СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ООЦИСТ ЭЙМЕРИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарной паразитологии. Изобретение направлено на решение проблемы методов профилактики и борьбы с протозойными болезнями (эймериозами) крупного и мелкого рогатого скота.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является выполнение комплекса эпизоотических вопросов, связанных с установлением видовой принадлежности простейших. Технический результат, достигаемый с помощью изобретения, состоит в повышении эффективности определения видовой принадлежности ооцист, за счет их быстрой споруляции и проявления морфологических признаков.

Способ прост в освоении любым практическим лабораторным работником, связанным с вопросами ветеринарной паразитологии.

Известно, что в кишечном тракте крупного рогатого скота паразитирует 17 видов эймерий, которые с фекалиями животных попадают во внешнюю среду не спорулированными, для того, чтобы в них прошли процессы созревания (споруляции), необходимы определенные благоприятные условия (М.Ш. Акбаев, Н.Е. Косменков и др. «Паразитология и инвазионные болезни животных», М.: Колосс, 2000 - С.743; М.В. Крылов «Определение паразитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений)» - С.-Пб.: Зоологический институт РАН, 1996. - С.602).

Предлагаются простые и сложные способы культивирования ооцист до состояния споруляции. Тем не менее простые сводятся к следующему: пробы фекалий, содержащие ооцисты, помещают в чашки Петри, дно которых выстлано фильтровальной бумагой. Материал увлажняют 2% раствором бихромата калия. Для лучшей аэрации и сохранения влажности крышку чашки Петри приоткрывают.

С интервалом в 24 часа берут пробы материала и исследуют под микроскопом; или собранные методом концентрации ооцисты отмывают водой путем центрифугирования один или два раза, помещают в чашки Петри и заливают очень тонким слоем 2% раствором бихромата калия. Затем эти чашки помещают в термостат при 25-28C°. Ежедневно ооцисты просматривают под микроскопом непосредственно в чашках Петри (Наиболее близкий аналог - М.В. Крылов «Определитель паразитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений)» - С.-Пб.: Зоологический институт РАН, 1996 - С.545). Сложные методы для быстрого спорулирования ооцист требуют аэрации среды путем ввода трубки через которую поступает воздух от микрокомпрессора или же пропускания воздуха через пористый фильтр №4, впаянный в дно сосуда (В.Р. Гобзем «Кокцидиоз телят». - Минск: Урожай, 1972. - С.103).

Недостатками простых способов являются:

1) споруляция ооцист в фекалиях, помещенных в чашки Петри и увлажненных 2% раствором бихромата калия, наблюдается только у отдельных видов, т.е. споруляция е превышает 2%;

2) необходимость проведения однократного или двукратного центрифугирования материала в воде;

3) бихромат калия является химическим реагентом, обладающим концерагенными свойствами.

Недостатками сложных методов является необходимость дополнительных технических приспособлений и сложности контроля за споруляцией.

С целью исключения этих недостатков предлагается способ культивирования ооцист включающий флотационный метод, т.е. основанный на всплывании ооцист в растворах высокой плотности.

Возможность практического осуществления заявленного изобретения подтверждается следующим: пробу фекалий от одного животного или объединенную от группы животных весом примерно 3 грамма кладут в медицинские стаканчики формы усеченного конуса, с делениями на 30 мл (полный объем их 50 мл), заливают небольшим количеством флотационного раствора (1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры на 1 л кипяченой воды), стеклянной палочкой размешивают до появления равномерной взвеси. Затем объем флотационной жидкости доводят до 50 мл и взвесь переливают через металлическое ситечко в такой же стаканчик и вновь объем флотационного раствора доводят до 50 мл. Из последнего стаканчика, после 5 минутного раствора верхний слой раствора (12 мл) отсасывают шприцом без иглы и переносят в центрифужную пробирку. Наполненные одинаковым объемом (12 мл) раствора, пробирки центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин. Всплывшие ооцисты снимают проволочной петлей (1-2 капли) и переносят на обезжиренное предметное стекло на котором предварительно восковым карандашом обведен овал (2,5-3 см в диаметре) и добавляют 3-4 капли водопроводной воды для снижения концентрации флотационной раствора. Стекла помещают на предметный столик и микроскопируют на наличие ооцист. Затем стекла помещают в штатив и ставят в эксикатор. На дно которого наливают водопроводную воду, для предупреждения высыхания ооцист. Эксикатор помещают в термостат с температурой 25-28°C. Ежедневно, стекла с материалом, микроскопируют и следят за споруляцией одних и тех же ооцист эймерий.

Предложенный способ культивирования ооцист имеет существенные отличия от описанных как в паразитологической так и в биологической литературе.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно ветеринарной паразитологии. Способ культивирования ооцист эймерий крупного рогатого скота, включающий микроскопирование процесса споруляции, отличающийся тем, что используют флотационный раствор, приготовленный из 1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры и 1 л кипяченой воды, с помощью которого в медицинских стаканчиках суспензируют 3 г исследуемых фекалий с 50 мл раствора, суспензию процеживают через металлическое сито, отстаивают 5 минут, шприцом без иглы отсасывают 12 мл верхнего слоя, переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин, поверхностную пленку (1-2 капли) снимают проволочной петлей и переносят на обезжиренное предметное стекло с овалом, прочерченным восковым карандашом, добавляют 3-4 капли водопроводной воды, предметные стекла кладут на штатив, затем штатив помещается в эксикатор, а далее ставят в термостат с температурой 25-28°C и ежедневно микроскопируют на наличие процессов споруляции. Изобретение обеспечивает упрощение способа.

Способ культивирования ооцист эймерий крупного рогатого скота, включающий микроскопирование процесса споруляции, отличающийся тем, что используют флотационный раствор, приготовленный из 1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры и 1 л кипяченой воды, с помощью которого в медицинских стаканчиках суспензируют 3 г исследуемых фекалий с 50 мл раствора, суспензию процеживают через металлическое сито, отстаивают 5 мин, шприцом без иглы отсасывают 12 мл верхнего слоя, переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют 1 мин при 1500 об/мин, поверхностную пленку (1-2 капли) снимают проволочной петлей и переносят на обезжиренное предметное стекло с овалом, прочерченным восковым карандашом, добавляют 3-4 капли водопроводной воды, предметные стекла кладут на штатив, затем штатив помещается в эксикатор, а далее ставят в термостат с температурой 25-28°C и ежедневно микроскопируют на наличие процессов споруляции.