СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КАЛИЦИВИРОЗА КОШЕК Российский патент 2013 года по МПК A61K31/4196 A61P31/12 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам лечения калицивироза кошек.

Известен способ лечения калицивироза кошек, включающий применение противовирусного препарата рибавирин (Povey R.C. Effect of orally administered ribavirin on experimental feline calicivirus infection in cats / R.C.Povey // Am. J. Vet. Res. - 1978. - Vol.39. - P.1337-1341). Способ лечения калицивироза кошек предполагает пероральное введение рибавирина в дозе 75 мг/кг массы животного, в 3 приема в сутки, в течение 10 дней.

Рибавирин - противовирусный препарат, синтетический аналог нуклеозидов, механизм действия которых заключается в ингибировании дегидрогеназы аденозинмонофосфата, что приводит к торможению синтеза вирусных РНК и ДНК. При этом рибавирин селективно ингибирует синтез вирусной РНК, не подавляя синтез РНК в нормально функционирующих клетках. Рибавирин легко проникает в пораженные клетки и быстро фосфорилируется внутриклеточной аденозинкиназой в рибавирин моно-, ди- и трифосфат. Эти метаболиты, особенно рибавирина трифосфат, обладают выраженной противовирусной активностью. Рибавирин ингибирует репликацию новых вирионов, что обеспечивает снижение вирусной нагрузки. Установлено, что препараты рибавирина эффективны в отношении многих ДНК и РНК вирусов, не чувствительных к другим антивирусным препаратам, в том числе и в отношении вируса калицивироза кошек.

Однако исследования по противовирусной активности рибавирина в отношении калицивироза кошек были проведены на незначительном количестве экспериментально инфицированных животных, что не дает достоверных данных о дозе и сроках его применения, способствующих выздоровлению кошек, естественно инфицированных этим вирусом. Доза в предлагаемом способе достаточно высокая, вызывает явления токсикоза, сопровождающиеся снижением количества эритроцитов и лейкоцитов, повышением активности аланинаминотрансфераз (АЛТ), появлением желтухи, снижением массы тела.

Несмотря на высокую активность рибавирина против многих вирусов, препарат не нашел применения в ветеринарной практике из-за выраженной токсичности.

Наиболее приемлемым, с точки зрения описанных недостатков, и принятым за прототип является способ лечения гепатита С человека при помощи препарата рибавирин-Липинт.

Рибавирин-Липинт - новый препарат липосомального рибавирина, использующий механизм адресной доставки вещества. Рибавирин-Липинт обладает меньшей токсичностью и более высокой терапевтической эффективностью, чем существующие препараты рибавирина.

Этот препарат прошел клинические испытания и рекомендован для лечения гепатита С у людей. Доза препарата рибавирин-Липинт в данном способе лечения составляет 1000 мг в сутки (1 флакон утром и 1 флакон вечером).

Данных о применении препарата рибавирин-Липинт при калицивирозе кошек нет.

Задача - расширение арсенала способов лечения калицивироза кошек.

Поставленная техническая задача решается тем, что в известном способе лечения калицивироза кошек, включающем пероральное введение рибавирина-Липинт, согласно изобретению кошкам выпаивают рибавирин-Липинт в дозе 20-25 мг/кг массы тела 1 раз в день, перед приемом корма, в течение 10 дней.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Определение противовирусной активности препарата рибавирин-Липинт в отношении вируса калицивироза кошек в условиях in vitro

В опытах использовали вирус калицивироза кошек (штамм «Ларс-30ДЕП). Инфекционную активность вируса определяли в чувствительной перевиваемой линии культур клеток почки котенка (F-81). Культивирование и заражение клеток вирусом калицивироза кошек проводили на перевиваемой линии культуры клеток F-81 (почка котенка) во флаконах для клеточных культур (Nunc, Дания) до появления 100% цитопатогенного действия. Клетки выращивали в среде Игла MEM с двойным набором аминокислот и витаминов (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН») с добавлением 5-10% эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone, lot №ASA28574), 0,06% L-глутамина и 100 мкг/мл канамицина. Клетки культивировали при 37°C и 5% CO₂. В качестве поддерживающей среды использовали ту же среду без сыворотки.

Определение токсичности и противовирусной активности препарата проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Р.У.Хабриев, ОАО «Издательство Медицина», 2005. - 832 с.).

Определение инфекционной активности вируса калицивироза кошек проводили микрометодом в 96-луночных культуральных планшетах (Costar) с культурой клеток F-81 с использованием не менее четырех параллельных рядов. Инфекционный титр вируса выражали в Т_{ЦД50/0,1 мл} (50%-ная тканевая цитопатическая доза).

Определение противовирусной активности препарата in vitro. Монослой используемой культуры клеток заражали вирусом калицивироза кошек в дозе не менее 1 ТЦД/кл, через 1,5 часа после этого его отмывали питательной средой без сыворотки и вносили препарат в 50%-ной ингибирующей дозе (опыт) или разводящую среду (контроль). Через 72 часа культивирования вируса в такой биосистеме культуральную жидкость титровали. Противовирусный эффект препарата рассчитывали по соотношениям инфекционных активностей вируса в опытных и контрольных образцах. В каждом опыте проводили дополнительный контроль на токсичность испытуемой дозы препарата (табл.1).

Таблица 1 Название препарата Использованная доза препарата Концентрация вируса калицивироза кошек (M±m), lg ТЦД_{50/0,1 мл} Опыт Контроль «Рибавирин-Липинт» 50 мкг/мл 3,17±0,14 7,5±0,24

В результате проведенных исследований установили, что исследованный препарат оказывает противовирусное действие на вирус калицивироза кошек. Снижение инфекционной активности вируса составило 4,33 lg ТЦД_{50/0,1 мл.}

Пример 2.

Определение эффективной дозы препарата рибавирин-Липинт для лечения калицивироза кошек.

Для определения эффективной дозы препарата рибавирин-Липинт в очаге калицивироза были сформированы опытные (3) группы кошек по принципу аналогов по 6 животных в каждой. У них отмечали: повышение температуры тела от 39,5 до 41,5°C, чихание, кашель, серозно-катаральные истечения из глаз и носа, отказ от еды, наличие эрозий на слизистой носа, ротовой полости и языка. У всех животных клинически и по результатам вирусологических исследований установлена острая респираторная форма калицивироза, обусловленная наличием вируса (Feline calicivirus virus) FCV.

В работе использовали коммерческий препарат рибавирин-Липинт, разработанный ГНЦ ВБ «Вектор». Препарат выпаивали животным перед кормлением в соответствующих дозах: 1-я группа - 20-25 мг/кг, 2-я - 30-35 и 3-я - 40-45 мг/кг массы тела животного, один раза в день в течение 10 дней.

За животными вели клинические наблюдения, биохимические исследования крови, ежедневный отбор проб биоматериала для проведения вирусологических исследований.

Клинические симптомы калицивироза регистрировали ежедневно перед проведением лечения и прослеживали в течение всего периода наблюдения.

Критерием эффективности терапии являлась длительность проявления клинических признаков и сроки выявления вируса в носовых, конъюнктивальных секретах и выделениях со слизистой ротовой полости. Одним из основных показателей клинического выздоровления являлось снижение температуры тела, восстановление аппетита, отсутствие истечений из носа и глаз, кашля и чихания, эрозий в ротовой полости. Вирусологическое выздоровление определяли на основании результатов вирусологических исследований проб биоматериала, отобранных от животных.

Результаты изучения лечебной эффективности рибавирина-Липинт представлены в табл.2.

В опытной группе 1 у животных длительность проявления клинических признаков составила 7-9 (7,83±0,78) дней, а сроки выявления вируса в пробах биоматериала - 5-8 (6,83±0,39) дней.

Оптимальные результаты лечения калицивироза кошек получали при использовании рибавирина-Липинт в дозе 20-25 мг/кг (опытная группа 1).

Таблица 2 Группа животных
(n=6) Доза препарата (мг/кг массы тела) Длительность проявления клинических признаков, дней (М±m) Сроки выявления вируса в пробах биоматериала, дней (М±m) Опытная 1 20-25 7,83±0,78 6,83±0,39 Опытная 2 30-35 7,67±0,81 6,67±0,45 Опытная 3 40-45 9,33±0,81 6,33±0,38

Увеличение дозы препарата до 30-35 мг/кг и 40-45 мг/кг не привело к значительным сокращениям длительности проявления клинических признаков у животных и сроков выявления вируса в пробах биоматериала у животных опытных групп 2 и 3 в сравнении с животными опытной группы 1.

Ценную информацию о функциональном состоянии печени дает определение в сыворотке крови активности ферментов печеночного происхождения - трансаминаз и щелочной фосфатазы. Трансаминазы - аланинаминотрансфераза (Алт) и аспартат аминотрансфераза (АсТ) - ферменты, катализирующие перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты. Выход трансфераз из гепатоцитов и повышение их активности в крови является маркером начальных стадий цитолитического синдрома. Рост активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови свидетельствует о синдроме холестаза при поражениях гепатобилиарной системы.

Результаты изучения влияния рибавирина-Липинт на активность ферментов сыворотки крови опытных животных представлены в табл.3.

Контроль динамики изменений биохимических показателей функционального состояния печени позволил заключить, что в выбранной дозировке (20-25 мг/кг) рибавирин-Липинт не оказывает токсического действия на гепатобилиарную систему животных (табл.3), дает оптимальные результаты лечения калицивироза кошек.

Таблица 3 Показатели Через 10 дней после применения препарата рибавирин-Липинт Перед применениям препарата рибавирин-Липинт 20-25 мг/кг 30-35 мг/кг 40-45 мг/кг   (n=6) (n=6) (n=6) (n=6) Алт, Ед/л 40,2±0,6 50,9±2,1 63,8±0,9 39,1±0,3 АсТ, Ед/л 41,2±0,3 55,0±0,5 63,6±0,8 40,9±0,7 ЩФ, Ед/л 108,8±0,9 115,9±1,2 122,3±1,1 109,6±0,8

Увеличение дозы препарата до 30-35 мг/кг и 40-45 мг/кг сопровождалось увеличением показателей Алт, АсТ и ЩФ.

Пример 3.

Для подтверждения оптимальных сроков лечения калицивироза кошек препаратом рибавирин-Липинт в дозе 20-25 мг/кг проведен производственный опыт на 32 кошках. Результаты представлены в табл.4.

Результаты вирусологических исследований были отрицательными у 84,4% животных на 5-й день лечения. Эффективность лечения к 14-му дню составила 100%.

Таблица 4 Критерии эффективности лечения Срок наблюдения, дней 5 7 14 Количество животных без проявления клинических 28 30 32 признаков калицивироза, голов       % к общему количеству животных 87,5 93,75 100 Количество животных с отрицательными результатами вирусологических исследований носовых секретов 27 29 32 % к общему количеству животных 84,4 90,6 100

Таким образом, предложенный способ лечения калицивироза кошек значительно сокращает сроки выздоровления животных и позволяет применять оптимальную дозу препарата, которая не ухудшает общего состояния организма и имеет перспективу в терапии калицивироза кошек.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает пероральное введение рибавирина-Липинт в дозе 20-25 мг/кг массы тела 1 раз в день, перед приемом корма, в течение 10 дней. Способ обладает высоким терапевтическим эффектом, ускоряет сроки выздоровления животных. 4 табл., 3 пр.

Способ лечения калицивироза кошек, включающий пероральное введение рибавирина-Липинт, отличающийся тем, что препарат используют в дозе 20-25 мг/кг массы тела 1 раз в день перед приемом корма в течение 10 дней.