СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР Российский патент 2014 года по МПК A61K35/74 C12R1/01 

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к борьбе с лептоспирозом человека и животных.

Известен способ подавления корд-фактора патогенности микробактерий туберкулеза с использованием микробного препарата (патент Российской Федерации на изобретение №2422150, А61K 35/74, опубл. 27.06.2011 г., бюл. №18). Однако нет сведений об использовании штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» для лизиса лептоспир.

Для лечения больных лептоспирозом животных используются различные антибиотики (Инструкция «О мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза», от 23.06.1992 г.). Однако известно, что использование антибиотиков вызывает дисбактериоз кишечника, снижает иммунобиологическую реактивность и иммуногенность вакцины, способствует появлению антибиотико-резистентных штаммов лептоспир.

В основу изобретения положена задача разработки способа подавления жизнеспособности и лизиса патогенных лептоспир путем применения микробного препарата.

Технический результат изобретения - способ подавления жизнеспособности патогенных лептоспир путем использования микробного препарата. В жидкую питательную среду с культурой штаммов различных серогрупп патогенных лептоспир добавляют культуру штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП». В результате подавляется жизнеспособность и лизируются лептоспиры.

В качестве микробного препарата используют штаммы бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП», депонированные в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ), справка о депонировании от 6 февраля 2001 г., №180/15 и №181/15.

Штаммы бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии и ВГНКИ ветеринарных препаратов.

Технический результат достигается следующим образом.

Штаммы бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» выращивают в мясопептонном агаре pH 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°C, затем суспензируют в равных соотношениях в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5×10⁸ КОЕ в 1 мл. Штаммы лептоспир серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Hebdomadis, Sejroe, Icterohaemorrhagiae, Canicola (из диагностического набора) выращивают в среде Уленгута в течение 10-15 суток при 28-30°C до достижения концентрации 5×10⁴ КОЕ в 1 мл.

В пробирки вносят 1 мл культуры разных серогрупп лептоспир (по 3 пробирки на каждую серологическую группу) и добавляют суспензию штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» в равных соотношениях в дозе 1 мл.

Контроль: в пробирки с культурой разных серогрупп лептоспир добавляют 1 мл стерильного физиологического раствора.

Учет результатов проводят через 12 дней, инкубации при 28-30°C. Проводят микроскопию мазков в темном поле при увеличении 40×7-10. При микроскопировании суспензии с пробирок, содержащих штаммы бактерий, отмечают отсутствие лептоспир всех серогрупп, то есть фиксируют подавление жизнеспособности и лизис лептоспир.

В пробирках без суспензии культуры штаммов бактерий «Bacillus subtilis» отмечают живые лептоспиры, то есть сохранение жизнеспособности лептоспир всех серогрупп.

Таким образом, суспензия штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» в питательной среде подавляют жизнеспособность и вызывают лизис патогенных лептоспир 7 серологических групп.

Способ подавления жизнеспособности и лизирования патогенных лептоспир может быть использован в ветеринарной и медицинской практике для разработки пробиотических препаратов в качестве лечебно-профилактических средств и обезвреживания объектов внешней среды при лептоспирозе.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для подавления жизнеспособности патогенных лептоспир. Способ предусматривает выращивание штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП». Из выращенных штаммов готовят суспензию. Полученную суспензию, содержащую штаммы бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» в равных соотношениях с концентрацией 5×10⁸ КОЕ в 1 мл, вносят в пробирки с культурами лептоспир. Инкубируют при заданных параметрах процесса и учитывают результат по отсутствию лептоспир в пробе. Изобретение позволяет расширить арсенал противолептоспирозных средств.

Способ подавления жизнеспособности патогенных лептоспир различных серогрупп, отличающийся тем, что в качестве микробного препарата антагониста используют суспензию штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП», в равных соотношениях с концентрацией 5×10⁸ КОЕ в 1 мл.