ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕРОЯТНЫХ СРОКОВ ЗАРАЖЕНИЯ ВИРУСОМ ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ВИЧ-1), В ТОМ ЧИСЛЕ ВИЧ-1 ГРУППЫ О, В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ ЧЕЛОВЕКА "ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК" Российский патент 2014 года по МПК C12Q1/00 A61K39/00 

Описание патента на изобретение RU2515051C1

ИЗОБРЕТЕНИЕ относится к области биотехнологии и медицины. И может быть использовано для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Распространение ВИЧ-инфекции остается реальной проблемой современного мира. Поскольку своевременная и качественная диагностика является реальным средством для сокращения ареала распространения ВИЧ-инфекции, то разработка эффективной тест-системы, способной определить вероятный срок инфицирования, является важной задачей современного общества.

Анализ уровня техники показал существование ряда способов и тестов, предложенных разными авторами, для определения стадий ВИЧ-инфекции с использованием различных методов. Известен, например, молекулярно-генетический тест, основанный на определении вирусной нагрузки периферической крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Кравченко А.В., Серебровская Л.В., Голохвостова Е.Л. и др. Тимазид в сочетании с хивидом и инвиразой в комплесной терапии больных с ВИЧ-инфекцией. - Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1998. - №5 - с.51-52). Известен способ оценки стадий ВИЧ-инфекции (Клиническая иммунология и аллергология под ред. Г.Лолора-младшего. - М.: Практика, 2000. - С.585-587), заключающийся в определении уровня сывороточного β2-микроглобулина. Описан способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции (В.В.Покровский с соавт. "Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции". - М.: ГОУ ВУНМЦ РФ, 2001. - С.11), заключающийся в определении абсолютного количества CD4+лимфоцитов периферической крови. Также известен способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции, основанный на том, что при исследовании сыворотки крови пациента методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяют оптическую плотность (ОП) исходного образца сыворотки крови, отражающую уровень ВИЧ-специфических антител, и ОП исходного образца сыворотки, инкубированного в течение 10 минут со 100 мкл 3.5 М раствора изотиоционата натрия. При снижении ОП на 40% и менее диагностируют стадию А - генерализованной лимфаденопатии, при снижении ОП в интервале 40-60% - стадию В - бациллярного ангиоматоза, орофарингеального кандидоза и т.д., а при снижении ОП на 60% и более - стадию С - СПИД (RU 2251701).

Таким образом, проведенный анализ уровня техники показал, что ни один из существующих источников не может служить ближайшим аналогом к заявляемому изобретению, так как все указанные документы относятся к способам и тестам, определяющим стадию ВИЧ-инфекции, и ни один из описанных источников не содержит технических решений, направленных на определение вероятного временного интервала заражения. Заявляемое изобретение относится к тест-системе, определяющей вероятный срок заражения ВИЧ-инфекцией. Анализ уровня техники не выявил аналогичных решений, направленных на решение поставленной задачи.

В настоящем изобретении заявляется набор реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест предназначен для дополнительного исследования ВИЧ-позитивных образцов с подтвержденным положительным результатом в иммунном блоте. Возможно исследование образцов с неопределенным или негативным результатом исследования в иммунном блоте, в которых подтверждено наличие ВИЧ РНК и/или антигена р24 ВИЧ-1.

В настоящем изобретении заявляется также способ использования данным набором реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Техническим результатом заявленного изобретения является определение вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, простота выполнения теста, что позволяет использовать заявленное изобретение для эпидемиологического надзора за динамикой распространения ВИЧ-инфекции, за динамикой выявления сероконверторов в определенной популяции (поло-возрастные, социальные группы населения), а также при эпидемиологическом расследовании случаев и очагов ВИЧ-инфекции.

Сущность предлагаемого технического решения состоит в том, что определение вероятного срока заражения ВИЧ-1 проводят с помощью тест-системы, которая включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Исследуемые образцы тестируются нативными и разведенными в растворе для разведения образцов. По результатам тестирования образцы подразделяются на «ранние» и «поздние». «Ранние» образцы - вероятный срок инфицирования до 9 месяцев от момента заражения, «поздние» образцы - вероятный срок инфицирования 9 и более месяцев от момента заражения. Принадлежность образца к «ранним» или «поздним» оценивается по проценту падения оптической плотности (ОП) разведенного образца по отношению к неразведенному.

Примеры

Данные примеры служат для иллюстрации конкретных воплощений изобретения и не направлены на сужение прав заявителя. Под объем прав заявителя подпадают все возможные варианты изобретения, в том числе и не приведенные в данном разделе.

Пример 1

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Конъюгат-1 - это смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с биотином. На первом этапе исследуемые образцы, контрольные образцы и их разведения 1:101, а также РРС инкубируют с конъюгатом-1. Специфические антитела, присутствующие в исследуемых и контрольных положительных образцах, связываются с антигенами, сорбированными в лунках микропланшета, и антигенами, конъюгированными с биотином, и образуют устойчивые комплексы. Избыток образцов и конъюгата-1 удаляется при промывке. На следующем этапе в лунки добавляется стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (конъюгат-2). Конъюгат-2 связывается с комплексом антиген-антитело-антиген, присутствующим в лунке. Избыток конъюгата-2 удаляется промывкой, и затем в лунки добавляется хромоген/субстрат. В лунках со связавшимся конъюгатом-2 развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

Пример 2

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Используется один конъюгат - смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с пероксидазой хрена. В процессе анализа образцы, контроли и их разведения, а также РРС инкубируют с конъюгатом в покрытых антигенами лунках планшета. Образующийся устойчивый комплекс после удаления избытка образца и конъюгата проявляется добавлением хромогена/субстрата. При этом развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

Принадлежность исследуемых образцов к «ранним» или «поздним» оценивается по % падения ОП при разведении образца, который рассчитывается по формуле:

% п а д е н и е О П = 100 % О П р а з в е д . о б р а з ц а О П с р . Р Р С О П ц е л ь н о г о о б р а з ц а × 100 % ,

где ОПср. РРС - среднее значение ОП РРС (рассчитывается по нескольким значениям ОП РРС).

Исследуемые образцы расценивать как «ранние»: если падение ОП>40%.

Исследуемые образцы расценивать как «поздние»: если падение ОП≤40%.

Пример расчета % падения ОП при разведении образца приведен в таблице 1.

Таблица 1 Результаты тестирования ВИЧ-позитивных образцов сыворотки/плазмы крови, установленные по % падения ОП при разведении образца Порядковый номер образца ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК ОП цельного образца ОП разведенного образца ОПср. РРС % падения ОП результат тестирования 10 3,189 3,071 0,054 5,4 поздний 11 3,117 2,999 0,054 5,5 поздний 38 2,964 0,062 0,048 99,5 ранний 39 3,187 0,487 0,048 86,2 ранний

Для учета и обработки результатов удобно использовать программу Excel. Использование данного приложения позволит проводить расчеты автоматически. Программа для обработки результатов тестирования находится на диске, приложенном к набору, или ее можно найти на сайте компании.

При разработке и оценке теста использовались образцы сероконверсионных панелей (BBI, Inc., Zeptometrix, США) и ВИЧ-позитивные образцы сывороток (плазмы) крови с установленными вероятными сроками заражения. Вероятность правильного определения давности заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, установленная по сероконверсионным панелям, составляет 100% (данные представлены в таблице 2), по образцам сывороток лиц с условно установленным сроком заражения (n=129) составляет 94% (таблицы 3, 4; данные приведены частично).

Таблица 2 Результаты тестирования ВИЧ-позитивных образцов сыворотки/плазмы крови, установленные по сероконверсионным панелям Сероконверсионная панель Дни с первого забора крови Результат тестирования в «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» BBI PRB 914 31 «ранние» BBI PRB 916 35 «ранние» BBI PRB 925 49 «ранние» BBI PRB 929 28 «ранние» BBI PRB 930 10 «ранние» BBI PRB 931 42 «ранние» BBI PRB 934 11 «ранние» BBI PRB 941 25 «ранние» BBI PRB 942 14 «ранние» BBI PRB 944 16 «ранние» BBI PRB 947 20 «ранние» BBI PRB 951 19 «ранние» BBI PRB 952 21 «ранние» BBI PRB 955 14 «ранние» BBI PRB 965 21 «ранние» BBI PRB 966 51 «ранние» BBI PRB 968 35 «ранние» BBI PRB 969 77 «ранние» ZMC HIV 6243 33 «ранние» ZMC HIV 6247 30 «ранние» ZMC HIV 9014 31 «ранние» ZMC HIV 9017 35 «ранние» ZMC HIV 9018 33 «ранние» ZMC HIV 9021 57 «ранние» ZMC HIV 9022 29 «ранние» ZMC HIV 9032 55 «ранние» ZMC HIV 9077 104 «ранние» ZMC HIV 9079 95 «ранние» ZMC HIV 12008 42 «ранние»

В тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» оценивалась возможность исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 различных субтипов, в том числе к ВИЧ-1 группы О: референс панель QCS 42-28-327-03Р (ГИСК) (субтипы А, В, С) (за исключением образца №24, содержащего антитела к ВИЧ-2), 1-ая международная референс панель анти ВИЧ (NIBSC Code:02/210) (субтипы А, В, С, Е) (за исключением образца №5, содержащего антитела к ВИЧ-2), образцы сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 группы О (№1342, К00175, К00259; BioMex). Результаты свидетельствуют о возможности исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1, принадлежащих различным субтипам, в том числе к ВИЧ-1 группы О, в тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК».

Специфичность набора реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» определяли при исследовании образцов сывороток донорской крови (n=352), продемонстрировавших в ИФА отрицательный результат. Специфичность составила 100%. Дополнительно были протестированы 255 образцов сывороток крови (отрицательных в ИФА):

■ 167 образцов сывороток крови от беременных женщин и больных с инфекционными заболеваниями;

■ 128 образцов сывороток крови от пациентов с различными неинфекционными заболеваниями.

Специфичность составила - 100%.

Полученные данные показывают высокую эффективность разработанной тест-системы «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» при определении вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Похожие патенты RU2515051C1

название год авторы номер документа
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СПЕКТРА АНТИТЕЛ К ВИЧ 1 И 2 ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИЧ 1 (p24) "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1 И 2, ВИЧ 1 ГРУППЫ О-СПЕКТР+АГ p24 ВИЧ 1" 2005
  • Бурков Анатолий Николаевич
  • Уланова Татьяна Ивановна
  • Обрядина Анна Петровна
  • Баранова Елена Николаевна
  • Шарипова Ирина Николаевна
RU2283497C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕФЕРЕНС-ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ТЕСТ-СИСТЕМ И ИММУНОБЛОТОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ МАРКЕРОВ ВИЧ-1 2015
  • Канев Александр Николаевич
  • Пьянков Степан Александрович
  • Юдина Ирина Викторовна
  • Черепанова Наталья Санкиреевна
  • Соколов Юрий Владимирович
  • Мирджамалова Феруза Одилжоновна
RU2603483C2
ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИЧ/СПИД 2010
  • Хаитов Рахим Мусаевич
  • Сидорович Игорь Георгиевич
  • Николаева Ирина Александровна
  • Шевалье Александр Федорович
  • Гасанов Вагиф Али-Оглы
  • Игнатьева Галина Алексеевна
  • Коробова Светлана Вячеславовна
  • Гудима Георгий Олегович
  • Карамов Эдуард Владимирович
  • Корнилаева Галина Владимировна
  • Павлова Татьяна Владимировна
  • Некрасов Аркадий Васильевич
  • Пучкова Наталья Григорьевна
  • Медведев Сергей Алексеевич
  • Вазыхова Фируза Гаруновна
RU2475264C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕФЕРЕНС-ПАНЕЛИ ОБРАЗЦОВ СЫВОРОТОК, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 2013
  • Канев Александр Николаевич
  • Пьянков Степан Александрович
  • Баяндин Роман Борисович
  • Черепанова Наталья Санкиреевна
  • Юдина Ирина Викторовна
  • Майданюк Валерий Григорьевич
RU2521232C1
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В 2006
  • Бурков Анатолий Николаевич
  • Уланова Татьяна Ивановна
  • Обрядина Анна Петровна
  • Егорова Наталия Игоревна
  • Иголкина Светлана Николаевна
  • Шарипова Ирина Николаевна
RU2325655C9
СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ВИЧ-1) 2000
  • Гришина Г.В.
  • Карамов Э.В.
  • Корнилаева Г.В.
  • Зефиров Н.С.
  • Чумаков Т.И.
RU2198658C2
ПАНЕЛЬ СЫВОРОТОК, СОДЕРЖАЩИХ АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ HCV РАЗНЫХ СУБТИПОВ 2010
  • Канев Александр Николаевич
  • Юдина Ирина Викторовна
  • Черепанова Наталья Сангиреевна
  • Максютов Ринат Амирович
  • Дроздов Илья Геннадиевич
  • Салим Камили
RU2456617C2
Мозаичный рекомбинантный полипептид, содержащий фрагменты белков вируса гепатита Е 1 и 3 генотипов в одной полипептидной цепи, предназначенный для использования в тест-системах, применяемых в серодиагностике гепатита Е 2020
  • Алаторцева Галина Ивановна
  • Сидоров Александр Викторович
  • Нестеренко Любовь Николаевна
  • Лухверчик Людмила Николаевна
  • Амиантова Ирина Ильинична
  • Доценко Вера Васильевна
  • Воробьев Денис Сергеевич
  • Милованова Александра Владимировна
  • Михайлов Михаил Иванович
  • Кюрегян Карен Каренович
  • Нурматов Зуридин Шарипович
  • Касымов Омор Тилегенович
  • Жаворонок Сергей Владимирович
  • Красочко Петр Альбинович
  • Зверев Виталий Васильевич
RU2754791C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ НИЗКОТИТРАЖНОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ТЕСТ-СИСТЕМ И ИММУНОБЛОТОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АНТИТЕЛ К РАЗНЫМ СУБТИПАМ ВГС 2009
  • Канев Александр Николаевич
  • Черепанова Наталья Сангиреевна
  • Юдина Ирина Викторовна
  • Максютов Ринат Амирович
  • Шалунова Нина Васильевна
  • Бочарова Нина Григорьевна
  • Медуницын Николай Васильевич
  • Дроздов Илья Геннадиевич
RU2408024C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТАДИЙ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ 2004
  • Сизякина Л.П.
  • Андреева И.И.
RU2251701C1

Реферат патента 2014 года ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕРОЯТНЫХ СРОКОВ ЗАРАЖЕНИЯ ВИРУСОМ ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ВИЧ-1), В ТОМ ЧИСЛЕ ВИЧ-1 ГРУППЫ О, В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ ЧЕЛОВЕКА "ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК"

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

Формула изобретения RU 2 515 051 C1

1. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, характеризующаяся тем, что она включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты, представляющие собой конъюгаты, хромоген/субстрат.

2. Способ определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, основанный на разном содержании антител в зависимости от срока инфицирования, включающий разделение исследуемого образца на две части и разведение одной из них; исследование обеих (нативной и разведенной) частей образца сыворотки крови больного при помощи иммуноферментной тест-системы, описанной в п.1; определение оптической плотности (ОП) нативного и разведенного образцов и РРС; расчет среднего значения ОП РРС; вычисление процента падения ОП разведенного образца по отношению к неразведенному по формуле
% п а д е н и е О П = 100 % О П р а з в е д . о б р а з ц а О П с р . Р Р С О П ц е л ь н о г о о б р а з ц а × 100 % ,
при этом вероятный срок заражения расценивается как «ранний», если падение ОП>40%, и как «поздний» - если падение ОП≤40%.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2515051C1

Способ обнаружения антител к ВИЧ-2 1988
  • Андерс Вальне
  • Бо Свеннерхолм
  • Ларс З.Римо
  • Стиг Жанссон
  • Петер Хораль
SU1825424A3
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СПЕКТРА АНТИТЕЛ К ВИЧ 1 И 2 ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИЧ 1 (p24) "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1 И 2, ВИЧ 1 ГРУППЫ О-СПЕКТР+АГ p24 ВИЧ 1" 2005
  • Бурков Анатолий Николаевич
  • Уланова Татьяна Ивановна
  • Обрядина Анна Петровна
  • Баранова Елена Николаевна
  • Шарипова Ирина Николаевна
RU2283497C1

RU 2 515 051 C1

Авторы

Шарипова Ирина Николаевна

Загрядская Юлия Евгеньевна

Пузырев Владимир Федорович

Ольховский Игорь Алексеевич

Нешумаев Дмитрий Александрович

Рузаева Людмила Александровна

Обрядина Анна Петровна

Бурков Анатолий Николаевич

Уланова Татьяна Ивановна

Даты

2014-05-10Публикация

2013-04-17Подача