СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОВРЕЖДАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ NK(CD)-ЛИМФОЦИТОВ НА ПЛАЦЕНТУ БЕРЕМЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГЕРПЕС-ВИРУСНУЮ ИНФЕКЦИЮ, УВЕЛИЧИВАЮЩЕГО ЧИСЛО ЯДЕР СИНЦИТИОТРОФОБЛАСТА В СОСТОЯНИИ АПОПТОЗА Российский патент 2013 года по МПК G01N33/49 

Цель исследования - показать повреждающее действие NK(CD¹⁶)-лимфоцитов периферической крови у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, на синцитиотрофобласт плаценты, увеличивающее число ядер в состоянии апоптоза. В периферической крови среди лимфоцитов до 10-15% составляет фракция NK(CD¹⁶)-лимфоцитов (Л.П.Сизякина, И.И.Андреева, 2005; А.А.Тотолян, И.С.Фрейдин, 2000), маркером которых является молекула CD¹⁶, что позволяет NK(CD¹⁶)-лимфоцитам участвовать в антитело-опосредованной клеточной цитотоксичности (В.А. Исаков, В.В. Борисова, Д.В. Исаков, 1999).

NK(CD¹⁶)-лимфоциты не имеют специализированных рецепторов, поэтому механизм их распознавания ориентирован только на измененное свое. NK(CD¹⁶)-лимфоциты отличаются от обычных лимфоцитов более крупными размерами (до 15 мкм), в цитоплазме которых содержатся гранулы, содержащие белок перфорин и гранзим. NK(CD¹⁶)-лимфоциты тесно сближаются с клеткой-мишенью и высвобождают содержимое гранул (перфорин и гранзим) в клетку-мишень, содержащую вирусные тела, запуская апоптоз (А.И.Воробьев, 2007).

В предпринимаемом нами исследовании мы установили, что под действием герпес-вирусной инфекции увеличивается в периферической крови беременных процентное содержание NK(CD¹⁶)-лимфоцитов, которые, прикрепляясь к ворсинкам плаценты, индуцируют увеличение ядер синцитиотрофобласта в состоянии апоптоза (фигура 1).

Аналогичных исследований в доступной нам литературе мы не обнаружили.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследовали периферическую кровь 25 беременных, поступивших в стационар с обострением герпес-вирусной инфекции. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН учреждения Российской академии медицинских наук. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

2. Содержание NK(CD¹⁶)-клеток периферической крови беременных после обострения герпес-вирусной инфекции определяли на проточном цитофлюориметре «Вескман Coulter Epics XL-MCL» (USA).

3. Верификация ВПГ-2 проводилась по динамике титров антител IgG в периферической крови с помощью стандартных тест-систем фирмы ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Анализ проводили на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» (USA).

4. Статистическая обработка материала данных проводилась с использованием t критерия Стьюдента.

5. Ядра в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза определялись в процентах на 2000 подсчитанных после проведения иммуногистохимической реакции ISEL.

Исследования позволили установить, что по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса в периферической крови беременных увеличивается процентное содержание NK(CD¹⁶)-лимфоцитов. Так, при титре антител к вирусу герпеса в периферической крови беременных в третьем триместре 1:1600 содержание NK(CD¹⁶)-лимфоцитов составляло 12,8±0,6% (контроль - 12,0±0,1%; р<0,05). По мере нарастания агрессивности герпесной инфекции процентное содержание NK(CD¹⁶)-лимфоцитов увеличивалось и при титре антител 1:3200 составило 13,1±0,4% (контроль -12,0±0,1%; р<0,05), а при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 составило 15,4±0,8% (контроль - 12,0±0,1%; р<0,001).

Таким образом, при обострении герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности, когда возбудитель проникает в синцитиотрофобласт плаценты (что нами подтверждено электронно-микроскопическими исследованиями; фигура 1), нарастание процентного содержания NK(CD¹⁶)-лимфоцитов угрожает при контакте их с синцитиотрофобластом выделению TNF_α и гранзима, что приводит к развитию апоптоза в ядрах фетоплацентарного барьера.

При увеличении содержания в периферической крови NK(CD¹⁶)-лимфоцитов в синцитиотрофобласте нарастало процентное содержание ядер в состоянии апоптоза. Так, при NK(CD¹⁶) 12,8±0,6% (контроль - 12,0±0,1; р<0,05) (титр антител к вирусу герпеса - 1:1600) в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты оно составляло 0,75±0,005% (контроль - 0,5±0,0015%). При повышении титра антител в периферической крови беременных до 1:3200 - процентное содержание NK(CD¹⁶) в крови увеличивалось до 13,1±0,4%, а содержание ядер в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты увеличивалось до 2,0±0,15%. При титре антител к вирусу герпеса в периферической крови беременных 1:12800 содержание NK(CD¹⁶) увеличивалось до 15,4±0,8%, что приводит к нарастанию числа ядер в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты до 3,5±0,009%, отражая выраженное повреждение плаценты.

Литература

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии / А.И.Воробьев. - М., изд. «Ньюдиамед». - 2007. - 1275 с.

2. Исаков В.А., Борисова В.В., Исаков Д.В. Герпес. Патогенез и лабораторная диагностика // Руководство для врачей. Санкт-Петербург, изд. «Лань», 1999. - 192 с.

3. Сизякина Л.П. Справочник по клинической иммунологии / Л.П.Сизякина, И.И.Андреева. - Ростов-на Дону, Феникс. - 2005. - 442 с.

4. Тотолян А.А. Клетки иммунной системы / А.А.Тотолян, И.С.Фрейдин. - СПб., 2000. - 290 с.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения наличия повреждений синцитиотрофобласта плаценты у беременных с герпес-вирусной инфекцией. Для этого в периферической крови беременных определяют количество NK(СD¹⁶)-лимфоцитов, при увеличении количества которых выше 12,0±0,1 определяют наличие повреждения синцитиотрофобласта. Способ позволяет определить повреждение плаценты за счет нарастания процентного содержания NK(СD¹⁶)-лимфоцитов. 1 ил.

Способ определения наличия повреждений синцитиотрофобласта плаценты у пациентов с герпес-вирусной инфекцией, включающий определение в периферической крови беременных количество NK(CD¹⁶)-лимфоцитов и при увеличении NK(CD¹⁶)-лиимфоцитов выше 12,0±0.1 определяют наличие повреждения синцитиотрофобласта плаценты беременной.