МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 21-АЦЕТОКСИПРЕГНА-1,4,9( 11 ),16-ТЕТРАЕН-3,20-ДИОНА ИЗ 21-АЦЕТОКСИПРЕГНА-4,9( 11 ),16-ТРИЕН-3,20-ДИОНА Российский патент 2013 года по МПК C07J5/00 C12P33/02 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к высокоэффективному микробиологическому способу получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9(11),16-тетраен-3,20-диона из 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона. Реакция 1,2-дегидрирования 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона осуществляется с помощью клеток Nocardioides simplex BKM Ac-2033Д при температуре 25°C в среде буферного раствора с pH 5,0-5,5, содержащей метил-β-циклодекстрин, полярный растворитель, смешивающийся с водой, и экзогенный акцептор электронов. Использование растущей культуры или осажденных клеток позволяет осуществлять трансформацию при высокой нагрузке субстрата (10-20 г/л) при полном селективном превращении субстрата в 1,2-дегидрированный продукт и высоких скоростях процесса. 6 з.п. ф-лы, 7 прим., 2 табл.

1. Микробиологический способ получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9(11),16-тетраен-3,20-диона формулы (I)

из 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона формулы (II)

в водной среде, содержащей экзогенный акцептор электронов менадион в эффективном количестве и метил-β-циклодекстрин в количестве не более 2 молей на 1 моль исходного субстрата, с применением клеток микроорганизма Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, обладающих 3-кетостероид-1-дегидрогеназной активностью, с использованием полярного растворителя, смешивающегося с водой, при концентрации указанного растворителя в водной среде от 4 до 8 об.%, в среде буферного раствора с pH от 5,0 до 5,5, преимущественно 5,1+0,1 при температуре 25°C в течение от 6 до 14 ч, при этом менадион вносят в среду для трансформации одновременно со стероидным субстратом в виде раствора в полярном растворителе с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс продолжительностью от 6 до 14 ч проводят с концентрацией исходного субстрата от 10 до 20 г/л соответственно.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полярного растворителя, смешивающегося с водой, используют апротонные растворители (предпочтительно диметилсульфоксид), или протонные растворители, например алифатические спирты (предпочтительно этанол), при этом концентрация растворителя в водной среде составляет от 4 до 8 об.%.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве буферного раствора с диапазоном значений pH от 5,0 до 5,5 используют Na-ацетатный буфер, или Na-цитратный буфер, или раствор NaH₂PO₄, подкисленный до pH 5,0 (предпочтительно Na-ацетатный буфер).

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что трансформацию проводят в водной среде, содержащей метил-β-циклодекстрин, взятый в количестве от 1,5 до 2 молей на 1 моль загруженного субстрата.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что в трансформации используют растущую культуру бактерий Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, взятую в эффективном количестве, предпочтительно от 0,1 до 0,17 г на 1 г загруженного субстрата в пересчете на сухой вес.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в трансформации используют осажденные клетки Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, взятые в эффективном количестве, предпочтительно от 0,1 до 0,17 г на 1 г загруженного субстрата в пересчете на сухой вес.