфат калия (1280 мг, 6,08 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (8 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и полученное вещество использовали на следующей стадии в виде соли TFA. MS (ESI) m/z 369,1 [M+1]+.
B. Гидрохлорид 4-(2-метокси-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-6-ил)бензамида.
В герметично закрытой пробирке TFA соль 4-(3-(2-морфолинoэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамида (200 мг, 0,41 ммоль) обрабатывали при помощи динеопентилацеталя N,N-диметилформамида при 96°C в течение 2 часов. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель), подвергали ультразвуковой обработке и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (19 мг, 11%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,71 (с, 1H), 8,16 (д, J=8,4, 2H), 8,03 (шир.с, 1H), 7,99 (д, J=8,4, 2H), 4,38 (т, J=5,6, 2H), 3,98-3,88 (м, 2H), 3,75-3,60 (м, 6H), 3,39 (с, 3H); MS (ESI) m/z 383,1 [М+1]+.
5.1.147 ПРИМЕР 147: СИНТЕЗ 4-(1-((1S,4S)-4-ГИДРОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)-2-МЕТОКСИ-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-6-ИЛ)БЕНЗАМИДА
A. 4-(3-((1S,4S)-4-Гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид.
6-Бром-1-((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (250 мг, 0,79 ммоль), (4-аминокарбонилфенил)бороновую кислоту (160 мг, 1,2 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (65 мг, 0,08 ммоль) и фосфат калия (676 мг, 3,19 ммоль) в ДМФА (20 мл) и воде (4 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и продукт использовали на следующей стадии в виде соли TFA. MS (ESI) m/z 354,2[M+1]+.
B. 4-(1-((1S,4S)-4-Гидроксициклогексил)-2-метокси-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-6-ил) бензамид.
В герметично закрытой пробирке TFA соль 4-(3-((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамида (172 мг, 0,41 ммоль) обрабатывали при помощи динеопентилацеталя N,N-диметилформамида при 96°C в течение 2 часов. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (21 мг, 15%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,66 (с, 1H), 8,15 (д, J=8,4, 2H), 8,05 (шир.с, 1H), 7,97 (д, J=8,4, 2H), 4,31 (м, 1H), 3,91 (с, 1H), 2,79 (кв., J=12,4, 2H), 1,85-1,81 (м, 1H), 1,62-1,52 (м, 3H), 1,28-1,23 (м, 2H), 0,89-0,86 (м, 1H); MS (ESI) m/z 368,1 [М+1]+.
5.1.148 ПРИМЕР 148: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1S,4S)-4-(МЕТОКСИМЕТИЛ)ЦИКЛОГЕКСИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил (1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексилкарбамат
Гидрид натрия (0,204 г, 8,5 ммоль, 60% мас. суспензия в минеральном масле) промывали три раза гексаном (10-мл порции), суспендировали в безводном тетрагидрофуране (10 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере азота. К полученной суспензии добавляли трет-бутил (1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексилкарбамат (см. Пример 140.B) (1,5 г, 6,55 ммоль) и 15-краун-5 (1,52 г, 6,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Добавляли по каплям метилйодид (0,98 г, 6,9 ммоль) и продолжали перемешивание при 0°C в течение 30 минут. Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Избыток гидрида гасили путем медленного добавления воды и продукт экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли и концентрировали. Полученное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (25-70% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,70 г, 44% выход). MS (ESI) m/z 244,1 [M+1]+.
B. Гидрохлорид (1S,4S)-4-(Метоксиметил)циклогексанамина
трет-Бутил (1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексилкарбамат (0,70 г, 2,63 ммоль) помещали в 1,4-диоксан (2 мл) при комнатной температуре и добавляли 4 н. раствор хлористоводородной кислоты в 1,4-диоксане (2,5 мл, 10,5 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Растворитель удаляли, полученный остаток обрабатывали простым эфиром и метанолом, подвергали ультразвуковой обработке, концентрировали и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,51 г, 98,6% выход). MS (ESI) m/z 130,1 [M+1]+.
C. 6-Бром-N2-((1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексил)пиразин-2,3-диамин.
2-Амино-3,5-дибромпиразин (0,845 г, 3,34 ммоль), гидрохлорид (1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексанамина (0,5 г, 2,78 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,72 г, 5,57 ммоль) растворяли в н-бутаноле (3 мл) и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой A. Смесь очищали с использованием хроматографии на силикагеле (50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,348 г, 40% выход). MS (ESI) m/z 315,5 [M]+, 317,5 [M+2]+.
D. 4-(5-Амино-6-((1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексиламино)пиразин-2-ил)фенол.
(3-6-Бром-N2-((1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексил)пиразин-2,3-диамин (0,348 г, 1,1 ммоль), 4-гидроксибензолбороновую кислоту (0,168 г, 1,2 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,09 г, 0,1 1 ммоль) и фосфат калия (0,93 г, 4,3 ммоль) объединяли в ДМФА (3 мл) и воде (0,2 мл) и нагревали вместе в герметично закрытой пробирке при 150°C в течение 2 часов. Продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле (1:9 гексан в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (0,34 г, 94% выход). MS (ESI) m/z 329,5 [M+1]+.
E. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексил)-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3H)-он.
4-(5-Амино-6-((1S,4S)-4-(метоксиметил)-циклогексиламино)пиразин-2-ил)фенол (0,34 г, 1,0 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (0,67 г, 4 ммоль) и тетрагидрофуран (5 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 80°C в течение 48 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли карбонат калия (0,15 г, 1,1 ммоль) и метанол (3 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Продукт очищали хроматографией на силикагеле (1:2 гексан в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,12 г, 34% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,9 (с, 1H), 9,71 (с, 1H) 8,37 (с, 1H), 7,88 (д, J=8,8, 2H), 6,85 (д, J=8,8, 2H), 4,25 (м, 1H), 3,6 (д, J=7,6, 2H), 3,35 (с, 3H), 2,46 (м, 2H), 1,99 (м, 1H), 1,85 (м, 1H), 1,81 (м, 1H), 1,58 (м,4H); MS (ESI) m/z 355,3 [М+1]+; т.пл. 236-238°C.
5.1.149 ПРИМЕР 149: СИНТЕЗ 6-(3H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-6-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 6-бром-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-3-карбоксилат.
Раствор 6-бром-3H-имидазо[4,5-b]пиридина (0,700 г, 3,53 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (0,847 г, 3,88 ммоль) и триэтиламина (0,984 мл, 7,1 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением продукта в виде твердого вещества (1,03 г, 98%). Полученное вещество использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки или анализа. MS (ESI) m/z 299 [M+1]+.
B. трет-Бутил 6-(триметилстаннил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-3-карбоксилат.
Раствор трет-бутил 6-бром-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-3-карбоксилат (0,167 г, 0,560 ммоль), гексаметилдиолово (0,220 г, 0,672 ммоль) и тетракис (трифенилфосфин)палладий(0) (0,0647 г, 0,07 ммоль) в толуоле (4 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 115°C в течение 90 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Очистка с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-20% метанола в дихлорметане) давала чистый продукт (0,165 г, 64%). MS (ESI) m/z 382,9 [M+1]+.
C. 6-(3H-имидазо[4,5-b]пиридин-6-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 101.B) (0,135 г, 0,432 ммоль), трет-бутил 6-(триметилстаннил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-3-карбоксилата (0,165 г, 0,432 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,028 г, 0,04 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 115°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и очистка с использованием Biotage колоночной хроматографии (0-20% метанола в дихлорметане) давала чистый продукт (0,053 г, 44%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 9,05 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 3,96 (м, 4H), 3,42 (м, 2H), 2,31 (м, 1H), 1,68 (м, 2H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 352,4 [М+1]+; т.пл. 367-370°C.
5.1.150 ПРИМЕР 150: СИНТЕЗ 1-(2-(2,2-ДИМЕТИЛТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-1-(2-(2,2-диметилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (161 мг, 0,6 ммоль), гидрохлорид 2-(2,2-диметил-тетрагидропиран-4-ил)этиламина (100 мг, 0,5 ммоль), диизопропилэтиламин (0,5 мл) и диметилсульфоксид (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer до 150°C в течение 2 часов с получением неочищенного 6-бром-N2-(2-(2,2-диметилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 329,5, 331,5 [M+1]+. К реакционной смеси добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (194 мг, 1,2 ммоль) и затем нагревали снова в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer до 150°C в течение 10 минут. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (90 мг, 42% выход от двух стадий). MS (ESI) m/z 355,4 [M]+, 357,4 [M+2]+.
B. 1-(2-(2,2-Диметилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(4-гидроксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(2-(2,2-диметилтетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (90 мг, 0,25 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (46 мг, 0,33 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (9 мг, 0,012 ммоль), 1 M карбоната натрия (0,75 мл, 0,0,75 ммоль) и диоксан (1,5 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и полученный остаток очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (45 мг, 48% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,90 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 7,84 (д, J=8,6 Гц, 2H), 6,83 (д, J=9,0, 2H), 3,82-3,94 (м, 2H), 3,50-3,56 (м, 1H), 3,39-3,48 (м, 2H), 1,64-1,73 (м, 2H), 1,51-1,63 (м, 3H), 0,99-1,08 (м, 4H), 0,91-0,98 (м, 4H); MS (ESI) m/z 354,4 [М+1]+; т.пл. 232-234°C.
5.1.151 ПРИМЕР 151: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ПИРАЗОЛ-1-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол.
Раствор 1-(4-бромфенил)-1H-пиразола (1,0 г, 4,48 ммоль), гексаметилдиолова (1,08 мл, 4,93 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,508 г, 0,06 ммоль) в толуоле (15 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (1,20 г, 87%). MS (ESI) m/z 309,3[M+1]+.
B. 6-(4-(1H-Пиразол-1-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-пиразол (300 мг, 0,97 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101. B) (304 мг, 0,97 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (68 мг, 0,097 ммоль) в ДМФА (15 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали при помощи 6 н. водного раствора гидроксида аммония (несколько капель). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, остаток брали для поглощения в воду (2 мл) и твердое вещество фильтровали и промывали водой с получением указанного в заголовке соединения (14,5 мг, 4% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,57 (с, 1H), 8,32 (д, J=8,8, 2H), 8,01 (д, J=8,8, 2H), 7,68 (с, 2H), 2,27-2,33 (м, 2H), 1,66-1,63 (м, 2H), 1,51-1,49 (м, 2H), 1,27 (м, 2H), 0,88-0,84 (м, 2H); MS (ESI) m/z 377,3 [М+1]+; т.пл. 294-296°C.
ПРИМЕР 152: СИНТЕЗ 6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-МОРФОЛИНOЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-(3-(2-Морфолинoэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил.
6-Бром-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 136.B) (700 мг, 2,13 ммоль), (4-цианофенил)бороновую кислоту (376 мг, 2,56 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (171 мг, 0,21 ммоль) и фосфат калия (1,80 мг, 6,52 ммоль) в ДМФА (30 мл) и воде (8 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и желаемый продукт (410 мг, 41%) использовали на следующей стадии в виде соли TFA. MS (ESI) m/z 351,4[M+1]+.
B. Этил 4-(3-(2-морфолинoэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат.
Газообразный HCl барботировали в суспензию 4-(3-(2-морфолиноэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрила (410 мг, 0,88 ммоль) в безводном этаноле (30 мл) при 0°C. Колбу закрывали и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения преобразования в продукт (отслеживали при помощи ЖХМС) летучие вещества удаляли при пониженном давлении и образовавшееся твердое вещество сушили в вакуумной печи с получением желаемого продукта (460 мг, 1,16 ммоль). Полученное вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 397,3 [M+1]+.
C. 6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(2-морфолинoэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Этил 4-(3-(2-морфолинoэтил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат (460 мг, 1,16 ммоль) в метаноле (15 мл) обрабатывали муравьиным гидразидом (278 мг, 4,64 ммоль) и триэтиламином (3,23 мл, 2,32 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 3 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали и обрабатывали при помощи 6 н. водного раствора гидроксида аммония (несколько капель). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и остаток брали для поглощения в воде (2 мл), твердое вещество фильтровали и промывали водой с получением указанного в заголовке соединения (71 мг, 15,5%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,09 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,57 (д, J=8,4, 2H), 8,12 (д, J=8,4, 2H), 4,04 (т, J=6,4, 2H), 3,45 (т, J=4,0, 4H), 3,34 (с, 4H), 2,70 (т, J=6,4, 2H); MS (ESI) m/z 393,1 [М+1]+; т.пл. 295-297°C.
5.1.153 ПРИМЕР 153: СИНТЕЗ 6-(4-(l H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(4-Бромфенил)-1H-бензо[d]имидазол.
1,2-Фенилдиамин (2,16 г,20 ммоль) и йод (0,1 г, 0,4 ммоль) помещали в тетрагидрофуран (4 мл) и воду (4 мл) и добавляли 4-бромбензальдегид (3,7 г, 20 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, экстрагировали этилацетатом и концентрировали. Образовавшееся твердое вещество обрабатывали этилацетатом (30 мл) и подвергали ультразвуковой обработке. Полученную суспензию фильтровали с получением желаемого продукта (1 г, 18% выход). MS (ESI) m/z 273,3 [M]+, 275,3 [M+2]+.
B. 2-(4-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1H-бензо[d]имидазол.
2-(4-Бромфенил)-1H-бензо[d]имидазол (0,3 г, 1,1 ммоль), бис(пинаколато)дибор (0,31 г, 1,2 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,09 г, 0,11 ммоль) и ацетат калия (0,32 г, 3,2 ммоль) помещали в герметично закрытую пробирку в DMSO (4 мл). Систему продували азотом, герметично закрывали и нагревали до 90°C в течение 2 часов. Растворитель удаляли и желаемый продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле (50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 57% выход). MS (ESI) m/z 321 A [M+1]+.
C. 6-(4-(1H-Бензо[d]имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
2-(4-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1H-бензо[d]имидазол (0,2 г, 0,6 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,20 г, 0,6 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,052 г, 0,06 ммоль) и фосфат калия (0,54 г, 2,5 ммоль) объединяли в ДМФА (3 мл) и воде (0,5 мл), смесь продували азотом и нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°C в течение ночи. Растворитель удаляли и неочищенное вещество очищали с использованием хроматографии на силикагеле (100% этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,04 г, 16% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,98 (с, 1H), 12,13 (с, 1H), 8,63 (с, 1Н), 8,29 (д, J=8,8, 2H), 8,23 (д, J=8,2H), 7,69 (д, J=1,6, 1H), 7,56 (д, J=8, 1H), 7,22 (м, 2H), 3,83 (м, 4H), 3,27 (т, J=11,6, 2H), 2,16 (м, 1H), 1,59 (д, J=12, 2H), 1,33 (м, 2H); MS (ESI) m/z 427,2 [М+1]+; т.пл. >300°C.
5.1.154 ПРИМЕР 154: СИНТЕЗ ГИДРОХЛОРИДА 6-(4-(1H-ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МУТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-имидазол.
Раствор 2-(4-бромфенил)-1H-имидазола (1,0 г, 4,48 ммоль), гексаметилдиолова (1,08 мл, 4,93 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,508 г, 0,06 ммоль) в толуоле (15 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% EtOAc в гексане) с получением желаемого станнана (635 мг, 46%). MS (ESI) m/z 309,2[M+1]+.
B. Гидрохлорид 6-(4-(1H-имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
2-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-имидазол (400 мг, 1,29 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (406 мг, 1,29 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (90 мг, 0,13 ммоль) в ДМФА (15 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (4,0 мг, 0,75% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,57 (с, 1H), 8,32 (д, J=8,8, 2H), 8,01 (д, J=8,8, 2H), 7,68 (с, 2H), 2,27-2,33 (м, 2H), 1,66-1,63 (м, 2H), 1,51-1,49 (м, 2H), 1,27 (м, 2H), 0,88-0,84 (м, 2H); MS (ESI) m/z 377,3 [М+1]+.
5.1.155 ПРИМЕР 155: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-Гидроксиацетогидразид.
Раствор этил 2-гидроксиацетата (1,00 г, 9,60 ммоль), гидразина (0,324 мг, 10,1 ммоль) и этанола (20 мл) объединяли и нагревали до 85°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (0,702 г, 81%). MS (ESI) m/z 91,1 [M+1]+.
B. 6-(4-(5-(Гидроксиметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор этил 4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (см. Пример 134.B) (0,280 г, 0,367 ммоль), 2-гидроксиацетогидразида (0,265 г, 1,47 ммоль), триэтиламина (2,04 мл, 7,34 ммоль) и метанола (4 мл) подвергали взаимодействию, как описано в Общей Процедуре F. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония, экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,9% (211 мг, 71%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,1 (шир.с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,13 (шир.с, 2H), 3,85 (м, 4H), 3,23 (м, 3H), 2,15 (м, 1H), 1,59 (м, 2H), 1,36 (м, 2H); MS (ESI) m/z 408,5 [М+1]+; т.пл. 258-260°C.
5.1.156 ПРИМЕР 156: СИНТЕЗ ГИДРОХЛОРИД 6-(4-(1H-ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(4-Бромфенил)-4-тозилоксазол.
4-Бромбензальдегид (700 мг, 3,78 ммоль) в этаноле (20 мл) обрабатывали при помощи тозил-метил-изоцианата (722 мг, 3,70 ммоль) и цианида натрия (181 мг, 3,70 ммоль). Полученную суспензию оставляли для перемешивания в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в диэтиловый эфир, подвергали ультразвуковой обработке, фильтровали и промывали диэтиловым эфиром с получением продукта (820 мг, 57%) в виде желтого твердого вещества. MS (ESI) m/z 380,2 [M+1]+.
B. 5-(4-Бромфенил)-1H-имидазол.
2-(4-Бромфенил)-4-тозилоксазол (820 мг, 2,17 ммоль) обрабатывали при помощи 7 н. раствора аммиака в метаноле. Полученную реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в диэтиловый эфир, подвергали ультразвуковой обработке, фильтровали и промывали диэтиловым эфиром с получением продукта (100 мг, 21%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 225,1 [M+1]+.
C. 5-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-имидазол.
Раствор 5-(4-бромфенил)-1H-имидазол (100 мг, 0,44 ммоль), гексаметилдиолова (0,11 мл, 0,49 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,050 г, 0,006 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-40% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (50 мг, 36%). MS (ESI) m/z 309,3 [M+1]+.
D. 6-(4-(1H-имидазол-5-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он гидрохлорид.
5-(4-(Триметилстаннил)фенил)-1H-имидазол (50 мг, 0,16 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (51 мг, 0,16 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (11 мг, 0,016 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 115°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (24,2 мг, 37% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD-d6) δ 8,46 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,8, 2H), 7,84 (д, J=8,8, 2H), 7,59 (с, 2H), 3,97-3,91 (м, 2H), 1,67-1,63 (м, 2H), 1,50-1,42 (м, 2H), 1,27 (м, 2H), 0,97-0,84 (м, 2H); MS (ESI) m/z 378,1 [М+1]+.
5.1.157 ПРИМЕР 157: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((5-ОКСОПИРРОЛИДИН-2-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-1-((5-оксопирролидин-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (253 мг, 1 ммоль), гидрохлорид 5-(аминометил)пирролидин-2-она (150 мг, 1 ммоль), диизопропилэтиламин (0,5 мл) и диметилсульфоксид (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 2 часов с получением неочищенного 5-((3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)пирролидин-2-она MS (ESI) m/z 286,0 [M]+, 288,0 [M+2]+. К реакционной смеси добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (243 мг, 1,5 ммоль) и раствор нагревали снова в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 312,0 [M]+, 314,0 [M+2]+.
B. 6-(4-Гидроксифенил)-1-((5-оксопирролидин-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((5-оксопирролидин-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (312 мг, 1 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (152 мг, 1,1 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (37 мг, 0,05 ммоль), 1 M карбоната натрия (3 мл, 3 ммоль) и диоксан (6 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 20 минут. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (42 мг, 13% выход от 2 стадий).1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,69 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,86 (д, J=8,6, 2H), 7,82 (с, 1H), 6,85 (д, J=8,6, 2H), 4,11 (м, 1H), 3,92 (дд, J=13,7, 6, 1H), 3,82 (дд, J=13,7, 6,2, 1H), 2,24 (м, 1H), 2,11 (м, 2H), 1,85 (дд, J=13,7, 6,2, 1H); MS (ESI) m/z 326,1 [М+1]+; т.пл. 338-340°C.
5.1.158 ПРИМЕР 158: СИНТЕЗ 6-(4-(4,5-ДИМЕТИЛ-1H-ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(4-Бромфенил)-4,5-диметил-1H-имидазол
4-Бромбензальдегид (1,39 г, 7,5 ммоль), 2,3-бутандион (0,43 г, 5 ммоль) и ацетат аммония (3,85 г, 50 ммоль) объединяли в ледяной уксусной кислоте (10 мл) и нагревали до 60°C в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток обрабатывали насыщенным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали в этилацетат. Органический слой затем промывали водой, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Образовавшееся твердое вещество очищали хроматографией на силикагеле (100% этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,8 г, 64% выход). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,63 (д, J=8,4, 2H), 7,49 (д, J=8,8, 2H), 2,2 (с, 6H); MS (ESI) m/z 251,1 [М]+, 253,1 [М+2]+.
B. 4,5-Диметил-2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1H-имидазол
Раствор 2-(4-бромфенил)-4,5-диметил-1H-имидазола (0,4 г, 1,59 ммоль), бис(пинаколато)дибора (0,44 г, 1,75 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,13 г, 0,159 ммоль) и ацетата калия (0,47 г, 4,77 ммоль) в DMSO (5 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 90°C в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через целит и промывали метанолом и этилацетатом. Фильтрат и промывочную жидкость объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество обрабатывали водой и экстрагировали в этилацетат. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением твердого осадка. Продукт выделяли фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (0,16 г, 34% выход). MS (ESI) m/z 299,5 [M+1]+.
C. 6-(4-(4,5-Диметил-1H-имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он
4,5-Диметил-2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1H-имидазол (0,16 г, 0,53 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,168 г, 0,53 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,044 г, 0,053 ммоль) и фосфат калия (0,45 г, 2,14 ммоль) подвергали взаимодействию в ДМФА (2 мл) в соответствии с Общей Процедурой B2 за исключением того, что реакционную смесь нагревали в течение 2 часов. Очистка хроматографией на силикагеле (10% метанола в этилацетате) давала указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (40,0 мг, 19% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,1 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,06 (д, J=8,6, 2H), 7,93 (д, J=8,20, 2H), 4,0-3,69 (м, 4H), 3,26 (т, J=11,1, 2H), 2,2 (с, 3H), 2,15 (м, 1H), 2,05 (с, 3H), 1,7 (м, 2H), 1,13 (м, 2H); MS (ESI) m/z 405,4 [М+1]+; т.пл. 250-254°C.
5.1.159 ПРИМЕР 159: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(((1S,4S)-4-МЕТОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)МЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил ((1S,4S)-гидроксициклогексил)метилкарбамат.
К (1S,4S)-4-гидроксициклогексанкарбоксамиду (см. Пример 132.A) (3,5 г) добавляли тетрагидрофуран (60 мл) и монохлорборан·диметилсульфид (5,1 мл, 48 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 16 часов. Реакцию гасили путем медленного добавления метанола и затем концентрировали до получения густого масла. К полученному маслу добавляли триэтиламин (10 мл, 72 ммоль), 2-пропанол (40 мл) и ди-трет-бутилдикарбонат (10,5 г, 48 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и затем очищали на колонке с силикагелем (0-80% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (1,2 г, 15% выход для 2 стадий). MS (ESI) m/z 230,4 [M+1]+.
B. Гидрохлорид ((1S,4S)-4-Метоксициклогексил)метанамина.
Гидрид натрия (326 мг, 14 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил ((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)метилкарбамата (1,2 г, 4,5 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл), с последующим добавлением йодметана (283 мкл, 4,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли дополнительное количество гидрида натрия и продолжали перемешивание смеси. Реакцию гасили путем медленного добавления воды и затем экстрагировали этилацетатом (3×). Органические слои объединяли и сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением бесцветного масла. Полученное масло очищали на колонке с силикагелем (0-50% этилацетата в гексане) с получением бесцветного масла. Полученное масло обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали и затем растирали в порошок с 10% метанола в диэтиловом эфире с получением белого твердого вещества (0,38 г, 47% выход). MS (ESI) m/z 144,4 [M+1]+.
C. 6-Бром-1-(((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (537 мг, 2,1 ммоль), гидрохлорид ((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метанамина (380 мг, 2,1 ммоль), диизопропилэтиламин (1 мл) и диметилсульфоксид (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 2 часов с получением неочищенного 6-бром-N2-(((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 315,0, 317,0 [M+1]+. Добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (680 мг, 4,2 ммоль) и реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь концентрировали и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (450 мг, 63% выход от двух стадий). MS (ESI) m/z 341,0, 343,0 [M+1]+.
D. Гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-Триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты.
Раствор 4-цианофенилбороновой кислоты (5,5 г, 37 ммоль) в этаноле (200 мл) охлаждали на ледяной бане. Осуществляли барботирование реакционной смеси газообразным хлористым водородом в течение 15 минут и полученный раствор оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 3 дней. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением гидрохлоридной соли имидата в виде белого твердого вещества. Имидат объединяли с 2-пропанолом (15 мл), триэтиламином (16 мл, 112 ммоль) и муравьиным гидразиом (6,7 г, 112 ммоль). Смесь нагревали до 100°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученное вещество очищали на колонке с силикагелем (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане) с получением густого масла. Полученное масло обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением продукта в виде гидрохлоридной соли. Соль растирали в порошок с 10% метанолом в диэтиловом эфире, фильтровали и сушили с получением белого твердого вещества (7,2 г, 86% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,24 (шир.с, 2H), 8,69 (с, 1H), 8,23 (с, 2H), 8,02 (д, J=8,0, 2H), 7,91 (д, J=8,6, 2H); MS (ESI) m/z 190,1 [М+1]+.
E. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-5-ил)фенил)-1-(((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (450 мг, 1,3 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (356 мг, 1,6 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (48 мг, 0,06 ммоль), 1 M карбоната натрия (4 мл, 4 ммоль) и диоксан (8 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции пропускали через ионообменную колонку Strata-XC и затем выделяли из колонки при помощи 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали и затем растирали в порошок с диэтиловым эфиром с получением белого твердого вещества (31 мг, 6% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,10 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,13 (м, 4H), 3,76 (д, J=7,0, 2H), 3,20 (с, 3H), 1,99 (шир., с, 1H), 1,81 (д, J=4,3, 1H), 1,37 (м, 6H); MS (ESI) m/z 406,5 [М+1]+; т.пл. 294-296°C.
5.1.160 ПРИМЕР 160: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-5-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(((1R,4R)-4-МЕТОКСИЦИКЛОГЕКСИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил ((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)метилкарбамат.
(1R,4R)-4-Гидроксициклогексанкарбоксамид (см. Пример 130.A) (5 г) растворяли в тетрагидрофуране (60 мл), добавляли монохлорборан·диметилсульфид (7,3 мл, 70 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 16 часов. Реакцию гасили путем медленного добавления метанола и концентрировали до получения густого масла. Полученное масло объединяли с триэтиламином (16 мл, 105 ммоль), 2-пропанолом (50 мл) и ди-трет-бутилдикарбонатом (15 г, 70 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и полученное вещество очищали на колонке с силикагелем (0-80% этилацетата в гексане) с получением белого твердого вещества (3 г, 52% выход для 2 стадий). MS (ESI) m/z 230,3 [M+1]+.
B. Гидрохлорид ((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метанамина.
К раствору трет-бутил ((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)метилкарбамата (3 г, 11 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) добавляли последовательно гидрид натрия (815 мг, 34 ммоль) и йодметан (707 мкл, 11 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли дополнительное количество гидрида натрия для завершения реакции. После завершения (отслеживали при помощи ТСХ) реакцию гасили путем медленного добавления воды и затем экстрагировали этилацетатом (3×). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением бесцветного масла. Полученное масло очищали на колонке с силикагелем (0-50% этилацетата в гексане) с получением бесцветного масла. Полученное масло обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с 10% метанолом в диэтиловом эфире с получением белого твердого вещества (1 г, 20% выход). MS (ESI) m/z 144,4 [M+1]+.
C. 6-Бром-1-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (537 мг, 2,1 ммоль), гидрохлорид ((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метанамина (380 мг, 2,1 ммоль), диизопропилэтиламин (1 мл) и диметилсульфоксид (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 2 часов с получением неочищенного 6-бром-N2-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)пиразин-2,3-диамина. MS (ESI) m/z 315,0 [M]+, 317,0 [M+2]+. К реакционной смеси добавляли 1,l'-карбонилдиимидазол (680 мг, 4,2 ммоль) и раствор нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 10 минут. Реакционную смесь конденсировали и продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (400 мг, 56% выход от двух стадий). MS (ESI) m/z 341,0 [M]+, 343,0 [M+2]+.
D. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-5-ил)фенил)-1-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (400 мг, 1,2 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (395 мг, 1,7 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (48 мг, 0,06 ммоль), 1 M карбоната натрия (4 мл, 4 ммоль) и диоксан (8 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали и полученное вещество очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции пропускали через ионообменную колонку Strata-XC и затем выделяли из колонки при помощи 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (36 мг, 8% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,09 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,13 (шир., с, 4H), 3,76 (д, J=6,6, 2H), 3,21 (с, 3H), 3,09 (шир., с, 1H), 1,99 (д, J=8,6, 2H), 1,87 (шир., с, 1Н), 1,73 (д, J=11,7, 2H), 1,08 (м, 4H), MS (ESI) m/z 406,4 [М+1]+, т.пл. 286-288°C.
5.1.161 ПРИМЕР 161: СИНТЕЗ 6-(6-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ПИРИДИН-3-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (E)-5-бром-N-((диметиламино)метилен)пиколинамид.
Раствор 5-бромпиколинамида (0,500 г, 2,49 ммоль) и диметилформамиддиметилацеталя (20 мл) нагревали до 85°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии (0,604 г, 95%). MS (ESI) m/z 257,1 [M+1]+.
B. 5-Бром-2-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин.
Раствор (E)-5-бром-N-((диметиламино)метилен)пиколинамида (0,604 мг, 2,36 ммоль) и гидразина (2,12 г, 66,1 ммоль) перемешивали при 25°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и разбавляли водой. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,442 г, 83%). MS (ESI) m/z 226,1 [M+1]+.
C. 5-Бром-2-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин.
Раствор 5-бром-2-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридина (0,342 мг, 1,52 ммоль), 3,4-дигидро-2H-пиран (0,256 г, 3,04 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновую кислоту (0,058 г, 0,30 ммоль) в тетрагидрофуране нагревали до 75°C в течение 6 часов. Реакционную смесь концентрировали и очищали с использованием Biotage колоночной хроматографии (0-20% метанола в дихлорметане) с получением полуочищенного продукта в виде масла (0,614 г, >100%). MS (ESI) m/z 310,2 [M+1]+.
D. 2-(1-(Тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)-5-(триметилстаннил)пиридин.
Раствор 5-бром-2-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридина (0,200 г, 0,647 ммоль), гексаметилдиолова (0,254 г, 0,776 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,069 г, 0,06 ммоль) в толуоле (3 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 115°C в течение 90 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Очистка с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-20% метанола в дихлорметане) давала чистый продукт (0,153 г, 60%). MS (ESI) m/z 382,9 [M+1]+.
E. 6-(6-(1-(Тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 101. B) (0,122 г, 0,389 ммоль), 2-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)-5-(триметилстаннил)пиридина (0,153 г, 0,389 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,027 г, 0,04 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) нагревали до 115°C в герметично закрытой пробирке и в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Очистка с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-20% метанола в дихлорметане) давала чистый продукт (0,098 г, 55%); MS (ESI) m/z 463,5 [M+1]+.
F. 6-(6-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-(6-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (0,098 г, 0,212 ммоль) и 4,0 M хлористоводородной кислоты в диоксане (4,0 мл) перемешивали при 25°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония и затем экстрагировали этилацетатом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,9% (30,4 мг, 38%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,29 (д, J=1,6, 1Н), 8,52 (м, 2H), 8,25 (с, 1Н), 8,14 (д, J=8,4, 1H), 3,85 (м, шир., 2H), 3,75 (д, J=7,2, 1H), 3,3 (м, 2H), 2,14 (м, 1H), 1,56 (м, шир., 2H), 1,36 (м, 2H); MS (ESI) m/z 379,4 [М+1]+; т.пл. 353-356°C.
5.1.162 ПРИМЕР 162: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(2-ОКСОПИРРОЛИДИН-1-ил)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3H)-он
6-Бром-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 157.A) (290 мг, 0,8 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (224 мг, 0,99 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (30 мг, 0,04 ммоль), 1 M карбоната натрия (2,5 мл, 2,5 ммоль) и диоксан (5 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции пропускали через ионообменную колонку Strata-XC и продукт выделяли из колонки при помощи 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (23 мг, 7% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,58 (с, 1H), 8,48 (шир., 1H), 8,20 (д, J=10,0, 2H), 8,13 (д, J=10,0, 2H), 4,06 (м, 2H), 3,58 (м, 2H), 3,52 (т, J=6,8, 2H), 1,85 (д, J=7,8, 2H), 1,74 (м, 2H); MS (ESI) m/z 391,5 [М+1]+; т.пл. 300-301°C.
5.1.163 ПРИМЕР 163: СИНТЕЗ 3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-5-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Хлор-3-нитро-N-(1-фенилэтил)пиридин-2-амин.
К раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (2,0 г, 10,4 ммоль) в тетрагидрофуране (18 мл) при -78°C добавляли диизопропилэтиламин (2,17 мл, 12,4 ммоль) и 1-фенилэтанамин (1,51 г, 12,4 ммоль). Реакционную смесь поддерживали при температуре -78°C в течение 2 часов и затем давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2,24 г, 78% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,68 (д, J=7,5, 1H), 8,42 (д, J=8,5, 1H), 7,45 (д, J=7,5, 2H), 7,34 (т, J=7,5, 2H), 7,25 (т, J=7,5, 1H), 6,80 (д, J=8,5, 1H), 5,36 (квинт., J=7, 1H), 1,57 (д, J=7, 3H).
B. 3-Нитро-N-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2-амин.
К раствору 6-хлор-3-нитро-N-(1-фенилэтил)пиридин-2-амина (2,24 г, 8,07 ммоль) и хинолин-5-илбороновой кислоты (1,81 г, 10,5 ммоль) в ДМФА (150 мл) добавляли карбонат калия (4,46 г, 32,3 ммоль) в воде (25 мл). Реакционный раствор продували потоком азота с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (932 мг, 0,81 ммоль). После нагревания при 85°C в течение 2 часов растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (2,36 г, 79% выход). MS (ESI) m/z 371,3 [M+1]+.
C. N2-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2,3-диамин.
Раствор 3-нитро-N-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2-амина (2,36 г, 6,37 ммоль) в этаноле (175 мл) продували азотом в течение нескольких минут. После добавления палладия на углероде (245 мг, 2,29 ммоль) в колбе создавали вакуум и устанавливали сверху баллон, заполненный водородом. После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов реакционную смесь фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,89 г, 87% выход). MS (ESI) m/z 341,3 [M+1]+.
D. 3-(1-Фенилэтил)-5-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он
Раствор N2-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2,3-диамина (0,500 г, 1,47 ммоль) и мочевины (0,265 г, 4,41 ммоль) в 1-метилпирролидин-2-оне (2 мл) нагревали при 185°C в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество растворяли в DMSO. Очистка с использованием обращенно-фазовой ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила в воде, в течение 18 мин) давала указанное в заголовке соединение (110 мг, 21% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 11,40 (с, 1H), 8,90-8,92 (м, 1H), 8,37 (д, J=8, 1H), 8,05 (д, J=8, 1H), 7,80 (т, J=7, 1H), 7,70 (д, J=7, 1H), 7,49 (д, J=8, 1H), 7,28-7,42 (м, 7H), 5,73 (кв., J=7,5, 1H), 1,95 (д, J=7,5, 3H); MS (ESI) m/z 366,8 [М+1]+.
5.1.164 ПРИМЕР 164: СИНТЕЗ (R)-3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-5-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. (R)-6-Хлор-3-нитро-N-(1-фенилэтил)пиридин-2-амин.
К раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (1,0 г, 5,18 ммоль) в тетрагидрофуране (8 мл) при -78°C добавляли диизопропилэтиламин (1,08 мл, 6,22 ммоль) с последующим добавлением (R)-1-фенилэтанамина (0,75 г, 6,22 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл). Реакционную смесь выдерживали при -78°C в течение 2 часов и затем давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,12 г, 78% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,67 (д, J=7,5, 1H), 8,43 (д, J=8,5, 1H), 7,46 (д, J=7,5, 2H), 7,35 (т, J=7,5, 2H), 7,25 (т, J=7,5, 1H), 6,80 (д, J=8,5, 1H), 5,38 (квинт., J=7, 1H), 1,59 (д, J=7, 3H).
B. (R)-3-Нитро-N-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2-амин.
К раствору (R)-6-хлор-3-нитро-N-(1-фенилэтил)пиридин-2-амина (1,12 г, 4,03 ммоль) и хинолин-5-илбороновой кислоты (0,91 г, 5,24 ммоль) в ДМФА (75 мл) добавляли карбонат калия (2,23 г, 16,1 ммоль) в воде (25 мл). Реакционный раствор продували потоком азота с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,466 г, 0,403 ммоль). После нагревания при 85°C в течение 2 часов растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,1 г, 74% выход). MS (ESI) m/z 371,3 [M+1]+.
C. (R)-N2-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2,3-диамин.
Раствор (R)-3-нитро-N-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2-амина (1,10 г, 2,97 ммоль) в этаноле (95 мл) продували азотом в течение нескольких минут. После добавления палладия на углероде (0,125 г, 1,18 ммоль) в колбе создавали вакуум и устанавливали сверху баллон, заполненный водородом. После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов реакционную смесь фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,77 г, 76% выход). MS (ESI) m/z 341,3 [M+1]+.
D. (R)-3-(1-Фенилэтил)-5-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он.
Раствор (R)-N2-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)пиридин-2,3-диамина (0,30 г, 0,881 ммоль) и мочевины (0,16 г, 2,64 ммоль) в 1-метилпирролидин-2-оне (1,2 мл) нагревали при 185°C в течение 1 часа. Очистка неочищенного вещества при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила в воде, в течение 18 мин) давала указанное в заголовке соединение (55 мг, 17% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,42 (с, 1H), 8,92 (дд, J=2,4, 1H), 8,38 (д, J=8,1H), 8,07 (д, J=8,1H), 7,82 (т, J=7, 1H), 7,70 (дд, J=1, 7,1H), 7,51 (д, J=8, 1H), 7,29-7,44 (м, 7H), 5,75 (кв., J=7,5, 1H), 1,96 (д, J=7,5, 3H); MS (ESI) m/z 366,8 [М+1]+.
5.1.165 ПРИМЕР 165: СИНТЕЗ (S)-3-(1-ГИДРОКСИ-3-МЕТИЛБУТАН-2-ИЛ)-5-(5-ИЗОПРОПИЛ-2-МЕТОКСИФЕНИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-2-(6-Хлор-3-нитропиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ол.
К раствору 2,6-дихлор-3-нитропиридина (1,0 г, 5,18 ммоль) в тетрагидрофуране (8 мл) при -78°C добавляли диизопропилэтиламин (1,08 мл, 6,22 ммоль) с последующим добавлением (S)-2-амино-3-метилбутан-1-ола (0,641 г, 6,22 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл). Реакционную смесь выдерживали при -78°C в течение 2 часов и затем давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,810 г, 60% выход). MS (ESI) m/z 260,2 [M+1]+.
B. (S)-2-(6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-3-нитропиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ол.
К раствору (S)-2-(6-хлор-3-нитропиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ола (0,80 г, 3,08 ммоль) и 5-изопропил-2-метоксифенилбороновой кислоты (0,78 г, 4,00 ммоль) в ДМФА (50 мл) добавляли карбонат калия (1,7 г, 12,3 ммоль) в воде (8 мл). Реакционный раствор продували потоком азота с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,358 г, 0,308 ммоль). После нагревания при 85°C в течение 2 часов растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,11 г, 96% выход). MS (ESI) m/z 374,3 [M+1]+.
C. (S)-2-(3-Амино-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ол.
Раствор (S)-2-(6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-3-нитропиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ола (0,33 г, 0,88 ммоль) в этаноле (30 мл) продували азотом в течение нескольких минут. После добавления палладия на углероде (0,038 г, 0,35 ммоль) в колбе создавали вакуум и устанавливали сверху баллон, заполненный водородом. После перемешивания при комнатной температуре в течение 18 часов реакционную смесь фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,30 г, 99% выход). MS (ESI) m/z 344,3 [M+1]+.
D. (S)-3-(1-Гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-5-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он.
В сосуд из боросиликатного стекла с толстыми стенками добавляли (S)-2-(3-Амино-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)пиридин-2-иламино)-3-метилбутан-1-ол (0,70 г, 2,04 ммоль), мочевину (0,245 г, 4,08 ммоль) и ДМФА (14 мл). Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновый реактор Biotage Emrys Optimizer и облучали при 220°C в течение 2700 (сек). После охлаждения до температуры окружающей среды раствор конденсировали и неочищенное вещество очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (10-100% ацетонитрила в воде, в течение 18 мин). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество затем очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,04 г, 5% выход). 1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 11,05 (с, 1H), 7,61 (с, 1H), 7,55 (д, J=8, 1H), 7,36 (д, J=8, 1H), 7,21 (д, J=7,5, 1H), 7,04 (д, J=7,5, 1H), 4,87 (т, J=5, 1H), 4,21-4,32 (м, 1H), 4,04-4,15 (м, 1H), 3,80-3,86 (м, 1H), 3,80 (с, 3H), 2,81-2,88 (м, 1H), 2,42-2,50 (м, 1Н), 1,21 (д, J=7, 6H), 1,05 (д, J=7, 3H), 0,75 (д, J=7, 3H); MS (ESI) m/z 370,3 [М+1]+.
5.1.166 ПРИМЕР 166: СИНТЕЗ (R)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. Этилпиридин-2-илкарбонат.
К смеси 2-гидроксипиридина (2,0 г, 21,0 ммоль) и карбоната калия (7,3 г, 52,6 ммоль) в ацетоне (40 мл) добавляли этилхлорформиат (5,7 г, 52,6 ммоль). После нагревания при 40°C в течение ночи, реакционную смесь пропускали через слой целита и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество растворяли в этилацетате, промывали водой (4×), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали с получением указанного в заголовке соединения (2,8 г, 80%). MS (ESI) m/z 168,2 [M+1]+.
B. Этил 6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-1-карбоксилат.
Раствор 6-бром-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она (2 г, 9,3 ммоль), этилпиридин-2-илкарбоната (2,1 г, 12,5 ммоль) и карбоната калия (1,8 г, 12,5 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) и ДМФА (20 мл) нагревали при 75°C в течение ночи. После концентрирования при пониженном давлении добавляли воду с последующим добавлением 1 н. раствора HCl до получения смеси с рН 1. Образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (2,3 г, 85%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,17 (шир.с, 1H), 8,18 (д, J=2, 1H), 7,98 (д, J=2, 1H), 4,42 (кв., J=7, 2H), 1,35 (т, J=7, 3H); MS (ESI) m/z 286,0 [М+1]+.
C. трет-Бутил 6-бром-2-оксо-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилат.
К раствору этил 6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-1-карбоксилата (1,6 г, 5,59 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбоната (1,47 г, 6,71 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) добавляли 4-диметиламинопиридин (0,102 г, 0,839 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 90 минут при комнатной температуре и добавляли изопропиламин (0,40 г, 6,71 ммоль). После перемешивания еще в течение 30 минут растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт растирали в порошок с диэтиловым эфиром (3×2 мл) с получением указанного в заголовке соединения (1,6 г, 91%). MS (ESI) m/z 314,0 [M+1]+.
D. (R)-трет-Бутил 6-бром-2-оксо-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилат.
К раствору трет-бутил 6-бром-2-оксо-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилата (1,6 г, 5,09 ммоль), (S)-1-фенилэтанола (0,75 г, 6,11 ммоль) и трифенилфосфина (1,6 г, 6,11 ммоль) в тетрагидрофуране (45 мл) добавляли диизопропилазодикарбоксилат (1,19 мл, 6,11 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,60 г, 28% выход). MS (ESI) m/z 418,2 [M+1]+.
E. Гидрохлорид (R)-6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она.
(R)-трет-Бутил 6-бром-2-оксо-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилат (0,60 г, 1,43 ммоль) обрабатывали при помощи 4,0 M хлористоводородной кислоты в диоксане (30 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г, 98% выход). MS (ESI) m/z 318,1 [M+1]+.
F. (R)-1-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он.
В сосуд из боросиликатного стекла с толстыми стенками, содержащий раствор гидрохлорида (R)-6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она (0,25 г, 0,705 ммоль) и хинолин-5-илбороновой кислоты (0,16 г, 0,916 ммоль) в ДМФА (18 мл), добавляли карбонат калия (0,39 г, 2,82 ммоль) в воде (2 мл). Реакционный раствор продували потоком азота с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,090 г, 0,078 ммоль). Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновый реактор Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 15 минут. После охлаждения до температуры окружающей среды растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле и промывали метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,09 г, 35% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,34 (с, 1H), 8,94 (дд, J=1,5, 4, 1H), 8,24 (д, J=8, 1H), 8,08 (д, J=8,5, 1H), 8,03 (д, J=2, 1H), 7,83 (дд, J=7, 8,5, 1H), 7,60 (дд, J=1,7, 1H), 7,48-7,54 (м, 3H), 7,40 (д, J=2, 1H), 7,36 (т, 7=7,5, 2H), 7,28 (т, J=7,5, 1H), 5,78 (кв., J=7, 1H), 2,02 (д, J=7, 3H); MS (ESI) m/z 367,2 [М+1]+.
5.1.167 ПРИМЕР 167: СИНТЕЗ 1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 6-бром-2-оксо-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилат.
К раствору трет-бутил 6-бром-2-оксо-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилата (см. Пример 166.C) (0,60 г, 1,97 ммоль), 1-фенилэтанола (0,289 г, 2,37 ммоль) и трифенилфосфина (0,62 г, 2,37 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) добавляли диизопропилазодикарбоксилат (0,46 мл, 2,37 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,30 г, 36% выход). MS (ESI) m/z 418,2 [M+1]+.
B. Гидрохлорид 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она.
трет-Бутил 6-бром-2-оксо-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-3(2H)-карбоксилат (0,30 г, 0,72 ммоль) обрабатывали при помощи 4,0 M хлористоводородной кислоты в диоксане (20 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,23 г, 90% выход). MS (ESI) m/z 318,1 [M+1]+.
C. 1-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-он.
В сосуд из боросиликатного стекла с толстыми стенками, содержащий раствор гидрохлорида 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она (0,125 г, 0,352 ммоль) и хинолин-5-илбороновой кислоты (0,080 г, 0,458 ммоль) в ДМФА (9 мл), добавляли карбонат калия (0,195 г, 1,41 ммоль) в воде (1 мл). Реакционный раствор продували потоком азота с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,045 г, 0,039 ммоль). Реакционный сосуд герметично закрывали и помещали в микроволновый реактор Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 15 минут. После охлаждения до температуры окружающей среды растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле и промывали метанолом с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г, 16% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,34 (с, 1H), 8,94 (дд, J=1,7, 4, 1H), 8,24 (д, J=8, 1H), 8,08 (д, J=8,5, 1H), 8,03 (д, J=2, 1H), 7,83 (дд, J=7, 8,5, 1H), 7,60 (дд, J=1,7, 1H), 7,48-7,54 (м, 3H), 7,40 (д, J=2, 1H), 7,36 (т, J=7,5, 2H), 7,28 (т, J=7,5, 1H), 5,78 (кв., J=7, 1H), 2,02 (д, J=7, 3H); MS (ESI) m/z 367,2 [М+1]+.
5.1.168 ПРИМЕР 168: СИНТЕЗ (R)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ил)-1H-имидазо[4,5-C]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. ((1R)-1-Фенилэтил)(2-бром-5-нитро(4-пиридил))амин.
К раствору, содержащему 2,4-дибром-5-нитропиридин (500 мг, 1,75 ммоль) и диизопропилэтиламин (314 мкл, 1,80 ммоль) в тетрагидрофуране (8 мл), при 0°C добавляли (R)-(+)-1-фенилэтиламин (225 мг, 1,86 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. После того как исходное вещество было полностью израсходовано (отслеживали при помощи ЖХМС), раствор конденсировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате, промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и конденсировали с получением (5,6 г, 99%) продукта. MS (ESI) m/z 322 [M+1]+.
B. ((1R)-1-Фенилэтил)(5-нитро-2-(5-хинолил)(4-пиридил))амин.
((1R)-1-Фенилэтил)(2-бром-5-нитро(4-пиридил))амин (5,6 г, 1,75 ммоль) и 5-хинолинбороновую кислоту (393 мг, 2,27 ммоль) растворяли в ДМФА (25 мл). В раствор барботировали газообразный азот в течение 2 минут. Затем добавляли карбонат калия (970 мг, 7,00 ммоль) в воде (5 мл) с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,175 ммоль). Раствор затем нагревали до 85°C в атмосфере азота в течение 1 часа. Раствор конденсировали при пониженном давлении и неочищенный продукт разбавляли этилацетатом и фильтровали через слой силикагеля. Полученный фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (502 мг, 77%). MS (ESI) m/z 371 [M+1]+.
C. ((1R)-1-фенилэтил)(3-амино-6-(5-хинолил)(4-пиридил))амин
((1R)-1-Фенилэтил)(5-нитро-2-(5-хинолил)(4-пиридил))амин (500 мг, 1,35 ммоль) растворяли в этаноле (100 мл). Добавляли палладий на углероде (70 мг) с последующим добавлением водорода. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, затем фильтровали через целит. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением желаемого продукта (450 мг, 97,9%). MS (ESI) m/z 341 [M+1]+.
D. 1-((1R)-1-фенилэтил)-6-(5-хинолил)-4-имидазолино[4,5-c]пиридин-2-он.
((1R)-1-Фенилэтил)(3-амино-6-(5-хинолил)(4-пиридил))амин (150 мг, 0,44 ммоль) и мочевину (52,8 мг, 0,88 ммоль) объединяли в 1-метилпирролидин-2-оне (4 мл) и нагревали при 185°C в течение 2 часов. Добавляли воду (10 мл) и неочищенный продукт собирали фильтрованием. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-95% ацетонитрила в воде, в течение 30 мин) с получением указанного в заголовке соединения (52,3 мг, 32,4%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,45 (с, 1H), 8,91 (дд, J=4,10, 1,56, 1H), 8,39 (д, J=0,78, 1H), 8,33 (ддд, J=8,74, 1,71, 0,88, 1H), 8,05 (д, J=8,49, 1H), 7,80 (дд, J=8,49, 7,13, 1H), 7,59 (дд, J=7,22, 1,37, 1H), 7,41-7,46 (м, 3H), 7,30-7,40 (м, 3H), 5,75 (д, J=7,22, 1H), 4,16 (д, J=0,98, 1H), 1,87 (д, J=7,22, 3 H); MS (ESI) m/z 367,0 [М+1]+.
5.1.169 ПРИМЕР 169: СИНТЕЗ (S)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-6-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-C]ПИРИДИН-2(3H)-ОНа
A. ((1S)-1-фенилэтил)(2-бром-5-нитро(4-пиридил))амин.
К раствору, содержащему 2,4-дибром-5-нитропиридин (500 мг, 1,75 ммоль) и диизопропилэтиламин (314 мкл, 1,80 ммоль) в тетрагидрофуране (8 мл), при 0°C добавляли (S)-(-)-1-фенилэтиламин (225 мг, 1,86 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. Реакция завершалась, согласно данным ЖХМС, и раствор конденсировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате, промывали водой, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением желаемого продукта (5,6 г, 99%). MS (ESI) m/z 322 [M+1]+.
B. ((1S)-1-Фенилэтил)(5-нитро-2-(5-хинолил)(4-пиридил))амин.
((1S)-1-Фенилэтил)(2-бром-5-нитро(4-пиридил))амин (5,6 г, 1,75 ммоль) и 5-хинолинбороновую кислоту (393 мг, 2,27 ммоль) растворяли в ДМФА (25 мл). В раствор барботировали газообразный азот в течение 2 минут. Затем добавляли карбонат калия (970 мг, 7,00 ммоль) в воде (5 мл) с последующим добавлением тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,175 ммоль). Раствор затем нагревали до 85°C в атмосфере азота в течение 1 часа. Раствор конденсировали при пониженном давлении и неочищенный продукт разбавляли этилацетатом и фильтровали через слой силикагеля. Полученный фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (500 мг, 77%). MS (ESI) m/z 371 [M+1]+.
C. ((1S)-1-Фенилэтил)(3-амино-6-(5-хинолил)(4-пиридил))амин.
((1S)-1-Фенилэтил)(5-нитро-2-(5-хинолил)(4-пиридил))амин (500 мг, 1,35 ммоль) растворяли в этаноле (100 мл). Добавляли палладий на углероде (80 мг) с последующим добавлением баллона водорода. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, затем фильтровали через целит. Фильтрат конденсировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта (450 мг, 97,9%). MS (ESI) m/z 341 [M+1]+.
D. (S)-1-(1-Фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-c]пиридин-2(3H)-он
((1S)-1-Фенилэтил)(3-амино-6-(5-хинолил)(4-пиридил))амин (450 мг, 1,32 ммоль) и мочевину (158 мг, 2,64 ммоль) объединяли в 1-метилпирролидин-2-оне (4 мл) и нагревали при 185°C в течение 2 часов. Добавляли воду (10 мл) и неочищенный продукт собирали фильтрованием. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-95% ацетонитрила в воде, в течение 30 мин) с получением продукта (92,9 мг, 19%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,45 (с, 1H), 8,91 (дд, J=4,10, 1,76, 1H), 8,39 (д, J=0,78, 1H), 8,33 (ддд, J=8,00, 1,27, 1,07, 1H), 8,05 (д, J=8,40, 1Н), 7,80 (дд, J=8,49, 7,13, 1H), 7,59 (дд, J=7,13, 1,27, 1H), 7,41-7,47 (м, 3H), 7,29-7,41 (м, 3H), 5,75 (д, J=7,22, 1H), 4,16 (д, J=0,78, 1H), 1,87 (д, J=7,22, 3 H); MS (ESI) m/z 367,0 [М+1]+.
5.1.170 ПРИМЕР 170: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-(МЕТИЛАМИНО)ПИРИМИДИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-метилтио)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,53 г, 1,7 ммоль), 2-(метилтио)пиримидин-5-илбороновую кислоту (0,35 г, 2,04 ммоль), фосфат калия (1,44 г, 6,81 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,14 г, 0,17 ммоль) объединяли вместе в ДМФА/воде (9:1 об/об, 6 мл) и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Охлажденную реакционную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл) и 5% HCl (водн., 50 мл). Смесь встряхивали и разделяли. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до около 5 мл объема. Происходило осаждение продукта из раствора, и продукт отфильтровывали (0,46 г, 76%). MS (ESI) m/z 357,4 [M+1]+.
B. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метилсульфонил)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метилтио)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,46 г, 1,29 ммоль) растворяли в хлороформе (10 мл). К полученному раствору добавляли м-хлопероксибензойную кислоту (0,6 г, 2,6 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь промывали 5% раствором бикарбоната натрия (водн., 2×50 мл), водой (50 мл) и затем насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением продукта (0,48 г, 96%). MS (ESI) m/z 389,0 [M+1]+.
C. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метиламино)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метилсульфонил)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,05 г, 0,129 ммоль) растворяли в 2 M метиламина в тетрагидрофуране (3 мл). Смесь перемешивали при 70°C в течение 24 часов. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали полупрепаративной ВЭЖХ (20-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 45 мин). В результате концентрирования желаемой фракции получали продукт (10 мг, 23%, чистота 99,7% по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,97 (с, 1H), 8,90 (с, 2H), 8,39 (с, 1H), 7,41 (д, J=4,4, 1H), 3,71 (д, J=6,8, 2H), 2,86 (д, J=4,8, 2H), 1,89 (м, 1H), 1,62 (м, 5H), 1,16 (м, 3H), 1,03 (м, 2H); MS (ESI) m/z 340,4 [М+1]+.
5.1.171 ПРИМЕР 171: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(2-(2-МЕТОКСИЭТИЛАМИНО)ПИРИМИДИН-5-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(2-(2-метоксиэтиламино)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метилсульфонил)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 170.B) (0,05 г, 0,129 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (3 мл). К полученному раствору добавляли 2-метоксиэтанамин (0,097 г, 1,287 ммоль). Смесь перемешивали при 70°C в течение 24 часов. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали при помощи полупрепаративной ВЭЖХ (20-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 45 мин). В результате концентрирования желаемой фракции получали продукт (15 мг, 30%, чистота 100% по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,00 (с, 1H), 8,89 (с, 2H), 8,39 (с, 1H), 7,47 (т, J=5,6, 1H), 3,70 (д, J=7,2, 2H), 3,48 (д, J=5,2, 4H), 3,27 (с, 3H), 1,89 (м, 1H), 1,62 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,04 (м, 2H); MS (ESI) m/z 384,3 [М+1]+; т.пл. >250°C.
5.1.172 ПРИМЕР 172: СИНТЕЗ (1R,4R)-4-(6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-1-ИЛ)ЦИКЛОГЕКСАНКАРБОКСАМИДА
A. трет-Бутил (1R,4R)-4-карбамоилциклогексилкарбамат.
(1R,4R)-4-(трет-Бутоксикарбонил-амино)циклогексанкарбоновую кислоту (1,7 г, 6,99 ммоль), хлорид аммония (560 мг, 10,5 ммоль), гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (2,66 г, 6,99 ммоль), триэтиламин (2,92 мл, 20,96 ммоль) и ацетонитрил (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь фильтровали и промывали свежим ацетонитрилом. Твердое вещество сушили в вакууме с получением продукта (1,57 г, 93% выход) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 242,9 [M+1]+.
B. (1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
трет-Бутил (1R,4R)-4-карбамоилциклогексилкарбамат (0,5 г, 2,063 ммоль) обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диоксане в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества. Твердый (1R,4R)-4-аминоциклогексанкарбоксамид объединяли с 3,5-дибромпиразин-2-амином (0,522 г, 2,063 ммоль), диизопропилэтиламином (0,721 мл, 4,13 ммоль) и метилсульфоксидом (4 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 2 часов при 150°C. Продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане) для выделения диамина, (1R,4R)-4-(3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанкарбоксамида. Полученный диамин объединяли с 1,1'-карбонилдиимидазолом (0,669 г, 4,13 ммоль) и диоксаном (4 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 10 минут при 100°C. Полученное вещество очищали хроматографией на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане). Выделенные фракции концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (85 мг, 12% выход от 3 стадий). MS (ESI) m/z 340,0 [M]+, 342,0 [M+2]+.
C. (1R,4R)-4-(6-(4-Гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
(1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид (85 мг, 0,25 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (41 мг, 0,3 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (10 мг, 0,012 ммоль), 1 M карбоната натрия (0,75 мл, 0,75 ммоль) и диоксан (3 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и затем очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с 10% метанолом в диэтиловом эфире с получением белого твердого вещества (37 мг, 42% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (с, 1H), 9,71 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,86 (д, J=8,6, 2H), 7,31 (с, 1H), 6,87 (д, J=8,6, 2Н), 6,77 (с, 1H), 4,23 (м, 1H), 2,38 (м, 2H), 2,22 (м, 1H), 1,88 (м, 4H), 1,52 (м, 2H); MS (ESI) m/z 354,3 [М+1]+; т.пл. 324-326°C.
5.1.173 ПРИМЕР 173: СИНТЕЗ (1S,4S)-4-(6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-1-ИЛ)ЦИКЛОГЕКСАНКАРБОКСАМИДА
A. трет-Бутил (1S,4S)-4-карбамоилциклогексилкарбамат.
(1S,4S)-4-(трет-Бутоксикарбониламино)циклогексанкарбоновую кислоту (1,7 г, 6,99 ммоль), хлорид аммония (560 мг, 10,5 ммоль), гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (2,66 г, 6,99 ммоль), триэтиламин (2,92 мл, 20,96 ммоль) и ацетонитрил (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь фильтровали и затем промывали свежим ацетонитрилом. Твердое вещество сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (1,5 г, 89% выход) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 243,3 [M+1]+.
B. (1S,4S)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
трет-Бутил (1S,4S)-4-карбамоилциклогексилкарбамат (1,5 г, 6,2 ммоль) обрабатывали при помощи 4 н. раствора хлористоводородной кислоты в диоксане (5 мл) в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества. Твердое вещество объединяли с 3,5-дибромпиразин-2-амином (1,7 г, 7 ммоль), диизопропилэтиламином (3,6 мл, 21 ммоль) и метилсульфоксидом (4 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 2 часов при 150°C. Полученное вещество очищали на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане) для выделения диамина, (1S,4S)-4-(3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)циклогексанкарбоксамида. Полученный диамин объединяли с 1,1'-карбонилдиимидазолом (0,669 г, 4,13 ммоль) и диоксаном (4 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 10 минут при 100°C. Продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане). Выделенные фракции концентрировали с получением продукта. MS (ESI) m/z 340,0 [M]+, 342,0 [M+2]+.
C. (1S,4S)-4-(6-(4-Гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b] пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
(1S,4S)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид (200 мг, 0,59 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (97 мг, 0,71 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (24 мг, 0,029 ммоль), 1 M карбоната натрия (1,7 мл, 1,7 ммоль) и диоксан (3 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь доводили до pH 7 при помощи 1 н. раствора хлористоводородной кислоты и затем экстрагировали водой и этилацетатом. Органический слой концентрировали и очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции концентрировали и полученное вещество растирали в порошок с 10% метанолом в диэтиловом эфире с получением белого твердого вещества (90 мг, 43% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,86 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 7,91 (д, J=9,0, 2H), 7,27 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 6,87 (д, J=8,6, 2H), 4,22 (м, 1H), 2,61 (м, 3H), 2,45 (шир., с, 1H), 2,21 (д, J=13,7, 2H), 1,57 (м, 4H); MS (ESI) m/z 354,3 [М+1]+; т.пл. 310-312°C.
5.1.174 ПРИМЕР 174: СИНТЕЗ 6-(5-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ТИОФЕН-2-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(5-(Гидроксиметил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К раствору 5-формилтиофен-2-илбороновой кислоты (100 мг, 0,639 ммоль) в метаноле (2 мл) добавляли борогидрид натрия (242 мг, 6,39 ммоль). Смесь перемешивали при 25°C в течение 10 минут. Добавляли 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (100 мг, 0,319 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]палладий(II)· дихлорметан (0,05 г, 0,06 ммоль), воду (2 мл) и диоксан (2 мл) и реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 140°C в течение 30 минут. Реакционную смесь затем экстрагировали этилацетатом (3×25 мл) и промывали водным раствором бикарбоната натрия (3×25 мл). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле (100% этилацетат). В результате концентрирования желаемых фракций получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (0,085г, 77%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,03 (с, 1H), 8,41 (с, 1H), 7,56 (д, J=3,6, 1H), 7,56 (д, J=3,6, 1H), 6,96 (д, J=3,6, 1H), 5,53 (т, J=5,6, 1H), 4,64 (д, J=5,6, 2H), 3,84-3,82 (м, 2H), 3,73 (д, J=6,8, 2H), 3,28-3,22 (м, 2H), 2,11 (м, 1H), 1,57-1,54 (м, 2H), 1,35-1,25 (м, 2H); MS (ESI) m/z 347,1 [М+1]+.
5.1.175 ПРИМЕР 175: СИНТЕЗ 6-(3-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)ТИОФЕН-2-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(3-(Гидроксиметил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К раствору 3-формилтиофен-2-илбороновой кислоты (0,156 г, 1 ммоль) в метаноле (2 мл) добавляли тетрагидроборат натрия (0,378 г, 10,00 ммоль). Смесь перемешивали при 25°C в течение 10 минут. Затем добавляли 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,157 г, 0,500 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,041 г, 0,050 ммоль), карбонат калия (0,138 г, 1,000 ммоль), 1,4-диоксан (2 мл) и воду (6,00 мл). Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 140°C в течение 30 минут. Реакционную смесь затем экстрагировали этилацетатом (3×25 мл) и промывали водным раствором бикарбоната натрия (3×25 мл). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле (100% этилацетат). В результате концентрирования желаемых фракций получали указанное в заголовке соединение (0,070 г, 40,4%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,09 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,54 (д, J=5,2, 1H), 7,21 (д, J=5,2, 1H), 5,30 (т, J=5,4, 1H), 4,67 (д, J=5,6, 2H), 3,85-3,82 (м, 2H), 3,73 (д, J=7,2, 2H), 3,27-3,22 (м, 2H), 2,15-2,07 (м, 1H), 1,57-1,54 (м, 2H), 1,34-1,23 (м, 2H); MS (ESI) m/z 347,1 [М+1]+.
5.1.176 ПРИМЕР 176: СИНТЕЗ 6-(5-(2-ГИДРОКСИЭТИЛ)ТИОФЕН-2-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(5-(2-Гидроксиэтил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К раствору 2-(5-бромтиофен-2-ил)этанола (0,207 г, 1 ммоль) [JACS 2001, p1 1600] в DMSO (3 мл) добавляли ацетат калия (0,294 г, 3 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,041 г, 0,050 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (0,381 г, 1,5 ммоль). Смесь перемешивали при 80°C в течение 16 часов. К реакционной смеси добавляли 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,157 г, 0,500 ммоль), карбонат калия (0,138 г, 1,000 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,041 г, 0,050 ммоль), воду (2 мл) и 1,4-диоксан (8 мл). Реакционную смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 140°C в течение 30 минут. Реакционную смесь затем экстрагировали этилацетатом (3×25 мл) и промывали водным раствором бикарбоната натрия (3×25 мл). Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле (5% метанола в этилацетате). В результате концентрирования желаемых фракций получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (0,047 г, 26%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,02 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,54 (д, J=3,6, 1H), 6,88 (д, J=3,6, 1H), 4,85 (т, J=5,2, 1H), 3,84-3,82 (м, 2H), 3,72 (д, J=7,2, 2H), 3,67-3,62 (м, 2H), 3,27-3,22 (м, 2H), 2,96-2,92 (м, 2H), 2,15-2,07 (м, 1H), 1,56-1,53 (м, 2H), 1,34-1,23 (м, 2H); MS (ESI) m/z 361,0 [М+1]+.
5.1.177 ПРИМЕР 177: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(ПИРРОЛИДИН-2-ИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 2-((3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)пирролидин-1-карбоксилат
3,5-Дибромпиразин-2-амин (2,24 г, 8,85 ммоль), трет-бутил 2-(аминометил)пирролидин-1-карбоксилат (1,95 г, 9,54 ммоль) и диизопропилэтиламин (1,74 г, 17 ммоль) растворяли в н-бутаноле (3 мл) и нагревали в герметично закрытой пробирке до 110°C в течение 48 часов. Смесь очищали с использованием хроматографии на силикагеле (20% этанол в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (2 г, 62,5% выход). MS (ESI) m/z 372,2 [M]+, 374,2 [M+2]+.
B. трет-Бутил 2-((6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил) пирролидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 2-((3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил) пирролидин-1-карбоксилат (2,0 г, 5,4 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (1,75 г, 10,80 ммоль) и тетрагидрофуран (7 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 120°C в течение ночи. Растворитель удаляли и неочищенный продукт очищали с использованием хроматографии на силикагеле (20% гексана в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (1,73 г, 80% выход). MS (ESI) m/z 398 [M]+, 400 [M+2]+.
C. трет-Бутил 2-((6-(4-гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пирролидин-1-карбоксилат.
трет-Бутил 2-((6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пирролидин-1-карбоксилат (0,5 г, 1,25 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (0,17 г, 1,25 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,103 г, 0,126 ммоль) и карбонат натрия (0,665 г, 6,28 ммоль) подвергали взаимодействию в течение 40 минут в 1,4-диоксане (4 мл) в соответствии с Общей Процедурой B2 и очищали с использованием хроматографии на силикагеле (60% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,21 г, 41,4% выход). MS (ESI) m/z 412,4 [M+1]+.
D. Гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-(пирролидин-2-илметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
трет-Бутил 2-((6-(4-гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пирролидин-1-карбоксилат (0,2 1 г, 0,52 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (3 мл), добавляли 1 M хлористоводородной кислоты в 1,4-диоксане (1 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. Растворитель удаляли, полученный остаток растирали в порошок с метанолом и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения (0,11 г, 61% выход).1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,09 (с, 1H), 9,768 (с, 1H), 9,4 (шир.с, 1H), 8,68 (шир.с, 1H), 8,415 (с, 1H), 7,906 (д, J=8,8, 2H), 6,873 (д, J=8,8, 2H), 4,19 (д, J=6,8, 2H), 3,89 (м, 1H), 3,30 (м, 1H), 3,13 (м, 1H), 2,14 (м, 1H), 1,97 (м, 2H), 1,79 (м, 1Н); MS (ESI) m/z 312,1 [М+1]+; т.пл. 178-180°C.
5.1.178 ПРИМЕР 178: СИНТЕЗ 6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ПИПЕРИДИН-1-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-N2-(2-(пиперидин-1-ил)этил)пиразин-2,3-диамин.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (1,54 г, 5,91 ммоль), 2-(пиперидин-1-ил)этанамин и диизопропилэтиламин (1,74 г, 17 ммоль) растворяли в н-бутаноле (5 мл) и нагревали в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение ночи. Смесь очищали с использованием хроматографии на силикагеле (20% этанола в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г, 73,3% выход). MS (ESI) m/z 300 [M]+, 302 [M+2]+.
B. 6-Бром-1-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он
6-Бром-N2-(2-(пиперидин-1-ил)этил)пиразин-2,3-диамин (1,27 г, 4,23 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (1,37 г, 8,46 ммоль) и тетрагидрофуран (5 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 110°C в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток обрабатывали водой и экстрагировали в этилацетат, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. После того как смеси давали отстояться, происходило осаждение желаемого продукта, и его собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде рыжевато-коричневого твердого вещества (1,2 г, 87% выход). MS (ESI) m/z 326,2 [M]+, 328,2 [M+2]+.
C. 4-(2-Оксо-3-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил.
6-Бром-1-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (1,2 г, 3,68 ммоль), 4-цианофенилбороновую кислоту (0,595 г, 4,05 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,3 г, 0,368 ммоль) и фосфат калия (3,12 г, 14,7 ммоль) объединяли в ДМФА (9 мл) и нагревали в герметично закрытой пробирке до 100°C в течение ночи. Колбу охлаждали до комнатной температуры и реакционную смесь фильтровали через целит, промывали метанолом и этилацетатом. Фильтрат и промывочные жидкости объединяли, концентрировали и обрабатывали водой. Продукт экстрагировали в этилацетат, органический слой концентрировали и полученное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле (60-100% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г, 39% выход). MS (ESI) m/z 349,3 [M+1]+.
D. Гидрохлорид этил 4-(2-оксо-3-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата.
4-(2-Оксо-3-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил (0,5 г, 1,43 ммоль) помещали в безводный этанол (5 мл) и охлаждали на ледяной бане. В содержащий смесь сосуд загружали газообразный хлористый водород в течение 15 минут, закрывали крышкой и оставляли для перемешивания в течение ночи, нагревая при этом до комнатной температуры. Растворитель удаляли и остаток обрабатывали простым эфиром, фильтровали и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,4 г, 64,6% выход). MS (ESI) m/z 395,6 [M+1]+.
E. Гидрохлорид 6-(4-(4H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
Гидрохлорид этил 4-(2-оксо-3-(2-(пиперидин-1-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидата (0,4 г, 1,01 ммоль), муравьиный гидразид (0,183 г, 3,04 ммоль) и триэтиламин (0,42 мл, 3,04 ммоль) объединяли в метаноле (4 мл) и нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции собирали и концентрировали и полученное твердое вещество обрабатывали при помощи хлористоводородной кислоты в простом эфире, фильтровали и сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения (0,035 г, 8,1% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,64 (с, 1H), 8,50 (с, 1H), 8,20 (д, J=8,4, 2H), 8,15 (д, J=8,4, 2H), 4,34 (м, 2H), 3,76 (д, J=10,8, 2H), 3,53 (м, 2H), 2,98 (т, J=10,8, 2H), 1,86 (м, 2H), 1,70 (м, 2H), 1,5 (м, 2H); MS (ESI) m/z 391,5[М+1]+; т.пл. 194-197°C.
5.1.179 ПРИМЕР 179: СИНТЕЗ 6-(2-АМИНОБЕНЗИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-4-ИМИДАЗОЛИНО[4,5-b]ПИРАЗИН-2-ОНа
A. Дигидрохлорид 6-(2-аминобензимидазол-5-ил)-1-(циклогексилметил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-она.
трет-Бутил 2-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-5-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат (480 мг, 0,80 ммоль), 6-бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (250 мг, 0,80 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (56 мг, 0,008 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 90°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель), подвергали ультразвуковой обработке и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (11,4 мг, 3% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,52 (шир.с, 1H), 12,05 (с, 1H), 8,48 (шир.с, 2H), 7,95 (с, 1H), 7,88 (д, J=8,4, 1H), 7,43 (д, J=8,4, 1H), 3,73 (д, J=7,6, 2H), 1,93 (м, 1H), 1,68 (м, 2H), 1,28-1,23 (м, 2H), 1,18-1,16 (м, 2H), 1,02 (м, 1H), 0,89-0,85 (м, 2H); MS (ESI) m/z 364,2 [M+1]+.
5.1.180 ПРИМЕР 180: СИНТЕЗ 6-(2-(ДИМЕТИЛАМИНО)-1H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-N,N-диметил-1H-бензо[d]имидазол-2-амин.
Раствор 6-бром-2-хлор-1H-бензо[d]имидазола (0,5 г, 2,16 ммоль), диметиламина (2,0 M в метаноле, 4,3 мл, 8,6 ммоль), диизопропилэтиламина (1,50 мл, 8,60 ммоль) в н-бутаноле (5 мл) нагревали при 105°C в течение 2,5 дней. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-80% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (0,5 г, 100%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 241,3 [M+1]+.
B. трет-Бутил 6-бром-2-(диметиламино)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат.
Раствор 6-бром-N,N-диметил-1H-бензо[d]имидазол-2-амина (0,5 г, 2,08 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (0,54 г, 2,5 ммоль), триэтиламина (0,35 мл, 2,55 ммоль) и диметиламинопиридина (несколько кристаллов) в безводном тетрагидрофуране (10 мл) оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-55% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (0,32 г, 54%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 341,3 [M+1]+.
C. трет-Бутил 2-(диметиламино)-6-(триметилстаннил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат
Раствор трет-бутил 6-бром-2-(диметиламино)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилата (320 мг, 0,93 ммоль), гексаметилдиолова (0,22 мл, 1,03 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (107 мг, 0,09 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 100°C в течение 2 часов. После того как реакция завершалась, толуол удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (0-50% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (230 мг, 58%). MS (ESI) m/z 425,2 [M+1]+.
D. 6-(2-(Диметиламино)-1H-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
трет-Бутил 2-(диметиламино)-6-(триметил-станнил)-1H-бензо[d]имидазол-1-карбоксилат (230 мг, 0,54 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (170 мг, 0,54 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (38 мг, 0,05 ммоль) в ДМФА (5 мл) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов при 105°C. Продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (30-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и подвергали ультразвуковой обработке. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением указанного в заголовке соединения (5,5 мг, 2,3% выход) в виде гидрохлоридной соли. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,44 (с, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 7,95 (дд, J=8,4, 1,6, 1H), 7,46 (д, J=8,4 1Н) 3,95 (м, 2Н), 3,92 (с, 3Н), 3,90 (с, 3Н), 2,25 (м, 1Н), 1,65 (м, 2Н), 1,49-1,41 (м, 2Н), 1,27 (м, 2Н), 0,95-0,88 (м, 2Н), MS (ESI) m/z 394,2 [М+1]+.
5.1.181 ПРИМЕР 181: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-(ПИПЕРИДИН-3-ИЛМЕТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. трет-Бутил 3-((3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилат.
В герметично закрытой пробирке раствор 5-бромпиразин-2,3-диамина (1,88 г, 7,46 ммоль), трет-бутил 3-(аминометил)пиперидинкарбоксилата (2,0 г, 9,33 ммоль), диизопропилэтиламина (1,95 мл, 11,19 ммоль) в н-бутаноле (200 мл) нагревали при 120°C в течение 17 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток брали для поглощения в гексан и подвергали ультразвуковой обработке. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (1,7 г, 61%). MS (ESI) m/z 387,3 [M+1]+.
B. трет-Бутил 3-((6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат.
В герметично закрытой пробирке раствор трет-бутил 3-((3-амино-6-бромпиразин-2-иламино)метил)пиперидин-1-карбоксилата (1,7 г, 4,41 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазола (0,9 г, 5,51 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) нагревали при 110°C. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток брали для поглощения в гексан и диэтиловый эфир, подвергали ультразвуковой обработке и осадок собирали фильтрованием, промывали гексаном и сушили в вакуумной печи с получением продукта (0,59 г, 26% выход) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS (ESI) m/z 413,3,2 [M+1]+.
C. 6-(4-Гидроксифенил)-1-(пиперидин-3-илметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
трет-Бутил 3-((6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилат (0,5 г, 1,21 ммоль), 4-гидроксифенилбороновую кислоту (0,16 г, 1,21 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,1 г, 0,12 ммоль) объединяли в ДМФА (30 мл). Добавляли фосфат калия (1,02 г, 4,84 ммоль) в воде (10 мл) и реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов. Охлажденный реакционный раствор фильтровали через целит и фильтровальную лепешку промывали этилацетатом. Фильтрат и этилацетатную промывку объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Соединение очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и подвергали ультразвуковой обработке. Эту процедуру повторяли два раза. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества, 99,2% чистоты (10,1 мг, 2,2%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,33 (с, 1H), 7,85 (д, J=8,4, 2H), 6,86 (д, J=8,4, 2H), 3,99 (м, 2H), 3,43-3,40 (м, 1H), 2,92-2,86 (м, 2H), 2,01-1,96 (м, 2H), 1,47-1,27 (м, 3H), 0,95-0,88 (м, 1H); MS (ESI) m/z 326,1 [М+1]+.
5.1.182 ПРИМЕР 182: СИНТЕЗ 6-(4-(5-ОКСОПИРРОЛИДИН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 7a-(4-Бромфенил)-3-фенилтетрагидропирролo[2,l-b]оксазол-5(6H)-он.
Рацемический фенилглицинол (6,40 г, 46,7 ммоль), 4-(4-бромфенил)-4-оксобутановую кислоту (12,0 г, 46,7 ммоль) и толуол (50 мл) объединяли в 100-мл круглодонной колбе со стержневой мешалкой, интенсивно перемешивали и нагревали при 120°C с использованием ловушки Дина-Старка и обратного холодильника в атмосфере азота в течение 16 часов. Флэш-хроматография (15-30-50% этилацетата в гексане) давала желаемый продукт в виде белого твердого вещества (12,77 г, 76%). Rf= 0,23 (30% этилацетата в гексане); 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,51-7,56 (м, 2H), 7,42-7,47 (м, 2H), 7,15-7,26 (м, 3H), 7,05-7,10 (м, 2H), 5,06 (т, J=8,20, 1H), 4,78-4,84 (м, 1H), 3,63 (т, J=8,79, 1H), 2,98-3,10 (м, 1H), 2,51-2,59 (м, 2H), 2,17-2,27 (м, 1H); MS (ESI) m/z 359[М+1]+.
B. 5-(4-Бромфенил)пирролидин-2-он.
7a-(4-Бромфенил)-3-фенилтетрагидропирролo[2,1-b]оксазол-5(6H)-он (8,61 г, 24,0 ммоль) растворяли в дихлорметане (120 мл) при перемешивании в атмосфере азота и охлаждали до -75°C. Добавляли тетрахлорид титана (3,95 мл, 36,1 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 5 минут при -75°C. Добавляли триэтилсилан (5,76 мл, 36,1 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 3 часов, при этом медленно нагревая до 10°C. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония для гашения реакции. Полученную смесь разбавляли дихлорметаном и интенсивно перемешивали в течение 10 минут. Смесь фильтровали через целит для удаления белых солей и фильтровальную лепешку промывали дихлорметаном. Слои фильтрата разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали на роторном испарителе и сушили в вакууме с получением желтого масла, которое использовали на следующей стадии без очистки. Полученное желтое масло растворяли в тетрагидрофуране (120 мл) и охлаждали до 0°C при перемешивании в атмосфере азота. Добавляли тионилхлорид (3,50 мл, 48,1 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут, при этом медленно нагревая до комнатной температуры. Добавляли дополнительное количество тионилхлорида (1 мл, 13,7 ммоль) и полученную смесь перемешивали еще в течение 1 часа. Все летучие вещества удаляли на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в этаноле (80 мл) при комнатной температуре при перемешивании в атмосфере азота. Добавляли этоксид натрия (45 мл 21% мас. раствора в этаноле, 120 ммоль) и полученную мутную смесь перемешивали в течение 40 часов при комнатной температуре. Все летучие вещества удаляли на роторном испарителе. Остаток обрабатывали при помощи дихлорметана (100 мл) и 1 M бисульфата натрия в воде (200 мл). Полученную смесь встряхивали в делительной воронке с получением двух прозрачных слоев. Слои разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в тетрагидрофуране (175 мл) при перемешивании при 70°C. Добавляли 1 M хлористоводородной кислоты в воде (48 мл) и полученную смесь нагревали при 70°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 1,75 часов. Тетрагидрофуран удаляли на роторном испарителе. Добавляли твердый бикарбонат натрия (6,10 г) с последующим добавлением дополнительного количества воды и дихлорметана. После того как вся кислота была нейтрализована, смесь встряхивали в делительной воронке и слои разделяли. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали на роторном испарителе почти досуха (твердые частицы осаждались). Полученную смесь разбавляли гексаном и твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом. Твердые вещества промывали три раза гексаном и сушили в вакууме с получением желаемого продукта (4,74 г, 82%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,11 (с, 1H), 7,52-7,58 (м, 2H), 7,23-7,30 (м, 2H), 4,65 (т, J=7,03, 1Н), 2,39-2,49 (м, 1H), 2,22 (т, J=8,00, 2H), 1,71 (м, 1H); MS (ESI) m/z 241 [М+1]+.
C. 6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (9,79 г, 38,7 ммоль) растворяли в диметилсульфоксиде (12 мл) при перемешивании в 150-мл герметично закрываемом сосуде. Добавляли диизопропилэтиламин (13,5 мл, 77,4 ммоль) с последующим добавлением 2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этанамина (5,00 г, 38,7 ммоль). Сосуд продували азотом для вытеснения воздуха и герметично закрывали. Полученную реакционную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в течение 16 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (9,41 г, 58,0 ммоль) и полученную смесь нагревали при 70°C. Сосуд продували азотом для вытеснения воздуха и герметично закрывали. Полученную реакционную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 70°C в течение 3 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли дополнительное количество 1,1'-карбонилдиимидазола (3,14 г, 19,4 ммоль) и полученную смесь нагревали при 70°C в течение 3,5 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли этилацетатом и выливали в делительную воронку, содержащую воду и 50% этилацетата в гексане. Происходило образование твердых частиц, при этом делительную воронку встряхивали. Твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали три раза водой и два раза простым этиловым эфиром и сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (5,57 г, 44%) в виде коричневато-серого твердого вещества. Вторую партию твердых частиц собирали из фильтрата с получением желаемого продукта (1,74 г, 14%) в виде коричневато-серого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,20 (шир., с, 1H), 8,03 (с, 1H), 3,82 (т, J=7,03, 4H), 3,23 (тд, J=1,62, 1,76, 2H), 1,58-1,70 (м, 4H), 1,42-1,55 (м, 1H), 1,10-1,23 (м, 2H); MS (ESI) m/z 327 [М+1]+.
D. 1-(2-(Тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (1,00 г, 3,06 ммоль), гексаметилдиолово (1,20 г, 3,67 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,71 г, 0,61 ммоль) и 1,4-диоксан (10 мл) объединяли в 150-мл герметично закрываемом сосуде со стержневой мешалкой. Сосуд продували азотом для вытеснения воздуха и герметично закрывали. Полученную реакционную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в течение 5 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит. Фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали на роторном испарителе. Флэш-хроматография (30-60% этилацетата в гексане) давала желаемый продукт (783 мг, 62%) в виде желтого воскообразного твердого вещества. Rf=0,20 (50% этилацетата/гексан); 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,84 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 3,87 (т, J=6,64, 2H), 3,80 (дд, J=11,32, 3,12, 2H), 3,18 (т, J=10,93, 2H), 1,60-1,73 (м, 4H), 1,33-1,46 (м, 1H), 1,08-1,23 (м, 2H), 0,31 (с, 9H); MS (ESI) m/z 413[М+1]+.
E. 6-(4-(5-Оксопирролидин-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-(4-Бромфенил)пирролидин-2-он (220 мг, 0,916 ммоль), 1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (396 мг, 0,962 ммоль), трис(дибензилидинацетон)дипалладий(0) (84 мг, 0,092 ммоль), три-o-толилфосфин (56 мг, 0,183 ммоль), триэтиламин (0,38 мл, 2,75 ммоль) и N,N-диметилформамид (2,5 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде со стержневой мешалкой. Воздух из сосуда удаляли и замещали три раза азотом. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 2,5 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, изократн.). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и ацетонитрил удаляли на роторном испарителе. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия для нейтрализации полученной смеси и затем экстрагировали дихлорметаном (5×20 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали на роторном испарителе почти досуха (твердые частицы осаждались). Остаточный растворитель удаляли при помощи пипетки. Оставшиеся твердые частицы промывали два раза простым этиловым эфиром и сушили в вакууме при 5°C с получением желаемого продукта (68 мг, 18%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,05 (шир., с, 1H), 8,49 (с, 1H), 8,15 (с, 1Н), 8,00 (д, J=8,20, 2H), 7,41 (д, J=8,20, 2H), 4,72 (т, J=7,03, 1H), 3,93 (т, J=6,83, 2H), 3,82 (дд, J=10,93, 3,12, 2H), 3,21 (т, J=11,13, 2H), 2,44-2,55 (м, 1H), 2,26 (т, J=8,00, 2H), 1,65-1,84 (м, 5H), 1,44-1,57 (м, 1H), 1,20 (кв.д, J=12,10, 4,30, 2H); MS (ESI) m/z 408 [М+1]+.
5.1.183 ПРИМЕР 183: СИНТЕЗ 6-(4-(4Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-МЕТИЛ-2-МОРФОЛИНOПРОПИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-N2-(2-метил-2-морфолинoпропил)пиразин-2,3-диамин.
В сосуд из боросиликатного стекла с толстыми стенками (5 мл) добавляли 2-амино-3,5-дибромпиразин (559 мг, 2,21 ммоль), 2-метил-2-морфолинoпропан-1-амин (350 мг, 2,212 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,773 мл, 4,42 ммоль), в этаноле. Раствор затем нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 140°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-15% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (555 мг, 76%) в виде бледного желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 7,16 (с, 1H), 3,72-3,63 (м, 4H), 3,39 (с, 2H), 2,62 (шир. с, 4H), 1,12 (с, 6H); MS (ESI) m/z 330,1 [М+1]+.
B. 6-Бром-1-(2-метил-2-морфолинoпропил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он.
Раствор фосгена в толуоле (20%, 2,35 мл, 4,45 ммоль) добавляли к 6-бром-N2-(2-метил-2-морфолинoпропил)пиразин-2,3-диамину (550 мг, 1,67 ммоль) в тетрагидрофуране (16,7 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт перекристаллизовывали из горячего метанола с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (244 мг, 41%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,20 (с, 1H), 8,03 (с, 1H), 3,76 (с, 2H), 3,51 (т, J=4,30, 4H), 2,64-2,53 (м, 4H), 1,01 (с, 6H); MS (ESI) m/z 356,0 [М+1]+.
C. 6-(4-(4H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-метил-2-морфолинопропил)-lН-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он.
6-Бром-1-(2-метил-2-морфолинoпропил)-lН-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (235 мг, 0,660 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (178 мг, 0,792 ммоль), карбонат натрия (210 мг, 1,98 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (26,9 мг, 0,033 ммоль) добавляли к диоксану (5,5 мл) и воде (0,5 мл) в сосуде из боросиликатного стекла с толстыми стенками (20 мл). Раствор затем нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 90 минут. Реакционную смесь фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C. Продукт выделяли из колонки с использованием 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме с получением продукта в виде белого твердого вещества (6,8 мг, 2,5%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,08 (шир. с, 1H), 8,59 (с, 1Н), 8,17-8,10 (м, 4H), 3,89 (с, 2H), 3,46 (шир. с, 4H), 2,66 (шир. с, 4H), 1,10 (с, 6H); MS (ESI) m/z 421,5 [М+1]+.
5.1.184 ПРИМЕР 184: СИНТЕЗ 6-(4-(4Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(1-МОРФОЛИНOПРОПАН-2-ИЛ)-lН-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3Н)-ОНа
A. 6-Бром-N2-(1-морфолинoпропан-2-ил)пиразин-2,3-диамин.
В сосуд из боросиликатного стекла с толстыми стенками (5 мл) добавляли 2-амино-3,5-дибромпиразин (789 мг, 3,12 ммоль), 1-морфолинoпропан-2-амин (450 мг, 3,12 ммоль) и диизопропилэтиламин (1,09 мл, 6,24 ммоль), в этаноле. Раствор затем нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 140°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи хроматографии Biotage (0-15% метанола в дихлорметан) с получением желаемого продукта (601 мг, 61%) в виде бледного желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 7,17 (с, 1H), 4,35 (шир. с, 1H), 3,71 (шир. с, 4H), 2,67 (шир. с, 6H), 1,26 (д, J=6,64, 3H); MS (ESI) m/z 316,0 [М+1]+.
B. 6-Бром-1-(1-морфолинопропан-2-ил)-lН-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он.
Раствор фосгена в толуоле (20%, 1,64 мл, 3,10 ммоль) добавляли к 6-бром-N2-(1-морфолинoпропан-2-ил)пиразин-2,3-диамину (600 мг, 1,90 ммоль) в ТГФ (19 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт перекристаллизовывали из горячего метанола с получением рыжевато-коричневого твердого вещества (324 мг, 50%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,35 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 4,99-4,82 (м, 1H), 4,11-3,32 (м, 8H), 3,25-3,01 (м, 2H), 1,53 (д, J=7,03, 3H); MS (ESI) m/z 342,0 [М+1]+.
C. 6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(1-морфолинoпропан-2-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он.
6-Бром-1-(1-морфолинoпропан-2-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он (315 мг, 0,921 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (249 мг, 1,105 ммоль), карбонат натрия (293 мг, 2,76 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (37,6 мг, 0,046 ммоль) добавляли к диоксану (7,6 мл) и воде (0,5 мл) в сосуде из боросиликатного стекла с толстыми стенками (20 мл). Раствор затем нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 60 минут. Реакционную смесь фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (5-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C. Продукт выделяли из колонки с использованием 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме с получением продукта в виде белого твердого вещества (32 мг, 9%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,06 (шир. с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,46 (шир. с, 1H), 8,20-8,05 (м, 4H), 4,79-4,68 (м, 1H), 3,43-3,30 (м, 4H), 3,21-3,14 (м, 1Н), 2,60-2,50 (м, 2H), 2,26-2,21 (м, 2H), 1,57 (д, J=7,03, 3H); MS (ESI) m/z 407,0 [М+1]+.
5.1.185 ПРИМЕР 185: СИНТЕЗ 6-(4-(ПИРРОЛИДИН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(Пирролидин-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К литийалюминийгидриду (332 мг, 8,75 ммоль) в круглодонной колбе со стержневой мешалкой добавляли тетрагидрофуран (13 мл). Полученную серую смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 5 минут. Добавляли 5-(4-бромфенил)пирролидин-2-он (700 мг, 2,92 ммоль) и полученную смесь нагревали при 70°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов. Полученную смесь охлаждали до 0°C и гасили путем добавления насыщенного водного раствора сульфата натрия, медленно по каплям. Добавляли простой этиловый эфир для лучшего перемешивания и гашеную реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут при комнатной температуре. Добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,18 г, 5,41 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь фильтровали через целит и фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали на роторном испарителе. Флэш-хроматография (10-30-50% этилацетата в гексане) давала 658 мг бесцветного масла, которое представляло собой смесь продуктов. Эту смесь использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 323 мг вышеполученной смеси, 1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 182.D) (407 мг, 0,990 ммоль), трис(дибензилидинацетон)дипалладий(0) (91 мг, 0,099 ммоль), три-o-толилфосфин (60 мг, 0,198 ммоль), триэтиламин (0,41 мл, 2,97 ммоль) и N,N-диметилформамид (2,0 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде со стержневой мешалкой. Воздух из сосуда удаляли и замещали три раза азотом. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 1,5 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в этаноле (4 мл) при 80°C при перемешивании. Добавляли 6 н. раствор хлористоводородной кислоты (0,35 мл, 2,10 ммоль) и полученный прозрачный раствор нагревали при 80°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (10-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и почти все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Добавляли ацетонитрил и полученную смесь загружали на ионообменную колонку Strata от Phenomenex. Колонку промывали последовательно водой, ацетонитрилом, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли при помоши 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента, концентрировали на роторном испарителе и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (64 мг, 16%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,45 (с, 1H), 7,93 (д, J=8,20, 2H), 7,46 (д, J=8,20, 2H), 4,09 (т, J=7,61, 1H), 3,92 (т, J=6,83, 2H), 3,82 (дд, J=11,52, 2,93, 2H), 3,51 (шир., с, 2H), 3,21 (тд, J=11,71, 1,95, 2H), 3,05 (ддд, J=9,96, 7,61, 5,47,1H), 2,87-2,95 (м, 1H), 2,08-2,20 (м, 1H), 1,64-1,87 (м, 6H), 1,42-1,58 (м, 2H), 1,12-1,27 (м, 2H); MS (ESI) m/z 394 [М+1]+.
5.1.186 ПРИМЕР 186: СИНТЕЗ 6-(4-(5-ОКСОПИРРОЛИДИН-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Этил 3-(4-бромфенил)-4-нитробутаноат.
(E)этил 3-(4-бромфенил)акрилат (12,0 г, 47,0 ммоль), 1,1,3,3-тетраметилгуанидин (1,0 мл) и нитрометан (100 мл) объединяли в 250-мл круглодонной колбе со стержневой мешалкой, интенсивно перемешивали и нагревали при 50°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 36 часов. Нитрометановый растворитель удаляли на роторном испарителе. Флэш-хроматография (10-30% этилацетата/гексан) давала желаемый продукт (13,62 г, 92%) в виде бесцветного масла. Rf=0,36 (30% этилацетата/гексан); 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,49-7,54 (м, 2H), 7,28-7,33 (м, 2H), 4,93-5,00 (м, 1H), 4,82-4,90 (м, 1H), 3,97 (кв.д, J=7,09, 2,15, 2H), 3,79 (тт, J=9,18, 6,05, 1Н), 2,78-2,85 (м, 1H), 2,65-2,74 (м, 1H), 1,07 (т, J=7,03, 3H); MS (ESI) m/z 317[М+1]+.
B. 4-(4-Бромфенил)пирролидин-2-он.
Этил 3-(4-бромфенил)-4-нитробутаноат (2,02 г, 6,39 ммоль) растворяли в этаноле (80 мл) и 4 M хлористоводородной кислоты в 1,4-диоксане (16 мл, 63,9 ммоль) при перемешивании и охлаждали до 0°C в атмосфере азота. Добавляли цинковую пыль (4,18 г, 63,9 ммоль) медленно по порциям в течение 10 минут. Можно было наблюдать выделение газа. Через 30 минут охлаждающую баню удаляли и серую реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Полученную смесь фильтровали через целит и фильтровальную лепешку тщательно промывали метанолом. Фильтрат концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в этаноле (50 мл) при перемешивании при комнатной температуре. Добавляли этоксид натрия (24 мл раствора 2,68 M в этаноле, 63,9 ммоль) и полученную мутную смесь (pH щелочной) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную мутную смесь выливали в делительную воронку, содержащую дихлорметан (300 мл) и 1 M бисульфата натрия (80 мл). Смесь встряхивали и слои разделяли. Водный слой экстрагировали один раз дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в ацетонитриле и добавляли воду, чтобы вызвать осаждение твердых частиц. Твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали два раза водой и два раза простым эфиром и сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (929 мг, 61%) в виде оранжеватого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,73 (шир., с, 1H), 7,49-7,54 (м, 2H), 7,25-7,31 (м, 2H), 3,55-3,65 (м, 2H), 3,12-3,20 (м, 1Н), 2,46-2,55 (м, 1H), 2,23-2,32 (м, 1H); MS (ESI) m/z 241 [М+1]+.
C. 6-(4-(5-Оксопирролидин-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
4-(4-Бромфенил)пирролидин-2-он (215 мг, 0,894 ммоль), 1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 182.D) (386 мг, 0,939 ммоль), трис(дибензилидин-ацетон)дипалладий(0) (82 мг, 0,089 ммоль), три-о-толилфосфин (54 мг, 0,179 ммоль), триэтиламин (0,37 мл, 2,68 ммоль) и N,N-диметилформамид (2,5 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде со стержневой мешалкой. Воздух из сосуда удаляли и замещали три раза азотом. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 2,5 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и ацетонитрил удаляли на роторном испарителе. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия для нейтрализации полученной смеси и затем экстрагировали дихлорметаном (4×20 мл). Объединенные органические слои концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в горячем диметилсульфоксиде и добавляли метанол, чтобы вызвать осаждение твердых частиц. Твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом и промывали последовательно метанолом, ацетонитрилом и этиловым эфиром. Эту процедуру повторяли и твердые вещества сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (60 мг, 16%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,03 (шир., с, 1H), 8,48 (с, 1H), 7,97 (д, J=8,59, 2H), 7,75 (с, 1H), 7,43 (д, J=8,59, 2H), 3,92 (т, J=6,83, 2H), 3,82 (дд, J=11,32, 2,73, 2H), 3,61-3,72 (м, 2H), 3,16-3,27 (м, 3H), 2,52-2,58 (м, 1H), 2,29-2,40 (м, 1H), 1,66-1,76 (м, 4H), 1,44-1,57 (м, 1H), 1,14-1,26 (м, 2H); MS (ESI) m/z 408 [М+1]+.
5.1.187 ПРИМЕР 187: СИНТЕЗ 6-(4-(ПИРРОЛИДИН-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(Пирролидин-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
К литийалюминийгидриду (190 мг, 5,00 ммоль) в круглодонной колбе со стержневой мешалкой добавляли тетрагидрофуран (7 мл). Полученную серую смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 5 минут. Добавляли 4-(4-бромфенил)пирролидин-2-он (400 мг, 1,67 ммоль) и полученную смесь нагревали при 65°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 1,25 часов. Полученную смесь охлаждали до 0°C и гасили путем медленного добавления по каплям насыщенного водного раствора сульфата натрия. Добавляли простой этиловый эфир для лучшего перемешивания и полученную гашеную реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут при комнатной температуре. Добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (727 мг, 3,33 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 35 минут при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь фильтровали через целит и фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали на роторном испарителе. Флэш-хроматография (5-10-30% этилацетата в гексане) давала 204 мг бесцветного масла, которое представляло собой смесь продуктов. Эту смесь объединяли с 1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-оном (см. Пример 182.D) (205 мг, 0,499 ммоль), трис(дибензилидинацетон)дипалладием(0) (46 мг, 0,050 ммоль), три-о-толилфосфином (30 мг, 0,100 ммоль), триэтиламином (0,21 мл, 1,50 ммоль) и N,N-диметилформамидом (1,5 мл), в сцинтилляционном сосуде со стержневой мешалкой. Воздух из сосуда удаляли и замещали три раза азотом. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 1 часа и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в этаноле (4 мл) при 80°C при перемешивании. Добавляли 6 н. раствор хлористоводородной кислоты (0,42 мл, 2,49 ммоль) и полученный прозрачный раствор нагревали при 80°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 70 минут. Реакционную смесь фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (10-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и почти все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Добавляли ацетонитрил и полученную смесь загружали на ионообменную колонку Strata от Phenomenex. Колонку промывали последовательно водой, ацетонитрилом, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли при помоши 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром до получения тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (41 мг, 6%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСО-d6) δ 8,41 (с, 1H), 7,92 (д, J=8,20, 2H), 7,37 (д, J=8,20, 2H), 3,90 (т, J=6,83, 2H), 3,82 (дд, J=1,32, 2,73, 2H), 3,59 (шир., с, 1H), 3,15-3,31 (м, 5H), 3,02-3,10 (м, 1H), 2,96 (ддд, J=10,74, 7,81, 7,61, 1H), 2,72 (дд, J=10,15, 8,20, 1H), 2,13-2,24 (м, 1H), 1,65-1,81 (м, 5H), 1,42-1,55 (м, 1H), 1,13-1,26 (м, 2H); MS (ESI) m/z 394 [М+1]+.
5.1.188 ПРИМЕР 188: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(ПИРИМИДИН-5-ИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 1-(Циклогексилметил)-6-(пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,324 г, 1,041 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,085 г, 0,104 ммоль), фосфат калия (0,884 г, 4,16 ммоль) и пиримидин-5-илбороновую кислоту (0,181 г, 1,458 ммоль) объединяли вместе в ДМФА:воде (9:1 об/об, 5 мл) и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали 5% раствором хлористоводородной кислоты (водн., 50 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (50% гексана в этилацетате). В результате концентрирования желаемой фракции получали продукт (0,014 г, 4%) с чистотой 95,1% по данным ВЭЖХ. 1H ЯМР (400 МГц, ДMСО-d6) δ 12,23 (с, 1H), 9,41 (с, 2H), 9,22 (с, 1H), 8,67 (с, 1H), 3,74 (д, J=7,2, 2H), 1,91 (м, 1H), 1,66 (м, 5H), 1,18 (м, 3H), 1,09 (м, 2H); MS (ESI) m/z 311,3 [М+1]+; т.пл. >260°C.
5.1.189 ПРИМЕР 189: СИНТЕЗ 6-(6-ФТОРПИРИДИН-3-ил)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ил)МЕТИЛ)-1H-имидазо[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-он
A. 6-(6-Фторпиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,324 г, 1,041 ммоль), 6-трифторпиридин-3-илбороновую кислоту (0,204 г, 1,449 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (0,085 г, 0,104 ммоль) и фосфат калия (0,878 г, 4,14 ммоль) объединяли вместе в ДМФА:воде (9:1 об/об, 6 мл) и подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B2. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом (60 мл) и промывали 5% раствором хлористоводородной кислоты (водн., 50 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали в порошок с метанолом и диэтиловым эфиром (5 мл), фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0,26 г, 76%) с чистотой 91,7% по данным ВЭЖХ. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,16 (с, 1H), 8,90 (д, J=2,4, 1H), 8,59 (м, 2H), 7,33 (дд, J=8,4, 2,8, 1H), 3,84 (м, 1H), 3,78 (д, J=7,6, 2H), 3,26 (д, J=9,2, 1H), 2,13 (м, 1H), 1,56 (д, J=10,8, 2H), 1,33 (м, 2H); MS (ESI) m/z 330,3 [М+1]+; т.пл. 220-222°C.
5.1.190 ПРИМЕР 190: СИНТЕЗ 6-(6-АМИНОПИРИДИН-3-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(6-Аминопиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В сосуде высокого давления Парра 6-(6-фторпиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 189.A) (0,108 г, 0,328 ммоль) суспендировали в 7 н. растворе аммиака в метаноле (10 мл). Сосуд герметично закрывали и нагревали до 160°C в течение 24 часов. Смесь концентрировали и остаток подвергали полупрепаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ (5-40% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции объединяли и подвергали процедуре ионообмена для выделения продукта в виде свободного основания (50 мг, 47%) с чистотой 99,3% по данным ВЭЖХ. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,85 (шир. с, 1H), 8,59 (д, J=3,2, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,00 (дд, J=12,0, 3,2, 1H), 6,54 (д, J=11,6, 1H), 6,23 (с, 2H), 3,84 (дд, J=12,4, 3,2, 2H), 3,76 (д, J=9,6, 2H), 2,11 (м, 1H), 1,55 (д, J=14,0, 2H), 1,31 (дкв., J=15,6, 5,6, 2H); MS (ESI) m/z 327,1 [М+1]+; т.пл. >260°C.
5.1.191 ПРИМЕР 191: СИНТЕЗ 6-(6-(МЕТИЛАМИНО)ПИРИДИН-3-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(6-(Метиламино)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В сосуде высокого давления Парра 6-(6-фторпиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 189.A) (0,102 г, 0,310 ммоль), метанаминийхлорид (0,627 г, 9,29 ммоль) и триэтиламин (1,254 г, 12,39 ммоль) объединяли в тетрагидрофуране (10 мл). Сосуд герметично закрывали и нагревали до 160°C в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток очищали при помощи препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ (0-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут) и затем полупрепаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ (5-45% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции подвергали процедуре ионообмена для выделения указанного в заголовке соединения в виде свободного основания (8 мг, 8%) с чистотой 97,7% по данным ВЭЖХ. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,67 (д, J=2,8, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,00 (дд, J=8,8, 2,8, 1H), 6,79 (дд, J=9,6, 4,8, 1H), 6,54 (дд, J=9,2, 0,8, 1Н), 3,83 (д, J=12,0, 2H), 3,75 (д, J=7,2, 2H), 3,25 (т, J=10,8, 2H), 2,82 (д, J=4,8, 3H), 2,13 (м, 1H), 1,55 (д, J=10,8, 2H), 1,31 (д.кв., J=11,2, 4,4, 2H); MS (ESI) m/z 341,5 [М+d]+; т.пл. >260°C.
5.1.192 ПРИМЕР 192: СИНТЕЗ N-(4-(2-ОКСО-3-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-5-ИЛ)ФЕНИЛ)МЕТАНСУЛЬФОНАМИДА
A. N-(4-(2-Оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)метансульфонамид.
Раствор 6-бром-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (см. Пример 31.B) (0,125 г, 0,393 ммоль), 4-(метилсульфонамидо)фенилбороновой кислоты (0,084 г, 0,471 ммоль), фосфата калия (0,333 г, 1,57 ммоль) и комплекса [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с метиленхлоридом (0,032 г, 0,0393 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) и воде (0,6 мл) нагревали при 100°C с использованием орбитальной нагревательной пластины. Реакционную смесь фильтровали через целит и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила в воде) с получением указанного в заголовке соединения с чистотой 96,3% (40 мг, 25%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,09 (с, 1H), 9,91 (с, 1H), 8,46 (с, 1H), 7,97 (д, J=8,6, 2H), 7,50 (д, J=7,0, 2H), 7,23-7,38 (м, 5H), 5,72 (кв., J=7,3, 1H), 3,04 (с, 3H), 2,01 (д, J=7,0, 3H); MS (ESI) m/z 410,1 [М+1]+.
5.1.193 ПРИМЕР 193: СИНТЕЗ 99-ФЕНИЛ-2-(ХИНОЛИН-5-ИЛ)-7H-ПУРИН-8(9H)-ОНа
A. 2-Бром-N4-фенилпиримидин-4,5-диамин.
Анилин (0,566 г, 5,97 ммоль) добавляли к 2-амино-3,5-дибромпиразину (1,0 г, 3,98 ммоль) в н-бутаноле (10 мл) и полученную смесь нагревали при 220°C в течение 4500 сек в микроволновом реакторе Emrys Optimizer. Реакционную смесь конденсировали до получения коричневого масла. Очистка с использованием хроматографии Biotage (10-60% этилацетата в гексане) давала (0,599 г, 5,62 ммоль, 56%) 2-бром-N4-фенилпиримидин-4,5-диамина. MS (ESI) m/z 265 [M]+, 267 [M+2]+.
B. N4-Фенил-2-(хинолин-5-ил)пиримидин-4,5-диамин.
2-Бром-N4-фенилпиримидин-4,5-диамин (0,599 г, 2,26 ммоль), хинолин-5-бороновую кислоту (0,469 г, 2,71 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,261 г, 0,183 ммоль), карбонат калия (1,24 г, 9,04 ммоль), воду (6 мл) и диметилформамид (25 мл) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой B. Неочищенное вещество подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле Biotage (0-8% метанола в дихлорметане) с получением указанного в заголовке соединения (0,140 г, 19,8% выход). MS (ESI) m/z 314,4 [M+1]+.
C. 9-Фенил-2-(хинолин-5-ил)-7H-пурин-8(9H)-он.
N4-Фенил-2-(хинолин-5-ил)пиримидин-4,5-диамин (0,140 г, 0,447 ммоль) и мочевину (0,66 г, 1,11 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с Общей Процедурой D2. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием препаративной ВЭЖХ (10-60% ацетонитрила в воде) с получением указанного в заголовке соединения (0,41 г, 15% выход). 1 н. ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,89 (м, J=7,8, 1H), 8,44 (д, J=7,8, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,13 (д, J=7,8, 1H), 7,87 (т, J=8,4, 1Н), 7,77 (д, J=6,9, 2H), 7,55 (д, J=6,3, 1H), 7,45 (м, 5H); MS (ESI) m/z 340,0 [М+1]+.
5.1.194 ПРИМЕР 194: СИНТЕЗ 6-(4-(5-МЕТИЛ-1Н-
1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ил)ФЕНИЛ)-1-(2-(2-ОКСОПИРРОЛИДИН-1-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Гидрохлорид 4-(5-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ил)фенилбороновой кислоты.
4-Цианофенилбороновую кислоту (0,91 г, 6,2 ммоль) растворяли в абсолютном этаноле (100 мл) и охлаждали на ледяной бане. Осуществляли барботирование реакционной смеси газообразным хлористым водородом в течение 15 минут и оставляли для перемешивания в течение 3 дней. Раствор концентрировали и затем промывали метанолом. Эту процедуру повторяли четыре раза для удаления всех следов хлористого водорода с получением белого твердого вещества. К твердому веществу добавляли 2-пропанол (10 мл), триэтиламин (0,5 мл) и ацетогидразин (0,69 г, 9,3 ммоль). Смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer до 100°C в течение 10 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем очищали на колонке с силикагелем (0-100% этилацетата в гексане, с последующим добавлением 0-40% метанола в этилацетате) с получением прозрачного масла. Полученное масло обрабатывали 4 н. раствором хлористого водорода в диоксане. Раствор концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Соль растирали в порошок с 10% раствором метанола в диэтиловом эфире с получением белого твердого вещества (0,8 г, 54% выход). MS (ESI) m/z 204,1 [M+1]+.
B. 6-(4-(5-Метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 162.A) (203 мг, 0,62 ммоль), гидрохлорид 4-(5-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ил)фенилбороновой кислоты (152 мг, 0,75 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (25 мг, 0,03 ммоль), 1 M карбоната натрия (1,9 мл, 1,9 ммоль) и диоксан (3 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 150°C в течение 1 часа. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции очищали на экстракционной колонке с твердой фазой Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA и затем выделяли из колонки при помощи раствора 2 M аммиака в метаноле. Раствор концентрировали и затем растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (16 мг, 6% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,56 (с, 1H), 8,16 (м, 2H), 8,08 (м, 2H), 4,05 (м, 2H), 3,57 (м, 2H), 3,51 (т, J=6,8, 2H), 2,41 (шир., с, 3H), 1,86 (м, 2H), 1,75 (т, J=7,4, 2H); MS (ESI) m/z 391,5 [М+1]+; т.пл. 315-316°C.
5.1.195 ПРИМЕР 195: СИНТЕЗ 6-(3-МЕТИЛ-4-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-Бром-2-метилбензамид.
Раствор 4-бром-2-метилбензонитрила (1,0 г, 5,1 ммоль), трифторуксусной кислоты (4,0 мл) и серной кислоты (1,0 мл) объединяли и нагревали до 65°C в течение 18 часов. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, и происходило осаждение продукта, который собирали фильтрованием. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,96 г, 88%). MS (ESI) m/z 420,5 [M+1]+.
B. (Z)-4-Бром-N-((диметиламино)метилен)-2-метилбензамид.
Раствор 4-бром-2-метилбензамида (0,961 г, 4,49 ммоль), 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамина (10,0 мл) объединяли и нагревали до 85°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (0,500 г). MS (ESI) m/z 270 [M+1]+.
C. 3-(4-Бром-2-метилфенил)-1H-1,2,4-триазол.
(Z)-4-Бром-N-((диметиламино)метилен)-2-метилбензамид (0,500 г, 1,86 ммоль) добавляли к уксусной кислоте (20,0 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли по каплям гидразин (2,0 мл, 0,64 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры при перемешивании в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и разбавляли водой (20 мл). Образовавшийся осадок собирали фильтрованием и сушили в высоком вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (0,338 г). MS (ESI) m/z 239 [M+1]+.
D. 3-(4-Бром-2-Метилфенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол.
3-(4-Бром-2-метилфенил)-1H-1,2,4-триазол (0,338 г, 1,42 ммоль) добавляли к тетрагидрофурану (15,0 мл) с последующим добавлением 3,4-дигидро-2H-пирана (0,239 г, 2,84 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновой кислоты (0,054 г, 0,28 ммоль). Раствор нагревали до 75°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-80% гексана в этилацетате) с получением чистого продукта (0,239 г, 17%). MS (ESI) m/z 322,2 [M+1]+.
E. 3-(2-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол.
3-(4-Бром-2-метилфенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол (0,239 г, 0,742 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (0,816 г, 0,816 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,054 г, 0,07 ммоль), ацетат калия (0,218 г, 2,23 ммоль) и диметилсульфоксид (2,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали при 90°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-80% гексан в этилацетате) с получением полуочищенного продукта (0,267 г), который использовали непосредственно на следующей стадии. MS (ESI) m/z 370,3 [M+1]+.
F. 6-(3-Метил-4-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он.
3-(2-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол (0,267 г, 0,723 ммоль), 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,226 г, 0,722 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,059 г, 0,07 ммоль), фосфат калия (0,153 г, 0,722 ммоль), диметилформамид (5,0 мл) и воду (2,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали при 90°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут) с получением полуочищенного продукта (0,134 г), который использовали непосредственно на следующей стадии. MS (ESI) m/z 476,5 [M+1]+.
G. 6-(3-Метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он.
6-(3-Метил-4-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он (0,134 г, 0,281 ммоль) добавляли к раствору 6,0 M хлористого водорода в диоксане (4,0 мл) и перемешивали при 25°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония, концентрировали, разбавляли водой (20,0 мл) и желаемый продукт собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,9% (0,040 г, 36%). 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,47 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,92-7,97 (м, 1H), 7,77 (д, J=8,20, 1H), 4,61 (шир., с, 2H), 3,88-4,03 (м, 4H), 3,40 (тд, J=11,62, 2,15, 2H), 2,60 (с, 3H), 2,19-2,36 (м, 1H), 1,66 (дд, J=12,49, 1,95, 2H), 1,39-1,55 (м, 2H); MS (ESI) m/z 408,5 [М+1]+; т.пл. 271-274°C.
5.1.196 Пример 196: СИНТЕЗ 6-(4-(1H-ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(1H-имидазол-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Этил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат (см. Пример 195.B) (0,300 г, 0,76 ммоль), 2,2-диэтоксиэтанамин (100 мг, 0,76 ммоль) и ледяную уксусную кислоту (0,114 мл, 1,9 ммоль) тщательно смешивали в герметично закрытой пробирке и полученную реакционную смесь перемешивали при 120°C в течение 16 часов. Полученное вещество растворяли в метаноле (10 мл) и черный нерастворимый остаток отфильтровывали. Фильтрат очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (15-40% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром в гексане до получения тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (0,093 г, 30%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,61 (шир., с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,07-8,18 (м, 2H), 7,94-8,08 (м, 2H), 7,29 (шир., с, 1H), 7,07 (шир., с, 1H), 3,95 (т, J=6,64, 2H), 3,83 (дд, J=11,13, 3,32, 2H), 3,22 (т, J=10,93, 3H), 1,63-1,84 (м, 4H), 1,41-1,62 (м, 1H), 1,09-1,35 (м,2H); MS (ESI) m/z 391,2 [М+1]+; т.пл. 293-295°C.
5.1.197 ПРИМЕР 197: СИНТЕЗ 6-(4-(5-(АМИНОМЕТИЛ)-1H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(4-(5-(Гидроксиметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Этил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат (см. Пример 195.B) (0,250 г, 0,63 ммоль) в этаноле (20 мл) обрабатывали при помощи 2-гидроксиацетогидразина (0,17 г, 1,9 ммоль) и триэтиламина (0,26 мл, 1,9 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали в герметично закрытой пробирке при 110°C в течение 16 часов. Охлажденный реакционный растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (15-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром в гексане до получения тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (0,130 г, 49%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 422,3 [M+1]+.
B. 6-(4-(5-(Хлорметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-(4-(5-(Гидроксиметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,130 г, 0,31 ммоль) в тионилхлориде (2 мл) перемешивали в герметично закрытой пробирке при 80°C в течение 1 часа. Охлажденный реакционный растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (0,110 г, 81%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 440,0 [M+1]+.
C. 6-(4-(5-(Аминометил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-(4-(5-(Хлорметил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,110 г, 0,250 ммоль) в этаноле (20 мл) обрабатывали при помощи гидроксида аммония (10 мл, 250 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали в герметично закрытой пробирке при 25°C в течение 16 часов. Реакционный растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (15-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром в гексане до получения тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (0,074 г, 70,4%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,56 (с, 1H), 7,93-8,25 (м, 4H), 3,87-4,04 (м, 4H), 3,83 (дд, J=11,32, 2,73, 2H), 3,22 (т, J=10,74, 2H), 1,63-1,81 (м, 4H), 1,52 (ддд, 1H), 1,04-1,34 (м, 2H); MS (ESI) m/z 421,2 [М+1]+; т.пл. 258-260°C.
5.1.198 ПРИМЕР 198: СИНТЕЗ 6-(1H-БЕНЗО[D]ИМИДАЗОЛ-5-ИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(1H-Бензо[d]имидазол-5-ил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
5-Бром-1H-бензо[d]имидазол (0,100 г, 0,487 ммоль), 1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-6-(триметилстаннил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 182.D) (0,200 г, 0,487 ммоль), трис(дибензилидинацетон)дипалладий(0) (0,045 г, 0,049 ммоль), три-o-толилфосфин (30 мг, 0,100 ммоль), триэтиламин (0,200 мл, 1,5 ммоль) и N,N-диметилформамид (6 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде со стержневой мешалкой. Воздух из сосуда удаляли и замещали три раза азотом. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 100°C в атмосфере азота в течение 3 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этилацетатом в гексане до получения тонкодисперсного порошка и твердые вещества сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (20 мг, 15%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,53 (с, 1H), 8,53 (с, 1Н), 8,28 (с, 1H), 8,17 (шир., с, 1H), 7,88 (шир., с, 1H), 7,70 (шир., с, 1H), 3,96 (т, J=6,83, 2H), 3,84 (дд, J=11,32, 2,73, 2H), 3,12-3,28 (м, 3H), 1,74 (кв., J=7,16, 4H), 1,52 (м, 1H), 1,09-1,35 (м, 3H); MS (ESI) m/z 365,1 [М+1]+; т.пл. 264-265°C.
5.1.199 ПРИМЕР 199: СИНТЕЗ 6-(2-АМИНОПИРИМИДИН-5-ИЛ)-1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(2-Аминопиримидин-5-ил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
1-(Циклогексилметил)-6-(2-(метилсульфонил)пиримидин-5-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 170.B) (0,5 г, 1,29 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (3 мл). Раствор охлаждали на ледяной бане и затем продували аммиаком (газ) в течение 1 минуты. Смесь перемешивали при 70°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали при помощи препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 7 н. раствором аммиака в метаноле (10 мл). Продукт элюировали при помощи раствора аммиака в метаноле. В результате концентрирования элюата получали продукт (30 мг, 7%, чистота 94,6% по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,96 (шир.с, 1H), 8,85 (с, 2H), 8,38 (с, 1H), 6,95 (с, 2H), 3,71 (д, J=6,5, 2H), 1,89 (м, 1H), 1,63 (м, 5H), 1,17 (м, 3H), 1,02 (м, 2H); MS (ESI) m/z 326,1 [М+1]+; т.пл. >250°C.
305.1.200 ПРИМЕР 200: СИНТЕЗ 6-(4-ГИДРОКСИФЕНИЛ)-1-((1-МЕТИЛПИПЕРИДИН-2-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-Бром-N2-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)пиразин-2,3-диамин.
В герметично закрытой колбе (1-метилпиперидин-2-ил)метанамин (1 г, 7,80 ммоль), 3,5-дибромпиразин-2-амин (1,578 г, 6,24 ммоль) и диизопропилэтиламин (1,635 мл, 9,36 ммоль) смешивали в н-бутаноле (30 мл) и полученную реакционную смесь нагревали в течение ночи при 115°C. После охлаждения летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали при помощи колоночной хроматографии Biotage (0-65% этилацетата в гексане) с получением указанного в заголовке соединения (0,485г, 1,616 ммоль, 25,9% выход). MS (ESI) m/z 301,1 [M+1]+.
B. 6-Бром-1-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Раствор 6-бром-N2-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)пиразин-2,3-диамина (0,48 г, 1,599 ммоль) и 1,1'-карбонилдиимидазола (0,324 г, 1,999 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (15 мл) нагревали в течение ночи при 115°C. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали при помощи колоночной хроматографии Biotage (0-15% метанола в дихлорметане) с получением указанного в заголовке соединения (0,48 г, 1,472 ммоль, 92% выход). MS (ESI) m/z 327,2 [M+1]+.
C. Гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она.
6-Бром-1-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (0,25 г, 0,766 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,063 г, 0,077 ммоль) объединяли в ДМФА (30,0 мл). Добавляли фосфат калия (0,65 г, 3,07 ммоль) в воде (8,0 мл) и реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов. Охлажденный реакционный раствор фильтровали через целит и фильтровальную лепешку промывали этилацетатом. Фильтрат и этилацетатную промывку объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции концентрировали, обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диэтиловом эфире (несколько капель) и подвергали ультразвуковой обработке. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением желаемого продукта (0,045 г, 0,133 ммоль, 17,30% выход) в виде гидрохлоридной соли. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,13 (с, 1H), 9,76 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,42 (с, 1H), 7,87 (д, J=8,4, 2H), 6,87 (д, J=8,4, 2H), 4,23 (дд, J=8,4 и 5,6, 2H), 4,15-4,12 (м, 1H), 2,07 (м, 1H), 1,84 (м, 1H), 1,76-1,73 (м, 2H), 1,64-1,57 (м, 2H), 1,28 (м, 3H), 0,89-0,85 (м, 2H); MS (ESI) m/z 340,1 [М+1]+.
5.1.201 ПРИМЕР 201: СИНТЕЗ 6-(2-МЕТИЛ-4-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-Бром-3-метилбензамид.
Раствор 4-бром-3-метилбензонитрила (2,0 г, 5,1 ммоль), трифторуксусной кислоты (4,0 мл) и серной кислоты (1,0 мл) объединяли и нагревали до 65°C в течение 18 часов. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, и происходило осаждение продукта, который отфильтровывали. Полученное вещество сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (2,12 г, 97%). MS (ESI) m/z 215,1 [M+1]+.
B. (Z)-4-Бром-N-((диметиламино)метилен)-3-метилбензамид.
Раствор 4-бром-3-метилбензамида (2,12 г, 9,88 ммоль) и 1,1-диметокси-N,N-диметилметанамина (10,0 мл) нагревали до 85°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (1,93 г). MS (ESI) m/z 270 [M+1]+.
C. 3-(4-Бром-3-метилфенил)-1H-1,2,4-триазол.
(Z)-4-Бром-N-((диметиламино)метилен)-3-метилбензамид (1,93 г, 7,17 ммоль) добавляли к уксусной кислоте (20,0 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли по каплям гидразин (6,0 мл, 201 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры при перемешивании в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и разбавляли водой (20 мл). Происходило осаждение продукта, который отфильтровывали, сушили в высоком вакууме и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (1,88 г). MS (ESI) m/z 239 [M+1]+.
D. 3-(4-Бром-3-метилфенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол.
3-(4-Бром-3-метилфенил)-1H-1,2,4-триазол (1,88 г, 7,90 ммоль) добавляли к тетрагидрофурану (15,0 мл) с последующим добавлением 3,4-дигидро-2H-пирана (1,33 г, 15,8 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновой кислоты (0,300 г, 1,60 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 75°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-80% гексана в этилацетате) с получением чистого продукта (0,377 г, 15%). MS (ESI) m/z 322,2 [M+1]+.
E. 3-(3-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол.
3-(4-Бром-3-метилфенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол (0,377 г, 1,17 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (0,327 г, 1,29 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,086 г, 0,12 ммоль), ацетат калия (0,345 г, 3,51 ммоль) и диметилсульфоксид (2,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали при 90°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием колоночной хроматографии Biotage (0-80% гексана в этилацетате) с получением полуочищенного продукта (0,232 г), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 370,3 [M+1]+.
F. 6-(3-Метил-4-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он.
3-(3-Метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол (0,232 г, 0,628 ммоль), 6-бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 108.B) (0,171 г, 0,523 ммоль), комплекс [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,043 г, 0,05 ммоль), фосфат калия (0,444 г, 2,09 ммоль), диметилформамид (5,0 мл) и воду (2,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали при 90°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут) с получением полуочищенного продукта (0,283 г), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 476,5 [M+1]+.
G. 6-(3-Метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он.
6-(3-Метил-4-(1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он (0,283 г, 0,578 ммоль) добавляли к 6,0 M хлористого водорода в диоксане (4,0 мл) и перемешивали при 25°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония, концентрировали, разбавляли водой (20 мл). Желаемый продукт собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 99,5% (0,061 г, 26%). 1 н. ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) δ 8,40 (шир., с, 1H), 8,07 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,94 (д, J=8,20, 1H), 7,55 (д, J=8,20, 1H), 4,04 (т, J=7,22, 2H), 3,90 (дд, J=1,32, 3,51, 2H), 3,34-3,42 (м, 3H), 2,49 (с, 3H), 1,70-1,87 (м, 4H), 1,58 (дддд, J=10,93, 7,32, 4,10, 3,81, 1H), 1,50-1,66 (м, 1H), 1,22-1,40 (м, 2 H); MS (ESI) m/z 408,5 [М+1]+; т.пл. 258-260°C.
5.1.202 ПРИМЕР 202: СИНТЕЗ 1-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-6-(6-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)ПИРИДИН-3-ИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 2-(5-Бромпиридин-2-ил)пропан-2-ол.
2,5-Дибромпиридин (1,04 г, 4,39 ммоль) растворяли в толуоле (22 мл) в 100-мл круглодонной колбе. Смесь охлаждали до -78°C. Добавляли по каплям н-бутиллитий (3,02 мл, 4,83 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 минут с последующим добавлением ацетона (2 мл). Смесь перемешивали в течение 40 минут и затем давали ей нагреться до комнатной температуры. Смесь промывали 5% раствором хлорида аммония (водн., 50 мл), водой (50 мл) и затем насыщенным солевым раствором (50 мл). Органическое вещество сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (5:1 гексан:этилацетат). В результате концентрирования желаемой фракции получали продукт (0,82 г, 86%). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,57 (дд, J=5,4, 0,6, 1H), 7,81 (дд, J=8,4, 2,4, 1H), 7,30 (дд, J=8,4, 0,6, 1H), 4,43 (с, 1H), 1,54 (с, 6H).
B. 2-(5-(Триметилстаннил)пиридин-2-ил)пропан-2-ол.
2-(5-Бромпиридин-2-ил)пропан-2-ол (0,34 г, 1,574 ммоль), 1,1,1,2,2,2-гексаметилдистаннан (0,361 мл, 1,652 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,182 г, 0,157 ммоль) объединяли в толуоле (5 мл) в 50-мл герметично закрывающейся колбе. Реакционную смесь перемешивали при 115°C в течение 1,5 часов. Смесь затем концентрировали до около 2 мл объема. Остаток очищали при помощи хроматографии Biotage (5:1 гексан:этилацетат). В результате концентрирования желаемых фракций получали указанное в заголовке соединение (0,33 г, 70%). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,57 (дд, J=5,4, 0,6, 1H), 7,81 (дд, J=8,4, 2,4, 1H), 7,30 (дд, J=5,4 0,6, 1H), 5,18 (шир.с, 1H), 1,54 (с, 6H), 0,35 (с, 9H).
C. 1-(Циклогексилметил)-6-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В 20-мл колбу для микроволнового нагрева добавляли 6-бром-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 55.B) (0,17 г, 0,546 ммоль), 2-(5-(триметилстаннил)пиридин-2-ил)пропан-2-ол (0,164 г, 0,546 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,089 г, 0,109 ммоль) в ДМФА (3 мл). Смесь затем продували азотом (газ) в течение 1 минуты и затем перемешивали в микроволновом реакторе при 140°C в течение 15 минут. Смесь концентрировали и остаток подвергали полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 7 н. раствором аммиака в метаноле (10 мл). Продукт элюировали при помощи аммиака в метаноле. В результате концентрирования элюата получали продукт (11 мг, 5%, чистота 96,9% по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,10 (дд, J=2,4, 0,8, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,32 (дд, J=7,6, 2,4, 1H), 7,75 (дд, J=8,0, 0,4, 1H), 5,29 (с, 1H), 3,73 (д, J=7,2, 2H), 1,91 (м, 1H), 1,64 (м, 5H), 1,47 (с, 6H), 1,16 (м, 3H), 1,02 (м, 2H); MS (ESI) m/z 368,4 [М+1]+; т.пл. >250°C.
5.1.203 ПРИМЕР 203: СИНТЕЗ 6-(6-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ил)ПИРИДИН-3-ИЛ)-1-((ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)МЕТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(6-(2-Гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В 20-мл колбу для микроволнового нагрева добавляли 6-бром-1-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 101.B) (0,33 г, 1,054 ммоль), 2-(5-(триметилстаннил)пиридин-2-ил)пропан-2-ол (см. Пример 202. B) (0,316 г, 1,054 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,172 г, 0,211 ммоль) в ДМФА (4 мл). Смесь перемешивали в микроволновом реакторе при 140°C в течение 15 минут. Смесь концентрировали и остаток подвергали полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 7 н. раствором аммиака в метаноле (10 мл). Продукт элюировали при помощи аммиака в метаноле. В результате концентрирования элюата получали продукт (84 мг, 21%, чистота 99,3% по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 9,08 (дд, J=2,4, 0,8, 1H), 8,44 (с, 1H), 8,36 (дд, J=10,8, 2,8, 1H), 7,79 (дд, J=10,4, 1,6, 1H), 3,98 (с, 1H), 3,93 (д, J=9,6, 2H), 3,37 (м, 3H), 2,26 (м, 1H), 1,67 (м, 2H), 1,60 (с, 6H), 1,46 (м, 2H); MS (ESI) m/z 370,1 [М+1]+; т.пл. 207-209°C.
5.1.204 ПРИМЕР 204: СИНТЕЗ 6-(6-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ил)ПИРИДИН-3-ИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 6-(6-(2-Гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В 20-мл колбу для микроволнового нагрева добавляли 6-бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 108.B) (0,17 г, 0,520 ммоль), 2-(5-(триметилстаннил)пиридин-2-ил)пропан-2-ол (см. Пример 202.B) (0,156 г, 0,520 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,085 г, 0,104 ммоль) в ДМФА (3 мл). Смесь перемешивали в микроволновом реакторе при 140°C в течение 15 минут. Смесь концентрировали и остаток подвергали полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие желаемый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 7 н. раствором аммиака в метаноле (10 мл). Продукт элюировали при помощи аммиака в метаноле. В результате концентрирования элюата получали продукт (40 мг, 20%, 95,9% с чистотой по данным ВЭЖХ). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 9,03 (д, J=2,0, 1H), 8,39 (с, 1H), 8,30 (д, J=2,4, 1H), 7,74 (д, J=8,1, 1H), 3,99 (т, J=7,2, 2H), 3,87(дд, J=11,2, 3,2, 2H), 3,31 (м, 1H), 1,76 (м,4H), 1,55 (с, 6H), 1,53 (м, 2H), 1,27 (м, 2H); MS (ESI) m/z 384,3 [М+1]+; т.пл. 132-133°C.
5.1.205 ПРИМЕР 205: СИНТЕЗ 6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-МОРФОЛИНO-2-ОКСОЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. Этил 2-(3-(3,5-дибромпиразин-2-ил)уреидо)ацетат.
3,5-Дибромпиразин-2-амин (5,00 г, 19,8 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (3,37 г, 20,8 ммоль), диизопропилэтиламин (10,3 мл, 7,67 ммоль), 1,4-диоксан (7,5 мл) и N,N-диметилформамид (15 мл) объединяли в 100-мл круглодонной колбе со стержневой мешалкой, перемешивали и нагревали при 50°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 4,5 часов. Добавляли дополнительное количество 1,l'-карбонилдиимидазола (0,34 г, 2,08 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 50°C еще в течение 3,5 часов. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли гидрохлорид этилового эфира глицина (2,90 г, 20,8 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 13 часов, в это время добавляли воду при интенсивном перемешивании, чтобы вызвать осаждение твердых частиц. Твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом, промывали два раза водой и два раза гексаном и сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (5,17 г, 68%) в виде светло-оранжевого твердого вещества, которое содержало небольшое количество примеси этил 2-(3-(5-бром-3-(1H-имидазол-1-ил)пиразин-2-ил)уреидо)ацетата. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,89 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,08 (т, J=5,66, 1H), 4,12 (кв., J=7,29, 2H), 3,96 (д, J=5,86, 2H), 1,21 (т, J=7,03, 3H); MS(ESI) m/z 383 [М+1]+.
B. Этил 2-(6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)ацетат и изопропил 2-(6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)ацетат.
Этил 2-(3-(3,5-дибромпиразин-2-ил)уреидо)ацетат (1,00 г, 2,62 ммоль), ацетат палладия(II) (0,059 г, 0,26 ммоль), Xantphos (0,454 г, 0,79 ммоль), бикарбонат натрия (0,660 г, 7,85 ммоль) и мокрый изопропанол (15 мл) объединяли в герметично закрываемом сосуде со стержневой мешалкой. Смесь продували азотом в течение 1 минуты и затем герметично закрывали, интенсивно перемешивали и нагревали при 120°C в течение 26 часов. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит. Фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали на роторном испарителе с использованем силикагеля. Флэш-хроматография на короткой колонке с силикагелем (20-60% этилацетата в гексане) обеспечивала частичную очистку. После концентрирования элюента на роторном испарителе полученный остаток очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут, а затем 60-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, от 30 до 35 мин). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Остаток сушили в вакууме с получением смеси желаемых продуктов (188 мг, 24%) в виде бледно-желтого твердого вещества. MS (ESI) m/z 301 и 315 [M+1]+.
C. 2-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)уксусная кислота.
Смесь этил 2-(6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)ацетата и изопропил 2-(6-бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)ацетата (170 мг, 0,565 ммоль), гидроксида лития (41 мг, 1,69 ммоль), воды (3 мл) и тетрагидрофурана (15 мл) объединяли в круглодонной колбе со стержневой мешалкой, интенсивно перемешивали и нагревали при 65°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 45 минут. Все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в смеси метанола (4 мл) и 6 н. хлористоводородной кислоты в воде (0,38 мл, 2,28 ммоль), фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (5-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Остаток сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (140 мг, 91%) в виде желтоватого пенистого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 13,40 (шир., с, 1Н), 12,42 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 4,54 (с, 2H); MS (ESI) m/z 273 [М+1]+.
D. 6-Бром-1-(2-морфолинo-2-оксоэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он 2,2,2-трифторацетат.
2-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)уксусную кислоту (141 мг, 0,516 ммоль) и 1,1'-карбонилдиимидазол (256 мг, 1,58 ммоль) объединяли в круглодонной колбе со стержневой мешалкой. Добавляли метиленхлорид (6 мл) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота. Добавляли ДМФА (2 мл). Все твердые вещества растворялись. Полученную прозрачную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2,5 часов, в течение которых добавляли морфолин (0,34 мл, 3,90 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Метиленхлорид удаляли на роторном испарителе. Полученную смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (5-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Остаток сушили в вакууме с получением желаемого продукта (209 мг, 89%) в виде желтоватого пенистого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,36 (с, 1H), 8,09 (с, 1H), 4,78 (с, 2H), 3,63-3,69 (м, 2H), 3,55-3,62 (м, 4H), 3,43 (т, J=4,88, 2H); MS (ESI) m/z 342 [М+1]+.
E. 6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(2-морфолино-2-оксоэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
6-Бром-1-(2-морфолинo-2-оксоэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он 2,2,2-трифторацетат (205 мг, 0,449 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (152 мг, 0,674 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (33 мг, 0,045 ммоль), 1 M карбоната натрия в воде (2,25 мл, 2,25 ммоль), 1,4-диоксан (1,5 мл) и изопропанол (0,5 мл) объединяли в герметично закрываемой пробирке со стержневой мешалкой. Смесь продували азотом в течение 1 минуты для удаления воздуха. Полученную смесь герметично закрывали, интенсивно перемешивали и нагревали при 120°C в течение ночи. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли метанолом и растворитель полностью удаляли на роторном испарителе. К остатку добавляли метанол и полученную смесь фильтровали. Фильтрат очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (5-60% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и почти все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Добавляли ацетонитрил и полученную смесь загружали на ионообменную колонку Strata-XC от Phenomenex. Колонку промывали последовательно водой, ацетонитрилом, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в 20% метанола в дихлорметане и концентрировали на роторном испарителе с использованем силикагеля. Флэш-хроматография (5-12-15% метанола в дихлорметане) давала желаемый продукт (43 мг, 24%) в виде белого твердого вещества. Rf= 0,16 (10% метанола в дихлорметане). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,21 (шир., с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,09-8,17 (м, 4H), 4,86 (с, 2H), 3,63-,72 (м, 4H), 3,60 (т, J=4,88, 2H), 3,45 (т, J=4,69, 2Н); MS (ESI) m/z 407 [М+1]+.
5.1.206 ПРИМЕР 206: СИНТЕЗ (R)-6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-3-(ЦИКЛОГЕКСИЛМЕТИЛ)-3,4-ДИГИДРОПИРАЗИНO[2,3-B]ПИРАЗИН-2(1H)-ОНа
A. (R)-трет-Бутил 3-циклогексил-1-(3,5-дибромпиразин-2-иламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
(R)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-циклогексилпропановую кислоту (1,00 г, 3,69 ммоль), 1,1'-карбонилдиимидазол (896 мг, 5,53 ммоль), дихлорметан (3 мл) и ДМФА (1 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде и перемешивали в течение 3,75 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. Добавляли 3,5-дибромпиразин-2-амин (1,86 г, 7,37 ммоль) и полученную смесь герметично закрывали и нагревали в течение 21 часа при 40°C, затем в течение 22,5 часов при 50°C. Добавляли диизопропилэтиламин (1,3 мл, 7,37 ммоль) и полученную смесь герметично закрывали и нагревали при 45°C при перемешивании в течение ночи. Дихлорметан удаляли на роторном испарителе. Полученную смесь разбавляли этилацетатом и водой и встряхивали в делительной воронке. Полученную суспензию фильтровали через целит и фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом. К фильтрату добавляли насыщенный солевой раствор и полученные два слоя разделяли в делительной воронке. Органические слои промывали водой, затем насыщенным солевым раствором и концентрировали на роторном испарителе. Полученный остаток растворяли в метаноле, фильтровали и очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-100% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и нейтрализовали при помощи насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Ацетонитрил удаляли на роторном испарителе и полученную водную смесь экстрагировали этилацетатом. Органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали, концентрировали на роторном испарителе и сушили в вакууме с получением желаемого продукта (616 мг, 33%) в виде не совсем белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 10,54 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 7,14 (д, J=8,20, 1H), 4,26 (кв., J=7,81, 1H), 1,77 (д, J=12,49, 1H), 1,58-1,72 (м, 5H), 1,51-1,57 (м, 2H), 1,38 (с, 9H), 1,07-1,25 (м, 3H), 0,80-0,98 (м, 2H); MS (ESI) m/z 507 [М+1]+.
B. (R)-6-Бром-3-(циклогексилметил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.
(R)-трет-Бутил 3-циклогексил-1-(3,5-дибромпиразин-2-иламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат (726 мг, 1,43 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл) при перемешивании в атмосфере азота. Добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл) и полученный прозрачный желтый раствор перемешивали в течение 50 минут при комнатной температуре. Добавляли дополнительное количество трифторуксусной кислоты (1 мл) и полученную смесь перемешивали еще в течение 5,5 часов при комнатной температуре. Растворитель полностью удаляли на роторном испарителе и полученный остаток сушили в вакууме в течение ночи. Добавляли бикарбонат натрия (1,21 г, 14,4 ммоль), Xantphos (249 мг, 0,43 ммоль), ацетат палладия(II) (32 мг, 0,143 ммоль) и мокрый изопропанол (21 мл) и полученную смесь продували азотом в течение 1 минуты для удаления воздуха. Полученную смесь интенсивно перемешивали и нагревали при 80°C при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 8 часов 20 минут и затем охлаждали до комнатной температуры в течение ночи. Полученную смесь разбавляли этилацетатом и фильтровали через целит. Фильтровальную лепешку тщательно промывали этилацетатом и фильтрат концентрировали на роторном испарителе. Добавляли метанол и тердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом. Твердые вещества промывали два раза метанолом, два раза простым этиловым эфиром и сушили в вакууме с получением желаемого продукта (241 мг, 53%) в виде желтовато-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,21 (с, 1H), 8,05 (д, J=2,34, 1H), 7,50 (с, 1H), 4,16 (тд, J=6,15, 2,15, 1H), 1,73 (д, J=11,32, 1H), 1,50-1,68 (м, 8H), 1,07-1,27 (м, 3H), 0,77-0,94 (м, 1H); MS (ESI) m/z 325 [М+1]+.
C. (R)-ди-трет-Бутил 6-бром-3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-l,4-дикарбоксилат
(R)-6-Бром-3-(циклогексилметил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он (167 мг, 0,514 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (280 мг, 1,28 ммоль), 4-(диметиламино)пиридин (6 мг, 0,051 ммоль) и ацетонитрил (4 мл) объединяли в сцинтилляционном сосуде, перемешивали и нагревали при 60°C в атмосфере азота в течение 1 часа. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду при интенсивном перемешивании и твердые вещества собирали при помощи фильтрации под вакуумом. Твердые вещества промывали водой и сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (241 мг, 89%) в виде светло-оранжевого порошка. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,45 (с, 1H), 4,94 (дд, J=9,18, 6,44, 1H), 1,84 (д, J=12,49, 1H), 1,57-1,70 (м, 4H), 1,53 (с, 9H), 1,49 (с, 9H), 1,34-1,42 (м, 2H), 1,23-1,30 (м, 1H), 1,09-1,18 (м, 3H), 0,82-0,94 (м, 2H); MS (ESI) m/z 525 [М+1]+.
D. (R)-6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-3-(циклогексилметил)-3,4-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-2(1H)-он
(R)-ди-трет-Бутил 6-бром-3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидропиразинo[2,3-b]пиразин-l,4-дикарбоксилат (237 мг, 0,451 ммоль), гидрохлорид 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (153 мг, 0,677 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (33 мг, 0,045 ммоль), 1 M карбоната натрия в воде (1,80 мл, 1,80 ммоль), 1,4-диоксан (1,5 мл) и изопропанол (0,5 мл) объединяли в герметично закрываемой пробирке со стержневой мешалкой. Смесь продували азотом в течение 1 минуты для удаления воздуха. Полученную смесь герметично закрывали, интенсивно перемешивали и нагревали при 120°C в течение ночи. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли метанолом и растворитель полностью удаляли на роторном испарителе. К остатку добавляли метанол (5 мл) и 6 н. раствор хлористоводородной кислоты в воде (0,35 мл, 2,1 ммоль). Полученную смесь быстро нагревали при помощи аппарата для сушки струей теплого воздуха и затем фильтровали. Фильтрат очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержимое сосудов с продуктом объединяли и почти все количество растворителя удаляли на роторном испарителе. Добавляли ацетонитрил и полученную смесь загружали на ионообменную колонку Strata от Phenomenex. Колонку промывали последовательно водой, ацетонитрилом, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента, концентрировали на роторном испарителе и затем сушили в вакууме при 45°C с получением желаемого продукта (7 мг, 4%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,21 (шир., с, 1H), 8,46 (шир., с, 1H,) 8,03-8,14 (м, 5H), 7,68 (д, J=1,56, 1H), 4,14-4,20 (м, 1H), 1,77 (д, J=12,10, 1H), 1,53-1,71 (м, 7H), 1,07-1,30 (м, 3H), 0,79-0,97 (м, 2H); MS (ESI) m/z 390 [М+1]+.
5.1.207 ПРИМЕР 207: СИНТЕЗ (R)-6-(4-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛФЕНИЛ)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. ((1R)-1-Фенилэтил)(3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амин.
Раствор (R)-α-метилбензиламина (2,28 мл, 17,93 ммоль) и 2-амино-3,5-дибромпиразина (3,00 г, 1 1,96 ммоль) в н-бутаноле (30 мл), как описано в Общей Процедуре A. Неочищенную молекулу очищали при помощи хроматографии на силикагеле (20-30% этилацетата в гексане). Чистые фракции объединяли и конденсировали с последующим растиранием в порошок из метанола с водой, обрабатывая при этом ультразвуком, с получением (1,92 г, 6,54 ммоль, 55%) ((1R)-1-фенилэтил)(3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амина. MS (ESI) m/z 294,0 [M+1]+.
B. 1-((1R)-1-Фенилэтил)-6-бром-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием ((1R)-1-фенилэтил)(3-амино-6-бромпиразин-2-ил)амина (0,50 г, 1,71 ммоль, 1,0 экв.), 1,1'-карбонилдиимидазола (0,35 г, 2,13 ммоль, 1,25 экв.) и тетрагидрофурана (7 мл), как описано в Общей Процедуре D1. Неочищенное вещество растворяли в метаноле (5 мл) и продукт растирали в порошок с водой, обрабатывая при этом ультразвуком. Осадок отфильтровывали и сушили в вакуумной печи в течение ночи с получением 0,27 г (0,83 ммоль, 49%) 1-((1S)-1-фенилэтил)-6-бром-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-она. MS (ESI) m/z 319,3 [M+1]+.
C. (R)-4-(2-Оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил.
1-((1R)-1-Фенилэтил)-6-бром-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-он (0,500 г, 1,57 ммоль), 4-цианофенилбороновую кислоту (0,276 г, 1,88 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен] дихлорпалладий(II)-комплекс с дихлорметаном (1:1) (0,128 г, 0,10 ммоль), фосфат калия (1,33 г, 6,27 ммоль), диметилформамид (5,0 мл) и воду (2,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали вместе при 90°C в течение 2 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут) с получением чистого продукта (0,462 г, 86%). MS (ESI) m/z 476,5 [M+1]+.
D. (R)Этил 4-(2-оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат.
Раствор (R)-4-(2-оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрила (0,462 г, 1,35 ммоль) и этанола (100 мл) охлаждали до 0°C и барботировали через раствор газообразный хлористый водород в течение 10 минут. Реакционную смесь оставляли для перемешивания и нагревания до 25°C в течение 18 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки в виде гидрохлоридной соли (0,281 г, 57%). MS (ESI) m/z 388,4 [M+1]+.
E. (R)-6-(4-(1H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-B]пиразин-2(3H)-он.
(R)этил 4-(2-оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат (0,281 г, 0,725 ммоль), формогидразин (0,174 г, 2,90 ммоль), триэтиламин (0,734 г, 7,25 ммоль) и метанол (4,0 мл) объединяли в герметично закрытой пробирке и нагревали до 100°C в течение 4 часов. Раствор конденсировали при пониженном давлении и очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Чистые фракции объединяли, нейтрализовали при помощи гидроксида аммония, концентрировали, разбавляли водой (20 мл) и желаемый продукт собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества с чистотой 96,7% (0,039 г, 14%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,48-8,51 (м, 1H), 8,49 (с, 2H), 8,41 (шир., с, 1H), 8,12 (с, 4H), 7,60 (д, J=7,03, 2H), 7,31-7,39 (м, 2H), 7,23-7,30 (м, 1H), 5,85 (кв., J=7,29, 1H), 2,12 (д, J=7,42, 3H); MS (ESI) m/z 384,4 [М+1]+; т.пл. 258-260°C.
5.1.208 ПРИМЕР 208: СИНТЕЗ (S)-6-(4-(4H-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(1-ФЕНИЛЭТИЛ)-1Н-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. (S)-6-(4-(4H-1,2,4-Триазол-3-ил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
В герметично закрытой пробирке к раствору гидрохлорида 4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенилбороновой кислоты (см. Пример 159.D) (0,239 г, 1,265 ммоль), (S)-6-(4-бромфенил)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-она (0,5 г, 1,265 ммоль), комплекса [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (1,033 г, 1,265 ммоль) в ДМФА (30 мл) добавляли фосфат калия (0,281 г, 1,265 ммоль) в воде (10 мл). Полученную реакционную смесь дегазировали и доводили до 120°C в течение 2 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, неочищенный продукт фильтровали через целит, промывали метанолом. После концентрирования неочищенный продукт очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Желаемые фракции объединяли, концентрировали до минимального содержания растворителя и нейтрализовали при помощи гидроксида аммония. Полученное свободное основание фильтровали, промывали водой и сушили в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (0,008 г, 0,021 ммоль, 1,649% выход).1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,24 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,22 (д, J=8,8, 2H), 8,10 (д, J=8,8, 2H), 7,58 (д, J=7,6, 2H), 7,32 (д, J=7,6, 2H), 7,26 (д, J=8,8, 1H), 5,84 (q, J=7,2, 1H), 2,10 (д, J=7,2, 2H); MS (ESI) m/z 384,1[М+1]+.
5.1.209 ПРИМЕР 209: СИНТЕЗ (1R,4R)-4-(6-(4-(2-ГИДРОКСИПРОПАН-2-ИЛ)ФЕНИЛ)-2-ОКСО-2,3-ДИГИДРО-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-1-ИЛ)ЦИКЛОГЕКСАНКАРБОКСАМИДА
A. трет-Бутил (1R,4R)-4-карбамоилциклогексилкарбамат.
(1R,4R)-4-(трет-Бутоксикарбонил-амино)циклогексанкарбоновую кислоту (1,7 г, 6,99 ммоль), хлорид аммония (560 мг, 10,5 ммоль), O-(бензотриазол-1-ил)-гексафторфосфат N,N,N',N'-тетраметилурония (2,66 г, 6,99 ммоль), триэтиламин (2,92 мл, 20,96 ммоль) и ацетонитрил (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь фильтровали и промывали свежим ацетонитрилом. Твердое вещество сушили в вакууме с получением желаемого продукта (1,57 г 93% выход) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 242,9 [M+1]+.
B. (1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
трет-Бутил (1R,4R)-4-карбамоилциклогексилкарбамат (0,5 г, 2,063 ммоль) обрабатывали 4 н. раствором хлористоводородной кислоты в диоксане в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества. К полученному твердому веществу добавляли 3,5-дибромпиразин-2-амин (0,522 г, 2,063 ммоль), диизопропилэтиламин (0,721 мл, 4,13 ммоль) и метилсульфоксид (4 мл) и нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 2 часов при 150°C. Реакционную смесь подвергали очистке при помощи хроматографии на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане) для выделения диамина. К полученному диамину добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (0,669 г, 4,13 ммоль) и диоксан (4 мл) и смесь нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer в течение 10 минут при 100°C. Реакционную смесь очищали на силикагеле (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане). Выделенные фракции концентрировали и растирали в порошок с простым эфиром с получением белого твердого вещества (85 мг, 12% выход от 3 стадий). MS (ESI) m/z 340,0 [M]+, 342,0 [M+2]+.
C. 2-(4-Бромфенил)пропан-2-ол.
1-(4-Бромфенил)этанон (9,25 г, 46,5 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (200 мл). Раствор охлаждали на -50°C бане. Добавляли метилмагнийбромид (3 M в простом эфире, 46,5 мл, 139 ммоль) в течение 15 минут. Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 20 часов. Реакцию гасили при помощи насыщенного раствора хлорида аммония и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением масла. Полученное масло очищали на колонке с силикагелем (0-20% этилацетата в гексане) с получением продукта в виде бесцветного масла (9,1 г, 91% выход). MS (ESI) m/z 197,1 [M]+, 199,1 [M+2]+.
D. 2-(4-(4,4,5,5-Тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)пропан-2-ол.
2-(4-Бромфенил)пропан-2-ол (4,7 г, 21,85 ммоль), бис(пинаколато)дибор (6,66 г, 26,2 ммоль), ацетат калия (6,43 г, 65,6 ммоль) и диметилсульфоксид (50 мл) перемешивали вместе и дегазировали в вакууме в течение 10 минут. Добавляли комплекс [1,1'-бис(дифенил-фосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1:1) (0,892 г, 1,093 ммоль) и реакционную смесь дегазировали еще в течение 5 минут. Реакционную смесь затем нагревали до 80°C в атмосфере азота в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем экстрагировали смесью 1:1 простой эфир:этилацетат и водой. Черную эмульсию фильтровали через слой целита. Органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и затем очищали на колонке с силикагелем (0-25% этилацетата в гексане). Содержащие продукт фракции концентрировали и затем растирали в порошок в гексане с получением белого твердого вещества (4 г, 70% выход). MS (ESI) m/z 263,3 [M+1]+.
E. (1R,4R)-4-(6-(4-(2-Гидроксипропан-2-ил)фенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид.
(1R,4R)-4-(6-Бром-2-оксо-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид (100 мг, 0,29 ммоль), 2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)пропан-2-ол (53 мг, 0,29 ммоль), дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II) в виде аддукта с дихлорметаном (12 мг, 0,015 ммоль), 1 M карбоната натрия (0,88 мл, 0,88 ммоль) и диоксан (2 мл) нагревали в микроволновом реакторе Biotage Emrys Optimizer при 130°C в течение 20 минут. Реакционную смесь очищали при помощи обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (10-70% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Содержащие продукт фракции нейтрализовали путем добавления карбоната калия. Раствор концентрировали и сушили. Твердое вещество очищали на колонке с силикагелем (0-100% (5% метанола в этилацетате) в гексане) с получением белого твердого вещества (50 мг, 43% выход). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,01 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 7,93 (д, J=8,6, 2H), 7,57 (д, J=8,2, 2H), 7,30 (с, 1H), 6,77 (с, 1H), 5,08 (с, 1H), 4,24 (т, J=12,5, 1H), 2,40 (м, 2H), 2,22 (т, J=12,3, 1H), 1,92 (д, J=10,9, 2H), 1,85 (д, J=9,0, 2H), 1,53 (м, 2H), 1,46 (с, 6H); MS (ESI) m/z 396,0 [М+1]+; т.пл. 280-282°C.
5.1.210 ПРИМЕР 210: СИНТЕЗ 6-(4-(5-МЕТИЛ-1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ФЕНИЛ)-1-(2-(ТЕТРАГИДРО-2H-ПИРАН-4-ИЛ)ЭТИЛ)-1H-ИМИДАЗО[4,5-B]ПИРАЗИН-2(3H)-ОНа
A. 4-(2-Оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил.
6-Бром-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он (см. Пример 108.B) (2,5 г, 7,60 ммоль), 4-цианофенилбороновую кислоту (1,69 г, 1 1,5 ммоль) и дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладий(II)·дихлорметан (0,62 г, 0,70 ммоль) объединяли в диоксане (10 мл). Добавляли карбонат натрия (0,91 г, 15,2 ммоль) в воде (10 мл) и реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. Охлажденный реакционный раствор фильтровали через целит и фильтровальную лепешку промывали этилацетатом. Фильтрат и этилацетатную промывку объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-80% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли при помоши 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром в гексане с получением тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (1,2 г, 46%) в виде белого твердого вещества. MS (ESI) m/z 350,0 [M+1]+.
B. Этил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат.
Газообразный HCl барботировали в суспензию 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрила (1,2 г, 3,43 ммоль) в безводном этаноле (30 мл) при 0°C. Колбу закрывали и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения преобразования в продукт (отслеживали при помощи ЖХМС), летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученное белое твердое вещество сушили в вакуумной печи с получением желаемого продукта (1,2 г, 88%). Полученное вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. MS (ESI) m/z 396,0 [M+1]+.
C. 6-(4-(5-Метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3H)-он.
Этил 4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензимидат (0,250 г, 0,63 ммоль) в этаноле (20 мл) обрабатывали при помощи ацетогидразина (0,23 г, 3,16 ммоль) и триэтиламина (3,23 мл, 2,32 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 3 часов. Охлажденный реакционный растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество очищали с использованием обращенно-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ (20-50% ацетонитрила + 0,1% TFA в H2O + 0,1% TFA, в течение 30 минут). Фракции, содержащие чистый продукт, пропускали через ионообменную колонку Phenomenex Strata-X-C для удаления TFA. Колонку промывали последовательно водой, метанолом и затем 5% раствором гидроксида аммония в метаноле. Продукт выделяли с использованием 5% раствора гидроксида аммония в метаноле в качестве элюента и концентрировали на роторном испарителе. Остаток растирали в порошок с этиловым эфиром в гексане до получения тонкодисперсного порошка и сушили в вакууме при 50°C с получением желаемого продукта (0,185 г, 72%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 13,73 (шир., с, 1H), 12,07 (шир., с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,09 (м, 4H), 3,93 (д, 2H), 3,83 (д, J=14,1, 2H), 3,22 (м, 2H), 2,42 (шир., с, 3H), 1,73 (м, 4H), 1,52 (м, 1H), 1,21 (м, 2H); MS (ESI) m/z 406,2 [М+1]+; т.пл. 290-292°С.
5.2 БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИМЕРЫ
5.2.1 Анализ MG63 pS6 МеSоScale
Далее представлен пример анализа, который можно использовать для определения противораковой активности испытываемого соединения.
Для этого анализа использовали клетки MG63 остеосаркомы человека (ATCC: CRL-1427) (пассаж 7-15). Клетки поддерживали с использованием DMEM (высокое содержание глюкозы с 1-глутамином), 10% FBS и Pen/Strep. Использовали следующие буферы: Полный Трис Лизисный Буфер (для использования в количестве 10 мл: 100 мкл ингибитора фосфатазы I (100X исходный раствор), 100 мкл ингибитора фосфатазы II (100X исходный раствор), 1 таблетка Complete Mini (без EDTA), 40 мкл PMSF, все тщательно смешивали в течение 5 минут при комнатной температуре); 1X Трис промывочный Буфер (для использования в количестве 250 мл: 25 мл 10X Трис промывочного буфера, 225 мл деионизированной воды, хранили при комнатной температуре); MSD блокирующий раствор-A (для использования в количестве 20 мл: 20 мл 1X трис промывочного буфера и 600 мг MSD блокатора A, хранили на льду); Буфер для разведения антител (для использования в количестве 3 мл: 1 мл блокирующего раствора-A, 1,82 мл 1X трис промывочного буфера, 150 мкл 2% MSD блокатора D-M, 30 мкл 10% MSD блокатора D-R, хранили на льду).
В день один утром клетки высевали в 96-луночные плоскодонные культуральные планшеты при плотности 5000 клеток/лунка в 100 мкл объема. В день 2 утром испытываемые соединения разбавляли до желаемой концентрации и добавляли к клеткам. Клетки обрабатывали соединением в течение 16-24 часов при 37°C, 0,5% CO2.
Планшеты блокировали в течение около 5 минут до завершения обработки соединением путем добавления 150 мкл MSD блокирующего раствора-A в планшет и инкубации при сильном встряхивании при комнатной температуре в течение 1 часа.
Клетки собирали и получали лизаты путем удаления среды при помощи многоканального устройства для пипетирования, промывки 1X охлаженным на льду PBS (не содержащий Ca и не содержащий Mg), добавления 50 мкл/лунка Полного Трис Лизисного Буфера и инкубации при встряхивании при 4°C в течение 1 часа.
Образцы лизатов добавляли в планшет с множеством пятен MSD путем пипетирования клеточных лизатов вверх и вниз около 4-5 раз, переноса 25 мкл/лунка в планшет с множеством пятен MSD (RA для отрицательного контроля и RB для положительного контроля) (лизисный буфер добавляли только к контрольным лункам) и инкубации при сильном встряхивании при комнатной температуре в течение 2 часов.
Антитело для детекции добавляли путем разведения анти-pS6 антитела (меченное SULFO-TAG, светочувствительное) в 3 мл охлажденного буфера для разведения антител до конечной концентрации 10 нМ, добавления 25 мкл/лунка 10 нМ антитела для детекции в MSD планшет, инкубации при сильном встряхивании при комнатной температуре в темноте в течение 1 часа и промывки планшета 4 раза 1X трис промывочным буфером.
Планшет считывали путем добавления 1X в количестве 150 мкл/лунка буфера для считывания T (с поверхностно-активным веществом) и с использованием, например, MSD SECTOR планшет-ридера и подходящей программы для анализа данных.
5.2.2 HTR-FRET анализ mTOR
Далее представлен пример анализа, который можно использовать для определения ингибиторной активности испытываемого соединения в отношении mTOR. Реагенты подготавливали следующим образом.
"Простой TOR буфер" (использовали для разведения TOR фракции с высоким содержанием глицерина): 10 мМ Трис pH 7,4, 100 мМ NaCl, 0,1% Tween-20, 1 мМ DTT (из 1 M исходного раствора, замороженного при -20°C, непосредственно перед использованием). Для удобства, большое количество "Простого TOR буфера" w/o DTT можно хранить при 4°C. Его можно довести до комнатной температуры и добавлять DTT непосредственно перед разведением TOR фракции.
5XKB/5XMn/5XATP раствор (использовали для разведения субстрата GST-p70S6kin 81 a.a. непосредственно перед использованием) (показано определенное количество для 40 мл):
Ферментный раствор: Развести TOR фракцию 1:14 в "Простом TOR Буфере". Для данной партии это 640 мкг/мл TOR фракции, разбавленной 14X с получением 45,7 мкг/мл TOR в буфере (т.е. 7,85 мл объединенной фракции TOR + 102,1 мл Простого TOR буфера =110 мл 14X разбавленной TOR фракции). Необходимо контролировать качество каждой партии фермента перед осуществлением анализа.
Раствор субстрата: Его можно получить непосредственно перед анализом, если это является предпочтительным.
Разбавить исходный раствор 5,3 мг/мл GST-p70S6киназного фрагмента до 3,5 мкг/мл (97 нМ) рабочего исходного раствора в 5XKB/5XMn/5XATP растворе (т.е. 26,41 мкл (5,3 мг/мл) GST-p70S6 + 40 мл 5XKB/5XMn/5XATP = 40 мл 3,5 мкг/мл (97 нМ)).
Буфер для анализа (для разведения используемых антител в реагенте для детекции антител):
Реагент для детекции антител (этот реагент следует получать непосредственно перед добавлением в аналитические планшеты):
С использованием программы PlateTrak (Screen) или Matrix Pipettor (SAR), 19,5 мкл разбавленной TOR фракции добавляли в аналитический планшет во все лунки с испытываемым соединением, контролем или положительным контролем. 19,5 мкл "Простого TOR буфера" добавляли во все лунки с отрицательным контролем. Если обрабатывать несколько планшетов теми же соединениями, можно увеличить объем фермента до значений, кратных 19,5 мкл, в высоком 384-луночном полипропиленовом планшете.
С использованием EP3, 0,5 мкл испытываемого соединения, контроля или DMSO-контроля добавляли в каждую лунку при перемешивании. Планшеты инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре.
С использованием программы PlateTrak (Screen) или Matrix Pipettor (SAR), 5 мкл 5XKB/5XMn/5XATP/5X раствора субстрата добавляли в каждую лунку аналитического планшета для начала реакции. Растворы тщательно смешивали и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре.
С использованием программы PlateTrak (Screen) или Matrix Pipettor (SAR), добавляли 5 мкл 60 мМ EDTA для прекращения реакции. Растворы тщательно смешивали и давали отстояться в течение 15-20 минут перед следующей стадией.
С использованием программы PlateTrak (Screen) или Matrix Pipettor (SAR), добавляли 10 мкл реагента для детекции антител. Растворы тщательно смешивали и инкубировали в течение 5 часов до O/N, обеспечивая возможность образования комплексов антител с фосфорилированным субстратом.
Планшеты считывали на AnalystHT с использованием протокола Multi-Method.
5.2.3 IMAP анализ PKCθ
Далее представлен пример анализа, который можно использовать для определения активности испытываемого соединения, направленной на ингибирование PKCθ. Реагенты подготавливали следующим образом.
Буфер для анализа: 50 мМ HEPES (pH 7,6), 10 мМ MgCl, 0,1 мМ EDTA, 5 мМ MBP, 0,01% Triton, 1мМ DTT, 0,05 мг/мл фосфатидилсерина, 0,05 мг/мл диацилглицерина.
Конечная концентрация PKCθ (Invitrogen) была 0,5 нМ. Конечная концентрация субстрата (FAM-AKRRRLSSLRA) (Molecular Devices) была 100 нМ. Конечная концентрация АТФ в реакционной смеси была 35 мкМ. Конечная концентрация DMSO в реакционной смеси была 2,5%.
Фермент сохраняли в 5 мкл аликвотах и хранили при -80°C до использования. Испытываемое соединение оставляли с ферментом для предварительной инкубации в течение 45 минут до начала реакции.
Реакционная смесь состояла из: 5 мкл испытываемого соединения в 10% DMSO, 5 мкл 400 нМ субстрата (FAM-AKRRRLSSLRA), 5 мкл 40 нМ PKCθ и 5 мкл 140 мкМ АТФ (АТФ добавляли к реакционной смеси последним, чтобы инициировать реакцию) на лунку.
Реакцию осуществляли в течение 60 минут и останавливали путем добавления 30 мкл на лунку 90% буфера A Progressive/10% буфера B Progressive и 1:400 разведения гранул для связывания (Molecular Devices).
Для инкубации и связывания реакционной смеси отводили время, по меньшей мере, 30 минут перед считыванием сигнала поляризации флуоресценции с использованием считывающего устройства Analyst (детектор устанавливали на: возбуждение флуоресцеина - 485 нМ, эмиссия флуоресцеина - 530 нМ, дихроизм флуоресцеина - 505 нМ).
5.2.4 Протокол HTRF анализа Tyk2 (с возможностью сдвига АТФ)
Далее представлен пример анализа, который можно использовать для определения активности испытываемого соединения, направленной на ингибирование Tyk2.
25 мкл/лунка DMSO добавляли к Колонкам 2 и 14 (за исключением того, что 28,5 мкл добавляли в лунку P14 384-луночного полипропиленового планшета Greiner). 20 мкл/лунка DMSO добавляли во все остальные лунки.
Добавляли 5 мМ растворов соединения путем добавления 5 мкл 30 мМ соединения к 25 мкл DMSO в Колонках 2 и 14 планшета. 1,5 мМ сравнительного контроля получали путем добавления 1,5 мкл 30 мМ JAK3 ингибитора VI к 28,5 мкл DMSO в лунке P14.
Затем осуществляли серийные разведения путем осуществления следующих стадий: (i) Соединения в колонке 2 смешивали путем пипетирования при движении вверх и вниз 20 мкл 6X; (ii) 10 мкл/лунка соединений в DMSO переносили из одной колонки в следующую колонку, для Колонок 2-11; (iii) содержимое лунок смешивали путем пипетирования при движении вверх и вниз 20 мкл 6X; (iv) верхние слои промывали при помощи 3X 25 мкл DMSO, 2X 25 мкл другого DMSO; (v) стадии i-iv повторяли для Колонок 14-23.
Получали следующие буферы.
Буфер для анализа: 50 мМ HEPES pH 7,6; 1 мМ DTT; 10 мМ MgCl2; 0,01% Triton X100; 0,01% BSA и 0,1 мМ EDTA.
Киназа в буфере для анализа: 450 нг/мл TYK2 кДа (Carna Biosciences 08-147 Lot 06CBS-3022D).
Субстрат/Смесь для детекции (1X АТФ) в буфере для анализа: 188 нМ DyLight 647-Стрептавидин (Pierce 21824); 5 мкМ Биотин-EQEDEPEGDYFEWLE (Lyn Substrate Peptide); 750 нг/мл Eu-анти-фосфо-Тирозин (PerkinElmer AD0069); 62,5 мкМ АТФ; 80 нМ пептидного субстрата (American Peptide Company 332722).
Субстрат/Смесь для детекции (20X АТФ) в буфере для анализа: 188 нМ DyLight 647-Стрептавидин; 5 мкМ Биотин-EQEDEPEGDYFEWLE; 750 нг/мл Eu-анти-фосфо-Тирозин; 1250 мкМ АТФ; 80 нМ пептидного субстрата.
14,5 мкл/лунка смеси фермента или буфера для разведения (Контроли) добавляли в 384-луночные черные планшеты Costar.
Соединение и смесь добавляли путем осуществления следующих стадий: (i) 0,5 мкл/лунка DMSO/соединений в DMSO переносили из 384-луночного полипропиленового планшета Greiner в планшет, содержащий 14,5 мкл/лунка смеси фермента и буфера для разведения; (ii) смешивали путем пипетирования 10 мкл при движении вверх и вниз 4X; (iii) верхние слои промывали 4X 10 мкл в DMSO, 2X 20 мкл в другом DMSO; (iv) стадии i-iii повторяли до завершения обработки всех планшетов.
Добавляли 10 мкл/лунка субстрата/смесей для детекции и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов (на встряхивающем устройстве в течение первых 2+ минут).
Добавляли 10 мкл/лунка 50 мМ EDTA/0,01% Triton X100 и инкубировали >15 минут при комнатной температуре (на встряхивающем устройстве в течение первых 2+ минут).
Планшеты считывали при 665 нМ и 620 нм эмиссии с использованием Analyst GT протокола HTRF_SP_A (Число импульсов = 665/620 X 10000).
5.2.5 Протокол HTRF анализа Syk
5 мкл/лунка DMSO добавляли в колонку 2, лунки A-O, и 29,5 мкл в лунку P2 384-луночного полипропиленового планшета Greiner. 20 мкл/лунка DMSO добавляли в колонки 1 и 3-12.
25 мМ растворов соединения получали путем добавления 25 мкл 30 мМ соединения в колонку 2 и 0,5 мкл 30 мМ сравнительного контроля в лунку P2.
Затем получали серийные разведения путем осуществления следующих стадий: (i) соединения в колонке 2 смешивали путем пипетирования 20 мкл при движении вверх и вниз 6X; (ii) 10 мкл/лунка соединений в DMSO переносили из одной колонки в следующую колонку, для колонок 2-11; (iii) содержимое лунок смешивали путем пипетирования 20 мкл при движении вверх и вниз 6X; (iv) верхние слои промывали при помощи 3X 25 мкл DMSO, 2X 25 мкл другого DMSO.
EP-3 схема (Приложение)
Получали следующие буферы.
Буфер для разведения: 50 мМ HEPES pH 7,6; 1 мМ DTT; 10 мМ MgCl2; 0,01% Triton X100; 0,01% BSA; 0,1 мМ EDTA.
Смесь фермента в буфере для разведения: 8,621 нг/мл Syk (Carna Biosciences 08-176).
Исходная смесь в буфере для разведения: 87,5 мкМ АТФ; 80 нМ пептидного субстрата (American Peptide Company 332722).
14,5 мкл/лунка смеси фермента или буфера для разведения (Контроли) добавляли в 384-луночные черные планшеты Costar.
Соединение и смесь добавляли путем осуществления следующих стадий: (i) 0,5 мкл/лунка DMSO/соединения в DMSO переносили из 384-луночного полипропиленового планшета Greiner в левую половину аналитического планшета, содержащего 14,5 мкл/лунка смеси фермента и буфера для разведения; (ii) смешивали путем пипетирования 10 мкл при движении вверх и вниз 4X; (iii) верхние слои промывали при помощи 4X 10 мкл в DMSO, 2X 20 мкл в другом DMSO; (iv) стадии i-iii повторяли с переносом на правую сторону аналитического планшета; (v) стадии i-iv повторяли с каждым соединением/аналитическим планшетом до завершения обработки всех планшетов.
EP-3 схема
Добавляли 10 мкл/лунка исходной смеси и инкубировали при комнатной температуре на встряхивающем устройстве в течение 2 минут (общее время реакции 1 час).
Получали следующие буферы.
Стоп-раствор в буфере для разведения: 120 мМ EDTA.
Смесь антител в буфере для разведения: 4,86 мкг/мл DyLight 647 Стрептавидин (Pierce 21824); 1 мкг/мл Lance Eu-Анти-Фосфотирозин (PerkinElmer AD0069).
Добавляли 5 мкл/лунка/в буфере для разведения и инкубировали при комнатной температуре на встряхивающем устройстве в течение 2 минут.
Добавляли 10 мл/лунка смеси антител и инкубировали при комнатной температуре на встряхивающем устройстве в течение 2 минут (общее время от 4 часов до в течение ночи).
Планшеты считывали при 665 нМ и 620 нМ эмиссии с использованием Analyst GT протокола HTRF_SP_A или EnVision протокола Steve's TR-FRET.
5.2.6 Протокол функционального анализа Syk (экспрессия CD69 в анти-IgM-стимулированных первичных B-клетках)
Клетки: Первичные B-клетки очищали из клеточных препаратов Buffy coat, которые были получены от здоровых доноров в Банке Крови Сан-Диего (SDBB). Клетки поддерживали в RPIM/10%FBS.
Реагенты: AffiniPure F(ab') фрагмент козлиного анти-человеческого IgM (Jackson, cat. 109-006-129, 1,3 мг/мл); PE меченное анти-человеческое CD69 (BD Pharmingen, cat. 555531,2 mls); 7AAD (BD Pharmingen, cat. 559925, 2 mls); RosetteSep B-клеточный обогащающий реагент (Stem Cell Technologies, cat. 15064, 10 mls); Ficoll-Paque Plus (Amersham, cat. 17-440-02); окрашивающий буфер FBS (BD Pharmingen).
Протокол: (i) клеточный препарат Buffy coat заказывали заранее у фирмы SDBB (обычно заказывают два на случай, если возникнут какие-либо трудности с одним из них); (ii) B-клетки очищали с использованием метода отрицательного выбора RosetteSep следующим образом:
a) 2,0 мл реагента RosetteSep добавляли к 40 мл Buffy coat. Объем каждого Buffy coat типично 80-100 мл. Смесь осторожно смешивали и давали выстояться при комнатной температуре в течение 20 минут (может происходить некоторое отверждение);
b) в колбе с культурой ткани 40 мл buffy coat смешивали с равным объемом стерильно отфильтрованного 2% FBS в PBS (без кальция/магния);
c) 35 мл этого разбавленного buffy coat добавляли в каждую из пяти 50-мл полипропиленовых конических пробирок. Медленно добавляли 14 мл Ficoll Paque под buffy coat и на дно каждой пробирки (осторожно, чтобы не смешивать с buffy coat);
d) пробирки центрифугировали при 2200 об/мин в течение 20 минут в настольной центрифуге Sorvall с торможением;
e) после центрифугирования клетки должны быть визуально различимы на поверхности раздела сыворотка/Ficoll. Сыворотку осторожно аспирировали до точки около поверхности раздела. При помощи пипетки Пастера клеточный слой удаляли с поверхности раздела, принимая меры предосторожности, чтобы удаляемое количество Ficoll было по возможности минимальным;
f) выделенные клетки разводили (прибл. 10 мл) в 100 мл 2% FBS в PBS, центрифугировали при 1200 об/мин в течение периода времени от 5 минут и клеточный осадок после центрифугирования ресуспендировали в 5-10 мл питательной среде RPMI, в зависимости от ожидаемого количества выделенных клеток.
Клетки подсчитывали и плотность клеток доводили до 1 млн/мл в питательной среде RPMI. Подготавливали планшет для предварительной обработки соединением в 96-луночном круглодонном формате с достаточным объемом клеток для покрытия желаемого количества лунок, принимая, что количество в планшете для обработки составляет 50 мкл клеток/лунка. В отдельном 96-луночном планшете соединения разбавляли 1:50 в питательной среде RPMI. 22 мкл разбавленного соединения добавляли к 200 мкл клеток в планшет для предварительной обработки соединением. Смесь помещали в инкубатор для культуры ткани на 30-60 минут.
Получали 20 мкг/мл анти-IgM раствора в питательной среде RPMI. Добавляли 50 мкл анти-IgM раствора на лунку в новый 96-луночный круглодонный планшет (планшет для стимуляции клеток). Включали только использованные культуральные среды в качестве контролей. 50 мкл предварительно обработанных соединением клеток добавляли в планшет, содержащий анти-IgM, с использованием многоканального устройства для пипетирования. Смесь снова помещали в инкубатор для культуры ткани на 12-14 часов.
Планшет центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Среду выгружали и планшет осторожно высушивали через промокательную бумагу. Подготавливали достаточное количество раствора антитела для покрытия планшета, принимая во внимание, что 100 мкл буфера для окрашивания содержат 5 мкл CD69 антитело/лунка. Добавляли 100 мкл раствора антитела на лунку, планшет осторожно постукивали для смешивания, планшет покрывали алюминиевой фольгой и помещали под вытяжку при комнатной температуре на 30 минут.
Планшет центрифугировали, разгружали и сушили промоканием. Планшет промывали один раз 250 мкл буфера для окрашивания, центрифугировали, разгружали и сушили промоканием. Конечный клеточный осадок после центрифугирования ресуспендировали в 100 мкл буфера для окрашивания и считывали на цитометре.
5.2.7 Функциональный Анализ Syk S.O.P. (IgE-зависимая секреция бета-гексозаминидазы из тучных клеток человека линии LAD2)
Обзор: LAD2 клетки высевали в 96-луночный планшет, сенсибилизировали через FcepsilonR при помощи NP-IgE и дегранулировали путем поперечного связывания с NP16-BSA. Супернатанты собирали и секреторные компоненты гранул, включая бета-гексозаминидазу, измеряли в различных колориметрических анализах.
Клетки: LAD2 клетки получали от Metcalf lab в NIH. Подробное описание выделения, характеристик и роста/хранения этих клеток см. в оригинальной публикации (Kirshenbaum et al. Leukemia Research 27:677-682, 2003). Клетки растут достаточно медленно, удваиваются через каждые 10-14 дней, и, таким образом, необходима их подпитка при полуистощении каждую неделю и нечастое расщепление. Питательная среда: StemPro-34 плюс сывороточная добавка (Invitrogen) с 100 нг/мл рекомбинантного человеческого SCF (BioSource). Клетки можно поддерживать в культуре примерно в течение 15 пассажей до морфологических и функциональньных изменений.
Реагенты: химерный человеческий нитрофенил-IgE (Serotec, MCA333S, 20 мкг/мл исходного раствора); NP16-BSA (Biosearch Technologies, N5050-10 мг, 10 мг/мл исходного раствора); PNAG субстрат (п-Нитрофенил N-ацетил-β-D-Глюкозаминид; Sigma N-9376) 0,004 M=1,37 мг/мл; подготовить 1,37 мг/мл в цитратном/фосфатном буфере, 150 мкл/образец (это занимает 30-60 минут при 37°C с частым вихревым перемешиванием)); цитратный/фосфатный буфер (0,04 M безводной лимонной кислоты (FW 192 г/моль); 2 мл 1 M лимонной кислоты (Hampton Research); 0,02 M Na2HPO4; 2 мл 0,5 M Na2HPO4 (SIGMA), использовать 5 н. раствор NaOH для доведения pH до 4,6 (примерно 1 мл) на 50 мл раствора); модифицированный буфер Tyrode (буфер Tyrode порошкообразный (SIGMA, T2145) один флакон в 1 л дистиллированной воды; дать порошку раствориться и затем добавить следующее: 1 M буфера HEPES pH 7,8 до конечной концентрации 20 мМ (1:50), 0,5 M NA2HPO4 до конечной концентрации 0,5 мМ (1:1000), 0,04% BSA (400 мг/л), pH должен быть 7,4); глициновый стоп-раствор (0,32 мг глицина, 2,4 г/100 мл; 0,2 M карбоната натрия (FW 106 г/моль), 2,5 г/100 мл).
Протокол: LAD2 осторожно выгружали из колбы для культивирования, собирали и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Использованную культуральную среду удаляли и сохраняли. Клетки ресуспендировали при 0,8-1 миллион/мл в использованной культуральной среде. 100 мкл 0,5 мкг/мл NP-IgE высевали в использованную культуральную среду в круглодонный 96-луночный планшет. Примечание: IgE раствор нужно сделать прозрачным с удалением агрегатов путем центрифугирования при > 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°C. 100 мкл клеток добавляли в планшет и снова помещали в инкубатор для культуры ткани на 12-14 часов для сенсибилизации клеток и нагрузки FcepsilonR рецепторов. Охлажденному модифицированному буферу Tyrode давали нагреться до комнатной температуры в течение ночи.
На следующее утро планшет центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Среду удаляли с использованием многоканального устройства для пипетирования. Клеточные осадки после центрифугирования ресуспендировали в 100 мкл модифицированного буфера Tyrode при осторожном растирании (5 ударов). Клетки оставляли на 3,5 часа в инкубаторе для культуры ткани. Примечание: В это время необходимо нагреть цитратный/фосфатный буфер до 37°C и затем ресуспендировать PNAG субстрат до 1,3 мг/мл с периодическим вихремым перемешиванием. Осуществляли серийное разведение соединения 1:50 в модифицированном буфере Tyrode и затем 11 мкл соединения, без дальнейшего смешивания, добавляли в каждую лунку (получая конечную концентрацию DMSO 0,2%). Соединение преинкубировали в течение 30-60 минут в инкубатор для культуры ткани.
Добавляли 12 мкл 1,0 мкг/мл NP16-BSA, разведенного в модифицированном буфере Tyrode. Общий объем теперь составлял 123 мкл. Можно добавить иономицин при конечной концентрации 100 нМ вместо NP-BSA в качестве Syk-независимого контроля для стимуляции. Инкубировали в инкубатор для культуры ткани в течение 90 минут.
Планшет центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут, 75 мкл супернатанта (SN) переносили в пустой 96-луночный планшет для хранения. Оставшийся SN удаляли из содержащего клетки планшета и отбрасывали. 125 мкл 0,1% Triton X-100 в модифицированном буфере Tyrode добавляли к клеточному осадку после центрифугирования, пипетировали вверх/вниз для лизиса клеток и смесь инкубировали на льду в течение 15 минут.
30 мкл супернатанта из планшета для хранения или 5 мкл лизата клеточного осадка плюс 25 мкл 0,1% раствора Triton добавляли в новые 96-луночные плоскодонные планшеты в должном порядке для конечного считывания планшетов. 150 мкл PNAG субстрата добавляли ко всем лункам. Планшет инкубировали в 37°C в бактериальном инкубаторе в течение 1 часа.
50 мкл стоп-раствора добавляли к каждой лунке. Лунки с наибольшей активностью должны быть ярко-желтыми. Планшет сразу же считывали при 405 нМ.
Рассчитывали % выделения на лунку (путем вычитания фонового значения из всех лунок) = 100×(SN/(SN + 6×клеточный лизат)). Net% выделения=100×(SN стим.-SN PBS)/(SN стим. + клетки лизата стим.-SN PBS).
Критерии контроля качестве анализа: 3 первичных параметра осуществления анализа:
1) процент выделения должен быть в пределах 10-20% в IgE-и DMSO-обработанных лунках (40% выделения с 100 нМ иономицина); 2) значение ИК50 для соединений с Syk должно быть в пределах 50-200 нМ; 3) Z' для анализа должен быть >0,55.
5.2.8 Протокол анализа биомаркера Syk (измерения фосфоноBLNK при помощи PhosFlow в анти-IgM стимулированных Ramos)
Клетки: клетки B-клеточной лимфомы Ramos (клон RA1, CRL1596) от ATCC растут быстро, и необходимо расщепление 1:20 каждые 3-4 дня для их поддержания. Клетки выращивали в RPMI/10% FBS.
Реагенты: AffiniPure F(ab')фрагмент козлиного анти-человеческого IgM (Jackson, cat, 109-006-129, 1,3 мг/мл); PE мышиное анти-фосфоноBLNK (pY84, BD Pharmingen, cat. 558442); реагент CytoFix (BD Pharmingen, cat. 554655); Perm/промывочный буфер I (BD Pharmingen, cat. 557885, 10X раствор); BSA буфер для окрашивания (BD Pharmingen, cat. 554657).
Протокол: Ramos клетки расщепляли 1:1 с использованием свежей питательной среды за день до эксперимента. В день эксперимента клетки центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Всю использованную культуральную среду сохраняли. Клетки ресуспендировали при 1 млн/мл в использованной культуральной среде. Подготавливали предварительно обработанный соединением планшет в 96-луночном формате с достаточным объемом клеток для покрытия желаемого количества лунок, принимая во внимание, что в планшете для обработки количество клеток составляет 50 мкл клеток/лунка, например, для 4 лунок добавляли 200 мкл клеток. В отдельном 96-луночном планшете соединения разводили 1:50 в использованной культуральной среде. 22 мкл разведенного соединения добавляли к 200 мкл клеток в планшет, предварительно обработанный соединением. Планшет снова помещали в инкубатор для культуры ткани на 30-60 минут. CytoFix реагент предварительно нагревали на 37°C водяной бане перед стимуляцией клеток.
Подготавливали 40 мкг/мл анти-IgM раствора в использованной культуральной среде. 50 мкл анти-IgM раствора на лунку добавляли в новый 96-луночный круглодонный планшет (планшет для стимуляции клеток). Включали только использованные культуральные среды в качестве контролей. 50 мкл предварительно обработанных соединением клеток быстро добавляли в планшет, содержащий анти-IgM, с использованием многоканального устройства для пипетирования, и планшет снова помещали в инкубатор для культуры ткани на 10 минут.
Равный объем (100 мкл) предварительно нагретого CytoFix реагента добавляли ко всем лункам планшета для стимуляции клеток. Планшет снова помещали в инкубатор для культуры ткани на 10 минут, центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут, среду осторожно выгружали и планшет высушивали через промокательную бумагу.
100 мкл Perm/промывочного буфера I добавляли ко всем лункам. Планшет оставляли при комнатной температуре в течение 10 минут, центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут, среду осторожно выгружали и планшет высушивали через промокательную бумагу. Клетки промывали три раза при помощи 200 мкл BSA буфера для окрашивания. Планшет центрифугировали, разгружали и промокали.
Подготавливали достаточное количество раствора антитела для покрытия планшета, принимая во внимание, что 100 мкл буфера для окрашивания содержат 5 мкл pBLNK антитела/лунка. Добавляли 100 мкл раствора антитела на лунку, планшет осторожно постукивали для смешивания, планшет покрывали алюминиевой фольгой и помещали под вытяжку при комнатной температуре на 30 минут.
Планшет центрифугировали, разгружали и сушили промоканием. Планшет промывали один раз при помощи 200 мкл буфера для окрашивания, центрифугировали, разгружали и сушили промоканием. Конечный клеточный осадок после центрифугирования ресуспендировали в 100 мкл буфера для окрашивания и считывали на цитометре.
Соединения в таблице 2 имеют следующие значения, определенные в анализах PKCθ, mTOR и Syk.
В таблице 2 выше использовали следующую систему: ***** = 0,1-5 мкМ, **** = 5,1-10 мкМ, *** = 10,1-20 мкМ, ** = 20,1-30 мкМ, * = >30 мкМ. "ND" означает, что соединение не было испытано против конкретно указанного фермента.
Объем вариантов воплощения изобретения, раскрытых в настоящей заявке, не должен ограничиваться конкретными вариантами воплощения, раскрытыми в примерах, которые предназначены в качестве иллюстрации некоторых аспектов раскрываемых вариантов воплощения изобретения, и любые варианты воплощения изобретения, которые являются функционально эквивалентными, охватываются настоящим раскрытием. Действительно, различные модификации вариантов воплощения изобретения, раскрываемых в настоящей заявке, являющиеся дополнением к тем, которые показаны и описаны в настоящей заявке, должны быть очевидны для специалистов в данной области и включены в объем прилагаемой формулы изобретения.
Были указаны различные ссылки, раскрытие которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ОЧИСТКИ ГЕТЕРОАРИЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | 2010 |
|
RU2557242C2 |
| ИМИДАЗОПИРАЗИНОНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ PDE1 | 2016 |
|
RU2712219C2 |
| ИНГИБИТОРЫ mTOR КИНАЗЫ ДЛЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАНИЙ И ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С mTOR/PI3K/AKT ПУТЕМ МЕТАБОЛИЗМА | 2009 |
|
RU2692796C2 |
| ИНГИБИТОРЫ mTOR КИНАЗЫ ДЛЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАНИЙ И ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С mTOR/PI3K/AKT ПУТЕМ МЕТАБОЛИЗМА | 2009 |
|
RU2546658C2 |
| СОЕДИНЕНИЯ ИМИДАЗОТРИАЗИНОНА | 2011 |
|
RU2603140C2 |
| ГЕТЕРОАРИЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ИХ КОМПОЗИЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНКИНАЗЫ | 2007 |
|
RU2474582C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ИМИДАЗОПИРИДИН-2-ОНА, ОБЛАДАЮЩИЕ mTOR ИНГИБИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ | 2009 |
|
RU2478636C2 |
| ИДЕНТИФИКАЦИЯ МУТАЦИИ LKB1 В КАЧЕСТВЕ ПРОГНОСТИЧЕСКОГО БИОМАРКЕРА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ИНГИБИТОРАМ TOR-КИНАЗЫ | 2011 |
|
RU2565034C2 |
| ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ PRMT5 | 2018 |
|
RU2797822C2 |
| АМИНОТРИАЗОЛОПИРИДИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗ | 2009 |
|
RU2552642C2 |
Изобретение относится к новым производным имидазо[4,5-b]пиразина общей формулы
или к его фармацевтически приемлемой соли, где R1 представляет собой или арил, незамещенный или замещенный одной из групп: галоген, гидроксил, С1-6алкил, С1-6алкоксил, NH2, NHC1-6алкил, NH(C1-6алкил)2, NHC1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, -C(O)NH2, -С(O)ОС1-6алкил, -С(O)NHC1-6алкил, циано, карбокси, гетероарил и гетероциклоалкил; или гетероарил, незамещенный или замещенный одной из групп: C1-6алкокси, гидрокси, -С1-6алкил, NH2 и NHC1-6алкил; гетероциклоалкил, незамещенный или замещенный одной группой =O; и R2 представляет собой Н; незамещенный С3-4алкил; С1-4алкил, замещенный С5-6циклоалкилом, незамещенным или замещенным одной группой, выбранной из амино, гидроксила, C1-6алкокси, или гетероциклоалкилом, незамещенным или замещенным 1-2 группами, выбранными из =O, С1-6алкила; или С5-6циклоалкил, замещенный одной группой, выбранной из гидроксила, С1-6алкоксила, С1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, CONH2; или замещенный или незамещенный гетероциклоалкил; где арил представляет собой ароматическую структуру, состоящую из 6-10 атомов углерода, включающую одно кольцо или два конденсированных кольца; где гетероарил представляет собой 5-10-членную арильную кольцевую систему, содержащую 1-2 гетероатома, выбранные из азота, кислорода и серы; где гетероциклоалкил представляет собой 5-9-членный неароматический циклоалкил, в котором 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода; при условии, что соединение не представляет собой 1,3-дигидро-5-фенил-2Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он. Также, изобретение относится к конкретным производным имидазо[4,5-b]пиразина, к фармацевтической композиции на его основе, к способу лечения или профилактики рака, воспалительных состояний, иммунологических состояний, метаболических состояний, и к способу ингибирования киназы в клетке, экспрессирующей указанную киназу. Технический результат: получены новые производные имидазо[4,5-b]пиразина, обладающие полезными биологическими свойствами. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 210 пр.
1. Соединение, имеющее следующую формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль,
где R1 представляет собой или арил, незамещенный или замещенный одной из групп: галоген, гидроксил, С1-6алкил, С1-6алкоксил, NH2, NHC1-6алкил, N(С1-6алкил)2, NHC1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, -C(O)NH2, -С(O)ОС1-6алкил, -С(O)NHC1-6алкил, циано, карбокси, гетероарил и гетероциклоалкил; или гетероарил, незамещенный или замещенный одной из групп: С1-6алкокси, гидрокси, С1-6алкил, NH2 и NHC1-6алкил; гетероциклоалкил, незамещенный или замещенный одной группой =O; и
R2 представляет собой Н; незамещенный С3-4алкил; С1-4алкил, замещенный С5-6циклоалкилом, незамещенным или замещенным одной группой, выбранной из амино, гидроксила, С1-6алкокси, или гетероциклоалкилом, незамещенным или замещенным 1-2 группами, выбранными из =O, С1-6алкила; или
С5-6циклоалкил, замещенный одной группой, выбранной из гидроксила, С1-6алкоксила, С1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, CONH2; или
замещенный или незамещенный гетероциклоалкил;
где арил представляет собой ароматическую структуру, состоящую из 6-10 атомов углерода, включающую одно кольцо или два конденсированных кольца;
где гетероарил представляет собой 5-10-членную арильную кольцевую систему, содержащую 1-2 гетероатома, выбранные из азота, кислорода и серы;
где гетероциклоалкил представляет собой 5-9-членный неароматический циклоалкил, в котором 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода;
при условии, что соединение не представляет собой 1,3-дигидро-5-фенил-2Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
2. Соединение по п.1, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил.
3. Соединение по п.2, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный хинолин, замещенный или незамещенный пиридин, замещенный или незамещенный пиримидин, замещенный или незамещенный индол или замещенный или незамещенный тиофен.
4. Соединение по п.1, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил.
5. Соединение по п.4, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный фенил.
6. Соединение по п.1, где R2 представляет собой незамещенный С3-4алкил или С1-4алкил, замещенный замещенным или незамещенным циклоалкилом или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
7. Соединение по п.6, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный фенил.
8. Соединение по п.1, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил, и R2 представляет собой С1-4алкил, замещенный замещенным или незамещенным циклоалкилом или замещенным или незамещенным гетероциклоалкилом.
9. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение представляет собой:
(1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-6-(3,4,5-триметоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(3-метоксибензил)-6-(4-метилсульфонил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(1-гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-6-фенил-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(1-гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-гидрокси-3-метилбутан-2-ил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-бензил-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(4-метоксибензил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-фенилэтил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-изопропил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-циклогексил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
5-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-изобутил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(2-гидроксиэтил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1(3-метилбутан-2-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(3-метилбутан-2-ил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
1-циклопентил-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(тетрагидрофуран-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклопропилметил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклопентилметил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-неопентил-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-изопропил-6-(3-изопропилфенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-изопропил-6-(2-метоксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(2-гидрокси-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(2-гидрокси-1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-бензгидрил-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-1-(1-фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(R)-1-(1-фенилпропил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(5-изопропил-2-метоксифенил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(3-метоксибензил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклопентилметил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(2-фторфенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(4-фторфенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-циклопентил-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(3-фторфенил)этил)-6-хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(3-метоксифенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(4-метоксифенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(хинолин-5-ил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(хинолин-5-ил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(изохинолин-5-ил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-изопропил-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(4-хлорфенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(4-метилсульфонил)фенил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(пиридин-4-ил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(2-фторфенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-фенилэтил)-6-(хинолин-6-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(пиперидин-4-илметил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(пиридин-2-ил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-(пиридин-3-ил)этил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1S,4S)-4-гидроксиметил)циклогексил)-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
N-(4-(2-оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)метансульфонамид;
6-(3-(метилсульфонил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-аминофенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-(диметиламино)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-фенил-6-(хинолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(1-фенилэтил)-6-(4-(трифторметил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
N-(3-(2-оксо-3-(1-фенилэтил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)метансульфонамид;
6-(4-(метилсульфонил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклопентилметил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-изобутил-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-циклопентил-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-циклогексил-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид;
метил 4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензоат;
1-(циклогексилметил)-6-(пиридин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-метилбензамид;
1-(циклогексилметил)-6-(4-(гидроксиметил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(пиридин-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил;
1-(циклогексилметил)-6-(1Н-индол-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-изопропилбензамид;
1-(2-гидроксиэтил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(1Н-индол-6-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
3-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид;
6-(4-(аминометил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((1-метилпиперидин-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензонитрил;
1-((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(пиридин-2-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-N-этилбензамид;
1-(циклогексилметил)-6-(4-(2-гидроксипропан-2-ил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(4-гидрокси-2-метилфенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензойная кислота;
6-(4-гидроксифенил)-1-(2-метоксиэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(3-метоксипропил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-фенилэтил-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-фенил-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(1Н-пиразол-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(2-оксоиндолин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(1Н-индазол-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(6-метоксипиридин-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(пиперидин-4-илметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(((1R,4R)-4-аминоциклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(6-гидроксипиридин-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(2-метоксипиридин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо [4,5-b] пиразин-5-ил)бензамид;
2-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)уксусная кислота;
2-(4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)фенил)ацетамид;
1-(циклогексилметил)-6-(2-оксоиндолин-6-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(3-(циклогексилметил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)-3-метилбензойная кислота;
N-метил-4-(2-оксо-3-(((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид;
4-(2-оксо-3-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид;
6-(4-(2-гидроксипропан-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1Н-индол-5-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-(циклогексилметил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
4-(2-оксо-3-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-5-ил)бензамид;
6-(3-(2Н-1,2,3-триазол-4-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-имидазол-1-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(2Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(2Н-тетразол-5-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(2-гидроксипиридин-4-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(2Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-имидазол-2-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(2-гидроксипропан-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(4-(5-метил-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-пиразол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-(5-(аминометил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-она;
1-(циклогексилметил)-6-(4-(5-(трифторметил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((тетрагидрофуран-2-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1R,4R)-4-(гидроксиметил)циклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((1R,4R)-4-метоксиметил)циклогексил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(((1R,4R)-4-гидроксициклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(((1S,4S)-4-гидроксициклогексил)метил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
6-(4-(5-(морфолинометил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-(2-морфолиноэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
1-(циклогексилметил)-6-(4-(оксазол-5-ил)фенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(2-метил-1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
6-(4-(5-(метоксиметил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-((1S,4S)-4-(гидроксиметил)циклогексил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-метил-1Н-пиразол-4-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1Н-пиразол-4-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
дигидрохлорид 6-(2-амино-1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
6-(4-(5-(2-гидроксипропан-2-ил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(5-изопропил-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-((1S,4S)-4-(метоксиметил)циклогексил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-6-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(2-(2,2-диметилтетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-6-(4-гидроксифенил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-пиразол-1-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-морфолиноэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-бензо[d]имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-(1Н-имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
6-(4-(5-гидроксиметил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-(1Н-имидазол-5-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
6-(4-гидроксифенил)-1-((5-оксопирролидин-2-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4,5-диметил-1Н-имидазол-2-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-5-ил)фенил)-1-((1S,4S)-4-метоксициклогексил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-5-ил)фенил)-1-((1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b] пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(5-((диметиламино)метил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-(пирролидин-2-илметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
дигидрохлорид 6-(2-аминобензимидазол-5-ил)-1-(циклогексилметил)-4-имидазолино[4,5-b]пиразин-2-она;
6-(2-диметиламино)-1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-гидроксифенил)-1-(пиперидин-3-илметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-пиперидин-1-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
1-(циклогексилметил)-6-(2-(метиламино)пиримидин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(2-(2-метоксиэтиламино)пиримидин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(5-оксопирролидин-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-метил-2-морфолинопропил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(1-морфолинопропан-2-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(пирролидин-2-ил)фенил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(5-(гидроксиметил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(1R,4R)-4-(6-(4-гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид;
(1S,4S)-4-(6-(4-гидроксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид;
6-(4-(5-оксопирролидин-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(пирролидин-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-(гидроксиметил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(5-(2-гидроксиэтил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(пиримидин-5-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-фторпиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-аминопиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(5-метил-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-(метиламино)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(2-метил-4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
1-(циклогексилметил)-6-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(гидроксиметил)тиофен-2-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1Н-бензо[d]имидазол-6-ил)-1-(1R,4R)-4-метоксициклогексил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4,5-диметил-1Н-имидазол-2-ил)фенил)-1-(2-морфолиноэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(6-(2-гидроксипропан-2-ил)пиридин-3-ил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(4Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-морфолино-2-оксоэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(3-метил-4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(1Н-имидазол-2-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(4-(5-(аминометил)-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1H-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(1Н-бензо[d]имидазол-5-ил)-1-(2-тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
6-(2-аминопиримидин-5-ил)-1-(циклогексилметил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
гидрохлорид 6-(4-гидроксифенил)-1-((1-метилпиперидин-2-ил)метил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-она;
(R)-6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(S)-6-(4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(1-фенилэтил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он;
(1R,4R)-4-(6-(4-(2-гидроксипропан-2-ил)фенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-1-ил)циклогексанкарбоксамид или
6-(4-(5-метил-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-1-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)-1Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2(3Н)-он.
10. Фармацевтическая композиция для применения при лечении или профилактике рака, воспалительного состояния, иммунологического состояния или метаболического состояния, включающая эффективное количество соединения, имеющего формулу:
или его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или наполнитель,
где R1 представляет собой или арил, незамещенный или замещенный одной из групп: галоген, гидроксил, С1-6алкил, С1-6алкоксил, NH2, NHC1-6алкил, N(С1-6алкил)2, NHC1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, -C(O)NH2, -С(O)ОС1-6алкил, -С(O)NHC1-6алкил, циано, карбокси, гетероарил и гетероциклоалкил; или гетероарил, незамещенный или замещенный одной из групп: С1-6алкокси, гидрокси, С1-6алкил, NH2 и NHC1-6алкил; гетероциклоалкил, незамещенный или замещенный одной группой =O; и
R2 представляет собой Н; незамещенный С3-4алкил; С1-4алкил, замещенный С5-6циклоалкилом, незамещенным или замещенным одной группой, выбранной из амино (NH2), гидроксила, С1-6алкокси, или гетероциклоалкилом, незамещенным или замещенным 1-2 группами, выбранными из =O, С1-6алкила; или
С5-6циклоалкил, замещенный одной группой, выбранной из гидроксила, C1-6алкоксила, С1-6алкилС1-6алкокси, С1-6алкилгидрокси, CONH2; или
незамещенный гетероциклоалкил;
где арил представляет собой ароматическую структуру, состоящую из 6-10 атомов углерода, включающую одно кольцо или два конденсированных кольца;
где гетероарил представляет собой 5-10-членную арильную кольцевую систему, содержащую 1-2 гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы;
где гетероциклоалкил представляет собой 5-9-членный неароматический циклоалкил, в котором 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода;
при условии, что соединение не представляет собой 1,3-дигидро-5-фенил-2Н-имидазо[4,5-b]пиразин-2-он.
11. Фармацевтическая композиция по п.10, подходящая для перорального, парентерального введения, введения через слизистую оболочку, чрескожного или местного введения.
12. Способ лечения или профилактики рака, воспалительного состояния, иммунологического состояния или метаболического состояния, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по п.1.
13. Способ по п.12, где рак представляет собой рак головы, шеи, глаза, полости рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, грудной клетки, кости, легкого, толстой кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почки, печени, поджелудочной железы и головного мозга или центральной нервной системы.
14. Способ по п.12, где воспалительное состояние представляет собой псориаз, астму, аллергический ринит, бронхит, хроническое обструктивное легочное заболевание, кистозный фиброз, воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженной толстой кишки, болезнь Крона, слизистый колит, язвенный колит, диабет или ожирение.
15. Способ по п.12, где иммунологическое состояние представляет собой ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, рассеянный склероз, обыкновенную волчанку, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, миастению гравис, болезнь Грейва или диабет.
16. Способ по п.12, где метаболическое состояние представляет собой ожирение или диабет.
17. Способ ингибирования киназы в клетке, экспрессирующей указанную киназу, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством соединения по п.1.
| Пломбировальные щипцы | 1923 |
|
SU2006A1 |
| КОМПОЗИЦИЯ ИНГРЕДИЕНТОВ ДЛЯ БАЛЬЗАМА | 2011 |
|
RU2458699C1 |
| Кипятильник для воды | 1921 |
|
SU5A1 |
| Gottlieb R | |||
| Et al: "Organic electrochemistry, II | |||
| Приспособление для точного наложения листов бумаги при снятии оттисков | 1922 |
|
SU6A1 |
| Nagashima, Tadamichi et al: "Solution-phase parallel | |||
