ПРИМЕНЕНИЕ ПЕПТИДА АКТГ (4-7)-ПГП ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ Российский патент 2014 года по МПК C07K11/00 A61K38/08 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, физиологии, патофизиологии, и может быть использовано для гепатопротекторного воздействия.

Известно, что в организме в результате окислительно-восстановительных реакций постоянно происходит образование активных форм кислорода (АФК), обладающих высокой реакционной способностью и стимулирующих процессы свободнорадикального окисления биомолекул.

В условиях нормы свободные радикалы играют важную роль в процессах жизнеобеспечения клеток в различных биологических системах, участвуя в реакциях окислительного фосфорилирования, биосинтеза простагландинов и нуклеиновых кислот, в регуляции липидного обмена и др. Однако их роль в биологических системах чрезвычайно динамична, поскольку свободные радикалы относятся к категории высокореактогенных молекул, избыточное образование которых может быстро привести к дезорганизации клеточных структур, нарушению функциональной активности клеток (Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Источники образования свободных радикалов и их значение в биологических системах в условиях нормы // Современные наукоемкие технологии. - 2006, №6. - С.28-34; Зайцев В.Г., Закревский В.И. Методологические аспекты исследования свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма // Вестник Волгоградской медицинской академии. - 1998, Т.54, вып.4. С.49-53. Маянский Д.Н. Проблемы хронического воспаления в современной патофизиологии // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1994. - №2. - С.51-55).

Токсическое действие АФК предотвращается за счет функционирования антиоксидантной защиты, представленной ферментативными и неферментативными компонентами (Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса // Вопросы медицинской химии. - 2001, Т.47, №6. - С.561-581). Одну из первых линий защиты клеток от агрессивного воздействия свободных радикалов обеспечивают супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза, проявляющая свою активность почти во всех клетках организма человека, особенно в печени, почках, эритроцитах (Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Молекулярно-клеточные механизмы инактивации свободных радикалов в биологических системах // Успехи современного естествознания. - 2006, №7. - С.29-36).

Печень как наиболее полифункциональный орган, которому принадлежит уникальная роль в регуляции постоянства внутренней среды организма, обладает высокой чувствительностью к действию раздражителей (Цейликман О.Б. Гепатотропные эффекты и монооксигеназная система печени при хроническом стрессе // Вестник ЮУрГУ. - 2006, №3. С.121-122; Шкурупий В.А. Ультраструктура клеток печени при стрессе. - Новосибирск: Наука, 1989. - 143 с.). Учитывая важнейшую роль печени в поддержании гомеостаза, данное обстоятельство может отрицательно сказаться и на состоянии других органов и систем.

В свою очередь активация процессов свободнорадикального окисления лежит в основе патогенеза многих заболеваний печени: неалкогольный стетогепатит, вирусные заболевания и др., причем тяжесть течения и прогноз заболевания тесно связаны с функциональным состоянием антиоксидантной системы гепатоцитов (Меснянкина О.А., Наумов В.З., Дегтярев О.В., Дуйко В.В. Свободнорадикальные процессы в патологии печени у лиц пожилого возраста. Организации здравоохранения Астраханский медицинский журнал. - 2011, №3. - С.39-43; Буеверов А.О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени // Рос. журн. гастроэнтер., гепат. и колопроктол. - 2002, №4. С.21-25).

Это позволяет считать, что фармакологические вещества, способные активировать ферменты антиоксидантной защиты, должны обладать гепатопротекторными свойствами (Иванов Ю.В., Матюшин И.А., Мишнев О.Д. и др. Действие мексидола при токсическом поражении печени // Вестник новых медицинских технологий: периодический теоретический и научно-практический журнал. - 2003. - №3. - С.68-70).

Гепатопротекторы - лекарственные средства, улучшающие метаболические процессы в печени, повышающие ее устойчивость к патогенным воздействиям, а также способствующие восстановлению ее функций при различных повреждениях (Каркищенко Н.Н. Клиническая и экологическая фармакология в терминах и понятиях. - М.: IMP-Медицина, 1995. - 304 с.).

Семакс - это гептапептид (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), получаемый синтетическим путем, аналог фрагмента 4-7 адренокортикотропного гормона (АКТГ), лишенный гормональной активности. Он относится к группе нейропептидов, обладающих адаптивным, анальгетическим и ноотропным эффектами (Манченко Д.М., Глазова Н.Ю., Левицкая Н.Г. и др. Ноотропные и анальгетические эффекты семакса при различных способах введения. - 2010. Т.96, №10. - С.1014-1023; Иванова Д.М., Левицкая Н.Г., Андреева Л.А. и др. Сравнительное исследование анальгетической активности фрагмента АКТГ 4-10 и его аналога семакса // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2007, Т.143, №1. С.8-12).

Семакс обладает антигипоксическим эффектом (Ашмарин И.П., Незавитьбатько В.Н., Мясоедов Н.Ф. и др. Ноотропный аналог адренокортикотропина 4-10 - Семакс (15-летний опыт разработки и изучения) // Журн. высш. нерв. деятельности им. И.П. Павлова. - 1997 Т.47, №2. С.420-430; Левицкая Н.Г., Себенцова Е.А., Андреева Л.А. и др. Нейропротекторные эффекты семакса на фоне МФТП-вызванных нарушений дофаминергической системы мозга // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2002, Т.88, №11. С.1369-1377; Себенцова Е.А., Левицкая Н.Г., Андреева Л.А. и др. Эффекты семакса на фоне блокады дофаминергических рецепторов галоперидолом // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2006, Т.141, №2. С.128-132).

Введение семакса оказывает стресс-лимитирующее действие на макрофаго-пролиферативные и деструктивные процессы в функционально-активных зонах селезенки и лимфиодных бляшек тонкой кишки, паховых лимфатических узлов, снижает стресс-индуцированное состояние клеток лимфоидного ряда в периферической крови (Бахмет А.А. Влияние некоторых олигопептидов на иммунные структуры лимфоидных бляшек тонкой кишки // Рос. журн. гастроэнтер., гепат. и колопроктол. - 2008, №5. С.38-44; Бахмет А.А., Коплик Е.В. Антистрессорное действие семакса в динамике восстановления лимфоидных образований селезенки после стрессорного воздействия у крыс с различной поведенческой активностью // Бюл. эксерим. биол. и мед. - 2012, Т.153, №5. С.615-617; Бахмет А.А. Морфологические особенности лимфоидных структур паховых лимфатических узлов крыс при эмоционально стрессе с предварительным введением некоторых олигопептидов // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2009, Т.5, №4. С.493-497).

Пепдид обладает противовоспалительным эффектом (Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001. 328 с.); способен предотвращать усиление генерации оксида азота в ишемизированном мозге (Фадюкова О.Е. Семакс предупреждает повышение генерации оксида азота в мозге крыс, обусловленное неполной глобальной ишемией // Эксперимент. и клин. фармакол. - 2001, №64 (2). С.31-34).

Кроме того, пептид АКТГ (4-7)-ПГП повышает антикоагулянтную, суммарную и неферментативную фибринолитическую активности, активность активатора плазминогена плазмы крови крыс в условиях иммобилизационного стресса (Ашмарин И.П., Ляпина Л.А., Пасторова В.Е. Модуляция гемостатических реакций in vitro и in vivo представителями семейств регуляторных пептидов // Вестн. РАМН. - 1996, №6. С.50-58; Григорьева М.Е., Ляпина Л.А. Противосвертывающие и антитромбоцитарные эффекты препарата «семакс» в условиях острого и хронического иммобилизационного стресса // Бюл. эксперимент. биол. и мед. - 2010, Т.149, №1. С.49-52), проявляет антиагрегационное воздействие в отношении тромбоцитов и снижает уровень гепарина (Ляпина Л.А., Пасторова В.Е., Оберган Т.Ю. Функциональное состояние противосвертывающей системы при воздействии на организм регуляторных пептидов Pro-Gly, Pro-Gly-Pro, семакса и тафцина в соединении с природным гепарином // Нейрохиия. - 2008, Т.25, №1-2. С.23-29); в норме усиливает устойчивость эритроцитов к гемолизу и снижает взаимодействие эритроцитов с тромбоцитами, а в условиях иммобилизационного стресса, не меняя скорости гемолиза, усиливает устойчивость эритроцитов (Голубева М.Г. Нейропептид семакс изменяет функциональную активность эритроцитов и тромбоцитов при иммобилизационном стрессе // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2010, №2. С.45-49).

Семакс увеличивает гомеостаз слизистой оболочки желудка к действию таких ульцерогенных факторов, как этанол и стресс (Бакаева З.В., Багликова К.Е., Климова П.А. Сопоставление гастропротекторных свойств семакса и его метаболитов // Вестник Московского университета. Серия 16: Биология. - 2009, №4. С.3-7).

Однако применение пептида АКТГ (4-7)-ПГП в качестве гепатопротектора неизвестно.

Техническим результатом является применение по новому назначению пептида АКТГ (4-7)-ПГП, имеющего формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для гепатопротекторного воздействия.

Технический результат достигается путем применения пептида АКТГ (4-7)-ПГП, имеющего формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для гепатопротекторного воздействия. В настоящее время, поскольку точно известна химическая формула этого пептида, он может быть синтезирован в любой лаборатории синтеза пептидов. Авторами был использован препарат, синтезированный Российским кардиологическим научно-производственным комплексом.

Растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия пептид АКТГ (4-7)-ПГП вводят экспериментальным животным (крысы) парентерально (внутрибрюшинно) в дозе 5 и 50 мкг/кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней.

Пример конкретного выполнения

Экспериментальные животные (крысы-самцы Вистар) массой 250-300 г были разделены на группы по 11 особей в каждой (таблица). Животные содержались при температуре воздуха в помещении 22-24°C, световом режиме: 12 часов - свет, 12 часов - темнота, и получали стандартный гранулированный корм и воду в свободном доступе с соблюдением всех правил и Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005). На момент проведения экспериментов животные были здоровыми, изменений поведения, аппетита, режима сна и бодрствования не обнаружено.

Растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия до получения необходимых доз 5 и 50 мкг/кг массы тела пептид АКТГ (4-7)-ПГП вводили экспериментальному животному парентерально (внутрибрюшинно) один раз в сутки в течение 5 дней. Контрольная группа животных получала эквивалентные объемы физиологического раствора.

На 5-й день животных выводили из эксперимента путем обескровливания под эфирным наркозом. Навеску части печени помещали в холодный физиологический раствор и гомогенизировали с последующей заморозкой при -20°C.

Функциональное состояние ферментативного звена антиоксидантной системы печени оценивали по содержанию супероксиддисмутазы (СОД) (Костюк В.А., Потапов А.Н., Ковалева Ж.В. // Вопр. мед. химии. 1990. №2. С.88-91) и каталазы (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. // Лаб. дело. 1988. №1. С.16-19).

Статистическую обработку результатов производили с использованием t-критерия Стьюдента и критерия Манна-Уитни.

Проведенные эксперименты показали, что после введения пептида АКТГ (4-7)-ПГП в дозах 5 и 50 мкг/кг активируется ферментативное звено антиоксидантной системы печени, что свидетельствует о гепатопротекторном эффекте (таблица).

Таблица Состояние ферментативного звена антиоксидантной системы печени в норме и в условиях введения пептида АКТГ (4-7)-ПГП. Показатель
Группа животных Контрольные животные Введение АКТГ 4-7-ПГП в дозе 5 мкг/кг Введение АКТГ 4-7-ПГП в дозе 50 мкг/кг СОД, усл. ед 2,3±0,1 2,6±0,1* 2,7±0,1* Каталаза, мкат/л 4,8±0,2 5,8±0,3* 5,6±0,3* Примечание: * - p<0,05 в сравнении с показателями контрольной группы…

Таким образом, результаты проведенных экспериментальных исследований показывают, что использование пептида АКТГ (4-7)-ПГП в дозах 5 и 50 мкг/кг вызывает гепатопротекторный эффект у животных в нормальном состоянии. Данный способ основан на применении регуляторного пептида, относящегося к классу биологически активных веществ, обладающих выраженным модуляторным эффектом и полифункциональностью, не является трудоемким и не требует использования сложного оборудования.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к терапевтическим пептидам, и может быть использовано в медицине. В качестве гепатопротектора применяют пептид АКТГ (4-7)-ПГП (Семакс), имеющий формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Применения указанного пептида с целью гепатопротекции в условиях развития свободно-радикального окисления гепатоцитов позволяет повысить эффективность лечения заболеваний печени, сопровождающихся интенсификацией процессов свободнорадикального окисления. 1 табл., 1 пр.

Применение пептида АКТГ (4-7)-ПГП, имеющего формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, для гепатопротекторного воздействия.