СПОСОБ ГЕПАТОПРОТЕКЦИИ АПИ-ФИТОКОМПОЗИЦИЕЙ Российский патент 2014 года по МПК G09B23/28 A61K31/685 A61K35/64 A61K36/484 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

По известным литературным источникам - лецитины (фосфатидилхолин и др.) являются основными компонентами клеточных мембран и структур гепатоцитов. Их дефицит приводит к развитию жировой инфильтрации печени, нарушению желчеобразования, желчевыделения и функций клеток печени. Гепатозащитное действие лецитинов основывается на ингибировании процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые рассматриваются, как один из ведущих патогенетических механизмов развития поражений печени (Подымова С.Д. Механизмы алкогольных повреждений печени и их коррекция эссенциальными фосфолипидами // Фарматека. - 2005. №14. С.25-31).

Известен способ профилактики поражения печени при формировании синдрома сочетанных дистрофически-дегенеративных изменений мезенхимальных производных при локальном хроническом воспалительном процессе и средство для его осуществления (RU 2455988, публ. 20.07.2012), который характеризуется тем, что в затемненном помещении перед сном в организм вводят мелатонин в эффективной дозе, например, в дозе 0,7-1,5 мг/кг веса, эффективным курсом, например, в течение 5-10 дней.

Основным недостатком способа является то, что применение мелатонина имеет ряд предосторожностей, а именно его не следует применять во время работы водителям транспортных средств и людям, профессия которых связана с повышенной концентрацией внимания.

Наиболее близким к заявленному решению является способ гепатопротекции индивидуальными флавоноидами (гесперидином, диосмином, флавицином, кверцетином), карсилом и сухим экстрактом (СЭ) из травы горошка обрубленного, согласно описанию экспериментальных исследований в диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук на тему: «Гепатопротекторные свойства флавоноидов (фармакодинамика и перспективы клинического изучения)» Доркиной Е.Г. Опыты проводились на крысах-самках массой 170-240 г. Острое поражение печени этанолом воспроизводили курсовой алкоголизацией крыс-самок путем 2-кратной внутрибрюшинной инъекции 33% раствора этанола в сутки в дозе 0,75 мл/100 г массы тела животного в течение 7 дней (Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Фоменко С.Е. и др. Эффективность применения растительного препарата диприм для восстановления функционального состояния печени после поражения этиловым спиртом // Гигиена и санитария. 2002. №1). Исследуемые флавоноиды, СЭ и карсил животным вводили ежедневно в течение 12 дней перорально (внутрижелудочно) в виде водной суспензии - за 5 дней до введения этанола, а затем совместно с ним (7 дней) - в одно и то же время до кормления животных за 1 час до введения гепатотоксина (этанола).

Основным недостатком способа является то, что кверцетин относится к кластогенным (генотоксичным) соединениям, обладающим способностью разрушать структуру ДНК клеток (Snyder & Gillis, 2002); гесперидин и дио-смин способны вызывать симптомы нейро-вегетативных нарушений; также диосмин не рекомендуется принимать лицам до 18 лет.

Задачей предлагаемого изобретения является создание способа гепато-протекции апи-фитокомпозицией, содержащей мед, лецитин и экстракт корня солодки, исключающего недостатки известных решений.

Задача достигается тем, что предложен способ гепатопротекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение модели острого алкогольного гепатита и проведение гепатопротекции средством природного происхождения, которое вводят лабораторному животному ежедневно в течение 12 дней внутрижелудочно в виде водной суспензии - за 5 дней до введения этанола, а затем совместно с ним 7 дней - в одно и то же время до кормления животного за 1 час до введения этанола 2 раза в сутки, причем, в качестве средства природного происхождения используют апи-фитокомпозицию в виде водной суспензии меда, лецитина и экстракта корня солодки в массовом соотношении 10:2:1, в дозе 200 мг/кг массы тела животного.

Таким образом, предложенный способ приводит к более выраженной коррекции алкогольного гепатита, чем в известных решениях, так как введение лецитинов (эссенциальных фосфолипидов) приводит к ингибированию процессов ПОЛ в гепатоцитах.

Кроме того, преимуществом предлагаемого способа является отсутствие побочных явлений, наблюдающихся при приеме вышеуказанных флавоноидов, а именно, генотоксичности и нейро-вегетативных нарушений, а также включенные в состав апи-фитокомпозиции в качестве корригентов вкуса экстракт корня солодки и мед обладают профилактическим действием заболеваний верхних дыхательных путей и общеукрепляющими свойствами.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на крысах-самках массой 170-240 г. 33% раствор этанола вводится внутрибрюшинно в дозе 0,75 мл/100 г массы тела животного 2 раза в сутки в течение 7 дней. Водная суспензия меда, лецитина и экстракта корня солодки (10:2:1) в дозе 200 мг/кг массы тела животного вводится ежедневно 2 раза в сутки в течение 12 дней внутрижелудочно (через зонд) - за 5 дней до введения раствора этанола, а затем совместно с ним (7 дней) - в одно и то же время до кормления животных за 1 час до введения этанола.

Оценку эффективности гепатозащитного действия проводили по степени нормализации биохимических показателей основных патологических синдромов, наблюдающихся при поражениях печени: цитолиза - активности в сыворотке АлАт (аланинаминотрансферазы), АсАт (аспартатаминотрансферазы), КФ (кислой фосфотазы); холестаза - активности в сыворотке крови ЩФ (щелочной фосфатазы), γ-ГТФ (гамма-глутамилтрансферазы), содержанию прямого билирубина (ПБ), мезенхимального воспаления - определение белковых фракций, соотношения альбумины/глобулины и тимоловой пробы (ТП) в сыворотке крови; печеночно-клеточной недостаточности, характеризуя состояние белково-синтетической и метаболической функций печени по показателям белкового (содержание общего белка, альбуминовой фракции и активности ХЭ, содержанию мочевины в сыворотке крови), углеводного (содержание глюкозы в крови и гликогена в печени) и липидного (содержание холестерина, тиреотропин-рилизинг-гормона (ТРГ) в сыворотке крови, содержание ТРГ и фосфолипидов (ФЛ) в печени) обменов. Интенсивность ПОЛ изучали по содержанию ТБК-активных продуктов в печени и сыворотке крови, диеновых конъюгатов (ДК) в печени, интенсивности спонтанного и Fe2+ - аскорбатиндуцированного ПОЛ в постъядерной фракции печени (ПФП).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью параметрического критерия t Стьюдента с определением средней арифметической (М) и ее стандартной ошибки (m), непараметрического критерия Манна-Уитни и коэффициента линейной корреляции.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Как известно, алкогольное поражение печени в большой степени обусловлено окислительной деградацией этанола, протекающей в этом органе (Калинин А.В., 2005, Lieber С.S., 2005). Избыточное поступление этанола приводит к накоплению ацетальдегида и повышению образования свободных радикалов, что приводит к усилению ПОЛ, истощению антиоксидантных ресурсов и повреждению биомембран, что и определяется понятием окислительного стресса.

В результате 7-дневной алкоголизации наблюдалось повышение N-деметилазной и НАДФН-НТ-редуктазной активностей на 140% и 55% вследствие индукции изоформы цитохрома Р450 2Е I, участвующей в окислении этанола. Одновременно было выявлено повышение интенсивности индуцированного ПОЛ ПФП на 130% и содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови на 115%, хотя в печени содержание ТБК-активных продуктов и ДК достоверно не изменилось. Это сопровождалось падением эффективности антиоксидантной защиты (АОЗ) на различных уровнях - снижением активности супероксиддисмутазы (СОД) на 40%, каталазы на 50%, Г-S-T на 38%, содержания глутатиона GSH на 50%, а также произошло снижение активности основных ферментов, поставляющих восстановительные эквиваленты для глутатионредуктазной реакции: МДГ - на 45%, Г-6-ФДГ - на 75% и ИЦДГ - на 58%.

Выявленные изменения биохимических показателей в результате 7-дневного введения 33% этанола крысам-самкам свидетельствовали о развитии поражения печени с проявлением признаков цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления и печеночной недостаточности.

Исследуемая апи-фитокомпозиция при алкогольном поражении печени проявила гепатопротекторные свойства. Восстановление показателей основных патологических синдромов при лечебно-профилактическом введении апи-фитокомпозиции в условиях острого алкогольного поражения печени у крыс приведены в таблице 1.

Таблица 1 Синдромы Вещества Цито
лиз (АлАт, АсАт, КФ, ФЛА2) Холес
таз (ЩФ, γ-ГТП, ПБ) Мезенхималь
ное воспаление (глобулины, альбумины/ глобулины, ТП) Печеночно-клеточная недостаточность белково-синтетическая функция (общ. белок, альбумины, ХЭ, мочевина) метаболическая функция (глюкоза сыв., гликоген печ., ТРГ сыв., ТРГ печ., ФЛ печ) Водная суспензия меда, лецитина, экстракта корня солодки ++++ ++ +±+ +-++± +++++ % восстановления 116,2 102,9 83,1 65,9 107,9 Примечение "+" - полная нормализация показателя; "±" - неполная нормализация; "-" - отсутствие эффекта

Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что применение апи-фитокомпозиции привело к восстановлению показателей синдромов цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления, белково-синтетической и метаболической функции печени.

При остром алкогольном поражении печени крыс, предложенная апи-фитокомпозиция в виде водной суспензии меда, лецитина, экстракта корня солодки способствовала нормализации интенсивности ПОЛ и активности антиоксидантной системы (АОС) (фиг.1). При этом наблюдалась полная нормализация содержания ТБК-активных продуктов.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной гепатопротекции в условиях модели острого алкогольного гепатита у крыс предложенной апи-фитокомпозицией.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для профилактики и лечения алкогольного и токсического гепатита. Способ включает моделирование гепатита путем 7-дневной алкоголизации крыс-самок. В качестве гепатопротекторного средства используют апи-фитокомпозицию в виде водной суспензии меда, лецитина и экстракта корня солодки в соотношении 10:2:1. Введение осуществляют 2 раза в сутки внутрижелудочно до кормления животного в дозе 200 мг/кг массы тела за 5 дней до введения этанола и затем в течение 7 дней за час до введения этанола. Способ обеспечивает эффективное лечение гепатита, в т.ч. за счет ингибирования процессов перекисного окисления липидов в гепатоцитах, при отсутствии побочных явлений. 1 пр., 1 табл., 1 ил.

Способ гепатопротекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение модели острого алкогольного гепатита и проведение гепатопротекции средством природного происхождения, которое вводят лабораторному животному ежедневно в течение 12 дней внутрижелудочно в виде водной суспензии - за 5 дней до введения этанола, а затем совместно с ним 7 дней - в одно и то же время до кормления животного за 1 час до введения этанола 2 раза в сутки, отличающийся тем, что в качестве средства природного происхождения используют апи-фитокомпозицию в виде водной суспензии меда, лецитина и экстракта корня солодки в соотношении 10:2:1, в дозе 200 мг/кг массы тела животного.