Штамм "Фауна" вируса калицивироза кошек Feline calicivirus для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек Российский патент 2023 года по МПК A61K39/125 C12N7/00 C12R1/93 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, может быть использовано для разработки и изготовления средств диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек и контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против данного заболевания.

Калицивироз кошек (калицивирусная инфекция кошек) - высококонтагиозное вирусное заболевание, чаще всего протекающее с симптомами язвенного стоматита и поражения верхних дыхательных путей [1, 2]. Возбудитель заболевания Feline calicivirus (FCV), относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus. Вирус впервые был выделен в 1957 г. и в настоящее время считается одним из важнейших патогенов, поражающим как домашних кошек, так и диких представителей семейства кошачьих [3, 4]. Помимо часто встречающихся симптомов язвенного стоматита, ринита и конъюнктивита, в литературе описаны и другие более редкие клинические признаками калицивирусной инфекции: полиартрит, аборты, энтерит, пневмония [5, 6]. В последние десятилетия были зарегистрированы высоковирулентные штаммы калицивироза кошек, вызывающие системную инфекцию с летальным исходом [1]. Вирус калицивироза кошек характеризуется высокой степенью изменчивости и большим антигенным разнообразием штаммов, что значительно снижает эффективность применяемых вакцин. Изучение генетической структуры штаммов FCV, циркулирующих на территории РФ, значительно облегчит разработку средств специфической профилактики, обеспечивающих надежную защиту от данной инфекции.

В настоящее время известны следующие штаммы вируса калицивироза кошек, которые применяются для диагностики калицивирусной инфекции, а также производства вакцин против данного заболевания:

- штамм «F-9» [7];

- штамм «F255» [15];

- штамм «Ларс» [8];

- штамм «Эшли» [9];

- штамм «Пума» [14]

Известен штамм вируса «F9», полученный в США, который используют для изготовления вакцин и изучения противовирусной активности препаратов. Недостатки данного штамма состоят в его значительных генетических отличиях (более 23,2%) от изолятов FCV, выделенных на территории Российской Федерации. В настоящее время все вакцины, представленные на рынке России, имеют два различных штамма против калицивирусной инфекции. Штамм «F255» представлен в вакцинах Леукарифелин, Квадрикат и вакцине Фел-О-Вакс. Штамм «F9» представлен в вакцинах Трикат, Форкат и Фелоцелл [15].

Штамм «F9» - первый живой вакцинный штамм, портив калицивируса. На момент его выведения штамм защищал от большинства патогенных полевых вирусных изолятов. Штамм «F255» был введен в вакцины позже, и явился альтернативой штамму «F9».

Наиболее близким решением, принятым за прототип, является штамм Feline calicivirus Ларс-30ДЕП (Патент RU 2184567, опубл. 10.07.2002 г.), полученный на территории России в 1993 году от кошки с признаками острого респираторного заболевания, депонированный в коллекции культур микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным номером 30, рекомендованный для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов. К недостаткам данного штамма можно отнести то, что его не рекомендуют для изучения противовирусной активности препаратов, у него не изучены молекулярно-генетические особенности и не установлен генетический статус.

Штамм «Пума» вируса калицивироза кошек изучен в работе Рахманиной М.М., но использование данного штамма для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики в доступной литературе нет [14].

Штамм вируса калицивироза кошек «Эшли» запатентован в 2016 г. для изучения противовирусной активности препаратов в отношении возбудителя калицивироза кошек и не применяется для изготовления вакцин [9].

Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм «Ларс» калицивироза кошек, используемый для изготовления отечественной ассоциированной вакцины «Мультифел» [8, 15].

Генетически штаммы FCV принадлежат к одной разнообразной геногруппе, однако, в Восточной Азии была описана вторая геногруппа. Филогенетический анализ обычно приводит к 'звездообразной' филогении. Это генетическое разнообразие сопровождается антигенным разнообразием, хотя перекрестная реактивность достаточна, чтобы все изоляты считались принадлежащими к одному серотипу. При исследовании пространственного и временного распределения штаммов FCV была описана очень высокая генетическая и антигенная сложность штаммов FCV, при этом в популяции кошек циркулирует множество различных штаммов FCV, и ни один отдельный полевой штамм не преобладает в ней [4, 10, 11].

Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов Feline calicivirus, обладающих новыми биологическими и генетическими характеристиками, и пригодных для изготовления средств диагностики и специфической профилактики данного заболевания. Техническим результатом предлагаемого изобретения является получение нового штамма, обладающего стабильной инфекционной активностью, адаптированного к перевиваемым культурам клеток, позволяющего изучать противовирусную активность различных препаратов в отношении возбудителя калицивироза кошек.

Указанная задача решена в результате депонирования нового штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus, который может быть использован для проведения лабораторных исследований и изготовления средств вакцинопрофилактики.

Изолят вируса калицивироза кошек, послуживший источником для получения штамма «Фауна» был выделен из патологического материала (смывы с ротоглотки), полученного от кота, поступившего на лечение в частную ветеринарную клинику «Фауна» г. Вологда, в 2021 году.

Штамм «Фауна» депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №471-деп/23-21 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек для изготовления средств диагностики и профилактики данного заболевания.

Для получения штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали перевиваемую культуру клеток почки кошки (CRFK). В результате проведения серии последовательных пассажей на данной культуре клеток из ранее выделенного изолята был получен штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек, имеющий стабильные биотехнологическими свойства и пригодный для использования при проведении лабораторных исследований и изготовления диагностических препаратов и препаратов специфической профилактики данного заболевания. Штамм адаптирован к перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK), что позволяет в промышленных масштабах получать вирусный материал штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек с титрами инфекционной активности от 7,00 до 7,75 lg ТЦД₅₀/см³.

Генетическую идентификацию полученного вируса и сравнительный анализ последовательности кДНК проводили с применением обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с последующей идентификацией и филогенетическим анализом с помощью секвенирования.

Редактор выравнивания последовательностей BioEdit использовался для анализа необработанных последовательностей. Выравнивания, содержащие полногеномные последовательности, были построены с использованием программы Clustal_W. Эволюционная история была выведена с использованием критерия максимального правдоподобия, основанного на 3 параметрах классической модели Tamura. Дерево было нарисовано в масштабе, с длиной ветвей, измеренной в количестве замен на сайт. Эволюционный анализ был проведен в MEGA6. Выравнивание аминокислотных последовательностей проводили с использованием Clustal X.

Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностей генной области капсидной части (ORF2) кДНК вируса калицивироза кошек (FCV) (был взят участок длиной 365 п.н. - позиции в геноме 5310…5674 п.н.). Штамм «Фауна» имеет большое количество нуклеотидных отличий от других заявленных штаммов («F9», «F255», «Ларс», «Эшли»), в том числе от прототипного штамма «Ларс» (степень сходства не более 52%), при этом относится к геногруппе 1.

Сущность изобретения отражена на графических изображениях:

Фиг. 1 - Филогенетическое древо для вируса калицивироза кошек штамма «Фауна».

Фиг. 2 - Состояние монослоя клеточной линии CRFK до (А) и после (Б) репродукции вируса калицивироза кошек штамма «Фауна».

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов участка ORF2 (5310…5674 н.о.) кДНК вируса калицивироза кошек штамма «Фауна»;

SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот белков для генного участка ORF2 (5310…5674 н.о.) кДНК вируса калицивироза кошек штамма «Фауна».

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки.

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus, виду Feline calicivirus и обладает морфологическими признаками, характерными для представителей калицивирусов: диаметр вирионов составляет 37-40 нм, вирионы без суперкапсидной оболочки, кубического типа симметрии, состоят из 32 капсомеров.

Антигенные свойства.

Все циркулирующие штаммы представляют собой единый серотип. У переболевших кошек в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в реакции нейтрализации (РН). Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой в РН в культуре клеток CRFK. Инокуляция в организм животного штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus сопровождается образованием вируснейтрализующих антител в крови в титре 4,70±0,65 log₂ SN₅₀ у кроликов.

Устойчивость к внешним факторам.

Вирус достаточно устойчив во внешней среде. На поверхностях при температуре (21±2)°С сохраняет активность в течение 24 ч, а при температуре 8°С и ниже - в течение 30 дней. Относительно стабилен в кислой среде при рН 4,0. Практически не чувствителен к эфиру, хлороформу. Чувствителен к формальдегиду, глутаровому альдегиду, хлорсодержащим дезинфицирующим средствам. Переносит двукратное размораживание и оттаивание.

Дополнительные признаки и свойства:

Патогенность - патогенен для естественно-восприимчивых животных.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при интраназальном заражении.

Безвреден для кроликов и белых мышей при внутримышечном и подкожном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемой культуре клеток CRFK.

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами - штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Условия хранения.

При хранении штамма в нативном состоянии при температуре -70±5°С допустимая длительность хранения без освежения составляет 24 мес., а при хранении в лиофилизированном состоянии при той же температуре до 10 лет.

Биотехнологические характеристики.

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). Репродукция вируса в культуре клеток CRFK сопровождается специфическим цитопатическим действием, приводящим к округлению клеток и деструкции монослоя через 24 ч культивирования. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток CRFK. При культивировании вирус штамма «Фауна» накапливается в титре не менее 7,00±0,25 lg ТЦД₅₀/см³ и сохраняет исходные характеристики при пассировании в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономические характеристики.

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек относится к семейству Caliciviridae, роду Vesivirus, виду Feline calicivirus (FCV). Геном представляет собой 7700 н.о. одноцепочечной РНК положительной полярности с тремя открытыми рамками считывания (ORF). ORF1 кодирует неструктурные белки, ORF2 кодирует основной капсидный белок VP₁, a ORF3 кодирует второстепенный капсидный белок VP₂. OPvF2 разделен на шесть областей (А-F) и обычно используется для филогенетической дифференцировки изолятов FCV. Геномные области А, В, D и F в значительной степени консервативны, в то время как области С и Е более вариабельны. Область F ORF2 (7253-7329 п.н. и начальная область ORF3 (7465-7524 п.н.) консервативны и, следовательно, удобны для точной идентификации FCV. При этом большинство зарегистрированных событий рекомбинации в геноме FCV происходят в генном участке капсидной (ORF2) области, исходя из этого, для проведения филогенетического анализа использовали именно этот генный участок (5310…5674 н.о.) (Фиг. 1).

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Биологические и вирусологические исследования штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus.

Биологические и вирусологические методы включали адаптацию вируса, выделенного из патологического материала, полученного от заболевшего кота, к культуре клеток CRFK. Для выделения вируса, вирусную суспензию вносили на освобожденный от ростовой среды монослой перевиваемой культуры клеток CRFK и экспонировали в течение 60 мин. при температуре (37,0±0,5)°С. Затем вносили поддерживающую среду ПСС (или аналог) с добавлением 2% фетальной сыворотки крови КРС и антибиотиков (стрептомицин 100 мкг/см³ и пенициллин 100 ЕД/см³). Инфицированную культуру инкубировали при температуре (37,0±0,5)°С в течение 24 ч до появления специфического цитопатического действия (ЦПД) через 8-12 ч, которое характеризовалось округлением клеток и деструкцией монослоя. При поражении не менее 80% площади монослоя (24 ч) культуральные флаконы промораживали при температуре минус (45,0±5,0)°С и после оттаивания при комнатной температуре производили сбор вируса с последующим отбором проб для исключения микробной контаминации и определения инфекционной активности вируса методом титрования в культуре клеток CRFK. Клеточный монослой до действия вируса представлен на фиг.2А, после формирования ЦПД - на фиг.2Б. Титрование вируса проводилось микрометодом по общепринятой методике в культуре клеток CRFK в 96-луночных планшетах. Результаты адаптации вируса к перевиваемой линии клеток почки кошки CRFK представлены в таблице 1. Инфекционная активность вируса в культуре клеток CRFK при репродукции в течение 5 пассажей составила 7,50±0,33 lg ТЦД₅₀/см³. Данные, приведенные в таблице 1, свидетельствовали о хорошей адаптационной активности штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus к данной клеточной культуре. Первое проявление ЦПД вируса в культуре клеток CRFK наблюдается через 8-12 ч культивирования. Через 16-24 ч культивирования большая часть клеток округлялась, собиралась в агрегаты и отслаивалась от субстрата.

Пример 2. Контроль стабильности биологической активности штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus.

Контроль стабильности биологической активности штамма определяли в течение 5 последовательных пассажей в культуре клеток CRFK. Результаты изучения стабильности штамма по его биологической активности в течение 5 пассажей представлены в таблице 2. В ходе проведенных исследований установлено, что штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus в течение 5 последовательных пассажей в культуре клеток CRFK проявлял стабильную биологическую активность, которая находилась в пределах от 7,00±0,25 lg ТДЦ₅₀/см³ до 7,75±0,00 lg ТДЦ₅₀/см³.

Пример 3. Получение антигена вируса калицивироза кошек Feline calicivirus штамма «Фауна».

Для приготовления антигена в культуру клеток CRFK, выращенную в культуральных флаконах с площадью рабочей поверхности 300 см², предварительно слив с них ростовую среду, вносили вируссодержащий материал в дозе 0,001 ТЦД₅₀/кл. Флаконы помещали на один час в термостат при температуре (37,0±0,5)°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносили поддерживающую среду ПСС (или аналог) с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при (37,0±0,5)°С до появления ЦПД вируса. При поражении площади монослоя не менее 80% культуральные флаконы подвергали замораживанию при температуре минус (45,0±0,5)°С. Стерильный инфицированный монослой дезагрегировали с рабочей поверхности флаконов путем его разморозки при температуре (20±2)°С и периодического встряхивания. По окончании разморозки интенсивным встряхиванием остатки монослоя удаляли с рабочей поверхности, затем соблюдая условия асептики инфицированную суспензию собирали в общую емкость. Из собранного материала отбирали пробу для контроля. Контроль антигена штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек осуществляли по показателю отсутствия контаминации грибами, бактериями и микоплазмами. Контроль контаминации грибами и бактериями антигена штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек проводили по ГОСТ 28085 [12]. Контроль контаминации микоплазмами осуществляли в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2997-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15) [13]. Нативный вируссодержащий материал с активностью не ниже 7,00 lg ТЦД₅₀/см³ хранили при температуре не выше минус (20±2)°С и использовали для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.

Пример 4. Получение гипериммунной сыворотки против антигена вируса калицивироза кошек Feline calicivirus штамма «Фауна».

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus использовали для получения высокоактивной гипериммунной сыворотки, предназначенной для оценки иммунобиологических свойств вируса калицивироза кошек. Для гипериммунизации животных применяли антиген вируса калицивироза кошек Feline calicivirus штамма «Фауна», полученный по методике, указанной в примере 3. Кроликов в количестве 4 голов иммунизировали в дозе 2,0 см³ внутримышечно двукратно. Отбор крови осуществляли на 14 сутки после последней иммунизации. Полученную сыворотку крови исследования на наличие антител против антигена вируса калицивироза кошек Feline calicivirus штамма «Фауна». Титр антител определяли в реакции микронейтрализации (РМН). Данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют, что способом, описанным в примере 4, получены диагностические сыворотки со специфической активностью 8,00±0,25 до 10,08±0,14 log₂ SN₅₀ в РМН.

Пример 5. Изучение антигенной активности штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus на кроликах.

Для изучения антигенной активности штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus использовали вируссодержащий материал с биологической активностью не ниже 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, полученный по методике, как указано в примере 3. Подопытным кроликам в количестве 5 голов вводили инактивированный материал в среднюю часть бедра в дозе 1,0 см³ однократно. Кроликов в количестве 5 голов оставили в качестве контроля. Титр антител к антигену вируса калицивироза кошек Feline calicivirus в сыворотках крови кроликов определяли через 21 сутки в РМН по общепринятой методике.

Результаты исследований антигенной активности штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus представлены в таблице 4, из которой следует, что титр антител у иммунизированных кроликов составил 4,70±0,65 log₂ SN₅₀.

Пример 6. Изучение биологических свойств штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus (определение патогенности для кошек).

Патогенность штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus изучали на естественно восприимчивых животных (беспородные котята в возрасте 2-3 мес.). Животных разделили на две группы по 4 головы в каждой - подопытную и контрольную. Подопытным котятам инокулировали интраназально вируссодержащую культуральную жидкость в объеме 1,0 см³ с титром инфекционной активности не ниже 7,0 lg ТЦД₅₀/см³. Животным контрольной группы инокулировали интраназально 0,9% раствор хлорида натрия в объеме 1,0 см³. На 3-4 сутки после заражения у всех животных подопытной группы наблюдали характерные клинические признаки калицивироза кошек: снижение активности, отказ от корма, повышение температуры, катаральный ринит, язвенные поражения на слизистой ротовой полости и языка. Гибели животных не наблюдалось. Специфичность заболевания животных подтверждена исследованиями биоматериала методом ПЦР.

Таким образом, штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной активностью, пригоден для изготовления инактивированных вакцин, определения их иммуногенной активности, а также диагностических целей, и расширяет арсенал новых отечественных производственных штаммов вируса калицивироза кошек Feline calicivirus.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента Российской Федерации на изобретение «Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек».

1. Berger A, Willi В, Meli ML, Boretti FS, Hartnack S, Dreyfus A, Lutz H, Hofmann-Lehmann R. Feline calicivirus and other respiratory pathogens in cats with Feline calicivirus-related symptoms and in clinically healthy cats in Switzerland. BMC Vet Res. 2015 Nov 13; 11:282. doi: 10.1186/s12917-015-0595-2. PMID: 26566897; PMCID: PMC4644299.

2. Battilani M, Vaccari F, Carelle MS, Morandi F, Benazzi C, Kipar A, Dondi F, Scagliarini A. Virulent feline calicivirus disease in a shelter in Italy: a case description. Res Vet Sci. 2013 Aug; 95(1):283-90. doi: 10.1016/j.rvsc.2013.01.025. Epub 2013 Feb 21. PMID: 23433681; PMCID: PMC7111799.

3. Zhou L, Fu N, Ding L, Li Y, Huang J, Sha X, Zhou Q, Song X, Zhang B. Molecular Characterization and Cross-Reactivity of Feline Calicivirus Circulating in Southwestern China. Viruses. 2021 Sep 12; 13(9): 1812. doi: 10.3390/v13091812. PMID: 34578393; PMCID: PMC8473038.

4. Hofmann-Lehmann R, Hosie MJ, Hartmann K, Egberink H, Truyen U, Tasker S, Belak S, Boucraut-Baralon C, Frymus T, Lloret A, Marsilio F, Pennisi MG, Addie DD, Lutz H, Thiry E, Radford AD, Mostl K. Calicivirus Infection in Cats. Viruses. 2022 Apr 29; 14(5):937. doi: 10.3390/v14050937. PMID: 35632680; PMCID: PMC9145992.

5. Pedersen NC, Elliott JB, Glasgow A, Poland A, Keel K. An isolated epizootic of hemorrhagic-like fever in cats caused by a novel and highly virulent strain of feline calicivirus. Vet Microbiol. 2000 May 11; 73(4):281-300. doi: 10.1016/s0378-1135(00)00183-8. PMID: 10781727; PMCID: PMC7117377.

6. Palombieri A, Sarchese V, Giordano MV, Fruci P, Crisi PE, Aste G, Bongiovanni L, Rinaldi V, Sposato A, Camero M, Lanave G, Martella V, Marsilio F, Di Martino B, Di Profio F. Detection and Characterization of Feline Calicivirus Associated with Paw and Mouth Disease. Animals (Basel). 2022 Dec 23; 13(1):65. doi: 10.3390/anil3010065. PMID: 36611675; PMCID: PMC9818015.

7. Вакцина против калицивироза, вирусного ринотрахеита и панлейкопении кошек Нобивак Tricat Trio. - URL: https://www.vetlek.ru/directions/?id=112 (дата обращения 03.03.23 г.).

8. Пат.2 184 567 Российская Федерация, МПК A61K 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм feline calicivirus, используемый для контроля иммуногенной активности вакцин, изготовления специфических лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов [Текст]/ Рахманина М.М., Элизбарашвили Э.И., Уласов В.И.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2001113087/13; заявл. 2001.05.16; опубл. 2002.07.10.

9. Пат.2 628 096 Российская Федерация, МПК A61K 39/125(2006.01), C12N 7/00(2006.01). Штамм Эшли вируса калицивироза кошек для изучения противовирусной активности препаратов в отношении калицивироза кошек / Глотова Т.И., Семенова О.Э., Глотов А.Г.; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ВГНКИ». - №2016121721; заявл. 2016.06.01; опубл. 2017.08.14.

10. Глотова Т.И., Семенова О.В., Никонова А.А., Глотов А.Г., Вяткин Ю.В., Бондарь А.А. Выделение и филогенетический анализ калицивируса кошек в Сибири. Вопросы вирусологии. 2018; 63(6):268-274. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0507-4088-2018-63-6-268-274.

11. Hou J, McGahie D, Lesbros С, Almeras Т, Howarth D, O'Hara V, Dawson S, Radford AD. European molecular epidemiology and strain diversity of feline calicivirus. Vet Rec. 2016 Jan 30; 178(5): 114-5. doi: 10.1136/vr.103446. Epub 2016 Jan 25. PMID: 26811440; PMCID: PMC4752659.

12. ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности».

13. ГФ XIV, т.2, с. 2997-3008 Испытания на присутствие микоплазм (ОФС.1.7.2.0031.15)/

14. https://new-disser.ru/_avtoreferats/01002883448.pdf?ysclid=lhokqxm2se678827572.

15. https://veterinarka.ru/for-vet/sravnitelnaya-effektivnost-vakcinnyh-shtammov-f9-i-255-protiv-kalicivirusnoi-infekcii-koshek.html?ysclid=lho199snm8653330775

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FCV strain

Fauna.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"

productionDate="2023-04-27">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-04-27</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>503</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-04-27</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ &quot;Федеральный центр охраны

здоровья животных&quot; (ФГБУ &quot;ВНИИЗЖ&quot;)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>FGBI &quot;ARRIAH&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Доронин Максим

Игоревич</InventorName>

<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Штамм «Фауна» вируса калицивироза

кошек для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической

профилактики калицивироза кошек</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>365</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..365</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q1">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgtgctcaacctgcgctaacgtgcttaaatactatggttgggatcccc

actttaggatgataattaaccccaacaaatttctctctgttggcttctgtgataatccccttatgtgttg

ttatcccgaattacttcctgaatttggaaccgtgtgggattgtgatcaatccccactgcaaatttacctt

gaatctatccttggtgatgatgaatggtcctcaacctatgaagccattgaccctgttgtccccccaatgc

attgggatagtgctgggaaaatcttccaacctcatcccggtgtgctgatgcatcatcttatcggtgaagt

cgcaaaggggtgggaccccaacttgcccttgtttcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>121</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..121</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FCV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>MCSTCANVLKYYGWDPHFRMIINPNKFLSVGFCDNPLMCCYPELLPEFG

TVWDCDQSPLQIYLESILGDDEWSSTYEAIDPVVPPMHWDSAGKIFQPHPGVLMHHLIGEVAKGWDPNLP

LF</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к области биотехнологии и касается нового штамма «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №471-деп/23-21 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ». Представленный штамм репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кошки (CRFK). В перевиваемой культуре клеток почки кошки CRFK в течение 24 часов инкубирования титр инфекционной активности вируса достигает значений 7,75±0,25 lg ТЦД₅₀/см³, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточной культуре на протяжении 5 пассажей. Представленный штамм может быть использован для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек и для контроля антигенной активности вакцин против данного заболевания. 2 ил., 4 табл., 6 пр.

Штамм «Фауна» вируса калицивироза кошек Feline calicivirus, депонированный во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №471-деп/23-21 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ», для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики калицивироза кошек.