6-ЗАМЕЩЕННЫЕ 3-АЗОЛИЛИМИДАЗО[1,2-b][1,2,4,5]ТЕТРАЗИНЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2014 года по МПК C07D487/04 A61K31/395 A61P35/00 

Изобретение относится к фармацевтической химии и касается производных имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразинов, содержащих в тетразиновом цикле 4-метилимидазолильный или 3,5-диметилпиразолильный заместитель и водород и пропилтиогруппу в азольном фрагменте. Указанные соединения могут быть использованы в качестве противоопухолевых агентов в первую очередь для лечения онкологических больных.

Соединения, раскрываемые в настоящем изобретении, являются новыми, не описанными ранее, производными азоло[1,2,4,5]тетразинов. Способ получения представленных соединений описан [Изв. АН. Сер. хим., 2011. 961-967]. Противоопухолевая активность азоло[1,2,4,5]тетразинов неизвестна и неописана.

Аналогами вышеуказанных веществ по строению и действию являются темозоломид формулы А [Патент US 0286088 от 10.11.2010], 3,6-дизамещенный 1.2,4,5-тстразин формулы В [Патент CN 102267983А от 07.12.2011], использующиеся для лечения онкологических заболеваний, и 3-(имидазол-1-ил)имидазо[1,2-b][1.2,4.5]тетразин формулы С, ингибитор протеинкиназ Mycobacterium tuberculosis, который можно использовать для лечения больных туберкулезом [Патент РФ 2462466 С1 от 27.09.2012 J.

Заявлено новое соединение

1. Имидазо[1.2-6][1,2,4,5]тетразины общей формулы I:

где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н;

Het=3,5-диметилпиразол-1-ил. R=пропилтио

Новые соединения, раскрываемые в настоящем изобретении, отличаются от известного и близкого по структуре соединения C тем, что заместитель имидазол-1-ил в 3-м положении азолотетразина заменен на 4-метилимидазол-1-ил- или 3,5-диметилпиразол-1-ил, а в положении 6 заместителями являются атом водорода или пропилтио.

Вещества, представленные в настоящем изобретении, могут быть получены с использованием известных методов синтеза 3-азолил-6-(алкилтио)имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразинов [Изв. АН. Сер. хим., 2011, 5]. Структуры представленных в изобретении новых соединений подтверждаются данными спектроскопии ЯМР 1Н (спектрометр Avance DRX-400 (Bruker) с рабочей частотой 400 МГц) и элементного анализа (автоматический анализатор CHN РЕ 2400 сер. II (Perkin Elmer)).

Примеры конкретного выполнения

Пример 1

3-(4-Метилимидазол-1-ил)имидазо[1,2-А][1,2,4,5]тетразин

В колбу с 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают 265 мг (1 ммоль) 3-(4-метилимидазол-1-ил)-6-(2,2-диметоксиэтиламино)-1,2,4,5-тетразина и реакционный раствор кипятят в течение 4 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из ацетонитрила. Выход 135 мг (66%). Т.пл. 211-212°C.

Найдено (%): C 47.81; H 3.39; N 48.77. C₈H₇N₇. Вычислено (%): C 47.76, Н 3.51, N 48.73. Спектр ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆, δ, м.д.): 7.23 (с, 3H, CH₃ в 4-метилимидазол-1-иле); 8.78, 7.74 (оба с, по 1 H, H(2) и H(5) в 4-метилимидазол-1-иле); 8.64 (м, 2 Н, в имидазолильном цикле).

Пример 2

3-(3,5-Диметилпиразол-1-ил)-6-(пропилтио)имидазо [1,2-b] [1,2,4,5] тетразин

К раствору 215 мг (1.0 ммоль) 3-(3,5-диметилпиразол-1-ил)имидазо[1,2-6][1,2,4,5]тетразина в 7 мл ацетонитрила добавляют 91.2 мг (1.2 ммоль) пропилмеркаптана и 101 мг (1 ммоль) триэтиламина. Перемешивают 4 ч при комнатной температуре. Растворитель упаривают, вещество экстрагируют бензолом, остаток после испарения бензола перекристаллизовывают из гексана. Выход 205 мг (71%). Т.пл. 95-97°C. Найдено (%): C 49.87; H 5.28; N 34.09. C₁₂H₁₅N₇S. Вычислено (%): С 49.81; Н 5.23; N 33.88. Спектр ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆, δ, м.д.): 2.40, 2.71 (оба с, по 3 Н, 2 СН₃ в 3,5-диметилпиразол-1-иле); 3.11 (т, 2 Н, -CH ₂CH₂CH₃, J=7.3 Гц); 1.75-1.66 (м, 2 Н, -CH₂ CH ₂CH₃; 1.06 (т, 3 Н, -CH₂CH₂ CH ₃, J=7.3 Гц); 6.17 (с, 1 Н, Н(4) в 3,5-диметилпиразол-1-иле); 8.39 (с, 1 H, CH в имидазолильном цикле).

Пример 3. Противоопухолевая активность

В экспериментах использовали линии клеток НСТ116 (аденокарцинома толстой кишки человека) и лейкоза К562, полученные из международного банка American Туре Culture Collection, США. Реагенты приобретали в компании ПанЭко, кроме отдельно оговоренных случаев. Клетки культивировали в среде, модифицированной Дульбекко среде. Игла с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°C, 5% CO₂ в увлажненной атмосфере. В экспериментах использовали культуру в логарифмической фазе роста.

Клетки рассевали на 96-луночные планшеты (Costar, США) в концентрации 5-10×10³ клеток в 190 мкл культуральной среды. В лунки вносили исследуемые соединения до конечных концентраций от 100 нМ до 50 мкМ или соответствующие количества растворителя (вода+диметилсульфоксид; контроль). Объем вносимых веществ не превышал 5% объема среды в лунках. Каждую концентрацию препарата изучали в 3 повторностях. Культуры инкубировали при 37°C в атмосфере с 5% содержанием CO₂ в течение 72 часов. По окончании инкубации в лунки вносили 20 мкл водного раствора МТТ (Sigma, США), и планшеты помещали в CO₂-инкубатор на 2 часа. О жизнеспособности клеток судили по цветной реакции, развивающейся при восстановлении МТТ в формазан дегидрогеназами митохондрий (МТТ-тест). Окраску регистрировали на спектрофотометре при длине волны возбуждения 540 нм. Оптическую плотность в лунках, где клетки инкубировались только с растворителем (контроль), принимали за 100%. Показатели оптической плотности в лунках с каждой концентрацией испытуемых препаратов усредняли и вычисляли процент выживших клеток при той или иной концентрации исследуемого вещества.

Результаты измерений приведены в таблице 1.

Таблица 1 Цитотоксичность соединений для линий опухолевых клеток человека     IC⁵⁰, мкМ № Соединение НСТ116 К562 1 2,2±0,12 1,2±0,2 2 1,8±0,1 2,0±0,3 Аналог А 5,8±0,5 6,2±0,4

Описываются новые производные имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразинов общей формулы

где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или Het=3,5-диметилпиразол-1-ил, R=пропилтио, и противоопухолевые агенты на их основе для лечения онкологических больных. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

1. Имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразины общей формулы I:

где: Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или
Het=3,5-диметилпиразол-1-ил, R=пропилтио.

2. Противоопухолевые агенты, представляющие собой соединения формулы I, где Het=4-метилимидазол-1-ил, R=Н или Het=3,5-диметилпиразол-1-ил, R=пропилтио.