СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2014 года по МПК A61K39/265 C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Известен способ получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса инфекционного ринотрахеита, сбор вируссодержащей жидкости, инактивирование ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (Патент РФ №2378014, «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Недостатком известного технического решения является использование при инактивации вируса формалина, обладающего канцерогенной активностью. Известно, что при незначительном превышении рабочей концентрации формалин вызывает быструю гибель культур клеток для выращивания вирусов и подавление инфекционной активности вирусов, что нередко сопровождается существенным снижением иммуногенности. При приготовлении вакцины не исключается возможность попадания остатков формальдегида вместе с вакциной в организм иммунизируемых животных, что крайне нежелательно.

Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет возможности использования в качестве инактивирующего агента раствора оксидантов, полученного электролизом раствора хлорида натрия, а также ускорение способа.

Поставленная задача решается в способе получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, включающем приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, тем, что инактивацию вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=200-300 мг/л в течение 60-70 мин при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости.

Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота тем, что в качестве штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота используют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм ГКВ 2333, семейства Herpes viridae, подсемейства Alphaherpesviridae или штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, сем. Herpesviridae, рода Varicellavims, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВНИИЗЖ-ДЕП».

Известен штамм вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм ГКВ 2333 (Патент РФ №2395299, «Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота», опубл. 27.07.2010, МКИ A61K 39/295, C12N 7/08, A61P 31/12).

Известен штамм инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, сем. Herpesviridae, рода Varicellavims, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВНИИЗЖ-ДЕП» (Патент РФ №2378014, «Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная», опубл. 10.01.2010, МКИ A61K 39/205).

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ГКВ 2333, семейства Herpesviridae, подсемейства Alphaherpesviridae вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота до достижения титра 5,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=200 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см³ на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 1, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации (PH) 4 log₂, в то время как в известном способе антигенная активность составила 3 log₂.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 2. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма ГКВ 2333, семейства Herpesviridae, подсемейства Alphaherpesviridae вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус вирусной диареи крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=300 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°C в течение 60 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 2, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации (PH) 4 log₂, в то время как в известном способе антигенная активность составила 4 log₂.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 3. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, сем. Herpesviridae, рода Varicellavims, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВНИИЗЖ-ДЕП», инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота до достижения титра 5,5 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0, концентрации оксидантов 0,7% и окислительно-восстановительного потенциала +950 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=150 мг/л в течение 60 мин при расходе инактивирующего средства 4,5 см³ на 0,8 л вируссодержащей жидкости при температуре 37°C в течение 60 минут при pH 7,2. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 3, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации (PH) 3 log₂, в то время как в известном способе антигенная активность составила 4 log₂.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Пример 4. Приготавливают вируссодержащий материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, сем. Herpesviridae, рода Varicellavims, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВНИИЗЖ-ДЕП», инфицируют вируссодержащим материалом культуру перевиваемых клеток почки теленка «ПТ-80», культивируют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота до достижения титра 6,0 lg (ТЦД 50/мл), проводят сбор вируссодержащей жидкости, инактивируют раствором оксидантов, полученным электролизом 20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH - 8,0, концентрации оксидантов 0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1050 мВ, обработку проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=250 мг/л в течение 70 мин при расходе инактивирующего средства 5,0 см³ на 1,0 л вируссодержащей жидкости при температуре 38°C в течение 60 минут при pH 7,4. Далее целевой продукт получают согласно известному способу. Получили вакцину 4, которая имеет антигенную активность в реакции нейтрализации (PH) 4 log₂, в то время как в известном способе антигенная активность составила 4 log₂.

Вакцину проверили на антигенность на лабораторных животных. В результате вакцина оказалась антигенноактивной и обладала протективными свойствами.

Кроме того, получаемая согласно заявляемому способу вакцина имеет срок хранения до 1 года.

Техническим результатом, достигаемым при применении предлагаемого изобретения является повышение эффективности инактивационной обработки вируссодержащих материалов при уменьшении концентрации инактивирующего средства, сокращение экспозиции обработки до 60-70 минут против 72 часов у прототипа; установлено, что раствор оксидантов относится к IV классу опасности, в соответствующих концентрациях не вызывает токсического действия на перевиваемую культуру клеток «ПТ-80», используемую для выращивания и накопления вируссодержащего материала, быстро разлагается после воздействия на вирус, исключая тем самым попадание в организм животных с биопрепаратом, обеспечивает снижение затрат на приобретение препарата до 6 раз и повышение безопасности труда обслуживающего персонала, отсутствует вредное влияние на окружающую среду. Вакцина имеет достаточную антигенную активность и обладает протективными свойствами. Способ обработки вируссодержащего материала предложенным инактивантом обеспечивает безопасность продукции, получаемой от сельскохозяйственных животных (мясо, молоко).

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, вирусологии и биотехнологии и касается способа получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Охарактеризованный способ: приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме. При этом инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, а инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=200-300 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38^°С при рН 7,2-7,4. Представленное изобретение может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

1. Способ получения вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, включающий приготовление вируссодержащего материала из штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инфицирование вируссодержащим материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, сбор вируссодержащей жидкости, инактивацию ее с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме, отличающийся тем, что инактивацию вируссодержащей жидкости проводят раствором оксидантов, полученным электролизом 10,0-20,0%-ного раствора хлорида натрия, причем электролиз ведут до достижения величин pH 7,0-8,0, концентрации оксидантов 0,7-0,9% и окислительно-восстановительного потенциала +1000±50 мВ и при расходе инактивирующего средства 4,5-5,0 см³ на 0,8-1,0 л вируссодержащей жидкости, причем инактивацию вируссодержащей жидкости проводят в одну стадию при содержании активного хлора Сах=200-300 мг/л в течение 60-70 мин и при температуре 37-38^°С при рН 7,2-7,4.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота используют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм ГКВ 2333, семейства Herpesviridae, подсемейства Alphaherpesviridae или штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, сем. Herpesviridae, рода Varicellavims, коллекция ФГУ «ВГНКИ» «ВНИИЗЖ-ДЕП».