СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАКЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1997 года по МПК A61K39/265 C12N5/06 C12N7/00 

Изобретение относится к области вирусологии, в частности к способу изготовления инактивирнной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС), и может быть использовано для производства вакцины в биологической промышленности и ветеринарии с целью профилактики этой болезни.

Известны способы изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС с использованием первичнотрипсинизированных культур клеток, эпизоотических штаммов вируса и концентрирования вирусного сырья для получения необходимого количества антигена в прививочной дозе препарата (Крюков H.H. М. Колос, 1974; Соловьев Б. В. Фомин Ю.В. Шарабрин О.И. и др. Труды ВГНКИ, т. XXII, 1975, с. 67 78; Муравьев В.H. Петрова И.А, Усманова Г.В. Костеновский Р.Г. Материалы конференции, посвящен. 70 лет МВА, М. 1989, 1990; Сухарев О.И. и др. Сб. научн. тр. Моск. вет. акад. 1980, т. 113, с. 65 67; Bouters R. et al. 1972 (VII-th Internat. Congress, Munchen); Straub O.C. 1975; Gilbert V. et al. Rev. Med. Veter, 1976.)
Известен также способ прототип (Сухарев О.И. и др. Сб. научн. тр. Моск. вет. акад. 1980, т. 113, с. 65 67) получения инактивированной вакцины против ИРТ КРС, который предусматривает изготовление препарата из эпизоотического штамма вируса ИРТ КРС "4016", выращенного в первичнотрипсинизированной культуре клеток тестикул телят (ТБ) с активностью 5,6 6,5 lg ТЦД 50/мл с последующим концентрированием вирусного сырья в 10 раз. Инактивацию вируссодержащего материала проводят димером этиленимина. При изготовлении вакцины для повышения иммунного ответа используют гидроокись алюминия в качестве адъюванта.

Основные недостатки известного способа заключаются в трудоемкости и нестабильности процесса приготовления клеточного сырья за счет трипсинизации тестикулярной ткани животных и сезонности получения этой ткани. Использование данной культуры и эпизоотического штамма вируса ИРТ КРС 4016 не позволяет получать вирус с необходимой активностью без использования дополнительного и трудоемкого процесса концентрирования вируссодержащего материала для получения необходимого количества антигена в прививочной дозе (≥7,0 lg ТЦД 50/мл). Кроме того, использование вирулентного штамма в технологическом процессе при изготовлении инактивированной вакцины сопряжено с потенциальной опасностью в ветеринарно-санитарном отношении. Применение для инактивации вирусного сырья димера этиленимина (обладающего общетоксическим действием и мутагенностью) опасно для здоровья работающих и связано с трудностями по стабилизации его свойств при хранении и стандартизации.

Целью предлагаемого изобретения является разработка эпизоотологически эффективного, экономичного, технологичного, экологически безопасного способа изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС.

Поставленная цель достигается тем, что используют перевиваемую культуру клеток МДВК, вакцинный штамм ТК-А. При этом применение перевиваемой линии клеток МДВК позволяет планово готовить клеточное сырье со значительно меньшими трудозатратами и себестоимостью продукции (в 1,5 раза) благодаря доступности и высокой пролиферативной активности перевиваемых клеток МДВК.

Использование вакцинного штамма ТК-А вируса ИРТ КРС при выращивании роллерным методом в перевиваемой культуре клеток МДВК исключает из технологического процесса трудоемкую стадию концентрирования вирусного сырья для получения необходимого количества антигена в прививочной дозе. Кроме того, используемый в предложенном способе вакцинный штамм вируса ИРТ КРС безопасен в экологическом отношении и способен стабильно накапливаться с высокой активностью (7,25 8,0 lg ТЦД 50/мл) при выращивании роллерным методом в перевиваемой культуре клеток МДВК. Предлагаемый способ предусматривает для инактивации вируссодержащего материала использовать теотропин (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазоциклодекан) препарат, обладающий стабильностью при хранении и подающийся стандартизации.

Пример конкретного выполнения.

Для получения опытных серий инактивированной вакцины против ИРТ КРС используют перевиваемую культуру клеток МДВК, вакцинный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС, активностью 7,25 8,0 lg ТЦД 50/мл, инактиватор теотропин (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8- тетраазоциклодекан) и масляный адъювант.

Выращивание культуры клеток и вируса осуществляют во вращающихся сосудах (роллер) в течение 2 4 сут.

Стерильность и инфекционную активность вируса определяют по общепринятым методикам.

Инактивацию вируссодержащего материала проводят теотропином (0,05 0,5% концентрации) при 36 38^oC в течение 1 6 сут.

Инактивированный антигенсодержащий материал проверяют на стерильность (по общепринятой методике) и полноту инактивации в культуре клеток МДВК.

Для изготовления вакцины к инактивированному вируссодержащему материалу добавляют масляный адъювант (1 1) и встряхивают до образования молочно-розового цвета жидкости. Вакцину проверяют на стерильность, полноту инактивации, безвредность, антигенную и иммуногенную активность. Результаты оценки инактивированной вакцины представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, более эффективной в иммунобиологическом отношении оказалась вакцина, полученная предложенным способом. Этот препарат при снижении в 2 раза прививочной дозы обеспечивает накопление BH-антител в более высоких титрах (1 32). Продолжительность иммунитета составляет при использовании предложенного способа изготовления вакцины 10 12 месяцев.

Аналогичные результаты получены и при исследовании других показателей, что видно из табл. 2.

По всем основным показателям предлагаемый способ значительно превосходит прототип.

Технологичность и экономичность достигаются за счет использования перевиваемой культуры клеток, роллерного метода выращивания и исключения стадии концентрирования вирусного сырья.

Безопасность обеспечивается за счет использования вакцинного штамма ТК-А и инактиватора теотропина.

Эффективность вакцины за счет иммунобиологической активности препарата.

Таким образом, предлагаемый способ изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС является экономичным, технологичным, безопасным, эпизоотологически эффективным и может быть промышленно применим.

Использование: изобретение относится к области вирусологии, и может быть использовано для производства вакцины в биологической промышленности и ветеринарии. Сущность: предложен способ изготовления инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, предусматривающий культивирование штамма вируса ТК-А инфекционного ринотрахеита в перевариваемой культуре клеток почки теленка - МДВК до активности 7,25 - 8,0 ТЦД 50/мм. Инактивацию вируссодержащего материала проводят теотропином в концентрации 0,05 - 0,5% при температуре 36 - 38^oC в течение 1 - 6 сут. с последующим добавлением масляного адъюванта. 2 табл.

Способ изготовления инактивированной культуральной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, включающий культивирование штамма вируса инфекционного ринотрахеита в монослойной культуре клеток, его инактивацию и добавление адъюванта, отличающийся тем, что в качестве культуры клеток используют перевариваемую линию клеток почки теленка МДВК, из вирусов вакцинный штамм ТК-А, культивирование которого осуществляют до активности 7,25 8,0 ТЦД 50/мм, инактивацию проводят теотропином в концентрации 0,05 0,5% при 36 38^oС в течение 1 6 сут, а из адъювантов используют масляный адъювант.