Штамм "Перс" вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек Российский патент 2023 года по МПК A61K39/125 C12N7/00 C12R1/93 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, может быть использовано для разработки и изготовления средств диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек.

Калицивироз кошек (калицивирусная инфекция кошек) - высококонтагиозное вирусное заболевание, характеризующееся преимущественно поражением слизистой ротовой полости и верхних дыхательных путей [1]. Возбудитель заболевания Feline calicivirus (FCV), относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus. Вирус распространен повсеместно и поражает домашних кошек всех пород и возрастов, а также зоопарковых и диких представителей семейства кошачьих. По литературным данным калицивироз кошек обнаруживали в 18-30% случаев заболеваний, связанных с поражением верхних дыхательных путей [2-4]. Также широко распространено вирусоносительство (до 75%), особенно среди бродячих кошек [1]. Помимо часто встречающихся симптомов язвенного стоматита, ринита и конъюнктивита, заболевание может проявляться хромотой, отеками головы и конечностей, пневмонией, некрозами языка и неба, поражением желудочно-кишечного тракта [5, 6]. В различных источниках описана системная инфекция, вызывающая гибель до 60% заболевших животных [3]. Калицивироз кошек характеризуется высокой степенью изменчивости и большим антигенным разнообразием штаммов, что значительно снижает эффективность применяющихся вакцин. Изучение генетической структуры штаммов вируса калицивироза, циркулирующих на территории Российской Федерации и использование этих штаммов при производстве вакцин, значительно облегчит разработку средств специфической профилактики, обеспечивающих надежную защиту от данной инфекции.

В настоящее время известны следующие штаммы вируса калицивироза кошек, которые применяются для диагностики калицивирусной инфекции, а также производства вакцин против данного заболевания:

- штамм «F-9» [7]

- штамм «Ларе» [8];

- штамм «Эшли» [9].

Штамм «F-9» входит в состав импортных ассоциированных вакцин против инфекционных болезней кошек, данные о нем представлены в GenBank, однако, исследования показывают, что с момента его выделения, вирус калицивироза претерпел значительные генетические изменения, и вакцины на основе штамма «F-9» (и альтернативного ему «F-255») не могут обеспечить надежную защиту от заражения новыми штаммами [3]. Кроме того, на территории РФ импортные препараты, изготовленные на основе этого штамма имеют высокую стоимость.

Штамм калицивирусной инфекции «Эшли» запатентован в 2016 г. для изучения противовирусной активности препаратов в отношении возбудителя калицивироза кошек и не применяется для изготовления вакцин [9].

Наиболее близким предполагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм «Ларе» калицивироза кошек, используемый для изготовления отечественной ассоциированной вакцины «Мультифел», однако, молекулярно-генетические свойства данного штамма не изучены [8].

Генетически штаммы вируса калицивирусной инфекции принадлежат к одной разнообразной геногруппе, однако, в Восточной Азии была описана вторая геногруппа. Филогенетический анализ обычно приводит к 'звездообразной' филогении. Это генетическое разнообразие сопровождается антигенным разнообразием, хотя перекрестная реактивность достаточна, чтобы все изоляты считались принадлежащими к одному серотипу. При исследовании пространственного и временного распределения штаммов вируса калицивирусной инфекции была описана очень высокая генетическая и антигенная сложность штаммов вируса FCV, при этом в популяции кошек циркулирует множество различных штаммов вируса FCV, и ни один отдельный полевой штамм не преобладает в ней [4, 6].

Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов вируса калицивироза кошек, обладающих новыми биологическими и генетическими характеристиками, и пригодных для изготовления средств диагностики и специфической профилактики данного заболевания. Указанная задача решена в результате депонирования нового штамма «Перс» вируса калицивироза кошек, который может быть использован для проведения лабораторных исследований и изготовления средств вакцинопрофилактики.

Изолят вируса калицивироза кошек, послуживший источником для получения штамма «Перс» был выделен из патологического материала, полученного от кота, поступившего на лечение в ветеринарную клинику ВООО Центра животных «Валента» г. Владимир, в 2021 г.

Штамм «Перс» депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №458 - деп /23-8 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивироза кошек для изготовления средств диагностики и профилактики данного заболевания.

Для получения штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали перевиваемую культуру клеток почки кошки (CRFK). В результате проведения серии последовательных пассажей на данной культуре клеток из ранее выделенного изолята был получен штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивироза кошек, имеющий стабильные биотехнологическими свойства и пригодный для использования при проведении лабораторных исследований и изготовлении диагностических препаратов и препаратов специфической профилактики данного заболевания. Штамм адаптирован к перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK), что позволяет в промышленных масштабах получать вирусный материал штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивироза кошек с титрами инфекционной активности от 7,75 до 8,25 lg ТЦД₅₀/см³.

Идентификация и филогенетическое родство штамма «Перс».

Проводили генетическую идентификацию полученного вируса и сравнительный анализ последовательности кДНК. Использовали обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР). Для идентификации и филогенетического анализа осуществляли секвенирование.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3 параметрах классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA7. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X.

Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностей генных областей ORF2 (F-область, белок VP₁) и ORF3 (белок VP₂) кДНК вируса Feline calicivirus калицивироза кошек (FCV) (был взят участок длиной 324 п.н. - позиции в геноме 7253…7576 п.н.). Штамм «Перс» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов (степень сходства не более 43%), при этом относится к геногруппе 1.

Сущность изобретения отражена на графических изображениях:

Фиг. 1 - Филогенетическое древо для вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс».

Фиг.2 - Состояние монослоя клеточной линии CRFK до (А) и после (Б) репродукции вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс».

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов участка ORF2…ORF3 кДНК вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс»;

SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот белков для генного участка ORF2…ORF3 кДНК вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс».

Штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки.

Штамм «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus, виду Feline calicivirus и обладает морфологическими признаками, характерными для представителей калицивирусов: диаметр вирионов составляет 37-40 нм, вирионы без суперкапсидной оболочки, кубического типа симметрии, состоят из 32 капсомеров.

Антигенные свойства.

В антигеном и генетическом отношении калицивирус кошек отличается от калицивируса собак [1]. Все циркулирующие штаммы представляют собой единый серотип. У переболевших кошек в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в реакции нейтрализации (РН). Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой в РН в культуре клеток CRFK. Инокуляция в организм животного штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек сопровождается образованием вируснейтрализующих антител в крови в титре от 4,25 log₂ SN₅₀ до 7,00 log₂ SN₅₀ у кроликов.

Устойчивость к внешним факторам.

Вирус достаточно устойчив во внешней среде. На поверхностях при температуре (22±2)°С сохраняет активность в течение 24 ч, а при температуре 10°С и ниже - в течение 30 дней. Относительно стабилен в кислой среде при рН 4,0. Практически не чувствителен к эфиру, хлороформу. Чувствителен к формальдегиду, глутаровому альдегиду, хлорсодержащим дезинфицирующим средствам. Переносит двукратное размораживание и оттаивание.

Дополнительные признаки и свойства:

Патогенность - патогенен для естественно-восприимчивых животных.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при интраназальном заражении.

Безвреден для кроликов и белых мышей при внутримышечном и подкожном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемой культуре клеток CRFK.

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штамм «Перс» не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Условия хранения.

При хранении штамма в нативном состоянии при температуре - 70±5°С допустимая длительность хранения без освежения составляет 12 мес., а при хранении в лиофилизированном состоянии при той же температуре - 10 лет.

Биотехнологические характеристики.

Штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). Репродукция вируса в культуре клеток CRFK сопровождается специфическим цитопатическим действием, приводящим к округлению клеток и деструкции монослоя через 24-48 ч культивирования. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток CRFK. При культивировании вирус штамма «Перс» накапливается в титре не менее 7,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³ и сохраняет исходные характеристики при пассировании в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономические характеристики.

Штамм «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus, виду Feline calicivirus (FCV). Геном представляет собой 7,7 кб одноцепочечной РНК положительной полярности с тремя открытыми рамками считывания (ORF). ORF1 кодирует неструктурные белки, ORF2 кодирует основной капсидный белок VP₁, a ORF3 кодирует второстепенный капсидный белок VP₂. ORF2 разделен на шесть областей (A-F) и обычно используется для филогенетической дифференцировки изолятов FCV. Геномные области А, В, D и F в значительной степени консервативны, в то время как области С и Е более вариабельны. Область F ORF2 (7253-7329 п.н. и начальная область ORF3 (7465-7524 п.н.) консервативны и, следовательно, удобны для точной идентификации FCV [11]. Рекомбинация является распространенным механизмом эволюции FCV. Большинство зарегистрированных событий рекомбинации в геноме FCV происходят в генном участке между полимеразной (ORF1) и капсидной (ORF2) областями [12].

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Биологические и вирусологические исследования штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек.

Биологические и вирусологические методы включали адаптацию вируса, выделенного из патологического материала, полученного от заболевшего кота, к культуре клеток CRFK. Для выделения вируса, вирусную суспензию вносили на освобожденный от ростовой среды монослой перевиваемой культуры клеток CRFK и экспонировали в течение 60 мин. при температуре (37,0±0,5)°С. Затем вносили поддерживающую среду ПСС (или аналог) с добавлением 2% фетальной сыворотки крови КРС и антибиотиков (стрептомицин 100 мкг/см³ и пенициллин 100 ЕД/см³). Инфицированную культуру инкубировали при температуре (37,0±0,5)°С в течение 24-36 ч до появления специфического цитопатического действия (ЦПД) через 12-16 ч, которое характеризовалось округлением клеток и деструкцией монослоя. При поражении не менее 80% площади монослоя (24-36 ч) культуральные флаконы промораживали при температуре минус (45,0±5,0)°С и после оттаивания при комнатной температуре производили сбор вируса с последующим отбором проб для исключения микробной контаминации и определения инфекционной активности вируса методом титрования в культуре клеток CRFK. Клеточный монослой до действия вируса представлен на фиг. 2А, после формирования ЦПД - на фиг. 2Б. Титрование вируса проводилось микрометодом по общепринятой методике в культуре клеток CRFK в 96-луночных планшетах. Результаты адаптации вируса к перевиваемой линии клеток почки кошки CRFK представлены в таблице 1. Инфекционная активность вируса в культуре клеток CRFK при репродукции в течение 5 пассажей составила 8,06±0,25 lg ТЦД₅₀/см³. Данные, приведенные в таблице 1, свидетельствовали о хорошей адаптационной активности штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек к данной клеточной культуре. Первое проявление ЦПД вируса в культуре клеток CRFK наблюдается через 12-16 ч культивирования. Через 24-36 ч культивирования большая часть клеток округлялась, собиралась в агрегаты и отслаивалась от субстрата.

Пример 2. Контроль стабильности биологической активности штамма «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек.

Контроль стабильности биологической активности штамма определяли в течение 5 последовательных пассажей в культуре клеток CRFK. Результаты изучения стабильности штамма по его биологической активности в течение 5 пассажей представлены в таблице 2. В ходе проведенных исследований установлено, что штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек в течение 5 последовательных пассажей в культуре клеток CRFK проявлял стабильную биологическую активность, которая находилась в пределах от 7,75±0,25 lg ТДЦ₅₀/см³ до 8,25±0,25 lg ТДЦ₅₀/см³.

Пример 3. Получение антигена вируса калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс» вируса калицивироза кошек.

Для приготовления антигена в культуру клеток CRFK, выращенную в культуральных флаконах с площадью рабочей поверхности 300 см², предварительно слив с них ростовую среду, вносили вируссодержащий материал в дозе 0,001 ТЦД₅₀/кл. Флаконы помещали на один час в термостат при температуре (37,0±0,5)°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносили поддерживающую среду ПСС (или аналог) с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при (37,0±0,5)°С до появления ЦПД вируса. При поражении площади монослоя не менее 80% культуральные флаконы подвергали замораживанию при температуре минус (45,0±0,5)°С. Стерильный инфицированный монослой дезагрегировали с рабочей поверхности флаконов путем его разморозки при температуре (20±2)°С и периодического встряхивания. По окончании разморозки интенсивным встряхиванием остатки монослоя удаляли с рабочей поверхности, затем соблюдая условия асептики инфицированную суспензию собирали в общую емкость. Из собранного материала отбирали пробу для контроля. Контроль посевного материала штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек перед лиофилизацией осуществляли по показателю отсутствия контаминации грибами, бактериями и микоплазмами. Контроль контаминации грибами и бактериями посевного материала штамма «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек проводили по ГОСТ 28085 [10]. Контроль контаминации микоплазмами осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2997-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15) [13]. Вируссодержащий материал с активностью не ниже 7,75 lg ТЦД₅₀/см³ хранили при температуре не выше минус (20±2)°С и использовали для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.

Пример 4. Получение гипериммунной сыворотки против антигена штамма «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек.

Штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивироза кошек использовали для получения высокоактивной гипериммунной сыворотки, предназначенной для оценки иммунобиологических свойств вируса калицивироза кошек. Для гипериммунизации животных применяли антиген вируса калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс», полученный по методике, указанной в примере 3. Кроликов 8 голов, разделили на 2 группы, обе группы иммунизировали в дозе 1,0 см³ внутримышечно по следующей схеме: 1) однократно, с обескровливанием через 35 дней после иммунизации; 2) двукратно, отбор крови на 21 сутки после последней иммунизации. Полученную сыворотку крови исследования на наличие антител против антигена вируса калицивирусной инфекции кошек штамма «Перс». Титр антител определяли в реакции микронейтрализации (РМН). Данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют, что способом, описанным в примере 4, получены диагностические сыворотки со специфической активностью 4,25-7,00 log₂ SN₅₀ в РМН.

Пример 5. Изучение антигенной активности штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек на кроликах.

Для изучения антигенной активности штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек использовали вируссодержащий материал с биологической активностью равной 8,0 lg ТЦД₅₀/см³, определенной до инактивации. Инактивацию проводили с помощью водного раствора аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ). Подопытным кроликам в количестве 5 голов вводили инактивированный вируссодержащий материал в среднюю часть бедра в дозе 1,0 см³ двукратно с интервалом 21 сутки. Кроликов в количестве 5 голов оставили в качестве контроля. Титр антител к антигену вируса калицивироза кошек в сыворотках крови кроликов определяли через 14 суток после второй иммунизации в РМН по общепринятой методике.

Результаты исследований антигенной активности штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек представлены в таблице 4, из которой следует, что титр антител у иммунизированных кроликов составил 6,80±0,48 log₂ SN₅₀.

Пример 6. Определение патогенности для кошек штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек.

Патогенность штамма «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек изучали на естественно восприимчивых животных (беспородные котята в возрасте 2-3 мес). Животных разделили на две группы по 4 головы в каждой - подопытную и контрольную. Подопытным котятам инокулировали интраназально вируссодержащую культуральную жидкость в объеме 1,0 см³ с титром инфекционной активности 8,0 lg ТЦД₅₀/см³. Животным контрольной группы инокулировали интраназально 0,9% раствор хлорида натрия в объеме 1,0 см³. На 3 сутки после заражения у 3 из 4 животных подопытной группы наблюдали характерные клинические признаки калицивироза кошек: снижение активности, отказ от корма, катаральный ринит, язвенные поражения на слизистой ротовой полости и языка. Гибели животных не наблюдалось. Специфичность заболевания животных подтверждена исследованиями биоматериала методом ПЦР.

Таким образом, штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной активностью, пригоден для изготовления инактивированных вакцин, определения их иммуногенной активности, а также диагностических целей, и расширяет арсенал новых отечественных производственных штаммов вируса Feline calicivirus калицивироза кошек.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента Российской Федерации на изобретение «Штамм «Перс» вируса Feline calicivirus калицивирусной инфекции кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек».

1. Алипер Т.И., Непоклонов Е.А., Мухин А.Н. и др. Диагностика и профилактика инфекционных болезней кошек и кошек: руководство для практикующих ветеринарных врачей. Под ред. Т.И. Алипера. М: ЗооВетКнига; 2017. 300 с.

2. Komina A, Krasnikov N, Kucheruk О, Zhukova Е, Yuzhakov A, Gulyukin А. Distribution and genetic diversity of Feline calicivirus in Moscow metropolitan area. J Vet Sci. 2022 Nov;23(6):e92. doi: 10.4142/jvs.22182. PMID: 36448438; PMCID: PMC9715382.

3. Глотова Т.И., Семенова O.B., Никонова A.A., Глотов А.Г., Вяткин Ю.В., Бондарь А.А. Выделение и филогенетический анализ калицивируса кошек в Сибири. Вопросы вирусологии. 2018; 63(6):268-274. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0507-4088-2018-63-6-268-274.

4. Hou J, Sánchez-Vizcaino F, McGahie D, Lesbros С, Almeras T, Howarth D, O'Hara V, Dawson S, Radford AD. European molecular epidemiology and strain diversity of feline calicivirus. Vet Rec. 2016 Jan 30;178(5):114-5. doi: 10.1136/vr.103446. Epub 2016 Jan 25. PMID: 26811440; PMCID: PMC4752659.

5. Рахманина M.M. Калицивирусная инфекция кошек: биологические свойства возбудителя, эпизоотология, специфические средства и методы профилактики: Автореф. дисс. … д-ра ветеринар, наук. М.; 2005.

6. Hofmann-Lehmann R, Hosie MJ, Hartmann К, Egberink H, Truyen U, Tasker S, Belák S, Boucraut-Baralon C, Frymus T, Lloret A, Marsilio F, Pennisi MG, Addie DD, Lutz H, Thiry E, Radford AD, Mostl K. Calicivirus Infection in Cats. Viruses. 2022 Apr 29;14(5):937. doi: 10.3390/vl4050937. PMID: 35632680; PMCID: PMC9145992.

7. Вакцина против калицивироза, вирусного ринотрахеита и панлейкопении кошек Нобивак Tricat Trio. - URL: https://www.vetlek.ru/directions/?id=112 (дата обращения 03.03.23 г.).

8. Пат. 2184567 Российская Федерация, МПК А61К 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм feline calicivirus, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов [Текст]/Рахманина М.М., Элизбарашвили Э.И., Уласов В.И.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2001113087/13; заявл. 2001.05.16; опубл. 2002.07.10.

9. Пат. 2628196 Российская Федерация, МПК А61К 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм Эшли вируса калицивироза кошек для изучения противовирусной активности препаратов в отношении калицивироза кошек [Текст]/Глотова Т.П., Семенова О.Э., Глотов А.Г.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2016121721; заявл. 2016.06.01; опубл. 2017.08.14.

10. ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности».

11. Zhou L, Fu N, Ding L, Li Y, Huang J, Sha X, et al. Molecular characterization and cross-reactivity of feline calicivirus circulating in Southwestern China. Viruses. 2021;13(9):1812.

12. Kim SJ, Park YH, Park KT. Development of a novel reverse transcription PCR and its application to field sample testing for feline calicivirus prevalence in healthy stray cats in Korea. J Vet Sci. 2020;21(5):e71.

13. ГФ XIV, т. 2, c. 2997-3008 Испытания на присутствие микоплазм (ОФС.1.7.2.0031.15).

--->

<?xml version="1.0 encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FCV Pers.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"

productionDate="2023-03-17">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-03-17</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>494</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-03-17</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ &quot;Федеральный центр охраны

здоровья животных&quot; (ФГБУ &quot;ВНИИЗЖ&quot;)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>FGBI &quot;ARRIAH&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Доронин Максим

Игоревич</InventorName>

<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Штамм «Перс» вируса калицивироза

кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической

профилактики калицивироза кошек</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>285</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..285</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q1">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>taactgcctcctacatgggaattcaattggcaaagattcggcttgcctc

taacattaggagtacaatgacaaaattatgaactcaattttaggtttaattgacactgttacaaacacaa

ttggcaaagcccaacaaattgagttggacaaagctgcacttggccaacaacgtgagctggcactgcaacg

tatgaatcttgatcgccaggcgttgaacaaccaagtagagcagtttaacaaaattctagagcagagggta

caaggccccatccaatcagtacgtct</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>95</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..95</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>LPPTWEFNWQRFGLPLTLGVQQNYELNFRFNHCGFGACGGYKHNWQSPT

NVGQSCTWPTTAGTATYESSPGVEQPSRAVQNSRAEGTRPHPISTS</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к области биотехнологии и касается нового штамма «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером №458 - деп / 23-8 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ». Представленный штамм репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). В перевиваемой культуре клеток почки кошки CRFK в течение 36 часов инкубирования титр инфекционной активности вируса достигает значений 8,25±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточной культуре на протяжении 5 пассажей. Представленный штамм может быть использован для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек и для контроля антигенной активности вакцин против данного заболевания. 2 ил., 4 табл., 6 пр.

Штамм «Перс» вируса калицивирусной инфекции кошек семейства Caliciviridae, рода Vesivirus, вида Feline calicivirus, депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером №458 - деп / 23-8 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ», предназначен для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивирусной инфекции кошек.