СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ Российский патент 2014 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления внутрибольничных штаммов и слежения за их циркуляцией в лечебно-профилактических учреждениях, в частности при проведении эпидемиологического мониторинга.

Известен способ выявления внутрибольничных штаммов и слежения за ними, основанный на определении профиля антибиотикочувствительности как внутривидового маркера штаммов для идентификации однородных возбудителей и выявления закономерностей их циркуляции в госпитальных условиях (Л.П.Зуева, М.С.Поляк, Е.Н.Колосовская и др. Микробиологический мониторинг и эпидемиологический анализ антибиотикорезистентности микроорганизмов с использованием компьютерной программы WHONET. Методические рекомендации. СПб., 2005. - 72 с.).

Недостатки: невысокая точность из-за изменения уровня антибиотикочувствительности культур в процессе лечения, низкая производительность из-за необходимости определения чувствительности к большому количеству антибиотиков (не менее 6-8).

Технический результат: повышение точности способа за счет изучения более стабильной характеристики, а именно чувствительности к анилиновым красителям, повышение производительности благодаря исследованию чувствительности к меньшему количеству препаратов (3 и более). Указанный результат достигается путем определения уровня чувствительности микробных культур к 3 и более анилиновым красителям. Изучение чувствительности к анилиновым красителям для определения видовой принадлежности микробных культур описано в книге: Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга II. / Под ред. А.С.Лабинской, Н.Н.Костюковой, С.М.Ивановой. - М.: БИНОМ, 2010. В качестве эпидемиологического маркера этот показатель используется в настоящее время впервые.

Способ осуществляют следующим образом.

В лунки стерильного 96-луночного планшета вносят по 5 мкл 0,1%-ных водно-спиртовых растворов анилиновых красителей (генциан фиолетовый, метиловый красный, бромфеноловый синий и бромкрезоловый пурпурный). С помощью многоканального дозатора готовят серийные двукратные разведения красителей в жидкой питательной среде, после чего в лунки добавляют стандартизованную взвесь исследуемой микробной культуры в физиологическом растворе плотностью 10⁶ клеток/мл. Микробные культуры могут быть взяты из клинических (пациенты с гнойно-воспалительными заболеваниями) и санитарных (смывы с объектов) проб. При определении тождества культур выявляют внутрибольничные штаммы, а при отсутствии тождества культур - внебольничные.

Примеры использования предлагаемой методики.

Пример №1. Изучена чувствительность к анилиновым красителям 3 культур энтерококка (Enterococcus faecalis), выделенных от разных пациентов отделения реанимации хирургического стационара. Результаты (см. табл.1) свидетельствуют об отсутствии подобия в показателях чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, об отсутствии эпидемических связей между данными клиническими случаями, то есть выявлены внебольничные штаммы.

Таблица 1 №№ культур генцианвиолет бромкрезоловый пурпурный бромфеноловый синий метиловый красный 51 0,63 5 2,5 80 138 0,16 40 10 10 139 5 5 20 40

Пример №2. Изучена чувствительность к 4 анилиновым красителям 2 культур клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae), выделенных с объектов внутрибольничной среды хирургического стационара. Результаты (см. табл.2) свидетельствуют о тождественности показателей чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, о наличии эпидемических связей между данными культурами, то есть о наличии внутрибольничного штамма.

Таблица 2 №№ культур генцианвиолет бромкрезоловый пурпурный бромфеноловый синий 77 с 0,31 160 160 79 с 0,31 160 160

Пример №3. Изучена чувствительность к анилиновым красителям 2 культур золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus), одна из которых выделена от пациента отделения реанимации хирургического стационара, а другая - с объекта внешней среды (ручка тумбочки) в данном отделении. Результаты (см. табл.3) свидетельствуют о подобии показателей чувствительности к анилиновым красителям у изученных культур и, следовательно, отражают процесс распространения микроорганизма в больничной среде, то есть выявлен внутрибольничный штамм.

Таблица 3 №№ культур генцианвиолет бромкрезоловый пурпурный бромфеноловый синий метиловый красный фуксин кислый 56 40 10 40 160 5 257 с 40 10 40 160 5

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предназначен для выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов при проведении эпидемиологического мониторинга. Готовят водно-спиртовые растворы 3-4 анилиновых красителей. Добавляют стандартизированную взвесь исследуемой микробной культуры. Инкубируют, оценивают полученные результаты и определяют тождественность штаммов. Причем при тождественности показателей чувствительности выделенных и изученных микробных культур к каждому соответствующему анилиновому красителю устанавливают выявление внутрибольничного штамма. Изобретение позволяет повысить точность способа. 4 табл., 3 пр.

Способ выявления внутрибольничных штаммов микроорганизмов путем определения уровней чувствительности микробных культур в клинических и санитарных пробах к 3-4 анилиновым красителям, причем при тождественности показателей чувствительности микробных культур к каждому соответствующему анилиновому красителю устанавливают выявление внутрибольничного штамма.