Способ получения активированных онкосфер цестод Советский патент 1993 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 

Изобретение относится к области биологии, в частности к получении) активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопрепаратов. . : /.,-. ..: .. . ./..:- ;.;VЦель изобретения -повышениевыходе активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования In vitro с использованием отечественных недорогих компонентов.

Поставленная цель достигается тем, что на стадий обработки онкосфер искусственным кишечным соком в его состав дополнительно вводится липаза и повышается процентное содержание желчи.

Примеры конкретного исполнения.

П р и м е р 1. Зрелые членики цестод помещают в чашки Петри с физиологическим раствором, с помощью препароваль- ных игл из них извлекают яйца. Взвесь яиц в количестве 200 тыс. в физиологическом

растворе переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют ИЖС и плотно закрывают пробирки пробками. ИЖС имеет следующий состав: пепсина 1 %, концентрированной соляной кислоты 1 % и физиологического раствора до 100 мл. рН ИЖС составляет 1,0-1,5, инкубацию проводят в термостате при 37,5-38°С в течение 2 ч. После обработки в ИЖС пробирки с взвесью яиц снова центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин, надосадочную жидкость сливают, к осадку приливают 5 мл ИКС. Опять плотно закрывают пробирки пробками и помещают их в термостат с температурой 37,5-38°С на 25 мин. ИКС имеет следующий состав: панкреатина 1 %, бикарбоната натрия 1%, трипсина 0.04%, липазы 0,01 %, свежей желчи крупного рогатого ско00

со

N о

та (КРС) 5% и дистиллированной воды до 100 мл. рН ИКС составляет 8,1-8,4, но при соединении с остатком ИЖС снижается до 7,1-7,4. По истечении времени инкубации пипеткой на предметное стекло наносят каплю взвеси яиц (предварительно встряхнув пробирки) и проводят микроскопию при малом (х8) и большом (х40) увеличениях, подсчитывают количество активированных онкосфер.

Результаты представлены в таблице. Пример 2. Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично примеру 1... После инкубации яиц и центрифугирования, ИЖС сливают, а к осадку до- бавляют ИКС следующего состава: панкреатина 1%, бикарбоната натрия 1%, трипсина 0,04%, липазы 0,02%, желчи КРС 10% и дистиллированной воды до 100 мл. Дальнейшую обработку и микроскопию взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1..

Результаты представлены в таблице. : П р и м е р. 3. Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично примеру 1. После инкубации яиц и центрифугирования ИЖС выливают, к осадку прибавляют ИКС следующего состава: панкреатина 1%, бикарбоната натрия 1%, трипсина 0,04%, липазы 0,03%, желчи КРС 20% и дисти/ яированной воды 100 мл. Дальнейшую обработку и микроскопию взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1.

Результаты представлены в таблице, П ри м е р 4. Выполняют по известному способу.

Этот способ является прототипом предлагаемого способа получения активирован- ных онкосфер цестод. Яйца цестод первоначально обрабатывают в ИЖС, имеющем следующим состав: пепсина 1 %, концентрированной соляной кислоты 1% и физиологического раствора до 100 мл, Пробирки закрывают Пробками. Инкубацию проводят в течение 1 ч в термостате при 37,5-38°С. По истечении срока инкубации центрифугируют в течение 3 мин при 3000 об/мин, после центрифугирования ИЖС сливают и к осадку добавляют ИКС; пробками плотно закрывают пробирки и помещают их в термостат с температурой 37,5-38°С на 30 мин. ИКС состоит из панкреатина 1%,

бикарбоната натрия 1%, желчи КРС 5% и дистиллированной воды до 100 мл. Микроскопию взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1. Результаты представлены в таблице.

Анализ данных, приведенных в таблице, показывает, что предложенный способ получения активированных онкосфер значительно повышает процент выхода а кти- вированных онкосфер, не требует дорогостоящих импортных реактивов и прост в применении.

По сравнению с прототипом 2 активации онкосфер повышается в 10 раз. Пред- ложенный способ может успешно применяться для получения активированных онкосфер в целях их дальнейшего культивирования in vitro.

Сопоставительный анализ с прототи- пом позволяет сделать вывод, что заявляемый способ получения активированных онкосфер отличается от известного введением в состав ИКС липазы и повышением процентного содержания желчи. Анализ известных составов пищеварительных соков показал, что один из введенных в заявляемое решение компонентов - желчь- известен.

Однако ее применение в искусственном кишечном соке с панкреатином, бикарбонатом натрия и трипсином, но без липазы не обеспечивает повышения количества активированных онкосфер.

Формула изобретения Способ получения активированных онкосфер цестод, включающий обработку яиц в искусственном желудочном соке и искус- ственном кишечном соке, содержащим панкреатин, трипсин, бикарбонат натрия, свежую желчь, дистиллированную воду, о т- личающийся тем, что, с целью повышения выхода онкосфер для дальнейшего их культивирования, в состав искусственного кишечного сока дополнительно вводят ли- пазу при следующем соотношении компонентов, мае. %:

Панкреатин1,0 Трипсип 0,04 Бикарбонат натрия 1,0 Липаза 0,01-0,04 Свежая желчь 5,0-20,0 Вода дистиллированная Остальное

51813410 6 Влияние различного состава ИКС на выход активированных онкосфер

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопрепаратов. Цель изобретения - повышение выхода активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования In vftro. Способ включает освобождение яиц онкосфер цестод из зрелых члеников, обработку яиц в искусственном желудочном соке при 37,5- 38°С в течение 2 ч и в искусственном кишечном соке, содержащем липазу в количестве 0,01-0,03% и 5-20% свежей желчи крупного рогатого скота, при 37,5-38°С в течение 25 мин. Данный способ позволяет получить 60% активированных онкосфер. 1 табл. ЧиГ Ё