Применение пептида АКТГ(6-9)-ПГП для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением Российский патент 2018 года по МПК C07K7/06 C07K14/695 A61K38/08 A61K38/35 A61P29/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, патофизиологии и физиологии, и может быть использовано для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.

Известно, что адренокортикотропный гормон (АКТГ), выполняющий в организме множество регуляторных функций, обладает широким спектром физиологической активности. Так, описаны его нейропротективные и противовоспалительные эффекты, отмечена способность влиять на процессы памяти, обучения, мотивации и поведения, а также на функционирование различных органов и систем [Левицкая Н.Г., Глазова Н.Ю., Себенцова Е.А., Манченко Д.М., Виленский Д.А., Андреева Л.А., Каменский А.А., Мясоедов Н.Ф. Исследование спектра физиологической активности аналога АКТГ_4-10 гептапептида семакса // Нейрохимия. - 2008. - Т. 25, №1-2. - С. 111-118]. При этом активным центром АКТГ, необходимым для активации всех видов меланокортиновых рецепторов, является последовательность His-Phe-Arg-Trp, соответствующая фрагменту АКТГ_6-9 [Clark A.J., Forfar R., Hussain M., Jerman J., McIver E., Taylor D, Chan L. ACTH Antagonists // Front Endocrinol. - 2016. - Vol. 7. - P. 101. - doi: 10.3389/fendo.2016.00101].

Модификация данного фрагмента АКТГ в виде присоединения к С-концу последовательности Pro-Gly-Pro с целью повышения устойчивости к действию карбоксипептидаз обладает нейротропными эффектами, в частности влиянием на процессы обучения [пат. 2443711 Рос. Федерация: МПК С07К 14/00 / Андреева Л.А, Гривенников И.А., Гаврилова С.А., Долотов О.В., Каменский А.А., Кошелев В.Б., Левицкая Н.Г., Мясоедов Н.Ф.; патентообладатель: Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН). - №2011103680/10; заявл. 02.02.2011; опубл 27.02.2012, Бюл. №6]. Однако до настоящего времени в литературе отсутствовали сведения о влиянии АКТГ_6-9-ПГП на болевую чувствительность, а анальгетические эффекты указанного пептида были исследованы нами впервые.

Техническим результатом изобретения является применение по новому назначению пептида АКТГ_6-9-ПГП, имеющего формулу His-Phe-Arg-Trp-Pro-Gly-Pro, для анальгетического эффекта при вызванной температурным раздражением боли.

Технический результат достигается путем применения пептида АКТГ_6-9-ПГП для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением. Нами был использован препарат, разработанный и синтезированный в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте молекулярной генетики Российской академии наук (ИМГ РАН). Растворенный в изотоническом растворе хлорида натрия пептид АКТГ_6-9-ПГП вводят экспериментальным животным (крысы) парентерально (внутрибрюшинно) однократно в дозах 5 и 150 мкг/кг массы тела за 15 минут до начала болевого раздражения и оценивают эффекты пептид через 15, 30 и 45 минут после введения.

Пример конкретного выполнения

Экспериментальные животные (крысы Вистар) массой 150-190 г были разделены на группы по 11 особей в каждой и содержались при температуре воздуха в помещении 22-24°C, световом режиме: 12 часов - свет, 12 часов - темнота и получали стандартный гранулированный корм и воду в свободном доступе.

Температурную болевую чувствительность в эксперименте принято оценивать по методу «горячая пластина» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / под. ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. В данном методе наличие анальгетического эффекта на ноцицептивный стимул оценивается по увеличению латентного периода поведенческого ответа (облизывание задних лап, выпрыгивание).

С использованием экспериментальной установки LE7406 Hot plate (Panlab Harvard Apparatus, Испания) проводили 4 испытания с интервалом 15 минут: однократное измерение исходного болевого порога до введения пептида и 3 измерения приобретенного болевого порога после введения пептида.

При обработке полученных результатов рассчитывали величину максимально возможного эффекта (МВЭ) по формуле:

где ЛПоп - латентный период реакции после введения вещества, ЛПконтр - латентный период реакции до введения вещества, МАХ время - максимальное время нанесения раздражителя (45 секунд).

Пептид АКТГ_6-9-ПГП растворяли в физиологическом растворе и вводили экспериментальным животным парентерально (внутрибрюшинно) однократно в дозах 5 и 150 мкг/кг в объеме из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. Эффекты пептида оценивали через 15, 30 и 45 минут после введения. Контрольные животные получали эквивалентные объемы физиологического раствора (ФР).

Достоверность полученных результатов определяли с помощью t-критерия Стьюдента и критерия Манна-Уитни в зависимости от типа распределения признаков и при сравнении генеральных дисперсий в сравниваемых группах.

При использовании пептида АКТГ_6-9-ПГП в дозах 5 и 150 мкг/кг отмечен анальгетический эффект (таблица).

Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями контрольной группы.

Таким образом, результаты выполненных экспериментальных исследований показывают, что использование пептида АКТГ_6-9-ПГП в дозах 5 и 150 мкг/кг вызывает выраженный анальгетический эффект при боли, вызванной температурным раздражением. Данный способ основан на применении регуляторного пептида, относящегося к классу биологически активных веществ, обладающих выраженным модуляторным эффектом и биологической полифункциональностью, не является трудоемким и не требует использования сложного оборудования.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к биологически активным пептидным фрагментам АКТГ, и может быть использовано в медицине для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением. Для этой цели применяют пептид АКТГ_6-9-ПГП структуры His-Phe-Arg-Trp-Pro-Gly-Pro. Изобретение позволяет достичь анальгетического эффекта при использовании малых доз пептида. 1 табл., 1 пр.

Применение пептида АКТГ_6-9-ПГП, имеющего формулу His-Phe-Arg-Trp-Pro-Gly-Pro, для анальгетического эффекта при боли, вызванной температурным раздражением.