СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ МИКРОПРЕПАРАТОВ ИЗ ЖЕЛЧИ ДЛЯ ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ДОЛГОСРОЧНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ Российский патент 2024 года по МПК G01N1/28 G09B23/28 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для диагностических, научно-исследовательских целей и при изготовлении микропрепаратов для учебных целей.

Существующие сегодня способы приготовления микропрепаратов носят временный характер и не могут быть использованы после длительного периода хранения для визуализации.

В клинической и лабораторной диагностике применяется классический способ изготовления микропрепарата: на плоское предметное стекло наносится капля биологического материала (желчь), а затем немедленно накрывается покровным стеклом [Методические указания МУК 4.2.3145-13. Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов]. В этом случае из-за тонкости покровного стекла полной герметизации в пространстве между двумя стеклами не возникает. Препарат такого типа завоздушивается и кристаллизуется, через несколько часов его визуализация затрудняется из-за выпадения кристаллов холестерина и желчных кислот. В таком препарате можно лишь увидеть кристаллизацию желчи, однако провести паразитологическое исследование не представляется возможным. Из-за большого количества кристаллов при микроскопическом исследовании невозможно увидеть и дифференцировать вегетативные формы простейших и их цисты, яйца паразитов, их тела или фрагменты. Взрослые особи трематод сами локализуются в билиарной системе печени (желчные протоки и желчный пузырь), при этом их обнаружение в организме затруднительно. За счет интенсивной ежесуточной овопродукции, их яйца могут попадать в желчь, где их можно обнаружить при микроскопическом исследовании. В желчи (дуоденальном содержимом) можно обнаружить яйца возбудителей таких заболеваний как: описторхоз (Opisthorchis felineus), клонорхоз (Clonorchis sinensis), фасциолез (Fasciola hepatica), дикроцелиоз (Dicrocoelium dendriticum), а также простейшие: кишечные лямблии (Giardia intestinalis) и их цисты [Ишманов М.Ю., Сертакова А.В., Соловьев А.М., Федяшина Н.А., Щербакова Е.В. 250 показателей здоровья. Справочник. Литрес. 2013. 718 с.; Поликарпов Л.С, Балашова Е.В., Карпухина Е.О. и др. Дополнительные методы обследования больного в терапевтической практике (в двух частях): учебное пособие для студентов медицинских вузов. – Красноярск: типография КрасГМУ. – 2010. – Ч.2. – 156 с.].

В дуоденальном содержимом можно обнаружить паразитов, обитающих в кишечнике, таких как нематоды: личинок кишечной угрицы (Strongyloides stercoralis) вызывающих стронгилоидоз, кривоголовки двенадцатиперстной (Ancylostoma duodenale) вызывающих анкилостомоз, патогенные для человека возбудители трихостронгилоидоза: Trichostrongylus colabriformis, Trichostrongylus Orientalis и Trichostrongylus oxei [Генис Д.Е. Медицинская паразитология: учебник. - Санкт-Петербург: «Лань», 2018. - 522 с.; Сергиев В.П., Морозов Е.Н. Медицинская паразитология: лабораторная диагностика: учебник. - Ростов-на-Дону: «Феникс», 2017.- 250 с.]. Иногда в желчи могут встречаться крючья эхинококка (Echinococcus granulosus), возбудителя эхиноккокоза, дизентерийная амеба и ее цисты (Entamoeba histolytica) [Ишманов М.Ю., Сертакова А.В., Соловьев А.М., Федяшина Н.А., Щербакова Е.В. 250 показателей здоровья. Справочник. Литрес. 2013. 718 с.]. При существующем способе исследования дуоденального содержимого с помощью чашки Петри, порции желчи наливаются тонким слоем для микроскопического исследования, а затем подвергаются микроскопии [Методические указания МУК 4.2.3145-13. Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов]. Такой способ имеет ряд технических недостатков: саму чашку сложно расположить на предметном столике микроскопа, она может соскальзывать, а исследуемый материал – проливаться. Также возникает постоянная необходимость придерживать чашку Петри рукой, что при неосторожной работе лаборанта может привезти к заражению инвазивными формами паразитов, а также их распространению. На открытую поверхность с исследуемым материалом могут попадать пылевые частицы, а также яйца паразитов из внешней среды, не имеющие отношения к больному, от которого получен данный материал.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является возможность многоразового использования его для учебных, научно-исследовательских и диагностический целей.

Предлагается способ изготовления микропрепаратов из желчи включающий подготовку желчи, двух предметных стекол и зажима для просушивания гистологических препаратов.

Отличием является то, что на одно предметное стекло помещают каплю желчи, плотно накрывают вторым предметным стеклом и совершают несколько круговых движений, не разъединяя стекла фиксируют их с помощью прищепки для просушивания гистологических препаратов, выполняющей роль зажима и в таком виде просушивают. Желательно использовать 2 зажима для просушивания гистологических препаратов с обеих сторон препарата, для лучшей фиксации во время просушивания. Далее зажимы для просушивания гистологических препаратов снимают, высохшая желчь служит склеивающей средой для предметных стекол, в дальнейшем не разъединяется. Для хранения, использования и транспортировки препарата далее его нужно вставить в чехол для хранения гистологических препаратов, который будет препятствовать разъединению стекол. Чехол изготовлен из силикона, что позволяет обеспечить длительное хранение стекол без повреждений во время их использования.

При осуществлении предлагаемого способа возникает полная герметизация между стеклами за счет возникновения поверхностного натяжения желчи между стеклами, стекла плотно притягивает друг к другу. Препарат сохраняется в течение длительного времени, что дает возможность неоднократно использовать его для диагностических, научно-исследовательских целей и учебном процессе. Чехол для хранения гистологических препаратов применяемый для надежной фиксации предметных стекол имеет основную длину боковых стенок соответственно основной длине предметного стекла (7,5 см), составляя 7 см, снаружи предметное стекло остается открытым на 0,5 см для более удобного извлечения препарата из рамки. Торцевая центральная часть рамки составляет 2,5 см, толщина внутреннего паза имеет углубление 1 мм, согласно толщине препарата, может немного растягиваться за счет материала (силикон), плотно охватывая препарат. Препарат в чехле можно устанавливать в держатель микроскопа, при этом за счет материала (силикон) он не царапает предметный столик микроскопа, и легко извлекается из держателя микроскопа после проведенного микроскопического исследования.

Желчь в нативном препарате фиксируется между стеклами, равномерно распределяется за счет поверхностного натяжения, она не кристаллизуется, за счет чего можно длительно хранить и исследовать микропрепарат. При таком способе в ней можно увидеть и дифференцировать яйца паразитов, их тела и фрагменты, цисты лямблий при их наличии, определить их количество с помощью микроскопического исследования.

Долговечность сохранения препаратов, возможность их исследования через длительный промежуток времени, возможность визуализации препарата актуальна в сложных диагностических случаях, для дифференциальной диагностики вида паразитарного заболевания. Также при выявлении наличия яиц паразитов, их тел или фрагментов и (или) цист лямблий можно оценить степень заражения больного (интенсивность инвазии – число гельминтов, обнаруженное у хозяина в абсолютных числах), выявить фазу заболевания и оценить тактику дополнительной диагностики и лечения, составить прогноз жизни.

В учебном процессе долговечность препаратов упрощает работу преподавателю и учебно-вспомогательному персоналу. Препарат можно использовать несколько раз, изготовив однажды.

Пример. По указанному способу изготовлен микропрепарат из желчи в октябре 2015 года, полученной от животных (Oryctolagus cuniculus domesticus) с экспериментальным моделированием описторхоза. В хорошем состоянии микропрепарат использовался на занятиях по патологической анатомии при прохождении темы «Описторхоз» и в научно-исследовательской работе кафедры Морфологии и судебной медицины ФГБОУ ВО КемГМУ в феврале 2024 года для демонстрации яиц паразитов, выявленных в эксперименте.

Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для диагностических, научно-исследовательских целей и при изготовлении микропрепаратов для учебных целей. Раскрыт способ изготовления микропрепаратов из желчи для паразитологического исследования долгосрочной визуализации, заключающийся в том, что каплю желчи помещают на одно предметное стекло, плотно накрывают вторым предметным стеклом и совершают несколько круговых движений, не разъединяя стекла фиксируют их с помощью зажима и в таком виде просушивают. Изобретение обеспечивает возможность многоразового использования его для учебных, научно-исследовательских и диагностический целей. 1 пр.

Способ изготовления микропрепаратов из желчи для паразитологического исследования долгосрочной визуализации, включающий подготовку желчи, двух предметных стекол и зажима, отличающийся тем, что на одно предметное стекло помещают каплю желчи, плотно накрывают вторым предметным стеклом и совершают несколько круговых движений, не разъединяя стекла фиксируют их с помощью зажима и в таком виде просушивают.