СРЕДСТВО ДЛЯ КУПИРОВАНИЯ АЛКОГОЛЬНОГО АБСТИНЕНТНОГО СИНДРОМА Российский патент 2014 года по МПК A61K38/08 A61P25/32 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается нового применения известного вещества (треонил-лизил-пролил-аргинил-пролил-глицил-пролил-диацетата) селанка (регистрационное удостоверение № ЛС-003338 (2009)) в качестве средства, купирующего алкогольный абстинентный синдром.

Поиск и разработка новых лекарственных средств для лечения алкоголизма остаются актуальной проблемой современной фармакологии, что связано с широкой распространенностью данного заболевания, тенденцией к хроническому течению, а также со значительными социальными и экономическими последствиями злоупотребления алкоголя (Кошкина Е.А. и соавт. Наркология, 2009, №11, 24-31).

Наличие в анамнезе алкогольного абстинентного синдрома (ААС) свидетельствует о формировании физической зависимости от этанола (Бокий И.В., Лапин И.П. Алкогольный абстинентный синдром. Л., «Медицина», 1976, 120 с.). Терапия большинства больных, как правило, начинается с устранения абстинентной симптоматики и направлена на предупреждение вегетативных, неврологических, соматических и психических расстройств (Полыковский А.А. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова, 1997, Т.97, №9, 20-26), что во многом определяет дальнейшее течение болезни и снижение риска возникновения раннего рецидива (Ерышев О. Ф. и соавт.http://www.credomed.ru/libra_studio/fp/alco_tri.swf).

Современные схемы фармакотерапии ААС, наряду с дезинтоксикационными мероприятиями, включают использование витаминов, гепатопротекторов, антиконвульсантов, нейролептиков, антидепрессантов, транквилизаторов и ноотропных препаратов (Альтшулер В.Б. и соавт. Стандарты (модели протоколов) диагностики и лечения наркологических больных. Приложение к приказу Минздрава России от 28.04.98 г. №140. - М.: Минздрав России, 1998, 42 с.).

Для устранения психопатологической симптоматики при лечении ААС наиболее эффективно применяются транквилизаторы бензодиазепинового ряда, которые имеют ряд недостатков, включая опасность развития лекарственной зависимости, потенцирование токсического действия алкоголя в остром периоде ААС, угнетение дыхания, головокружение, слабость, перевозбуждение, бессонницу при использовании в больших дозах (Авруцкий Г.Я., Недува А.А. Лечение психически больных. - М.: Медицина, 1988; Lejoyeux М. et al. Alcohol Alcohol. 1998; 33(6):563-75; Проблемы диагностики и лечения алкоголизма и наркомании/Под ред. Иванца Н.Н., 2001 г., 112 с.; Malcolm R. et al. J Gen Intern Med. 2002; 17(5):349-55).

Данные литературы указывают на стресс как ведущую причину срыва ремиссии при лечении алкоголизма, поэтому продолжает оставаться актуальным поиск новых фармакологических мишеней, ориентированных одновременно на механизмы формирования стрессовых реакций и алкогольной зависимости (Breese, et al.. Alcohol Clin Exp Res. 2005; 29(2):185-95). Так, в частности, диазепам и агонист ГАМКв рецепторов баклофен препятствовали развитию анксиогенной реакции в условиях алкогольной абстиненции (Knapp et al., Alcohol Clin Exp Res. 2007 Арr; 31(4):582-95). С другой стороны, антагонист бензодиазепиновых рецепторов флумазенил также блокировал сенсибилизацию к тревожной реакции синдрома отмены (Knapp et al.. Alcohol. 2004; 32(2):101-11). Буспирон, агонист 5-НТ_1C рецепторов, и антагонист 5-НТ_2C рецепторов предотвращали развитие тревоги при отмене этанола, что свидетельствует о вовлеченности серотонинергической системы (Overstreet, et al., Psychopharmacology. 2003; 167:344-352; Breese, et al., Neuropsychopharmacology. 2004; 29(3):470-82) (см. Таблицу).

  Основные направления поиска средств для купирования повышенной тревожности при отмене этанола № Соединение Механизм Дозы, мг/кг Жив-е Тест Ссылки 1. СР-154, 526 Антагонист КРФ(1)-рецепторов 10,0, в/б крысы СВ Overstreet, et al., 2003; Breese, et al., 2003 2. САМ 1028; CI988 Антагонисты ХЦК₂-рецепторов 0,1-1,0, в/б мыши, крысы ПКЛ Wilson, etal, 1998 3. Буспирон Агонист 5-НТ_1A рецепторов 0,6, в/б крысы CВ Breese, et al., 2005 4. Акампросат Антагонист NMDA-и mGlu5-рецепторов 400,0, в/б крысы ПКЛ Kotlinska et al., 2008 5. ССРА Агонист аденозин A₁-рецепторов 0,05, 0,125, 0,25 в/б мыши ПКЛ Prediger, et al., 2005 6. JNJ-31020028 Антагонист нейропептид Y₂-рецептов 15,0, п/к крысы ПКЛ Cippitelli, etal., 2011 7. N/OFQ Агонист NOP -рецепторов 1,0-3,0 µг, i.c.v. крысы ПКЛ Martin-Fardon, et al., 2010; Economidou, et al., 2011 Примечание: СВ - «социальное взаимодействие», ПКЛ - «приподнятый крестообразный лабиринт», N/OFQ-NOP, ноцицептин/орфанин рецептор.

Помимо тревожных расстройств, при злоупотреблении алкоголем у 5-15% больных наблюдается развитие периферической нейропатии, для которой характерны спонтанные боли, гиперальгезия и аллодиния, усиливающиеся в период алкогольной абстиненции (Dina O.A., et al. Eur J Neurosci. 2008;27(1):83-92). Гипотезы, объясняющие повреждение периферических нервов в результате продолжительного потребления алкоголя, включают активацию микроглии спинного мозга, следствия окислительного стресса, связанные с образованием свободных радикалов, активацию глутаматных рецепторов mGlu5 на уровне спинного мозга, активацию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, а также дефицит тиамина и прямое нейротоксическое действие этанола (Chopra К, and Tiwari V. Br J Clin Pharmacol. 2012; 73(3):348-62). Однако отсутствие достаточной информации о нейробиологических механизмах формирования алкогольной полинейропатии значительно осложняет разработку адекватных средств и методов фармакотерапии, направленной на предотвращение дальнейшего повреждения нервных волокон и восстановление нормального функционирования.

У лиц со сформированной зависимостью алкогольная депривация вызывает падение содержания дофамина и эндогенных опиоидов в системе «положительного подкрепления» в головном мозге. В настоящее время имеется положительный опыт использования биологически активных добавок, содержащих D-фенилаланин (ингибитор энкефалиназ) и L-аминокислоты (L-глутамин и L-5-гидрокситриптофан), способствующие синтезу дофамина, для облегчения протекания абстинентного состояния у пациентов на этапе детоксикационной терапии (Jukic Т. et al. Coil Antropol. 2011; 35(4):1225-30).

Селанк, оригинальный отечественный пептидный препарат, эффективный при лечении тревожных расстройств разной структуры, характеризуется быстрым наступлением терапевтического действия и отсутствием нежелательных побочных эффектов (Per. № ЛСР 003338/09 от 30.04.2009). В экспериментальных исследованиях показано, что селанк обладает широким спектром психотропной активности, в частности оптимизирует процессы обучения и восстановления навыка пространственной ориентировки, нарушенного стрессом и/или нейротоксическим воздействием (Козловский И.И. и соавт. Экспер. и клинич. фармакология, 2008, Т.71, №2, 3-7; Семенова Т.П. и соавт. Экспер. и клинич. фармакология, Т.73, №8, 2-5). Механизм центрального действия селанка включает ингибирование ферментов деградации энкефалинов, повышающих функциональную активность эндогенной опиоидной системы мозга (Зозуля А.А. и соавт., Бюлл. Эксперим. Биол. и Мед., 2001. Т. 131. №4, 315-317; Кост Н.Б. и соавт. Ж. Биоорг. Химии, 2001. Т. 27. №3, 156-159; Кост Н.В. и соавт. Вестник РАМН, 2007, №3, 24-33), а также влияние на содержание норадреналина, дофамина и кругооборот серотонина в гипоталамусе, гиппокампе и неокортексе (Наркевич В.Б. и соавт. Эксперим. и клинич. фармакология, 2008, Т.71, №5, 28-31), что, вероятно, обеспечивает формирование адаптивного ответа организма на стрессовую ситуацию. В клинических условиях у препарата выявлено терапевтически значимое влияние на когнитивные функции в сочетании с анксиолитическим и стимулирующим действием (Телешова Е.С. и соавт. Психиатрия. 2010. Т.4. №4. С.26-35), что изменяет представления о возможных направлениях и перспективности применения селанка в медицинской практике.

Таким образом, способность селанка оказывать противотревожное действие, изменять кругооборот катехоламинов и серотонина в структурах мозга, связанных с эмоциональными реакциями, ингибировать энкефалин-деградирующие ферменты сыворотки крови, а также отсутствие негативных побочных эффектов позволяют его использовать в качестве средства, купирующего алкогольный абстинентный синдром легкой и средней степени тяжести. В доступных литературных источниках до настоящего времени отсутствуют указания на применение селанка по предполагаемому назначению.

Настоящее исследование выполнено на беспородных крысах-самцах (питомник РАМН «Столбовая») в возрасте 8-ми месяцев со средней массой 450-470 г в активной фазе эксперимента.

Методика хронической алкоголизации животных

Для моделирования патологического влечения к этанолу использовали методику принудительной алкоголизации животных с предоставлением 10% раствора этанола в качестве единственного источника жидкости в течение 6-ти месяцев. Животных содержали в индивидуальных клетках в стандартных условиях вивария ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В.Закусова» РАМН с предоставлением брикетированного корма ad libitum при регулируемом 12/12 световом режиме. Раз в неделю регистрировали изменение массы тела животных и количество потребляемого этанола (в г/кг). В процессе принудительной алкоголизации крысы потребляли физиологически значимые количества этанола (6,5±0,2 г/кг в начале и 5,0±0,3 г/кг в конце эксперимента в пересчете на этанол). Опыты выполнены на крысах со сформировавшейся устойчивой алкогольной мотивацией, оценку которой проводили по показателю среднесуточного потребления этанола (из расчета на 1 кг веса в сутки) в условиях свободного выбора между 10% этанолом и водой.

Животные были разделены на опытные и контрольные группы с учетом массы тела, количества потребляемого алкоголя, степени выраженности синдрома отмены этанола и содержались в стандартных условиях вивария в индивидуальных клетках до начала эксперимента.

Поведение животных оценивали через 48 часов после отмены алкоголя с использованием стандартных тестов.

Тест «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ)

Сущность методики заключается в анализе соотношения реакции страха животных в незнакомом пространстве и боязни высоты, с одной стороны, и поисковой активности в новой обстановке, с другой.

Установка ПКЛ для крыс сконструирована из дерева, окрашена в темный цвет и имеет следующие характеристики каждого из 4-х рукавов лабиринта: длина - 50 см, ширина - 15 см; высота бортиков 2-х противоположных закрытых рукавов - 15 см; размер центральной площадки - 15×15 см²; лабиринт приподнят над полом на 75 см. Каждое животное помещали в центр лабиринта на 300 сек. Регистрировали следующие показатели: время нахождения в открытых рукавах; число заходов в открытые рукава; число заходов в закрытые рукава; время нахождения в центре; число выходов на центральную площадку; число вертикальных стоек; количество кивков в открытых рукавах.

Анксиолитическое действие оценивали по увеличению продолжительности нахождения в открытых рукавах и числа заходов животных в открытые рукава лабиринта.

Тест «социальное взаимодействие» (СВ)

Данный тест для оценки тревожности заключается в определении времени активного социального взаимодействия (как показателя тревожного поведения) пары крыс и позволяет зафиксировать как анксиогенные, так и анксиолитические свойства препарата (File SE, Hyde JR. Br.J.Pharmacol. 1978; 62(1):19-24).

Экспериментальная установка представляет собой открытое поле со сторонами 60 см × 60 см и со стенками высотой 50 см, выкрашенное в белый цвет и разделенное черным маркером на 16 квадратов. Тестирование проводили в течение 5 минут в условиях низкой освещенности при помещении пары крыс (1-я - «экспериментальная», 2-я - «резидент»), содержавшихся до эксперимента в индивидуальных клетках и не различавшихся по массе тела более чем на 10 г, в незнакомую обстановку открытого поля. Регистрировали продолжительность активного поведения «экспериментальной» крысы по отношению к парной (например, груминг, обнюхивания, покусывания, броски, борьба, преследования, подползания и/или вскарабкивания на другую крысу). Пассивный контакт (сидение и/или лежание бок о бок) не учитывали. Оценку стрессовой реакции в процессе социального взаимодействия проводили на основе индивидуальных поведенческих данных «экспериментальной» крысы в соответствии с протоколом исследования, предложенным Overstreet D. et al. (Overstreet, et al., Psychopharmacology. 2003;167:344-352). В опыте использовали следующие группы «экспериментальных» животных: 1 - интактные крысы, не имевшие контакта с этанолом; 2 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией, которым через 48 часов после отмены этанола вводили внутрибрюшинно воду для инъекций (контроль); 3 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией, которым через 48 часов после отмены этанола вводили внутрибрюшинно селанк в дозе 0,3 мг/кг.

Анксиолитическое действие оценивали по увеличению времени активного социального поведения «экспериментальной» крысы по отношению к крысе-«резиденту».

Оценка механической аллодинии

Порог чувствительности в ответ на механическую стимуляцию определяли с использованием калиброванных филоментов von Frey (Ugo Basile, Italy), прикладывая их через перфорированный (1 см²) пол к задним лапам крыс, помещенных в отдельные камеры из плексигласа за 15 мин до тестирования для адаптации к экспериментальным условиям (Chaplan SR et al. J.Neurosci Methods 1994; 53: 55-63). Серию филоментов von Frey с разной интенсивностью (0.04, 0.07, 0.16, 0.40, 0.60, 1.00 г) прикладывали вертикально к плантарной поверхности задней лапы крысы в течение 1 секунды с интервалом в 5 секунд до сгибания волоска. Быстрое отдергивание лапы рассматривали как положительный результат. В случае положительной реакции использовали следующий филомент меньшего диаметра или тот же волосок, если отсутствовали лизание или передергивание лапы. Порог чувствительности определяли по минимальному давлению, вызывающему рефлекторную реакцию отдергивания лапы (по крайней мере 1 раз из 5-ти попыток).

Значительное снижение порогов чувствительности при аппликации филоментов von Frey рассматривали как механическую аллодинию, то есть ответ на стимул, не вызывающий болевой реакции в нормальных условиях (Shumilla JA. et al. J Pain. 2005; 6(8):535-49).

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами

Пример 1. Влияние селанка на тревожную реакцию алкоголизированных крыс через 48 ч после отмены этанола в тесте ПКЛ

В опыте при отмене этанола у животных с устойчивой алкогольной мотивацией развивается повышенная тревожная реакция, о чем свидетельствует уменьшение времени пребывания в открытых рукавах ПКЛ (р<0.05) и числа выходов в открытые рукава ПКЛ (р>0.05) по сравнению с интактными животными, не имевшими доступа к этанолу (фиг.1).

Селанк в дозе 0,3 мг/кг, внутрибрюшинно, при однократном введении значительно увеличивал время нахождения в открытых рукавах ПКЛ (р<0,01) и число выходов в открытые рукава ПКЛ (р<0,05), что указывает на анксиолитическое действие препарата (фиг.1).

При анализе этологических показателей установлено, что селанк препятствовал снижению (р<0,01) в условиях алкогольной абстиненции направленной исследовательской активности животных, определяемой по числу наклонов головы (кивков) в открытых рукавах ПКЛ, что также свидетельствует об анксиолитическом действии и оптимизации адаптивного поведения в стрессовой ситуации (фиг.2).

Пример 2. Влияние селанка на поведение алкоголизированных крыс через 48 ч после отмены этанола в тесте «социальное взаимодействие»

Установлено, что в условиях отмены этанола у животных со сформировавшейся алкогольной зависимостью значительно снижается (р<0,05) время активного социального поведения, что указывает на формирование стрессовой реакции (фиг.3).

Селанк в дозе 0,3 мг/кг, внутрибрюшинно, при однократном введении значительно увеличивал время социального контакта пары крыс (р<0,01), что свидетельствует об анксиолитическом действии препарата (фиг.3).

Пример 3. Влияние селанка на изменение тактильной чувствительности у крыс через 48 ч после отмены этанола

Известно, что первые сутки после отмены этанола могут сопровождаться специфическими чувствительными расстройствами, в том числе аллодинией (Shumilla JA. et al. J Pain. 2005;6(8):535-49).

В настоящем опыте показано, что у животных, потребляющих 10% раствор этанола (группа 2), пороги чувствительности к механическому воздействию повышены (р<0,01) по сравнению с интактными крысами (группа 1), в то время как на фоне алкогольной абстиненции порог чувствительности к механическому воздействию резко снижается (группа 3), что может указывать на развитие механической аллодинии (фиг.4).

Селанк в дозе 0,3 мг/кг, внутрибрюшинно, при однократном введении увеличивал (р<0,01) пороги чувствительности у крыс с признаками синдрома отмены (фиг.4).

Описание чертежей

Фиг.1. Влияние селанка на поведение крыс с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»

По оси абсцисс представлены номера групп животных в соответствии с основными параметрами поведения в тесте ПКЛ - время пребывания в открытых рукавах (1-3 столбики) и число заходов в открытые рукава ПКЛ (4-6 столбики): 1 - интактные животные; 2 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола; 3 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола+селанк в дозе 0,3 мг/кг; 4 - интактные животные; 5 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола; 6 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола+селанк в дозе 0,3 мг/кг.

По оси ординат - относительные время пребывания в открытых рукавах ПКЛ и число выходов в открытые рукава ПКЛ, выраженные в %, рассчитанные по формулам:

(время в открытых рукавах в сек/общее время наблюдения в сек)* 100% и (число выходов в открытые рукава/общее число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта)* 100%, соответственно. * - Р<0,05; ** - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группам 2 и 5 соответственно; x - Р<0,05 статистически значимые отличия по отношению к группе 1 согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; данные представлены в виде средних значений; число животных в каждой группе - 9-10.

Фиг.2. Влияние селанка на направленную исследовательскую активность крыс через 48 часов после отмены этанола в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»

По оси абсцисс представлены номера групп животных: 1 - интактные животные; 2 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола; 3 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола+селанк в дозе 0,3 мг/кг.

По оси ординат - число наклонов головы (кивков) в открытых рукавах ПКЛ.

xx - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группе 1; ** - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группе 2 согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; данные представлены в виде средних значений; число животных в каждой группе - 9-10.

Фиг.3. Влияние селанка на поведение крыс с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола в тесте «социальное взаимодействие»

По оси абсцисс представлены номера групп животных: 1 - интактные животные; 2 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола; 3 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола+селанк в дозе 0,3 мг/кг.

По оси ординат - относительное время социального взаимодействия пары крыс, выраженное в %. За 100% принято общее время наблюдения - 300 секунд.

Х - Р<0,05 статистически значимые отличия по отношению к группе 1;

** - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группе 2 согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; данные представлены в виде средних значений; число животных в каждой группе - 8-15.

Фиг.4. Влияние селанка на пороги тактильной чувствительности при неболевой механической стимуляции крыс через 48 часов после отмены этанола

По оси абсцисс представлены номера групп животных: 1 - интактные животные; 2 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией на фоне потребления 10% раствора этанола; 3 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола; 4 - животные с устойчивой алкогольной мотивацией через 48 часов после отмены этанола+селанк в дозе 0,3 мг/кг.

По оси ординат - характеристика механического воздействия филоментами von Frey, выраженная в граммах.

Х - Р<0,05, xx - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группе 1; ** - Р<0,01 статистически значимые отличия по отношению к группе 3 согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; данные представлены в виде средних значений; число животных в каждой группе - 9-10.

Изобретение относится к медицине, в частности к наркофармакологии, и касается нового применения треонил-лизил-пролил-аргинил-пролил-глицил-пролил-диацетата (селанка) в качестве средства для купирования алкогольного абстинентного синдрома (ААС). Установлено, что селанк устраняет тревогу, индуцированную отменой этанола. Выявлено, что селанк восстанавливает пороги тактильной чувствительности, сниженные в период алкогольной абстиненции, до уровня значений интактных животных. Таким образом, анксиолитик селанк может применяться как эффективное средство для коррекции клинических проявлений алкогольного абстинентного синдрома легкой и средней степени тяжести при отсутствии негативных побочных эффектов. 7 ил., 1 табл., 3 пр.

Применение треонил-лизил-пролил-аргинил-пролил-глицил-пролил-диацетата (препарат селанк) в качестве средства, купирующего алкогольный абстинентный синдром.