СПОСОБ ОЦЕНКИ ИНДУЦИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ОКСИГЕНАЦИЮ ГЕМОГЛОБИНА В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ НА ФОНЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛОБИНА И 2,3 ДФГ В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/48 

Цель исследования - изучить характер оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных при обострении в третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции, приводящей к избыточному включению в гемоглобин 2,3 дифосфоглицерата, снижающему формирование HbO₂.

Установлено, что сродство Hb к O₂ будет меняться, если лиганд по-разному взаимодействует с 2 формами гемоглобина. Лиганд, который уменьшает сродство Hb к O₂, должен присоединяться к деоксигемоглобину (Wyman J., 1948; Федоров Н.А., 1976; Воробьев А.И., 2007; Андриевская И.А., 2008; Луценко М.Т., Надточий Е.В., 2009).

Сродство Hb к O₂ зависит от присоединения к Hb в диоксиформе 2,3 дифосфоглицерата. Константы равновесия для присоединения первых 3 молекул O₂ уменьшаются в присутствии 2,3 дифосфоглицерата (Baner Ch., 1969; Rorth M., 1972; Rorth M., Astmp P., 1972).

Неспецифический эффект 2,3 дифосфоглицерата на сродство Hb к O₂ в случае увеличения 2,3 дифосфоглицерата выше физиологического уровня (5 мкмоль/мл) в интактных эритроцитах приводит к уменьшению присоединения O₂ к Hb и увеличивает константу скорости отщепления O₂, связанного с Hb.

На эти процессы могут повлиять уменьшение внутриэритроцитарного pH, а также накопление продуктов метаболизма, изменяющих электростатическое равновесие в гемоглобиновой системе (M., Astmp Р., 1972; Perutz M., Mazzarella L., 1963).

Следовательно, если при обострении цитомегаловирусной инфекции коэффициент включения 2,3 дифосфоглицерата в гемоглобин будет увеличен, гемоглобин не будет в достаточной мере принимать кислород и концентрация HbO₂ в эритроцитах начнет снижаться.

В доступной литературе нет сведений, освещающих механизм формирования гипоксии (содержание HbO₂) в периферической крови в период гестации на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Исследовали периферическую кровь беременных, перенесших в третьем триместре обострение цитомегаловирусной инфекции и 20 беременных не болевших в течение всего периода гестации (контроль). Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Федерального государственного бюджетного учреждения Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

2. Содержание HbO₂ определяли в периферической крови беременных на спектрофотометре «Stat-Fax-2100x» (USA) по М.С. Кушаковскому (1968).

3. Титр антител к цитомегаловирусу определяли иммуноферментативным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100x» (USA).

4. Содержание 2,3 дифосфоглицерата в эритроцитах периферической крови беременных определяли на спектрофотометре «Stat-Fax-1900+» (USA) по методу И.Л. Виноградовой, С.Ю. Багрянцевой, Г.В. Дервиз (1980).

5. Количественное содержание гемоглобина определяли следующим методом: 1) На мазках крови, взятой у беременных, проводили гистохимическую реакцию по Лепене, позволяющую выявлять гемоглобин (метод описан в монографии Ф.Г. Дж. Хейхоу, Д. Кваглино «Гистохимическая цитохимия» Москва, изд. Медицина, 1983, с.60). 2) С помощью цитофотометрической установки «Mekos» (регистрационное удостоверение МЗ РФ 29/10010198/1282-01) на окрашенных мазках составляли галерею из 100 эритроцитов от каждого пациента. 3) Данные вносились в компьютер, и с помощью цитофотометрической программы вычисляли количество гемоглобина, приходящегося на один эритроцит.

Исследования показали, что при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в третьем триметре беременности количество 2,3 дифосфоглицерата в эритроцитах периферической крови увеличивается до 7,2 мкмоль/мл (контроль - 4,8 мкмоль/мл). Одновременно количество гемоглобина в эритроцитах цитофотометрически снижается до 72,25 усл. ед. (фигура 1); контроль - 165,90 усл. ед. (фигура 2). Это приводит к снижению в периферической крови беременных содержания оксигемоглобина до 96% (контроль - 100,0%), что создает угрозу формирования гипоксии.

Литература

1. Андриевская И.А. Дыхательная функция крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень СО РАМН, 2008, №3, с.56-65.

2. Виноградова И.А., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лабораторное дело, 1980, №7, с.424-426.

3. Воробьев А.И. Руководство по гематологии // Изд. Ньюдиамед, Москва, 2007, 1275 с.

4. Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина // Лен. отделение, Медицина, 1968, 324 с.

5. Луценко М.Т., Надточий Е.В. Морфофункциональные изменения в эритроцитах периферической крови при гипоксии у больных с бронхиальной астмой // Бюллетень физиологии и патологии дыхания, 2009, Вып.31, с.12-15.

6. Baner Ch. Antogonistic influence of CO₂ and 2,3α-diphosphoglicerate on the Bohr effect of human haemoglobin // «Life shi», 1969, v.8, 1041 p.

7. Perutz M., Mazzerella L. Preliminary X-ray analysis of haemoglobin // H. «Nature», 1963, v.199, 639 p.

8. Rorth M. Haemoglobin inteactions and red cell metabolism // «Ser. Haematol», 1972, v.5, p.1.

9. Rorth M., Astrup P. Oxygen affinity of haemoglobin and red cell acidbase status//Copenhagen, 1972, 371 p.

На фигуре 1 изображена галерея эритроцитов периферической крови беременной, перенесшей в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции. Окраска по Лепене на гемоглобин. Увеличение 10×90.

На фигуре 2 изображена галерея эритроцитов периферической крови беременной, не болевших на всем протяжении гестации. Окраска по Лепене на гемоглобин. Увеличение 10×90.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам диагностики, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание в эритроцитах периферической крови 2,3 дифосфоглицерата, гемоглобина цитофотометрическим методом, оксигемоглобина в периферической крови. При нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержании 2,3 дифосфоглицерата до 7,2 мкмоль/мл, снижении гемоглобина до 72,25 усл. ед., снижении оксигемоглобина до 96,0% создается угроза формирования гипоксии. Способ позволяет изучить характер оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферичекой крови беременных при обострении в третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции. 2 ил.

Способ оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, содержание в эритроцитах периферической крови 2,3 дифосфоглицерата, гемоглобина цитофотометрическим методом, оксигемоглобина в периферической крови, и при нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержания 2,3 дифосфоглицерата до 7,2 мкмоль/мл, снижении гемоглобина до 72,25 усл. ед., снижении оксигемоглобина до 96,0% создается угроза формирования гипоксии.