СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ОКОЛОУШНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО СОДЕРЖАНИЮ БИОМАРКЕРОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ И В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПАЦИЕНТА Российский патент 2014 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, и может быть использовано в диагностике злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений.

Известен способ диагностики злокачественных новообразований органов полости рта по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, включающий исследования плазмы венозной крови и ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента в утренние часы до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа на основе моноклональных антител, выполнение забора венозной крови пациента после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут и выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа плазмы крови с последующим анализом результатов исследований (см. Кочурова Е.В. Значение онкомаркеров слюнной жидкости при плоскоклеточном раке органов полости рта, Автореферат диссертации к.м.н., Москва, 2008 г., с.28).

Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:

- обладает недостаточной точностью дифференциальной диагностики околоушной слюнной железы в день обращения пациента,

- обладает недостаточной чувствительностью дифференциальной диагностики околоушной слюнной железы,

- недостаточность вероятности выявления процесса злокачественных новообразований околоушной слюнной железы в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних,

- сложность подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала.

Задачей изобретения является создание способа качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента.

Техническим результатом является достижение значительного повышения точности дифференциальной диагностики в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики, достижение высокой вероятности выявления процесса злокачественного новообразования в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала.

Технический результат достигается тем, что предложен способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, включающий исследования плазмы венозной крови и ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа на основе моноклональных антител, выполнение забора венозной крови пациента, получение плазмы крови в виде надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа плазмы крови с последующим анализом результатов исследований, при этом венозную кровь и ротовую жидкость в любой последовательности забирают у пациента, в качестве биомаркера в ротовой жидкости пациента выбирают раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125), а в качестве биомаркера в плазме крови выбирают нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase, при содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 957,1-1528,5 ед./мл и нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30-57,9 нг/мл диагностируют железистый рак околоушной слюнной железы пациента, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 1739,3-2709,7 ед./мл и содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1-24,5 нг/мл - диагностируют лимфому околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. При этом при необходимости кратковременного хранения венозной крови пациента перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавляют в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, забирают плазму крови в виде надосадочной жидкости, размещают в пробирке «эпиндорф» и сразу замораживают в жидком азоте при температуре минус 190°C. При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым, лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Способ осуществляют следующим образом. Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирают у пациента для диагностики злокачественных новообразований. Выполняют забор ротовой жидкости пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема им пищи и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляют ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняют повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещают в кювету и выполняют стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

Выполняют забор венозной крови пациента, получают плазму крови в виде надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, выполняют стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ плазмы крови. При этом при необходимости кратковременного хранения венозной крови пациента перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавляют в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, забирают плазму крови в виде надосадочной жидкости, размещают в пробирке «эпиндорф» и сразу замораживают в жидком азоте при температуре минус 190°C.

В качестве биомаркера для диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) группы клинического контроля принимают уровень 404,2-879,8 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 957,1-1528,5 ед./мл, то диагностируют железистый рак околоушной слюнной железы пациента.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 1739,3-2709,7 ед./мл, то диагностируют лимфому околоушной слюнной железы пациента.

В качестве биомаркера для диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбирают нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяют ее количественное содержание в плазме крови пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в плазме крови пациента нейрон-специфическая енолаза / neuron-specific enolase группы клинического контроля принимают уровень 4,6-9 нг/мл.

Если определяют содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30-57,9 нг/мл, то диагностируют железистый рак околоушной слюнной железы пациента.

Если определяют содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1-24,5 нг/мл, то диагностируют лимфому околоушной слюнной железы пациента.

Затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым, лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, отличительными являются:

- выполнение забора венозной крови и ротовой жидкости в любой последовательности у пациента,

- выбор в качестве биомаркера в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125), а в качестве биомаркера в плазме крови - нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase,

- диагностирование при содержании в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 957,1-1528,5 ед./мл и нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30-57,9 нг/мл железистого рака околоушной слюнной железы пациента,

- диагностирование при содержании в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 1739,3-2709,7 ед./мл и при содержании в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1-24,5 нг/мл лимфомы околоушной слюнной железы пациента,

- прогнозирование по полученным результатам определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента тактики лечения пациента,

- при этом при необходимости кратковременного хранения венозной крови пациента перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавляют в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, забирают плазму крови в виде надосадочной жидкости, размещают в пробирке «эпиндорф» и сразу замораживают в жидком азоте при температуре минус 190°C. При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента,

- выполнение при необходимости кратковременного хранения венозной крови пациента, перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавляют в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, забирают плазму крови в виде надосадочной жидкости, размещают в пробирке «эпиндорф» и сразу замораживают в жидком азоте при температуре минус 190°C,

- дополнительное осуществление в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым, лечением пациента контрольного определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Экспериментальные исследования предложенного способа качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента при своем использовании обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной диагностики в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики, достижение высокой вероятности выявления процесса злокачественных новообразований в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала. Кроме того, предложенный способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента обеспечил при практическом использовании значительное повышение качества жизни пациентов.

Реализация предложенного способа качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент С., 57 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациента для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациента в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациента размещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 1057,1 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 57,9 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали железистый рак левой околоушной слюнной железы. В связи с полученными данными пациенту было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Пример 2. Пациент З., 50 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациента для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациента в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациента размещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 1089 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 46,9 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали железистый рак левой околоушной слюнной железы. В связи с полученными данными пациенту было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Пример 3. Пациент Г., 83 года, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы справа».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациента для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациента в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут. При этом в связи с преклонным возрастом пациента возникла необходимость кратковременного хранения его венозной крови, поэтому перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавили в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, забрали плазму крови в виде надосадочной жидкости, разместили в пробирке «эпиндорф» и сразу заморозили в жидком азоте при температуре минус 190°C. Впоследствии готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациента помещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 1528 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали железистый рак околоушной слюнной железы справа. В связи с полученными данными пациенту было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Пример 4. Пациентка М., 48 лет, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациентки для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациенткой и после полоскания полости рта пациенткой кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациентки в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациентки при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациентки размещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 2709 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали лимфому левой околоушной слюнной железы. В связи с полученными данными пациентке после удаления лимфомы околоушной слюнной железы проводилось только химиотерапевтическое лечение (согласно рекомендациям ESMO).

Пример 5. Пациентка Р., 62 лет, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациента для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациента в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациента размещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 2228 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 21,9 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали лимфому левой околоушной слюнной железы. В связи с полученными данными пациентке после удаления лимфомы околоушной слюнной железы проводилось только химиотерапевтическое лечение (согласно рекомендациям ESMO).

Пример 6. Пациент Ф., 39 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «злокачественное новообразование околоушной слюнной железы справа».

Ротовую жидкость и венозную кровь в любой последовательности забирали у пациента для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и выполняли повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. Выполняли также забор венозной крови пациента в качестве надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости и плазмы крови пациента размещали в отдельные кюветы и выполняли стандартный иммуноэлектрохемилюминисцентный анализ на аппарате Elecsys 2010 фирмы «Рош-Москва» (Швейцария) на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбрали раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125) и определяли его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в плазме крови выбрали нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase и определяли ее количественное содержание в плазме крови пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки ракового антигена 125 / cancer antigen 125 (CA 125) в количестве 1739,3 ед./мл, а также установили содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 24,5 нг/мл. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. На основе полученных результатов диагностировали лимфому правой околоушной слюнной железы. В связи с полученными данными пациентке после удаления лимфомы околоушной слюнной железы проводилось только химиотерапевтическое лечение (согласно рекомендациям ESMO).

Установленные клинические диагнозы впоследствии подтвердились результатами выполненной морфологической верификации предварительно взятого у всех пациентов биопсийного материала из очага поражения.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым, лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судили об эффективности выбранного лечения пациента.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента. Для этого проводят исследования плазмы венозной крови и ротовой жидкости пациента методом стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа. Забор венозной крови и ротовой жидкости проводят в любой последовательности. В качестве биомаркера в ротовой жидкости пациента выбирают раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125), а в качестве биомаркера в плазме крови выбирают нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase, при содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 957,1-1528,5 ед/мл и нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30-57,9 нг/мл диагностируют железистый рак околоушной слюнной железы пациента. Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 1739,3-2709,7 ед/мл и содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1-24,5 нг/мл - диагностируют лимфому околоушной слюнной железы пациента. Затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения. Изобретение обеспечивает точность и чувствительность дифференциальной диагностики в день обращения пациента, повышение вероятности выявления процесса злокачественных новообразований у пациента на ранних стадиях заболевания. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.

1. Способ качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, включающий исследования плазмы венозной крови и ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 2 часа после приема пищи пациентом и после полоскания полости рта пациента кипяченой водой комнатной температуры, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторное центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа на основе моноклональных антител, выполнение забора венозной крови пациента, получение плазмы крови в виде надосадочной жидкости после центрифугирования венозной крови пациента при 1500 об/мин в течение 5 минут, выполнение стандартного иммуноэлектрохемилюминисцентного анализа плазмы крови с последующим анализом результатов исследований, отличающийся тем, что венозную кровь и ротовую жидкость в любой последовательности забирают у пациента, в качестве биомаркера в ротовой жидкости пациента выбирают раковый антиген 125 / cancer antigen 125 (CA 125), а в качестве биомаркера в плазме крови выбирают нейрон-специфическую енолазу / neuron-specific enolase, при содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 957,1-1528,5 ед./мл и нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 30-57,9 нг/мл диагностируют железистый рак околоушной слюнной железы пациента, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента CA 125 в количестве 1739,3-2709,7 ед./мл и содержание в плазме крови пациента нейрон-специфической енолазы / neuron-specific enolase в количестве 16,1-24,5 нг/мл - диагностируют лимфому околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при необходимости кратковременного хранения венозной крови пациента перед выполнением анализа ее в количестве 5 мл добавляют в пробирку с 1 мл 0,14 М цитрата натрия, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, забирают плазму крови в виде надосадочной жидкости, размещают в пробирке «эпиндорф» и сразу замораживают в жидком азоте при температуре минус 190°C.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым, лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.