СПОСОБ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ ЖЕЛЧИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики описторхозного поражения печени и желудочно-кишечного тракта.

Широко известны способы ультразвуковой диагностики описторхозного поражения печени (RU, патент №2136216, МПК А61В 8/00, опубл. 09.10.1999 г., Ярошина Т.Н. «Ультразвуковая диагностика» в книге «Хирургия печени и желчных путей» под ред. Б.И. Альперовича, Томск, СГМУ, 1997, с. 151-189). Недостатком данной методики является низкая точность диагностики.

Известен также способ диагностики описторхоза с применением микроскопии, включающий диагностику натощак с первоначальной анестезией ротоглотки, затем эзофагогастродуоденоскопию, во время которой оценивают степень поражения слизистой оболочки пилорического отдела желудка, а также наличие и степень доуденогастрального рефлюкса. При наличии последнего, под визуальным контролем, проводят аспирацию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки и дальнейшую прямую микроскопию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки с целью обнаружения яиц гельминтов (RU, патент №2257152, МПК А61В 10/00, G01N 33/48, опубл. 27.07.2005). Данный способ достаточно трудоемок и может вызывать повреждение желудочно-кишечного тракта.

Наиболее близким решением к заявляемому является исследование желчи с центрифугированием для выявления яиц трематод (в т.ч. описторхид), включающий взбалтывание желчи с равным количеством диэтилового эфира, центрифугирование в центрифужных пробирках всех порций дуоденального содержимого не менее 20 мин при 1500-2000 об/мин, слив надосадочной части желчи в отдельную емкость. Осадок переносят пипеткой или прямо из пробирки на предметное стекло. Микроскопию осуществляют без покровного стекла при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10 (Паразитологичесие методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. - 72 с.) [МУК 4.2735-99, с. 31].

Данный способ исследования желчи с центрифугированием позволяет выявлять яйца описторхид, однако он недостаточно эффективен при их малом содержании в исследуемой желчи.

Задачей данного изобретения является усовершенствование методики предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии.

Технический результат, который будет достигнут от использования изобретения, заключается в повышении точности диагностики.

Технический результат достигается тем, что в способе предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии, включающем забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию, центрифугированию подвергают исходную желчь, затем полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Сущность изобретения заключается в увеличении концентрации яиц описторхид в исследуемом материале.

Первоначальное центрифугирование всех порций исходной желчи, затем экстрагирование полученного концентрированного осадка желчи с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаление надосадочной жидкости, и микроскопия нанесенного на предметное стекло, полученного очищенного концентрированного осадка в количестве 200 мкл позволяет с высокой точностью за 1 раз выявить яйца описторхид и с высокой точностью выставить диагноз.

Из анализа научно-технической и патентной литературы дополнительного центрифугирования предварительно центрифугированной желчи с получением высоко концентрированного очищенного осадка и его микроскопии, приводящих к существенному повышению точности и качества диагностики описторхозной инвазии, нами не выявлено, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение осуществляется следующим образом.

Желчь от пациента при зондировании наливают в центрифужные пробирки объемом 10 мл. Для исследования на яйца трематод, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы, берут порции пузырной желчи «В» и печеночной «С». Порции «В» в норме может быть 30-50 мл, порции «С» - 10-30 мл. От одного пациента может быть забрано для анализа на наличие яиц трематод от 10 до 80 мл желчи. Яйца трематод распределены в желчи неравномерно, поэтому очень важно весь биологический материал, полученный от пациента, без потерь, использовать для анализа.

Всю доставленную в лабораторию желчь от пациента центрифугируют в центрифужных пробирках 20 минут при 1500-2000 об/мин. После чего надосадочную часть желчи сливают в отдельную емкость.

Оставшиеся осадки первичной желчи (до 500 мкл в каждой пробирке) сливают в одну пробирку. К полученному осадку добавляют до 8 мл 3% уксусной кислоты и 2 мл диэтилового эфира. Встряхивают при закрытой крышке и ставят в штатив на 2 минуты, затем центрифугируют в течение 2-х минут при 2000 об/мин.

После центрифугирования надосадочную часть сливают в отдельную емкость. Излишки влаги снимают со стенок пробирки ватным тампоном, а полученный осадок (200 мкл) переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом на предмет яиц описторхид.

При параллельном независимом исследовании образцов желчи от 33 пациентов в трех лабораториях (в двух из которых исследования проводились традиционным методом (по прототипу), в третьей - заявляемым способом), показано, что заявляемый способ предварительной обработки желчи позволяет повысить чувствительность диагностики описторхоза из желчи за счет выявления инвазии при низком содержании яиц в образце в 3 раза по сравнению со способом обработки и микроскопии желчи по прототипу.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Сравнительные данные показателей по заявляемому способу и способу по прототипу приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы, заявляемый способ по сравнению со способом по прототипу является менее ресурсо- и трудозатратным, т.к. позволяет сократить расходы экстрагента (диэтилового эфира) в 2,5 раза, время микроскопирования в 3 раза, минимизировать потери образцов желчи, идущих на анализ, при этом увеличивая качество выявления яиц трематод в 3 раза, особенно при низком их содержании в образце.

Заявляемый способ позволяет получить более прозрачный осадок, концентрированный до малых объемов, без потерь яиц трематод, что повышает качество диагностики описторхид из желчи. Вероятность ложноотрицательного ответа при наличии яиц в пробе практически отсутствует.

Таким образом, двойное центрифугирование всех порций желчи позволяет без потерь сконцентрировать яйца трематод в малом объеме жидкости, а применение 3% уксусной кислоты растворяет слизистую структуру желчи, переводя ее в прозрачный раствор, что способствует лучшим условиям для микроскопирования осадка и в 3 раза повышает результативность диагностики описторхоза, особенно при низком содержании яиц в желчи, по сравнению с методом, указанным в МУК.

Изобретение относится к медицине и описывает способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии. Способ включает забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию. Для повышения точности диагностики центрифугированию подвергают исходную желчь, полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка микроскопируют. Изобретение позволяет получить более прозрачный осадок, концентрированный до малых объемов, без потерь яиц трематод, что повышает качество диагностики описторхид из желчи. Вероятность ложноотрицательного ответа при наличии яиц в пробе практически отсутствует. Способ является менее трудозатратным, т.к. позволяет сократить в 3 раза время микроскопирования, при этом увеличивая в 3 раза результативность диагностики описторхоза, особенно при низком содержании яиц в желчи. 2 табл., 1 пр.

Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии, включающий забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию, отличающийся тем, что центрифугированию подвергают исходную желчь, затем полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, после чего снова центрифугируют в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а микроскопии подвергают полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка.