СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТУРАЛЬНОГО 9-ДЕЦЕН-2-ОНА БИОКОНВЕРСИЕЙ УНДЕЦИЛЕНОВОЙ КИСЛОТЫ ПРИ ПОМОЩИ ПЛЕСЕНИ И ПРИМЕНЕНИЕ В ПАРФЮМЕРИИ В КАЧЕСТВЕ ПИЩЕВОГО АРОМАТИЗАТОРА Российский патент 2015 года по МПК C12P7/26 C12N1/14 

Настоящее изобретение относится к биоконверсии при помощи плесени ундециленовой кислоты в 9-децен-2-он, причем последний может быть использован в парфюмерии и в качестве пищевого ароматизатора.

Заявителем было обнаружено, что 9-децен-2-он (или деценон-2 или метилоктенилкетон, RN CAS 35194-30-0) является метилкетоном, обладающим такими ольфактивными и вкусовыми свойствами, что его можно использовать для любых применений в производстве ароматизаторов (ароматов и запахов). Действительно он имеет зеленую и жирную ноту, а также фруктовые ноты, в частности груши, яблока, ананаса, плода пассифлоры и экзотических фруктов в целом.

Этот кетон, также как и другие метилкетоны, образован метаболическим путем, в котором задействованы первые стадии β-окисления после окисления жирной кислоты. Этот метаболический путь формирования метилкетонов используется грибами при детоксификации жирных кислот.

Как видно из изображения метаболического пути (Фиг.1), субстрат, используемый в процессе биоконверсии, является ундециленовой кислотой, которую получают крекингом (физическая операция трансформирования сырого продукта в более очищенные соединения) рицинолевой кислоты, происходящей из касторового масла с последующей очисткой путем сухой перегонки. Наконец, после стадии декарбоксилирования метилкетон, полученный в конце пути, содержит на один атом углерода меньше, чем исходная жирная кислота.

Насколько известно заявителю, на сегодняшний день не существует никакого биотехнологического процесса, который описывает и/или позволяет осуществить синтез 9-децен-2-она. Действительно, на сегодняшний день эту молекулу можно получить только химическим синтезом и с незначительным выходом. К тому же недостаток синтетических ароматов заключается в том, что они меньше ценятся потребителями, чем натуральные ароматы. Следовательно, целью настоящего изобретения является альтернативный способ получения натуральных ароматических молекул, в частности, полученных с использованием 9-децен-2-она, биологическими способами, более конкретно, биоконверсией с использованием таких микроорганизмов, как плесень.

В контексте настоящего изобретения под «биоконверсией» понимают биологическую трансформацию субстрата, предпочтительно, происходящего из природного источника, для получения натуральных ароматических веществ, которые могут использоваться в рецептурах в качестве ароматов и запахов, которые относят к натуральным.

Неожиданно заявителем было обнаружено, что эта цель может быть достигнута за счет способа получения 9-децен-2-она, отличающегося биоконверсией ундециленовой кислоты при помощи плесени, причем указанный способ содержит следующие стадии:

а) культивирование указанной плесени;

b) добавление ундециленовой кислоты в качестве субстрата биоконверсии в присутствии масла;

с) биоконверсия субстрата в 9-децен-2-он,

d) экстракция и очистка 9-децен-2-она.

В контексте настоящего изобретения термином «плесень» обозначают микроскопические филаментарные одно- или многоклеточные грибы. Из видов плесени различают фикомицеты и септомицеты. В составе фикомицетов существует группа оомицетов и группа зигомицетов. В составе септомицетов выделяют группу базидиомицетов и группу дейтеромицетов.

В варианте осуществления изобретения плесень по изобретению относится к группе дейтеромицетов, классу гифомицетов, порядку Tuberculariales, семейству Aspergillaceae. Более предпочтительно указанная плесень относится к роду Aspergillus или Penicillium. В первом предпочтительном варианте осуществления указанная плесень принадлежит к виду Aspergillus oryzae или к виду Aspergillus nyger. Во втором предпочтительном варианте осуществления указанная плесень принадлежит к виду Penicillium roquefortii или к виду Penicillium camenbertii.

Из плесени Aspergillus oryzae можно назвать следующие коллекционные штаммы: Aspergillus oryzae DSMZ 1861, Aspergillus oryzae DSMZ 1864, Aspergillus oryzae DSMZ 1147, Aspergillus oryzae DSMZ 63303, Aspergillus oryzae CBS 570.65, Aspergillus oryzae CBS 819.72, Aspergillus oryzae CBS 110.27.

Из плесени Aspergillus nyger можно назвать следующие коллекционные штаммы: Aspergillus nyger DSMZ 823, Aspergillus nyger DSMZ 2466.

Из плесени Penicillium roquefortii можно назвать следующие коллекционные штаммы: Penicillium roquefortii CBS 221-30, Penicillium roquefortii PRB 18, Penicillium roquefortii DSMZ 1079, Penicillium roquefortii DSMZ 1080.

Из плесени Penicillium camembertii можно назвать штамм Penicillium camembertii DSMZ 1233.

В другом предпочтительно варианте осуществления плесень по изобретению относится к группе зигомицетов, классу Zygomycиtes, порядку Mucorales, семейству Mortierellaceae или семейству Mucoraceae.

Более предпочтительно указанная плесень относится к роду Mortierella или роду Mucor, или роду Rhizopus и еще более предпочтительно указанная плесень относится к виду Mortierella isabellina или Mortierella rammniana, или к виду Mucor racemosus или Mucor miehei, или к виду Rhizopus arrihizus или Rhisopus oryzae.

Из плесени, относящейся к виду Mortierella, можно назвать следующие коллекционные штаммы: Mortierella isabellina DSMZ 1414, Mortierella isabellina CBS 100559, Mortierella isabellina CBS 221.29, Mortierella isabellina CBS 194.28, Mortierella isabellina CBS 208.32, Mortierella isabellina CBS 224.35, Mortierella isabellina CBS 560.63, Mortierella isabellina CBS 167.80, Mortierella isabellina CBS 493.83, Mortierella isabellina CBS 309.93, Mortierella isabellina CBS 250.95, Mortierella isabellina CBS 109075, Mortierella ramanniana CBS 112.08, Mortierella ramanniana CBS 219.47, Mortierella ramanniana CBS 243.58, Mortierella ramanniana CBS 478.63, Mortierella ramanniana CBS 852.72, Mortierella ramanniana CBS 366.95, Mortierella ramanniana CBS 101226.

Из плесени, относящейся к виду Mucor, можно назвать следующие коллекционные штаммы: Mucor javanicus DSMZ 1222, Mucor racemosus DSMZ 62760, Mucor rouxii DSMZ 1191.

Из плесени, относящейся к виду Rhizopus, можно назвать следующие коллекционные штаммы: Rhizopus arrhizus oryzae DSMZ 905, Rhizopus oryzae DSMZ 2199, Rhizopus deltmar DSMZ 853, Rhizopus niveus DSMZ 2194, Rhizomucor miehei DSMZ 1330.

Культивирование на стадии а) способа по изобретению включает создание культуры, предпочтительно полуконцентрированной, например, путем клеточной амплификации в соответствующей культурной среде. Этой культуре предшествует предварительная культура штамма в первой культурной среде, более адаптированной к первым стадиям размножения.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения время нахождения в культуре указанной плесени составляет от 20 до 30 часов и в действительности зависит от состояния роста мицелия, причем за последним можно наблюдать в микроскоп. Предпочтительно минимальная биомасса плесени составляет от 7 до 15 г/л и более предпочтительно от 9 до 12 г/л до начала осуществления биоконверсии по изобретению.

Стадия b) способа заключается в добавлении субстрата к клеточной культуре. Согласно изобретению для биологического синтеза 9-децен-2-она используют наиболее приемлемый субстрат, которым является ундециленовая кислота или один из ее эфиров, метиловый эфир или этиловый эфир ундециленовой кислоты. Само собой разумеется, что субстрат может представлять собой смесь различных пригодных субстратов, в частности, смесь ундециленовой кислоты и одного или нескольких из ее эфиров.

В соответствии с преимущественным вариантом осуществления изобретения субстрат вводят в мицелий периодическим способом или способом с подпиткой.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанную ундециленовую кислоту вводят в среду ферментации с расходом от 0,1 до 0,9 г/л/час, предпочтительно от 0,2 до 0,7 г/л/час и очень предпочтительно от 0,3 до 0,55 г/л/час.

Стадия с) способа заключается в биоконверсии ундециленовой кислоты в 9-децен-2-он. Продолжительность этой стадии биоконверсии главным образом составляет от 36 до 96 часов.

В связи с высокой токсичностью ундециленовой кислоты для мицетов период адаптации может оказаться необходимым для того, чтобы подготовить плесень к преобразованию субстрата. Так, в соответствии с предпочтительным вариантом осуществления стадия биоконверсии способа по изобретению включает первую фазу адаптации плесени, в течение которой указанную ундециленовую кислоту вводят с расходом от 0,1 до 0,5 г/л/час, затем вторую фазу, в течение которой ундециленовую кислоту вводят с расходом от 0,25 до 0,9 г/л/час. Преимущественно продолжительность этой стадии адаптации меньше 20 часов, предпочтительно меньше 12 часов и более предпочтительно меньше 6 часов.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления ундециленовую кислоту вводят в присутствии масла. Это масло можно выбирать из группы, содержащей традиционные пищевые масла, такие как масло соевое, кукурузное, подсолнечное или любое другое или триглицериды, содержащие жирные кислоты короткой цепи, такие как миглиол, или белые масла, такие как парафиновое масло или минеральные масла, состоящие из углеводородов длинной цепи. Предпочтительно указанное масло представляет собой подсолнечное масло, частично гидрогенизированное или богатое олеиновой кислотой.

Предпочтительно указанное масло вводят в следующих пропорциях по отношению к субстрату: ундециленовая кислота/масло = ј ундециленовой кислоты - ѕ масла или 1/3 ундециленовой кислоты - 2/3 масла или 1/2 ундециленовой кислоты - 1/2 масла.

Преимущественно указанное масло вводят в среду ферментации с расходом от 0,4 до 4,0 г/л/час, предпочтительно от 0,5 до 3 г/л/час и очень предпочтительно от 0,75 до 2,5 г/л/час.

Как любые микроорганизмы в условиях вынужденной биоконверсии, мицеты нуждаются в источнике углерода, обеспечивающем их энергетические потребности, как, например, источник глюцида, предпочтительно глюкозы или мальтозы. В процессе биоконверсии предпочтительным является поступление глюкозы. Следовательно, в соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения глюкоза или мальтоза вводятся одновременно в ундециленовую кислоту и в масло. Преимущественно указанная глюкоза и указанная мальтоза вводятся в среду ферментации с расходом менее 1 г/л/час, предпочтительно менее 0,75 г/л/час и очень предпочтительно менее 0,5 г/л/час.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения введение указанной ундециленовой кислоты, указанного масла и возможно указанной глюкозы или мальтозы в среду ферментации осуществляется непрерывно в течение 5-96 часов, предпочтительно 24-72 часов и более предпочтительно 24-48 часов.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления биоконверсию по изобретению проводят при температуре от 25°С до 35°С, предпочтительно от 27°С до 30°С.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления рН среды ферментации составляет от 5 до 8, предпочтительно от 5,5 до 7,5 и более предпочтительно от 6 до 7. В рамках изобретения рН регулируют при помощи гидроксида натрия (например, стерильного NaOH₅N или другого основания, традиционно используемого для ферментации (Na₄OH, KОН, и т.д.)).

В процессе биоконверсии необходимым является интенсивное перемешивание, а также хорошая аэрация среды ферментации. В ферментаторе перемешивание осуществляется при помощи нескольких лопастей. Преимущественно и в зависимости от размера ферментатора, например, если ферментатор имеет объем 6 литров, необходимое надлежащее перемешивание по изобретению составляет от 200 до 1200 об./мин и предпочтительно от 300 до 900 об./мин. Что касается аэрации, то она может осуществляться путем подачи воздуха на уровне лопастей. Преимущественно надлежащая аэрация среды ферментации по изобретению меньше или равна 1 vvm, предпочтительно составляет от 0,2 до 0,8 vvm и более предпочтительно от 0,3 до 0,7 vvm.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления биоконверсию по изобретению останавливают путем добавления кислоты в культурную среду. Указанную кислоту можно выбирать из группы, содержащей фосфорную кислоту, серную кислоту, соляную кислоту или лимонную кислоту. Предпочтительно указанная кислота является фосфорной кислотой или лимонной кислотой.

На стадии а) экстракцию 9-децен-2-она можно осуществлять гидродистилляцией или экстракцией при помощи растворителя, выбранного из группы, содержащей циклогексан, метилциклогексан, или этилацетат. Предпочтительно в качестве растворителя используют циклогексан или смесь циклогексана и этилацетата.

Очистку 9-децен-2-она можно затем осуществлять обессмоливанием с последующей фракционной дистилляцией.

Этот способ экстракции/очистки позволяет, таким образом, получать молекулу с чистотой более 98% с выходом экстракции порядка 75-85%.

Выход биоконверсии 9-децен-2-он по отношению к используемому субстрату, ундециленовой кислоте, составляет примерно от 25 до 35%.

Изобретение также относится к 9-децен-2-он, полученному таким способом, как описан выше.

Объектом изобретения является любое применение 9-децен-2-он (CAS 35194-30-0) в парфюмерии и в качестве пищевого ароматизатора, в частности, для получения духов, ароматических веществ, косметических или пищевых композиций или в качестве пищевой добавки.

В предпочтительном варианте осуществления объектом изобретения является любое применение 9-децен-2-он, полученного способом, таким как описан выше, в парфюмерии и в качестве пищевого ароматизатора, в частности, для получения духов, ароматических веществ, косметических или пищевых композиций или в качестве пищевой добавки.

В контексте настоящего изобретения термин парфюмерия означает не только парфюмерию в обычном смысле, но также другие области, в которых запах продукта является важным. Речь, например, может идти, но это не является ограничением, о парфюмерных композициях в обычном смысле этого термина, таких как парфюмерные основы и концентраты, одеколоны, туалетная вода, духи и подобные продукты; топические композиции - в частности, косметические, - такие как кремы для лица и тела, тальк, масла для волос, шампуни, лосьоны для волос, мази, соли и масла для ванны, гели для душа и ванны, туалетное мыло, средства от пота и дезодоранты для тела, лосьоны и кремы для бритья, мыло, кремы, зубная паста, ополаскиватели для рта, мази и подобные продукты; и санитарно-гигиенические средства, такие как смягчающие средства, детергенты, моющие средства, дезодоранты для помещений, аэрозоли и подобные продукты.

Термин одорант используется для обозначения соединения, которое распространяет запах.

Под пищевым ароматизатором понимают любое использование соединений по изобретению для ароматизации любого пищевого продукта, жидкого или твердого, для питания человека или животных, в частности, напитков, молочных продуктов, мороженого, конфет, жевательной резинки, и т.д., а также для ароматизации табачных изделий.

9-децен-2-он является также применимым в парфюмерных композициях или в пищевых ароматических композициях для придания нот экзотических, цветочных или фруктовых, в частности, ананаса, груши, плода пассифлоры и экзотических фруктов. В зависимости от применения используемое количество этой молекулы 9-децен-2-он определяется специалистом в данной области.

Предпочтительно 9-децен-2-он будут использовать в количествах от 0,00025% до 30%, предпочтительно от 0,0025 до 20%, более предпочтительно от 0,025 до 10% масс. по отношению к общей массе композиции, в которой он присутствует. Он может входить в состав твердых или жидких композиций и, в частности, в композиции гелей, кремов, мазей и/или спреев.

9-децен-2-он можно также использовать в композиции, которая сама по себе является душистой, или в композиции, в которой ароматизатор используется для того, чтобы скрыть или нейтрализовать некоторые запахи.

Другие аспекты, объекты, преимущества и характеристики изобретения представлены в нижеследующем описании, не имеющем ограничительного характера, в котором описаны варианты предпочтительного осуществления и изобретения посредством следующих примеров.

На Фиг.1 изображена биоконверсия ундециленовой кислоты до 9-децен-2-он.

ПРИМЕРЫ

Пример 1:

Засевают штаммы Mortierella isabellina (А), Aspergillus oryzae (В) и Penicillium roquefortii (С) [источник = пробирка, замороженная при -80°С] на агаризированный солод и инкубируют при 27°С (в случае А) или 30°С (в случае В и С) в течение 72 часов.

Засевают предварительную культуру в 3,5 л среды на солоде в ферментаторе объемом 6 л:

Экстракт солода: 50 г/л

Экстракт дрожжей: 7,5 г/л

рН: 6,5

Mortierella isabellina (А)

Инкубируют в течение 24 часов указанный штамм при 27°С, при перемешивании со скоростью 500 об./мин и аэрации, соответствующей 0,3 vvm.

Aspergillus oryzae (В)

Инкубируют в течение 24 часов указанный штамм при 30°С, при перемешивании со скоростью 600 об./мин и аэрации, соответствующей 0,5 vvm.

Penicillium roquefortii (С)

Инкубируют в течение 24 часов указанный штамм при 30°С, при перемешивании со скоростью 600 rpm и аэрации, соответствующей 0,3 vvm.

Вес сухого мицелия по окончании культивирования по каждому штамму составляет примерно от 9 до 11 г/л.

Затем ундециленовую кислоту подают с расходом 0,15 г/л/час в течение 6 часов, затем с расходом 0,33 г/л/час в течение 72 часов: т.е. в сумме 25 г/л. Эту ундециленовую кислоту подают в смеси с гидрогенизированным подсолнечным маслом (1/3 кислоты-2/3 масла); это масло, таким образом, подают с расходом 0,6 г/л/час, затем 1 г/л/час. Параллельно непрерывно подают глюкозу с расходом 0,36 г/л/час в течение 72 часов. рН устанавливают соответствующим 6,5 в течение всей продолжительности конверсии с NaOH 5N. Повышают скорость до 900 об./мин и Mortierella isabellina аэрируют с расходом 1 vvm, а Aspergillus oryzae или Penicillium roquefortii 0,3 vvm. Конверсию продолжают в течение 72 часов.

В неоптимизированных условиях выход 9-децен-2-он составляет от 5 до 7 г/л.

Пример 2: Конверсия с Aspergillus oryzae (В)

Засевают Aspergillus oryzae [источник = пробирка, замороженная при -80°С] на агаризированный солод и инкубируют при 30°С в течение 72 часов.

Засевают предварительную культуру в 3,5 л среды на солоде (та же концентрация, что и в примере 1).

Инкубируют при 30°С, 600 об./мин, 0,5 vvm воздуха, свободном рН в течение 24 часов. Получают вес в сухом веществе 11 г/л.

Затем ундециленовую кислоту подают с расходом 0,5 г/л/час в течение 6 часов, затем с расходом 0,9 г/л/час в течение 48 часов: т.е. в сумме 46 г/л. Эту ундециленовую кислоту подают в смеси с гидрогенизированным подсолнечным маслом (1/4 кислоты-3/4 масла); это масло, таким образом, подают с расходом 1,5 г/л/час, затем 2,7 г/л/час. Параллельно непрерывно подают глюкозу с расходом 0,36 г/л/час в течение 48 часов. рН устанавливают соответствующим 6 в течение всей продолжительности конверсии с NaOH₅N. Повышают скорость до 900 об./мин и аэрируют с расходом 0,3 vvm. Конверсию продолжают в течение 48 часов.

Выход 9-децен-2-он составляет 16,5 г/л, т.е. выход биоконверсии составляет 35%.

Пример 3: Конверсия с Mortierella isabellina (А)

Засевают Mortierella isabellina [источник = пробирка, замороженная при -80°С] на агаризированный солод и инкубируют при 27°С в течение 72 часов.

Засевают предыдущую предварительную культуру в 3,5 л среды на солоде (та же концентрация, что и в примере 1).

Инкубируют в течение 24 часов при 27°С, перемешивании, составляющем 600 об./мин, и аэрации, соответствующей 0,5 vvm. Получают вес в сухом веществе 11,3 г/л.

Затем ундециленовую кислоту подают с расходом 0,27 г/л/час в течение 6 часов, затем с расходом 0,477 г/л/час в течение 48 часов: т.е. в сумме 46 г/л. Эту ундециленовую кислоту подают в смеси с гидрогенизированным подсолнечным маслом (1/4 кислоты-3/4 масла); это масло, таким образом, подают с расходом 0,8 г/л/час, затем 1,43 г/л/час. Параллельно непрерывно подают глюкозу с расходом 0,32 г/л/час в течение 48 часов. рН устанавливают соответствующим 7,5 в течение всей продолжительности конверсии с NaOH₅N. Повышают скорость до 900 об./мин и аэрируют с расходом 1 vvm. Конверсию продолжают в течение 48 часов.

Выход 9-децен-2-он составляет 8 г/л, т.е. выход биоконверсии составляет 33%.

Пример 4: Конверсия с Penicillium roquefortii (С)

Засевают Penicillium roquefortii [источник = пробирка, замороженная при -80°С] на агаризированный солод и инкубируют при 30°С в течение 72 часов.

Засевают предыдущую предварительную культуру в 3,5 л среды на солоде (та же концентрация, что и в примере 1).

Инкубируют в течение 22 часов при 30°С, перемешивании, составляющем 600 об./мин, и аэрации, соответствующей 0,3 vvm. Получают вес в сухом веществе 10 г/л.

Затем ундециленовую кислоту повторно подают с расходом 0,25 г/л/час в течение 6 часов, затем с расходом 0,45 г/л/час в течение 48 часов, затем с расходом 0,25 г/л/час в течение 24 часов: т.е. в сумме 30 г/л. Эту ундециленовую кислоту подают в смеси с гидрогенизированным подсолнечным маслом (1/3 кислоты-2/3 масла); это масло, таким образом, подают с расходом 0,5 г/л/час, затем 0,9 г/л/час, затем 0,5 г/л/час. Параллельно непрерывно подают глюкозу с расходом 0,36 г/л/час в течение 72 часов. рН устанавливают соответствующим 6,5 в течение всей продолжительности конверсии с NaOH 5N. Повышают скорость до 900 об./мин и аэрируют с расходом 0,6 vvm. Конверсию продолжают в течение 48 часов.

Выход 9-децен-2-он составляет 10,5 г/л, т.е. выход биоконверсии составляет 35%.

Пример 5: экстракция-очистка

Подкисляют до рН от 1,5 до 2 при помощи 85% фосфорной кислоты. Вводят растворитель экстракции циклогексан и перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Центрифугируют и рекуперируют органическую фазу. Определяют количество метилкетона. Растворитель концентрируют и получают таким образом «сырое» маслянистое вещество. Перегоняют в вакууме. Получают «обессмоленный» лактон и экстрагированное масло. Затем очищают, фракционируя молекулу в вакууме. Получают продукт, очищенный более чем на 99%.

Пример 6: Оценка 9-децен-2-он в парфюмерии

9-децен-2-он, очищенный на 99%, тестировали на блоттере и в растворе (5% в этаноле): головная нота сильная, однородная, с нотками розы, альдегидными, ацетата цитронеллы, листов кориандра и морскими нотами. Сердце имеет грушевые ноты.

Пример 6: Оценка в качестве пищевого ароматизатора

9-децен-2-он, очищенный на 99%, тестировали в 8 м.д. в минеральной воде: он имеет фруктовые ноты: груши, яблока и ананаса и зеленые и жирные ноты.

Он представляет интерес для усложнения натуральных рецептур экзотических фруктов, тем более что существует не так много натуральных молекул для достижения этой цели. В частности, тональность «Ананас» 9-децен-2-он является очень привлекательной альтернативой для замены аллилкапроата, который представляет собой молекулу, наиболее часто используемую в настоящее время для получения тональности типа ананаса.

Пример 8: Использование в рецептурах в качестве пищевого ароматизатора и в парфюмерии

Добавление 9-децен-2-он в аромат экзотических фруктов позволяет получать типично «ананасовую» тональность. В следующей рецептуре равная весовая замена аллилкапроата, обычно используемого в рецептуре, на 9-децен-2-он, позволяет очень успешно создавать тональность «ананас», которую придает аллилкапроат.

Натуральный этилкапроат 50 г

Натуральный малтол 20 г Натуральный изоамилацетат 35 г Натуральный этилизовалерат 37 г Натуральный ментол codex 8 г Натуральный этилметил-2-бутират 75 г Натуральный этилацет 50 г Натуральный изоамилбутират 12 г Натуральный этилбутират 35 г Камфара очищенная 2 г Натуральный 9-децен-2-он 200 г Натуральный этиловый спирт количество до 1000 г

Использование 50 м.д. этой смеси в слабом сокосодержащем напитке придает ему очень характерные ноты «ананаса»; также использование 200 м.д. этой смеси делает щербет типично «ананасовым».

Также в составе натурального пищевого ароматизатора 9-децен-2-он позволяет получать интересные «грушевые» ноты, например, в следующей рецептуре:

Натуральная капроновая кислота от 1 до 10 г Натуральный изоамиловый спирт от 20 до 60 г Натуральный гексиловый спирт от 10 от 50 г Натуральный этил капрат от 20 до 80 г Натуральный этил каприлат от 50 до 150 г Натуральный изоамилацетат от 50 до 150 г Натуральный пропилацетат от 50 до 150 г Натуральный гексилацетат от 50 до 150 г

Натуральный бутилацетат от 50 до 150 г Натуральный этилацетат от 50 до 150 г Натуральный 9-децен-2-он от 20 до 50 г Пропиленгиликоль количество до 1000 г

Использование 100 м.д. этой смеси в слабо подслащенном (5%) и слабо подкисленном напитке (0,1% лимонной кислоты) придает ему очень характерные «грушевые» ноты, даже если 9-децен-2-он содержится в очень небольшом количестве (от 2 до 5 м.д.).

В парфюмерном составе 9-децен-2-он позволяет усиливать ноту «цветочную, зеленую, фиалковую», а также «альдегидную фруктовую» шампуня, например, в следующей формуле, в которой используется 1% 9-децен-2-он, что делает парфюмерную ноту шампуня более сложной и более насыщенной:

Бензилацетат 70 г Фенилэтиловый спирт 100 г Гамма ундекалактон 4 г Амбреттолид цис-изомер 10 г Анисовый альдегид 25 г Бакданол 80 г Цитронеллол 85 г Этил ванилин 2 г Гераниол 40 г Дигидрометил ясмонат 120 г Оксациклогексадецен-2-он 100 г Гелиотропин 20 г

2-ацетил-1,2,3,4,5,6,7,8-октагидро-2,3,8,8-тетраметилнафтален 110 г Изоэугенол 2 г 4-(1,1-диметилэтил)-<a>-метилбензолпропанал 110 г Линалоол 60 г Метилионон 30 г Ванилин 10 г 2-октиленовая кислота, метиловый эфир 12 г 9-децен-2-он 10 г Итого 1000 г

В случае другого применения в парфюмерии, а именно в качестве смягчающего средства, присутствие 0,5% 9-децен-2-он придает особенность и усиливает фруктовую ноту, «яблочную» или «грушевую», запаха смягчающего средства, как указано в следующей формуле:

Бензилацетат 70 г Феноксиаллилацетат 30 г Фенилэтиловый спирт 80 г Гексилкоричный альдегид 40 г Альдегид С12 2 г Амбреттолид цис-изомер 60 г Анисовый альдегид 30 г 2-циклогексилиден-2-фенилацетонитрил 20 г Бакданол 50 г Цитронеллол 50 г

Кумарин 80 г Дигидромирценол 100 г 3а,4,5,6,7,7а-гексагидро-4,7-метано-1Н-индениловый эфир уксусной кислоты 65 г 2-ацетил-1,2,3,4,5,6,7,8-октагидро-2,3,8,8-тетраметилнафталин 106 г Метилионантем 40 г Эфирное масло пачули 30 г Циклогексил салицилат 100 г Диметил-3-циклогексен-1-карбоксальдегид 8 г Амброксан 5% DPG 6 г Эфирное масло гальбании 10% DPG 10 г Индол 10% DPG 8 г 9-децен-1-ол 10% DPG 10 г 9-децен-2-он 5 г Итого 1000 г

Наконец, в случае крема, 9-децен-2-он придает последнему выраженные цветочные ноты, например, при следующем применении:

Бензилацетат 49 г Цис-3-гексенилацетат 2 г Линалилацетат 85 г Фенилэтиловый спирт 65 г Гамма ундекалактон 6 г Аллиламил гликолят 20 г Метилантранилат 5 г Анисовый альдегид 10 г

Метилбензоат 8 г Цитронеллол 45 г Этил ванилин 11 г Гераниол 35 г Гидрометил ясмонат 130 г Гелиотропин 5 г Цис-3 гексенол 2 г Альфа ионон 23 г Бета ионон 4 г 2-ацетил-1,2,3,4,5,6,7,8-октагидро-2,3,8,8-тетраметилнафталин 75 г 4-(1,1-диметилэтил)-<a>-метилбензолпропанал 70 г Линалол 100 г Эфирное масло пачули 11 г Гамма ноналактон 27 г Гексенил цис-3-салицилат 35 г Гексилсалицилат 75 г Терпинеол 48 г Диметил-3-циклогексен-1-карбоксальдегид 4 г Ванилин 2 г Ацетилцедрен 12 г Сандалор 12 г Диметилбензилкарбинол бутират 1 г Метил-2,4-дигидрокси-3,6-диметилбензоат 13 г 9-децен-2-он 10 г

В присутствии 9-децен-2-он в креме присутствует главным образом головная нота с более интенсивными зелеными и свежими нотками.

Пример 9: Тесты на токсичность

Молекулу тестировали на 3 кроликах в соответствии с экспериментальным протоколом, установленным “the OECD guideline N 404 dated April 24^th 2002” и тестом “method B.4 of the Directive N 2004/73/EC): Острое кожное раздражение.

Из него следует, что 9-децен-2-он не вызывает раздражения и для его использования не требуется никакого символа или фразы, предупреждающих о риске (в соответствии с “EEC Directives 67/548/59 и 99/45).

Так же молекулу тестировали на 3 кроликах в соответствии с экспериментальным протоколом, установленным “the OECD guideline N 405 dated April 24^th 2002” и тестом “method B.5 of the Directive N 2004/73/EC): Острое раздражение глаз.

Из него также следует, что 9-децен-2-он не вызывает раздражения и для его использования не требуется никакого символа или фразы, предупреждающих о риске (в соответствии с “EEC Directives 67/548/59 и 99/45).

Наконец, величина, полученная во время теста LD50 (острая ротовая токсичность (ср. та же Directive), а именно 2500 мг/кг, позволяет классифицировать молекулу как неопасную.

В связи с безопасностью молекулы, таким образом, оказалось, что эта молекула может использоваться в рецептурах и в связи с тем, что ее присутствие установлено в манго и ананасе, может использоваться в пищевой и парфюмерной промышленности в качестве ароматизатора под знаком «натуральный».

Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано выше посредством примеров предпочтительных вариантов его осуществления, оно может быть изменено без отклонения от духа и природы изобретения, такого как определено в прилагаемой формуле изобретения.

Изобретение относится к способу получения 9-децен-2-она. Способ предусматривает культивирование указанной плесени, относящейся к семейству Aspergillaceae или Mortierellaceae, добавление ундециленовой кислоты в качестве субстрата в среду ферментации с расходом от 0,1 до 0,9 г/л/час в присутствии масла, биоконверсию субстрата в 9-децен-2-он, его экстракцию и очистку. При этом в качестве масла используют масло, выбранное из группы, содержащей традиционные пищевые масла или триглицериды, содержащие жирные кислоты короткой цепи, или белые масла. Изобретение позволяет получить 9-децен-2-он с выходом 8-16,5 г/л и высокой степенью очистки 99%. 12 з.п. ф-лы, 1 ил., 9 пр.

1. Способ получения 9-децен-2-он, характеризующийся биоконверсией ундециленовой кислоты при помощи плесени, которая относится к семейству Aspergillaceae или Mortierellaceae, причем указанный способ включает следующие стадии:
а) культивирование указанной плесени;
b) добавление ундециленовой кислоты в качестве субстрата в среду ферментации с расходом от 0,1 до 0,9 г/л/час в присутствии масла, где указанное масло выбрано из группы, содержащей традиционные пищевые масла или триглицериды, содержащие жирные кислоты короткой цепи или, альтернативно, белые масла;
с) биоконверсию субстрата в 9-децен-2-он,
d) экстракцию и очистку 9-децен-2-он.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная плесень относится к роду Aspergillus или роду Penicillium.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная плесень относится к роду Mortierella.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадия биоконверсии включает первую фазу адаптации плесени, во время которой указанную ундециленовую кислоту вводят с расходом от 0,1 до 0,5 г/л/час, затем вторую фазу, во время которой указанную ундециленовую кислоту вводят с расходом от 0,25 до 0,9 г/л/час.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что продолжительность указанной фазы адаптации составляет менее 20 часов, предпочтительно менее 12 часов и очень предпочтительно менее 6 часов.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное масло вводят в среду ферментации с расходом от 0,4 до 4,0 г/л/час.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что глюкозу или мальтозу вводят одновременно с ундециленовой кислотой и маслом.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанную глюкозу или указанную мальтозу вводят в среду ферментации с расходом меньше 1 г/л/час, предпочтительно меньше 0,75 г/л/час и очень предпочтительно меньше 0,5 г/л/час.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что введение указанной ундециленовой кислоты, указанного масла и возможно указанной глюкозы или мальтозы в среду ферментации осуществляют непрерывно в течение 5-96 часов.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что биоконверсию проводят при температуре от 25°С до 35°С, предпочтительно от 27°С до 30°С.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что рН среды ферментации составляет от 5 до 8.

12. Способ по п.1, отличающийся тем, что аэрация среды ферментации меньше или равна 1 vvm.

13. Способ по п.1, отличающийся тем, что биоконверсию останавливают путем добавления в культуральную среду кислоты, выбранной из группы, содержащей фосфорную кислоту, серную кислоту, соляную кислоту или лимонную кислоту.