СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2013 года по МПК A61K39/12 A61P31/12 C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано при разработке средств специфической профилактики, и, в частности, для получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота.

Известен способ получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота включающем приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса вирусной диареи «Орегон», инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса вирусной диареи, сбор вируссодержащей жидкости, инактивирование ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (Патент РФ №2372938, «Инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота и способ профилактики вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота», опубл. 20.11.2009, МКИ А61К 39/205).

Недостатком известного технического решения является использование при инактивации вируса формалина, обладающего канцерогенной активностью. Известно, что при незначительном превышении рабочей концентрации формалин вызывает быструю гибель культур клеток для выращивания вирусов и подавление инфекционной активности вирусов, что нередко сопровождается существенным снижением иммуногенности. При приготовлении вакцины не исключается возможность попадания остатков формальдегида вместе с вакциной в организм иммунизируемых животных, что крайне нежелательно.

Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет возможности использования в качестве инактивирующего агента раствора оксидантов, полученного электролизом раствора хлорида натрия, а также ускорение способа.

Поставленная задача решается в способе получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота, включающем приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме тем, что инактивацию вируса вирусной диареи крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=400-600 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости.

Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота тем, что в качестве штамма вируса вирусной диареи крупного рогатого скота используют штамм «Орегон» или штамм вируса диареи крупного рогатого скота ГКВ 2336 семейства Flaviviridae рода Pestivirus.

Известен штамм вируса диареи крупного рогатого скота «Орегон» (Патент РФ №2372938, «Инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота и способ профилактики вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота», опубл. 20.11.2009, МКИ А61К 39/205).

Известен штамм вируса диареи крупного рогатого скота ГКВ 2336, семейства Flaviviridae, рода Pestivirus (Патент РФ №2395299, Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота, МПК А61К 39/295, C12N 7/08, A61P 31/12, опубл. 27.07.2010).

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «Орегон» вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток коронарных сосудов теленка «КСТ», культивируют вирус вирусной диареи крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=400 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см³ на 0,8 л вируссодержащей жидкости в конечной концентрации при температуре 37°С в течение 60 минут при рН 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 1, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации 1:512, в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:256.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 2. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «Орегон» вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток коронарных сосудов теленка «КСТ», культивируют вирус вирусной диареи крупного рогатого скота до достижения титра 6,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН-8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=600 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°С в течение 60 минут при рН 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 2, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации 1:256, в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:256.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 3. Приготавливают посевной материал из штамма вируса диареи крупного рогатого скота ГКВ 2336, семейства Flaviviridae, рода Pestivirus, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток коронарных сосудов теленка «КСТ», культивируют вирус вирусной диареи крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=400 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см³ на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°С в течение 60 минут при рН 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 3, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации 1:512, в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:256.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 4. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма вируса диареи крупного рогатого скота ГКВ 2336, семейства Flaviviridae, рода Pestivims, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток коронарных сосудов теленка «КСТ», культивируют вирус вирусной диареи крупного рогатого скота до достижения титр 6,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН-8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=600 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см³ на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°С в течение 60 минут при рН 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 4 которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации 1:512, в то время как в известном способе антигенная активность составила 1:256.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Кроме того, получаемая согласно заявляемому способу вакцина имеет срок хранения до 1 года.

Техническим результатом, достигаемым при применении предлагаемого изобретения является повышение эффективности инактивационной обработки вируссодержащих материалов при уменьшении концентрации инактивирующего средства, сокращение экспозиции обработки до 60-70 минут против 72 часов у прототипа; установлено, что раствор оксидантов относится к IV классу опасности, в соответствующих концентрациях не вызывает токсического действия на перевиваемую культуру клеток коронарных сосудов теленка «КСТ», используемую для выращивания и накопления вируссодержащего материала, быстро разлагается после воздействия на вирус, исключая тем самым попадание в организм животных с биопрепаратом, обеспечивает снижение затрат на приобретение препарата до 6 раз и повышение безопасности труда обслуживающего персонала, отсутствует вредное влияние на окружающую среду. Вакцина имеет достаточную антигенную активность и обладает протективными свойствами. Способ обработки вируссодержащего материала предложенным инактивантом обеспечивает безопасность продукции, получаемой от сельскохозяйственных животных (мясо, молоко).

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, микробиологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке средств специфической профилактики, и, в частности, для получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота. Сущность: для повышения качества целевого продукта за счет возможности использования в качестве инактивирующего агента раствора оксидантов, полученного электролизом раствора хлорида натрия, а также ускорения способа получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота, включающего приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, причем инактивацию вируса вирусной диареи крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=400-600 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8- 1,0 л вируссодержащей жидкости. 1 з.п. ф-лы, 3 пр.

1. Способ получения вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса вирусной диареи крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающийся тем, что инактивацию вируса вирусной диареи крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин рН 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=400-600 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве штамма вируса вирусной диареи крупного рогатого скота используют штамм «Орегон» или штамм вируса диареи крупного рогатого скота ГКВ 2336 семейства Flaviviridae рода Pestivirus.