СПОСОБ ОЦЕНКИ НАРУШЕНИЯ ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА ПРИ СНИЖЕНИИ МИКРОВЯЗКОСТИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ И ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 

Мембраны эритроцитов при нарушении метаболизма в организме подвергаются воздействию перекисного окисления [2, 4, 6]. При воздействии на мембраны эритроцитов факторов иммунного нарушения происходит перестройка белково-липидного строения мембран, приводящая к изменению внутриклеточного обмена [10].

Воздействия инфекционных факторов при различных заболеваниях приводят к перестройке фосфолипидов в мембранах эритроцитов и повышению их микровязкости [1, 3, 4, 5]. Эти изменения в мембранах эритроцитов отражаются на функциональных процессах, проявляющихся в нарушении кислородтранспортной функции эритроцитов [7, 9].

Целью настоящего исследования является разработка способа оценки изменения оксигенации гемоглобина эритроцитов при обострении у беременных на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции, которая приводит к снижению микровязкости мембран эритроцитов, создавая формирование гипоксического состояния. В доступной литературе не обнаружено описания действия цитомегаловирусной инфекции на микровязкость мембран эритроцитов и его опосредованного влияния на оксигенацию гемоглобина.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Обследовано 45 беременных на сроке гестации 20-22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) в стадии обострения (основная группа) и 15 беременных на тех же сроках гестации без патологии (контрольная группа). У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение ЦМВИ - устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности - более 65%, а также ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск); выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

2. Содержание оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Мэллой [8].

3. Состав эритроцитов в периферической крови определяли с помощью автоматизированной цитофотометрической установки «Mekos» (Москва).

4. Измерение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении [2, 3]. Флюоресценцию пирена измеряли спектрофлюорометрически на спектрофлюориметре «Hitachi» (Япония). Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 334 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Для определения микровязкости зоны липид-белковых контактов длина волны возбуждения - 286 нм, длина волны мономеров - 395 нм, длина волны эксимеров - 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (K_ЭКС=F₄₇₀/F₃₉₅), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F_Э/F_М.

В результате исследований были получены следующие данные:

1. Произошли изменения микровязкости мембран эритроцитов. При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации до титра антител к цитомегаловирусу 1:1600 коэффициент эксимеризации пирена, определяющий микровязкость, составил в липидном бислое мембран эритроцитов 0,59±0,006 F_Э/F_М (контроль - 0,86±0,003 F_Э/F_М), а в белок-липидном слое - до 0,70±0,004 F_Э/F_М (контроль - 1,1±0,005 F_Э/F_М).

2. Повышение микровязкости в мембранах эритроцитов отражалось на их строении. С помощью автоматизированной цитофотометрической установки «Mekos» было получено, что у беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции число дискоцитов в периферической крови снижалось до 70,0±1,3% (контроль - 91,3±1,7%); Содержание эхиноцитов увеличивается до 8,0±0,5% (контроль - 2,7±0,09%); мишеневидных эритроцитов - до 11,5±0,9% (контроль - 2,0±0,05%), а число дегенеративных форм составило 10,5±0,3% (контроль - 4,0±0,03%). Содержание оксигемоглобина в крови беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600 снизилось до 89,8±1,5% (контроль - 97,8±2,1%). Таким образом, обострение цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации с титром антител 1:1600 приводит к повышению микровязкости мембран эритроцитов, снижая содержание оксигемоглобина до 89,8±1,5% при контроле - 97,8±2,1%, создавая угрозу формирования гипоксии.

Литература

1. Горшинская И.А., Глотина Л.Ю., Горло Е.И., Рова Т.А., Бордюшков Ю.Н. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных // Вопросы мед. химии. - 1999. - Т.45. - №1. - С.53-57.

2. Дзучкоев С.Г., Карсанова З.О., Турина А.Е. Перекисное окисление липидов и антиокислительная защита мембран клеток при сахарном диабете // НИИ медико-биологических проблем ВНЦ РАН и Правительства Алания. - 2017. - Т.20, №36 - С.7-12.

3. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов // М.: Наука, 1989. - С.206.

4. Дубинина Е.Е, Пустыгина А.В. Окислительная модификация протеинов, ее роль при патологических состояниях // Укр. биохим. журн. - 2008. - Т. 80, №6 - С.8-10.

5. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н., Андриевская И.А., Довжикова И.В., Болелова С.М. Изменение микровязкости мембран эритроцитов крови у беременных, инфицированных вирусом герпеса // Бюл. Физиол. и патол. Дыхания СО РАМН, Благовещенск, 2006. - Вып.23 (приложение). - С.16-18.

6. Копытова Т.В., Химкина Л.Н., Суздальцева И.В. Окислительный стресс, эндоксемия у больных тяжелыми распространенными дерматозами // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. - 2009. - №2. - С.10-13.

7. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных // Медицинская информатика. - 2009. - №1(19). - С.27-30.

8. Покровский А.А. Биохимические методы исследования // справочник М.: «Медицина», 1969. - С.337.

9. Рябов Г.А., Палечник И.Н., Азизов Ю.М. Активированные формы кислорода и их роль в некоторых патологических состояниях // Анестезиология и реанимация. - 1991. - №1. - С.63-69.

10. Bishop Ch. Overall red cell metabolism. In: The red blood cell. Ed. Bishop Ch. and Surgenor D. New York, 1964, P.147.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, микровязкость мембран эритроцитов путем эксимеризации липидного бислоя и белок-липидного слоя, количество дегенеративных форм эритроцитов, мишеневидных эритроцитов и эхиноцитов, содержание оксигемоглобина. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, выявлении снижения эксимеризации липидного бислоя до 0,59±0,006 F_Э/F_М, белок-липидного слоя до 0,70±0,004 F_Э/F_М, увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 10,5±0,3%, эхиноцитов до 8,0±0,5%, мишеневидных эритроцтов до 11,5±0,9%, снижении содержания оксигемоглобина до 89,8±1,5% оценивают угрозу формирования гипоксии.

Способ оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, характеризующийся тем, что в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, микровязкость мембран эритроцитов путем эксимеризации липидного бислоя и белок-липидного слоя, количество дегенеративных форм эритроцитов, мишеневидных эритроцитов и эхиноцитов, содержание оксигемоглобина и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, выявлении снижения эксимеризации липидного бислоя до 0,59±0,006 F_Э/F_М, белок-липидного слоя до 0,70±0,004 F_Э/F_М, увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 10,5±0,3%, эхиноцитов до 8,0±0,5%, мишеневидных эритроцитов до 11,5±0,9%, снижении содержания оксигемоглобина до 89,9±1,5% оценивают угрозу формирования гипоксии.