СОЕДИНЕНИЕ А-87774 ИЛИ ЕГО СОЛЬ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЯ И ЕГО СОЛИ И АГРОХИМИКАТ, СОДЕРЖАЩИЙ СОЕДИНЕНИЕ ИЛИ ЕГО СОЛЬ В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА Российский патент 2015 года по МПК C12P1/04 A01N63/02 A01P13/00 A01P21/00 C12N1/20 C12R1/465 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к соединениям A-87774 или их солям, микроорганизму, продуцирующему их, их способу получения, агрохимикату (в частности, гербициду или регулятору роста растений), содержащему такие соединения в качестве активного ингредиента, способу применения таких соединений и продукту культуры микроорганизма.

Предшествующий уровень техники

Микроорганизмы продуцируют различные физиологически активные вещества, и часть из них эффективно применяют для повышения продуктивности в области сельского хозяйства. Например, милбемицины, авермектины и спинозины введены в практическое применение в качестве инсектицидов, а бластицидин и касугамицин в качестве фунгицидов.

С другой стороны, в области гербицидов, биалофос стал коммерческим.

Метаболиты микроорганизмов, при применении в качестве агрохимикатов, имеют преимущество в том, что легко разлагаются в окружающей среде, и это преимущество считают желательным свойством, которым будущие агрохимикаты должны обладать с учетом нагрузки на окружающую среду. Однако ни одно соединение, кроме соединений, указанных выше, не было введено в практическое применение в качестве соединения, обладающего гербицидным действием, и существует потребность в получении нового активного вещества.

Сущность настоящего изобретения

Проблемы, решаемые посредством настоящего изобретения

Целью настоящего изобретения является предоставление новых соединений A-87774 или их солей, обладающих гербицидным действием или регулирующим действием на рост растений, микроорганизма, продуцирующего такие соединения, способа их получения, агрохимиката (в частности, гербицида или регулятора роста растений), содержащего такие соединения в качестве активного ингредиента, способа применения таких соединений и продукта культуры микроорганизма.

Средства для решения поставленных задач

Авторы настоящего изобретения, в свете вышеуказанных задач, интенсивно проводили исследование относительно метаболитов микроорганизмов и в результате обнаружили, что соединения, обладающие чрезвычайно сильным гербицидным действием, присутствуют в культуральном растворе микроорганизмов, принадлежащих к Streptomyces, что привело к завершению настоящего изобретения.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет соединения A-87774, представленные соединениями A-87774-1, A-87774-2 или A-87774-3 или их солью, микроорганизм, продуцирующий соединение, способ получения соединения, агрохимикат (в частности, гербицид или регулятор роста растений), содержащий настоящее соединение в качестве активного ингредиента, способ удаления сорняков с применением настоящего соединения и способ регулирования роста растения, продукт культуры, получаемый посредством культивирования микроорганизмов, и агрохимикат, содержащий продукт культуры.

Эффект настоящего изобретения

Новые соединения A-87774 по настоящему изобретению обладают превосходным гербицидным действием или регулирующим действием на рост растения и полезны в качестве агрохимиката (в частности, гербицида или регулятора роста растения).

Краткое описание рисунков

Фиг.1 показывает спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-1.

Фиг.2 показывает спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-1.

Фиг.3 показывает спектр поглощения в инфракрасной области соединения A-87774-1.

Фиг.4 показывает спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-2.

Фиг.5 показывает спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-2.

Фиг.6 показывает спектр поглощения в инфракрасной области соединения A-87774-2.

Фиг.7 показывает спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-3.

Фиг.8 показывает спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса соединения A-87774-3.

Фиг.9 показывает спектр поглощения в инфракрасной области соединения A-87774-3.

Способ осуществления изобретения

Новое соединение A-87774-1 по настоящему изобретению обладает следующими свойствами:

1) Молекулярный вес: 668,

2) Молекулярная формула: C₁₈H₂₉N₄O₁₇PS₂,

3) Спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 5,86 (1H, д, J=5,9 Гц), 5,59 (1H, д, J=11,0 Гц), 4,56 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,42 (1H, дд, J=11,2, 2,9 Гц), 4,38 (1H, дд, J=11,2, 3,7 Гц), 4,30-4,27 (2H, м), 4,24-4,23 (2H, м), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 3,97 (1H, дд, J=12,7, 2,1 Гц), 3,61 (1H, дд, J=11,3, 10,3 Гц), 3,55 (1H, м), 3,52 (1H, м), 3,33 (1H, дд, J=11,4, 1,8 Гц), 2,72 (1H, дд, J=7,0, 6,6 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),

4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 174,0 (с), 154,8 (с), 91,4 (с), 89,2 (д), 87,6 (д), 80,8 (д), 74,8 (д), 73,5 (д), 70,2 (д), 70,2 (д), 70,0 (т), 63,7 (д), 60,6 (д), 53,8 (т), 36,5 (т), 30,3 (т), 18,3 (кв),

5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3423, 1703, 1639, 1487, 1450, 1406, 1383, 1339, 1258, 1217, 1184, 1088, 1067, 937, 899, 827, 536, и

6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+40,0° (с, 0,22, в H₂O), или его соль.

Новое соединение A-87774-2 по настоящему изобретению, обладающее следующими свойствами:

1) Молекулярный вес: 666,

2) Молекулярная формула: C₁₈H₂₇N₄O₁₇PS₂,

3) Спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 7,73 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,91 (1H, д, J=2,4 Гц), 5,90 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,60 (1H, д, J=10,8 Гц), 4,57 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,55 (1H, д, J=11,4 Гц), 4,46 (1H, дд, J=11,2, 2,2 Гц), 4,34-4,32 (3H, м), 4,22 (1H, д, J=12,6 Гц), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 3,96 (1H, дд, J=12,6, 1,7 Гц), 3,61 (1H, дд, J=11,4, 10,1 Гц), 3,32 (1H, д, J=11,4 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),

4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 166,3 (с), 151,8 (с), 141,7 (д), 102,8 (д), 91,3 (с), 89,3 (д), 89,2 (д), 81,5 (д), 74,8 (д), 73,5 (д), 73,4 (д), 69,5 (д), 69,4 (т), 63,7 (д), 60,6 (д), 53,8 (т), 18,3 (кв),

5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3399, 1706, 1455, 1405, 1346, 1266, 1185, 1087, 1067, 934, 900, 826, 534, и

6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+47,2° (c, 1,0, в H₂O),

или его соль.

Новое соединение A-87774-3 по настоящему изобретению обладает следующими свойствами:

1) Молекулярный вес: 828,

2) Молекулярная формула: C₂₄H₃₇N₄O₂₂PS₂,

3) Спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 7,74 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,94 (1H, д, J=5,3 Гц), 5,91 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,60 (1H, д, J=11,0 Гц), 5,01 (1H, уш.с), 4,57 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,57 (1H, м), 4,50-4,48 (3H, м), 4,41 (1H, м), 4,22 (1H, д, J=12,5 Гц), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 4,04 (1H, дд, J=3,3, 1,8 Гц), 3,96 (1H, дд, J=12,5, 1,3 Гц), 3,87 (1H, д, J=12,3 Гц), 3,85 (1H, м), 3,71 (1H, дд, J=12,3, 4,4 Гц), 3,63-3,61 (3H, м), 3,32 (1H, д, J=11,4 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),

4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 166,3 (с), 151,8 (с), 141,6 (д), 102,9 (д), 100,3 (д), 91,3 (с), 89,2 (д), 89,1 (д), 80,2 (д), 74,8 (д), 74,1 (д), 73,8 (д), 73,5 (д), 72,2 (д), 70,3 (д), 69,9 (д), 69,3 (т), 66,8 (д), 63,7 (д), 61,0 (т), 60,6 (д), 53,7 (т), 18,3 (кв),

5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3396, 1705, 1402, 1340, 1265, 1184, 1090, 1063, 937, 899, 825, 538, и

6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+78,7º (C, 1,0, в H₂O),

или его соль.

Соединения A-87774 могут образовывать любые соли не ослабляющие гербицидное действие или регулирующее действие роста растения соединений A-87774. Соли соединений A-87774, например, могут быть солями щелочных металлов или щелочноземельных металлов, такими как соль натрия, соль калия, соль магния и соль кальция; солями аммония; или солями органического амина, такими как изопропиламин и триэтиламин и предпочтительно солью натрия.

Посредством культивирования микроорганизмов соединения A-87774 по настоящему изобретению могут быть выделены из их продукта культуры.

Примеры штаммов, принадлежащих к роду Streptomyces, применяемому в способе получения соединений A-87774 по настоящему изобретению, могут включать штамм SANK 61805 Streptomyces sp. Штамм SANK 61805 имеет следующие микологические особенности. Следует отметить, что таксономический анализ, такой как морфологические свойства, свойства на различных культуральных средах, физиологические свойства, хемотаксономические свойства и 16S рРНК ген штамма SANK 61805, определяли способом, описанным в "Identification Manual of Actinomycetes (Hosenkin no Bunrui to Dotei)" (под редакцией японского общества по актиномицетам, изданное Business Center for Academic Societies, Япония, 2001).

1. Морфологические свойства

Штамм SANK 61805 культивировали на агаровой среде, описанной ISP (Международный Проект по Стрептомицетам), при 28°C в течение 14 дней с последующим микроскопическим наблюдением. Субстратный мицелий хорошо удлиняется, ветвится и имеет цвет от бледного желтовато-коричневого, желтовато-коричневого до сероватого желто-коричневого. Разрушение мицелия или зигзагообразное удлинение, подобное штаммам рода Nocardia, не наблюдается. Воздушный мицелий ветвится просто и имеет цвет белый, коричневато-серый до сероватого желто-коричневого. 10-50 или более цепочек спор образуются на кончиках воздушного мицелия, и цепочки спор имеют линейную форму или, в редких случаях, спиральную форму. Наблюдения посредством электронного микроскопа свидетельствуют о гладкой структуре поверхности. Спора является эллиптической и имеет размер от 0,4 до 0,8 × от 0,8 до 1,2 мкм. Дополнительно, специальный орган, такой как трохоидный ветвистый склероций или спорангий воздушного мицелия не наблюдается.

2. Свойства на различных культуральных средах

Свойства на различных культуральных средах после культивирования при 28°C в течение 14 дней показаны в Таблице 1. Обозначения цветовых тонов являются номерами цветовых чипов в "Standard Color Chart", выпущенной японским исследовательским институтом цвета согласно системе Манселла.

Таблица 1 Тип среды Объекты¹⁾ Свойства штамма SANK 61805 Дрожжевой экстракт/солодово-пептонный агар (ISP2) G: Очень хороший, приподнятый, тусклый оранжево-желтый цвет (10YR7/8)²⁾   AM: Обильно образованный, пушистый, темный коричневато-серый (5YR4/2)   R: Тусклый желто-оранжевый (10YR7/10)   SP: Не образует Овсяный агар (ISP3) G: Очень хороший, приподнятый, бесцветный   AM: Обильно образованный, пушистый, серовато-коричневый (5YR5/2)   R: Тусклый желто-оранжевый (10YR7/8)   SP: Не образует Агар из крахмала/неорганическая соль (ISP4) G: Очень хороший, приподнятый, желтовато-коричневый (10YR5/4)   AM: Очень хороший, пушистый, серовато-коричневый (5YR5/2)   R: Желто-коричневый (10YR7/6)   SP: Не образует Глицерин/аспарагиновый агар (ISP5) G: Очень хороший, приподнятый, желтовато-коричневый (10YR5/4)   AM: Очень хороший, серовато-коричневый (5YR5/2)   R: Тусклый желто-коричневый (10YR7/8)   SP: Не образует Пептон/дрожжевой/железо агар(ISP6) G: Не очень хороший, приподнятый, серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   AM: Не очень хороший, белый   R: Серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   SP: Черный Тирозиновый агар (ISP7) G: Очень хороший, приподнятый, темно коричневато-серый (10YR3/1)   AM: Очень хороший, пушистый, коричневато-серый (10YR5/2)   R: Темный коричневато-серый (10YR2/1)   SP: Черный Сахароза/нитратный агар G: Не очень хороший, приподнятый, бесцветный   AM: Не очень хороший, пушистый, серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   R: Бесцветный   SP: Не образует Глюкоза/аспарагиновый агар G: Не очень хороший, приподнятый, бесцветный   AM: Не очень хороший, пушистый, серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   R: Бесцветный   SP: Не образует Питательный агар (Difco) G: Не очень хороший, плоский, бледный желтовато-коричневый (2.5Y8/4)   AM: Не образует   R: Бледный желтовато-коричневый (2.5Y8/4)   SP: Не образует Агар на основе экстракта картофеля/экстракта моркови G Не очень хороший, приподнятый, бледный желтовато-коричневый (10YR7/3)   AM Не очень хороший, пушистый, серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   R Бледный желтовато-коричневый (10YR7/3)   SP Не образует Водный агар G Не очень хороший, плоский, желтовато-серый (7.5Y9/2)   AM Не хороший, пушистый, серовато-желто-коричневый (10YR5/3)   R Желтовато-серый (7.5Y9/2)   SP Не образует ¹⁾ "G", "AM", "R" и "SP" обозначают "рост", "воздушный мицелий", "обратная сторона" и "растворимый пигмент" соответственно.
²⁾ Обозначения в скобках в колонке свойств являются обозначениями цветовых тонов согласно системе Манселла.

3. Физиологические свойства

Физиологические свойства штамма SANK 61805, наблюдаемые в течение от 2 до 21 дней после культивирования при 28°C, показаны в Таблице 2.

Таблица 2 Гидролиз крахмала   Положительное Ожижение желатина   Отрицательное Восстановление нитрата   Отрицательное Пептонизация молока   Отрицательное Коагуляция молока   Отрицательное Образование меланин-подобного пигмента (среда 1)¹⁾ Положительное   (среда 2)²⁾ Положительное   (среда 3)³⁾ Положительное Способность разлагать субстрат Казеин Отрицательное   тирозин Положительное   ксантин Отрицательное Диапазон температур для роста (среда 4)⁴⁾ 10-48ºС Оптимальная температура для роста (среда 4) 24-40ºС Солеустойчивость   7% 1) "Среда 1" обозначает "триптон/дрожжевой экстракт/бульон (ISP1)".
2) "Среда 2" обозначает "агар на основе пептон/дрожжевой экстракт/железо (ISP6)".
3) "Среда 3" обозначает "тирозиновый агар (ISP7)".
4) "Среда 4" обозначает "агар на основе дрожжевой экстракт/экстракт солода (ISP2)".

Дополнительно, потребление источников углерода для штамма SANK 61805, наблюдаемое после культивирования при 28°C в течение 14 дней с применением агаровой среды Pridham-Gottlieb (ISP9), показано в Таблице 3.

Таблица 3 D-глюкоза + D-фруктоза + L-арабиноза + L-рамноза + D-ксилоза + Сахароза - инозитол - Рафиноза + D-маннитол + контроль - "+" обозначает "потребляется", "±" обозначает "слабо потребляется", "-" обозначает "не потребляется".

4. Относительно грибкового компонента

Хематаксономическое свойство штамма SANK 61805 исследовали согласно "Identification Manual of Actinomycetes (Hosenkin no Bunrui to Dotei)" (под редакцией японского общества по актиномицетам, изданное Business Center for Academic Societies, Япония, 2001). В результате обнаружили LL-диаминопимелиновую кислоту из клеточной оболочки и не обнаружили никакого характерного паттерна в качестве сахарного компонента для клетки в целом. В качестве главных молекулярных разновидностей менахинонов обнаружили МК-9 (Н₆) и МК-9 (Н₈).

5. Генетический анализ 16S рРНК

Была расшифрована основная последовательность (1325 п.о.) 16S рРНК генов штамма SANK 61805 и проведен поиск по базам данных, в результате чего штамм SANK 61805 был включен в кластер генов рода Streptomyces.

Идентификацию проводили в соответствии с критериями ISP (International Streptomyces Project), S.A. Waksman, The Actynomecetes, vol. 2, R.E. Buchanan and N.E. Gibbons, Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th edition, 1974, Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, vol. 4, 1989 и последним документам касательно актиномицетов рода Streptomyces для принятия решения о том, что настоящий штамм принадлежит роду Streptomyces среди актиномицетов. Затем настоящий штамм был назван Streptomyces sp. штамм SANK 61805.

Из вышеуказанных результатов настоящий штамм был идентифицирован в качестве Streptomyces sp. штамм SANK 61805 (далее в настоящем описании называемый "штамм SANK 61805"). Следует отметить, что настоящий штамм был международно депонирован в National Institute of Advanced Industrial Science and Technology International Patent Organism Depository (Адрес: AIST Tsukuba Central No.6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Япония) 19 июня 2007, его депозитарный номер FERM BP-10840.

Как хорошо известно в области техники, актиномицеты склонны к мутации в природе или посредством искусственного воздействия (например, ультрафиолетовое излучение, радиоактивное излучение, химическая обработка и т.д.), и штамм SANK 61805 по настоящему изобретению также склонен к мутации. Штамм SANK 61805 по настоящему изобретению включает все его мутантные штаммы. Дополнительно, эти мутантные штаммы также включают штаммы, полученные генетическим путем, например рекомбинацией, трансдукцией, трансформацией или подобным. Таким образом, штамм SANK 61805, который продуцирует соединение A-87774-1, A-87774-2 или A-87774-3, и его мутантный штамм, и штаммы, которые нельзя ясно отличить от них, все включены в штамм SANK 61805.

При культивировании штамма (продуцирующего штамма), который продуцирует соединения A-87774 по настоящему изобретению, применяемая среда может быть средой, которая соответственно содержит составляющие, выбранные из источника углерода, источника азота, неорганического иона и органического питательного источника, и также может быть включена любая синтетическая или натуральная среда.

Питательные источники могут быть такими, которые известны и традиционно применяются для культивирования штаммов грибов и актиномицетов, и включают источники углерода, источники азота и неорганические соли, которые могут быть утилизированы микроорганизмами.

Конкретно, источник углерода может быть, например, глюкозой, фруктозой, мальтозой, сахарозой, маннитом, глицерином, декстрином, овсом, рожью, кукурузным крахмалом, картофелем, кукурузной мукой, соевой мукой, маслом семян хлопка, крахмальной патокой, патокой, соевым маслом, лимонной кислотой или винной кислотой и может быть применен один или в комбинации. Источник углерода, в целом, применяется в пределах диапазона от 1 до 10% по весу от количества среды, но не ограничен им.

Дополнительно, источник азота может быть, в целом, материалом, содержащим белок или продукт его гидролиза. Предпочтительный источник азота может быть, например, соевой мукой, отрубями пшеницы, арахисовой мукой, хлопковой мукой, обезжиренным молоком, продуктом гидролиза казеина, фармамином, рыбным кормом, кукурузным сиропом, пептоном, мясным экстрактом, сырыми дрожжами, сухими дрожжами, дрожжевым экстрактом, экстрактом солода, картофелем, сульфатом аммония, нитратом аммония или нитратом натрия и может быть применен один или в комбинации. Источник азота предпочтительно применяется в пределах диапазона от 0,2 до 6% по весу количества среды.

Кроме того, питательная неорганическая соль может быть обычной солью, способной давать ионы натрия, аммония, кальция, фосфата, сульфата, хлорида или карбоната. Дополнительно, питательная неорганическая соль может также быть следовым количеством металла, такого как калий, кальций, кобальт, марганец, железо, цинк, никель или магний.

Следует отметить, что на жидкой культуре может быть применено противопенное средство, такое как силиконовое масло, растительное масло или поверхностно-активное вещество.

pH среды для культивирования штаммов, продуцирующих соединения A-87774 (продуцирующий штамм, в частности штамм SANK 61805), для получения соединений A-87774-1, A-87774-2 или A-87774-3, предпочтительно составляет от 5,0 до 8,0.

Температура среды для получения соединения A-87774 может быть соответственно изменена в пределах диапазона, в котором продуцирующий штамм (продуцирующий штамм, в частности, штамм SANK 61805) образует требуемое вещество, но предпочтительно от 22 до 36°C.

Соединения A-87774 могут быть получены посредством аэробного культивирования продуцирующего штамма (в частности, штамма SANK 61805) и получены из продукта культуры. Таким способом культивирования может являться аэробный способ культивирования, применяемый обычно, например, способ культивирования на твердой среде, способ культивирования со встряхиванием или способ культивирования при аэрировании с перемешиванием.

Соединения A-87774 могут быть экстрагированы посредством разделения культурального раствора продуцирующего штамма (в частности, штамма SANK 61805) на жидкость и грибковый компонент или без разделения, из фильтрата или культурального раствора с применением их физико-химических свойств, и предпочтительно экстрагированы после разделения на жидкий и грибковый компоненты. Разделение может быть выполнено, например, посредством способа разделения центрифугированием или способа фильтрации с применением диатомита в качестве вспомогательного агента фильтрации.

При извлечении соединений A-87774 из грибкового компонента, водный раствор или растворимый в воде органический растворитель добавляют к грибковому компоненту с последующим перемешиванием и затем смесь подвергают, например, разделению способом центрифигурования или способом фильтрации с применением диатомита в качестве вспомогательного агента фильтрации для отделения жидкой фазы. Из полученной жидкой фазы отгоняют растворимый в воде органический растворитель (предпочтительно, отгоняют при пониженном давлении) и затем подобную процедуру применяют к жидкой фазе фильтрата, полученного из культурального раствора, указанной ниже, для получения соединений A-87774-1, A-87774-2 или A-87774-3. Растворимый в воде органический растворитель для применения при экстракции может быть метанолом, этиловым спиртом, ацетоном, ацетонитрилом или тетрагидрофураном или их смешанным растворителем, и доля добавляемого растворимого в воде органического растворителя составляет от 0 до 95% по объему.

Соединения A-87774 являются растворимым в воде веществом, и использование их физико-химических свойств позволяет их экстрагировать и очищать от фильтрата. В качестве адсорбента применяют, например, активированный уголь или синтетический адсорбент. Такой синтетический адсорбент может быть, например, серией HP, такой как Diaion HP-20 (изготавливаемый Mitsubishi Chemical Corporation) или серией XAD, такой как AMBERLITE XAD-2 (изготавливаемый Organo Corporation). Жидкость, содержащая соединения A-87774, может быть пропущена через слой адсорбента, как указано выше, для удаления из нее примесей, содержащихся в ней, посредством адсорбции, или соединения A-87774 могут также быть адсорбированы на нем единожды и затем элюированы органическим растворителем. Органический растворитель для элюирования может быть, например, растворимым в воде органическим растворителем, таким как метанол, этиловый спирт, ацетон, ацетонитрил или тетрагидрофуран, и смешанным растворителем, смесью воды и подобного растворимого в воде органического растворителя, и кроме того, растворитель, pH которого регулируют посредством добавления уксусной кислоты, муравьиной кислоты или водным раствором аммиака, также может быть использован. Дополнительно, также возможно экстрагировать или удалять примеси, содержащиеся в водном растворе, содержащем соединения A-87774, путем применения несмешивающегося с водой органического растворителя, например этилацетата, толуола, хлороформа, метиленхлорида, бутанола или подобного, одного или в комбинации, без применения адсорбента.

Экстрагированная фракция соединений A-87774, полученная таким образом, может быть подвергнута обычному способу, применяемому для очистки органического соединения, для дополнительной очистки. Такой способ очистки может быть, например, адсорбцией, разделением, катионным обменом, анионным обменом, колоночной хроматографией фильтрации в геле, тонкослойной хроматографией или высокоэффективной жидкостной хроматографией. Носитель для применения в таких хроматографиях может быть, например, силикагелем, оксидом алюминия, флоризилом, целлюлозой, активированным углем, Dowex 50W, Amberlite CG-400, Sephadex LH-20, Sephadex G-25 или силикагелем С18, и они могут быть применены по одному или в комбинации в любом порядке для эффективного отделения и очистки соединений A-87774.

Соединения A-87774 по настоящему изобретению, полученные из продукта культуры, который может быть получен путем культивирования продуцирующего штамма (в частности, штамма SANK 61805), как указанно выше, обладают превосходным гербицидным действием, и, таким образом, могут быть применены в качестве агрохимиката, в частности, в качестве гербицида, для удаления злостных сорняков в области сельского хозяйства и садоводства, в частности, сорняков на полях на возвышенности или сорняков на затопляемых полях, посредством обработки сорняков или почвы.

Такие злостные сорняки на полях на возвышенности могут быть, например, пасленовыми сорняками, такими как черный паслен и дурман вонючий, мальвовыми сорняками, такими как канатник и грудинка колючая, вьюнковыми сорняками, такими как ипомея высокая и вьюнок полевой, амарантовыми сорняками, такими как щирица синеватая и щирица колосистая, сложноцветными сорняками, такими как дурнишник обыкновенный, амброзия обыкновенная, крестовник обыкновенный и полынь однолетняя, крестоцветными сорняками, такими как горчица дикая и пастушья сумка, хеноподиевыми сорняками, такими как марь белая и марь фиголистная, фиалковыми сорняками, такими как фиалка полевая, гвоздиковидными сорняками, такими как мокрица обыкновенная, стручковыми сорняками, такими как белый клевер, Indian jointvetch и астрагал серповидный, портулаковыми сорняками, такими как портулак обыкновенный, норичниковыми сорняками, такими как вероника персидская, губоцветными сорняками, такими как яснотка, молочайными сорняками, такими как молочай приземистый, травянистыми сорняками, такими как ежовник, сорго алеппское, южная росичка кровяная, лапчатка гусиная, однолетний пырей, водный лисохвост, дикий овес, плевел жесткий, райграс, лисохвост зеленый и бермудская трава, осокоцветными сорняками, такими как рисовая сыть вееровидная и желтый циперус, коммелиновыми сорняками, такими как азиатская коммелина и тропическая традесканция, или хвощовыми сорняками, такими как хвощ полевой. Дополнительно, злостные сорняки в затопляемом поле могут быть травянистыми сорняками, такими как ежовник ранний, осокоцветными сорняками, такими как японский камыш, сыть поздноцветущая, ситняг игольчатый, Курогувай и Шицуи, частуховыми сорняками, такими как стрелолист и стрелолист карликовый, или широколистными сорняками, такими как линдерния лежачая, монохория, канабис и трехтычиночный повойничек.

Гербицидное действие соединений A-87774 на эти сорняки можно оценить путем обработки частей стебля и листьев раствором препарата после прорастания целевых сорняков, или путем обработки почвы, в которой присутствуют семена или клубни целевых сорняков, раствором препарата до прорастания целевых сорняков и сравнением последующего роста сорняков с таковым необработанной контрольной группы.

Соединения A-87774 могут быть применены не только для сельскохозяйственных участков земли и затопляемых полей, но также и для садов, полей тутовника, земель, не используемых в сельском хозяйстве, и горных лесов.

Кроме того, соединения A-87774 по настоящему изобретению также обладают регулирующим действием или подавляющим рост, не доводя растения до гибели, и, таким образом, могут быть применены в качестве регулятора роста растения. Растения можно обработать соединением A-87774 в подходящее время и в подходящей концентрации для регулирования роста растений, и, таким образом, можно ожидать различные действия, такие как, например, предотвращение полегания благодаря сокращенной длине стебля риса-падди и сокращение необходимости стрижки благодаря подавлению роста травы.

Соединения A-87774 могут быть применены в форме композиции, обычно применяемой в качестве агрохимической композиции. Такой композицией могут быть, например, эмульсии, смачивающиеся порошки, гранулированные смачивающиеся порошки, растворимые в воде химикаты, растворы, порошки, гранулы, суспензии, высокотекучие композиции, сухие высокотекучие композиции или капсулы, покрытые полимерными материалами.

Эти композиции могут содержать соответствующие добавки и носители, и такие добавки и носители, содержащиеся в твердой композиции, могут быть, например, растительными порошками, такими как соевая мука, пшеничная мука, крахмал и кристаллическая целлюлоза; минеральными порошками, такими как диатомит, фосфорит, гипс, тальк, бентонит, цеолит и глина; или органическими или неорганическими соединениями, такими как бензоат натрий, мочевина, карбонат кальция и сульфат натрия. Далее, добавка и носитель, содержащиеся в жидкой композиции, могут быть, например, растительными маслами, такими как соевое масло, рапсовое масло и хлопковое масло; минеральными маслами; ароматическими углеводородами, такими как керосин, ксилол и толуол; амидами, такими как формамид и диметилформамид; сложными эфирами, такими как ацетат этиленгликоля и диэтилсукцинат; кетонами, такими как метилизобутилкетон и ацетон; эфирами, такими как диэтиловый эфир этиленгликоля; спиртами, такими как этиленгликоль и изопропанол; диметилсульфоксидом; трихлорэтиленом; или водой. Поверхностно-активное вещество может быть добавлено для придания жидкой композиции однородности и устойчивости.

Соответствующее неионогенное поверхностно-активное вещество может быть, например, продуктом присоединения этиленоксидного полимера и более высших алифатических спиртов, таких как сложный эфир сахарозы и жирной кислоты, лауриловый спирт, стеариловый спирт и олеиловый спирт; аддуктом этиленоксидного полимера и алкилфенолов, таких как изооктилфенол и нонилфенол; аддуктом этиленоксидного полимера и алкилнафтолов, таких как бутилнафтол и октилнафтол; аддуктом этиленоксидного полимера и высших жирных кислот, таких как пальмитиновая кислота, стеариновая и олеиновая кислота; продуктом присоединения этиленоксидного полимера и моно- или диалкилфосфатов, таких как стеарилфосфат и дилаурилфосфат; аддуктом этиленоксидного полимера и более высших алифатических аминов, таких как додециламин и стеарамид; сложным эфиром высших жирных кислот и многоатомных спиртов, таким как сорбитан; и их аддуктом с этиленоксидным полимером, а также с сополимером этиленоксида и пропиленоксида.

Соответствующее анионное поверхностно-активное вещество может быть, например, солями алкилсульфокислоты, такими как лаурилсульфат натрия, и солями амина сложного эфира серной кислоты и олеилового спирта; солями жирной кислоты, такими как диоктилсульфосукцинат натрия, олеат натрия и стеарат натрия; или алкиларилсульфонатами, такими как изопропилнафталенсульфонат натрия, метиленбиснафталенсульфонат натрия, лигнинсульфонат натрия и додецилбензолсульфонат натрия. Дополнительно, соответствующее катионное поверхностно-активное вещество может быть, например, более высшим алифатическим амином, четвертичными аммониевыми солями или солями алкилпиридиния.

Содержание соединений A-87774 в агрохимической композиции зависит от дозированных форм, или подобного, но составляет, например, 100% по весу в качестве верхнего предела и 0,01% по весу в качестве нижнего предела, предпочтительно от 0,1 до 50% по весу. Количество соединений A-87774, применяемых в качестве агрохимиката, зависит от целевых сорняков, целевых растений, рост которых необходимо регулировать, дозированных форм или содержаний в композициях, но может быть от 1000 г до 0,1 г на 10 ар, предпочтительно в пределах диапазона от 100 г до 1 г.

Далее настоящее изобретение будет описано подробно со ссылками на Примеры и Тестовые Примеры, но настоящее изобретение не ограничено ими.

Примеры

Пример 1

Отделение соединений A-87774-1 и A-87774-2

(1) Культура штамма SAHK 61805

80 мл среды, как показано в следующем составе среды, помещали в колбу Эрленмейера объемом 500 мл, нагревали и стерилизовали при 121°C в течение 30 минут. Каждую среду инокулировали одной платиновой петлей штамма SANK 61805 Streptomyces sp. из скошенного агара и культивировали при 28°C и при 210 оборотах в минуту в течение 3 дней при вращательном встряхивании для получения культурального раствора для посева. 80 мл среды с такой же композицией помещали в 100 колб Эрленмейера объемом по 500 мл каждая, нагревали и стерилизовали при 121°C в течение 30 минут, затем охлаждали до комнатной температуры. Их инокулировали 0,5 мл вышеуказанного культурального раствора для посева и культивировали при 28°C и 210 оборотах в минуту в течение 8 дней при вращательном встряхивании.

Состав среды   Растворимый крахмал 40 г Глюкоза 10 г Соевая мука 10 г Дрожжевой экстракт 4,5 г Кукурузная патока 2,5 г Дигидрофосфат калия 0,5 г Октагидрат фосфата магния 0,05 г Гептагидрат сульфата цинка 0,01 г Гексагидрат сульфата никеля 0,001 г Гексагидрат хлорида кобальта 0,001 г CB-442 (противопенное средство) 0,05 г Водопроводная вода 1000 мл рН до стерилизации 7,5

(2) Отделение соединений A-87774-1 и A-87774-2

Отделение активных ингредиентов проводили согласно следующему способу. После разделения дикую горчицу, культивированную в течение 7 дней в почве из затопляемого поля, помещенной в 4 см кубическую емкость, опрыскивали 0,5 мл раствора каждой фракции и исследовали гербицидное действие их активных ингредиентов.

8 л культурального раствора, полученного в вышеуказанном пункте (1), разделяли на грибковый компонент и жидкую часть посредством центрифуги (7500×g). Часть грибкового компонента перемешивали с метанолом и затем отфильтровывали на диатомите. После того как фильтрат был сконцентрирован при пониженном давлении, его объединяли с жидкой частью культурального раствора и концентрировали до 5 л, которые пропускали через колонку Diaion HP-20 (внутренний диаметр 6 см, длина 31 см), и пропущенную жидкость и 2,8 л воды, использованные для промывки колонки, объединяли. Этот раствор пропускали через колонку Dowex 50W×8 (H⁺ тип: внутренний диаметр 6 см, длина 33 см) и пропущенный раствор и 2 л воды, используемые для промывки колонки, объединяли. Затем этот раствор пропускали через колонку активированного угля (внутренний диаметр 6 см, длина 20 см), чтобы адсорбировать активный ингредиент. Колонку промывали 1 л воды и 2 л метанол/вода (3/1), затем активный ингредиент элюировали 2,5 л метанол/2,8% водный раствор аммиака (4/1). Твердый продукт, полученный из элюата путем отгонки растворителя при пониженном давлении, растворяли в 80 мл воды и пропускали через колонку Amberlite CG-400 тип I (Cl^- тип: внутренний диаметр 4 см, длина 22 см). Колонку промывали последовательно 1 л 0,02 н. HCl и 1 л 0,02 н. HCl, содержащим 0,01 M NaCl, и затем активный ингредиент элюировали 1,3 л 0,02 н. HCl, содержащим 0,6 M NaCl. Чтобы удалить NaCl, все пропускали через колонку активированного угля (внутренний диаметр 3 см, длина 20 см) снова, колонку промывали 1 л воды и затем активный ингредиент элюировали 1,5 л метанол/2,8% водный раствор аммиака (4/1) и отгоняли раствор при пониженном давлении, чтобы получить 383 мг твердого продукта.

Этот твердый продукт очищали посредством колоночной хроматографии на Sephadex G-25. Таким образом, в колонку Sephadex G-25 (внутренний диаметр 2,5 см, длина 41 см), уравновешенную смешанным растворителем из ацетонитрила, воды и уксусной кислоты (объемные соотношения компонентов в смеси: 73/27/0,1), помещали твердый продукт после растворения в 1 мл воды, элюировали тем же самым смешанным растворителем и элюат фракционировали на порции по 12 мл каждая. Активный ингредиент, обладающий гербицидным действием, элюировали в порциях с 49 по 89 и, таким образом, растворитель этой фракции отогоняли при пониженном давлении для получения 130 мг твердого продукта.

Этот твердый продукт очищали посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В качестве колонки ВЭЖХ применяли колонку Shiseido CAPCELL-PAK C18 UG120Å (внутренний диаметр 2 см, длина 25 см) и в качестве элюента применяли смешанный растворитель из ацетонитрила, воды и уксусной кислоты (объемные соотношения в компонентов смеси: 4/96/0,1), для проведения элюирования при температуре сушильного шкафа колонки 40°C и при потоке 15 мл/мин, с получением 11,3 мг соединения A-87774-2 в виде белого порошка, элюируемого при времени удерживания от 5,6 до 9,6 минут, и 81,3 мг фракции, содержащей соединение А-87774-1, элюируемой до 5,6 минут. Последнюю фракцию снова очищали при помощи Shiseido CAPCELL-PAK C18 UG120Å (внутренний диаметр 1 см, длина 25 см) и ВЭЖХ (температура сушильного шкафа колонки 40°C, поток 5 мл/мин) с применением смешанного растворителя из ацетонитрила, воды и уксусной кислоты (объемные соотношения компонентов смеси: 3/97/0,1), чтобы получить 2,4 мг соединения A-87774-1 в виде белого порошка, элюируемого между 13,4 и 16,6 минутами.

Эти соединения A-87774-1 и A-87774-2 имели молекулярный вес, молекулярную формулу, спектр ¹H-ядерного магнитного резонанса при измерении в дейтерированной воде, спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса при измерении в дейтерированной воде, спектр поглощения в инфракрасной области при измерении посредством KBr диска и удельное оптическое вращение, указанные выше. Спектр ¹H-ядерного магнитного резонанса, спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса и спектр поглощения в инфракрасной области соединения A-87774-1 показаны на Фиг.1, Фиг.2 и Фиг.3 соответственно, и спектр ¹H-ядерного магнитного резонанса, спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса и спектр поглощения в инфракрасной области соединения А-87774-2 показаны на Фиг.4, Фиг.5 и Фиг.6 соответственно. Следует отметить, что метанол добавляли в качестве материала внутреннего стандарта при получении спектра ¹H-ядерного магнитного резонанса и спектра ¹³C-ядерного магнитного резонанса для A-87774-1 и A-87774-2.

Приборы для проведения измерений следующие:

Спектр ядерного магнитного резонанса: JEOL ECA500

Спектр поглощения в инфракрасной области: SHIMADZU FTIR-8400

Удельное оптическое вращение: JASCO DIP-360.

Дополнительно, условия для измерения ЯМР следующие:

Частота ¹H: 500,16 МГц, ¹³C: 125,77 МГц

Температура для измерения, количество шагов интегрирования:

A-87774-1 ¹H: 23,9°C, 8 раз,

  ¹³C: 24,6°C, 21600 раз, A-87774-2 ¹H: 23,1°C, 8 раз,
¹³C: 24,6°C, 46000 раз.

Пример 2

Отделение соединения A-87774-3

(1) Культура штамма SANK 61805

80 мл среды, имеющей тот же самый состав, что и выше в Примере 1 (1), помещали в 4 колбы Эрленмейера объемом по 500 мл каждая, нагревали и стерилизовали при 121°C в течение 30 минут. Каждую среду инокулировали одной платиновой петлей штамма SANK 61805 Streptomyces sp. из скошенного агара и культивировали при 28°C и 210 оборотах в минуту при вращательном встряхивании. На 7-й и 14-й день добавляли глицерин до 2%-ного эквивалента с последующим культивированием в течение 22 дней.

(2) Отделение соединения A-87774-3

320 мл культурального раствора, полученного выше в (1), разделяли на грибковый компонент и жидкую часть посредством центрифуги (7500×g). Часть грибкового компонента перемешивали с метанолом и затем отфильтровывали на диатомите. После того как фильтрат был сконцентрирован при пониженном давлении, его объединяли с жидкой частью культурального раствора и концентрировали. Все пропускали через колонку активированного угля (внутренний диаметр 1,6 см, длина 16 см), чтобы адсорбировать активный ингредиент. Колонку промывали последовательно 120 мл воды, метанол/вода (1/1) и метанола, затем элюировали активный ингредиент 120 мл метанол/2,8% водный раствор аммиака (4/1). Полученное концентрировали, затем растворяли в 3 мл воды и пропускали через колонку Dowex 50W×8 (H⁺ тип: внутренний диаметр 1,2 см, длина 9,5 см), элюированный раствор и 50 мл воды, используемой для промывки колонки, объединяли. Затем пропускали через колонку Amberlite CG-400 тип I (тип Cl^-: внутренний диаметр 1,8 см, длина 12 см). В колонке последовательно промыли 60 мл 0,02 н. HCl, 80 мл 0,02 н. HCl, содержащего 0,01 M NaCl, и 200 мл 0,02 н. HCl, содержащего 0,6 M NaCl, и фракционировали на порции по 20 мл каждая, активные ингредиенты элюировались между 5 и 14 порциями. Чтобы удалить NaCl, эту фракцию пропустили через колонку активированного угля (внутренний диаметр 1,2 см, длина 10 см) снова и колонку промывали 50 мл воды. Затем активный ингредиент элюировали 50 мл метанол/2,8% водный раствор аммиака (4/1) и растворитель отгоняли при пониженном давлении, чтобы получить 237 мг твердого продукта.

Этот твердый продукт очищали посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В качестве колонки ВЭЖХ использовали Shiseido CAPCELL-PAK C18 UG120Å (внутренний диаметр 2 см, длина 25 см) и в качестве элюента применяли смешанный растворитель из ацетонитрила, воды и уксусной кислоты (объемные соотношения компонентов смеси: 3/97/0,4), для проведения элюирования при температуре сушильного шкафа колонки 40°C и потоке 10 мл/минут, с получением 7,3 мг соединения A-87774-3 в виде белого порошка, элюируемого при времени удержания между 12,5 и 16,8 минутами.

Это соединение A-87774-3 имело молекулярный вес, молекулярную формулу, спектр ¹H-ядерного магнитного резонанса при измерении в дейтерированной воде, ¹³C-спектр ядерного магнитного резонанса при измерении в дейтерированной воде, спектр поглощения в инфракрасной области при измерении посредством KBr диска и удельное оптическое вращение, указанные выше. Спектр ¹H-ядерного магнитного резонанса, ¹³C-спектр ядерного магнитного резонанса и спектр поглощения в инфракрасной области соединения A-87774-3 показаны на Фиг.7, Фиг.8 и Фиг.9 соответственно. Следует отметить, что ацетон добавляли в качестве материала внутреннего стандарта для спектра ¹H-ядерного магнитного резонанса A-87774-3 и уксусную кислоту добавляли для получения ¹³C-спектра ядерного магнитного резонанса A-87774-3.

Приборы для проведения измерений следующие:

Спектр ядерного магнитного резонанса: JEOL ECA500

Спектр поглощения в инфракрасной области: SHIMADZU FTIR-8400

Удельное оптическое вращение: JASCO DIP-360.

Дополнительно, условия для измерения ЯМР следующие:

Частота ¹H: 500,16 МГц, ¹³C: 125,77 МГц

Температура для измерения, количество шагов интегрирования:

A-87774-3 ¹H: 23,1°C, 64 раза,
¹³C: 23,9°C, 48000 раз.

Тестовый пример 1

Тест опрыскивания стеблей и листьев

Соединения A-87774-1, A-87774-2 и A-87774-3 растворяли в водном растворе, содержащем 0,1% (масс./об.) Newcol 1200 для получения растворов 100 и 50 мг/л. Гранулированную почву из затопляемого поля помещали в 4 см кубическую емкость, в почву помещали семена дикой горчицы, канатника, щирицы колосистой и ежовника и проращивали в теплице в течение 7 дней для получения растений, которые затем опрыскивали 0,5 мл этого тестового раствора, и изучали гербицидное действие через 14 дней после обработки. Гербицидное действие оценивали по 6 бальной шкале от 5 (гибель) до 0 (отсутствие действия). Эти результаты показаны в Таблице 4.

Таблица 4 Концентрация соединения (мг/л) A-87774-1 A-87774-2 A-87774-3 горчица дикая канатник щирица колосистая ежовник горчица дикая канатник щирица колосистая ежовник горчица дикая канатник щирица колосистая ежовник 100 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 3 50 5 5 5 1 5 5 5 3 5 5 5 1

Исходя из этих результатов было обнаружено, что все соединения A-87774 проявляют превосходные гербицидные действия.

Тестовый пример 2

Тест опрыскивания стеблей и листьев

В пластмассовую емкость [10×15×3 см (высота)], в которую помещали почву из затопляемого поля, высаживали тестовое растение, показанное в Таблице 2, и через 14 дней после высаживания растение опрыскивали A-87774-2. 100 мг/л раствор, разведенный в водном растворе, содержащем 0,01% (об/об) грамина S, готовили в качестве раствора препарата и распыляли в жидком виде в количестве, эквивалентном 2000 л/га (дозировка 200 г/га). Гербицидное действие изучали через 14 дней после этого и оценивали по 6 бальной шкале от 5 (гибель) до 0 (отсутствие действия). Эти результаты показаны в Таблице 5.

Таблица 5 Доза соединения (г/га) A-87774-2 ежовник южная росичка кровяная райграс дикий овес желтый циперус канатник сида колючая щирица колосистая горчица дикая черный паслен 200 2 5 5 4 5 5 5 5 5 5

Исходя из этих результатов было обнаружено, что соединение A-87774-2 обладает превосходными гербицидными действиями на широкий диапазон сорняков.

Тестовый пример 3

Тест опрыскивания стеблей и листьев

В пластмассовую емкость [10×15×3 см (высота)], в которую помещали почву из затопляемого поля, высаживали 9 типов растений и через 14 дней растения после высаживания опрыскивали раствором, содержащим 62,5 мг/л A-87774-2, или 250 мг или 62,5 мг/л А-87774-3, растворенного в водном растворе, содержащем 0,1% (вес./об) Newcol 1200, в жидком виде в количестве, эквивалентном 2000 л/га. Дозировка составляла 125 г/га, 500 г/га и 125 г/га соответственно. Гербицидное действие изучали через 15 дней после этого и оценивали по 6-бальной шкале от 5 (гибель) до 0 (отсутствие действия). Эти результаты показаны в Таблице 6.

Таблица 6 Доза соединения (г/га) ежовник южная росичка кровяная райграс плевел жесткий лисохвост зеленый канатник вьюнок пурпурный высокий щирица колосистая горчица дикая А-87774-2                   125 5 5 4 5 5 5 5 5 5 А87774-3                   500 5 5 5 5 5 5 5 5 5 125 2 5 0 1 5 5 5 5 5

Исходя из этих результатов было обнаружено, что соединение A-87774-3 также обладает превосходными гербицидными действиями на широкий диапазон сорняков.

Тестовый пример 4

Тест обработки почвы

В пластмассовый горшок [10×15×3 см (высота)], в который помещали почву из затопляемого поля, высаживали 7 типов видовых растений и через 1 день после этого поливали в качестве обработки раствором препарата, содержащим 50 мг/л или 12,5 мг/л A-87774-2 или A-87774-3, степень подавления роста изучали через 14 дней. Дозировка раствора препарата составляла 500 г/га и 125 г/га соответственно. Гербицидное действие оценивали по 6-бальной шкале от 5 (отсутствие прорастания) до 0 (отсутствие действия). Эти результаты показаны в Таблице 7.

Таблица 7 Доза соединения (г/га) A-87774-2 A-87774-3 ежовник южная росичка кровяная райграс канатник вьюнок пурпурный высокий щирица колосистая горчица дикая ежовник южная росичка кровяная райграс канатник вьюнок пурпурный высокий щирица колосистая горчица дикая 500 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 125 1 5 5 0 5 5 5 4 5 5 0 5 5 5

Исходя из этих результатов было обнаружено, что соединения A-87774 проявляют превосходные гербицидные действия также при обработке почвы.

Тестовый пример 5

Тест обработки затопляемого поля

В емкость диаметром 6 см, в которую помещали почву из затопляемого поля и заполняли водой с последующим рыхлением, помещали семена или клубни 6 типов сорняков из затопляемого поля. Через 2 дня после этого поливали в качестве обработки раствором препарата, содержащим 50 мг/л A-87774-2 или A-87774-3, и изучали степень подавления роста спустя 26 дней после этого. Дозировку раствора препарата установили 500 г/га. Гербицидное действие оценивали по 6-бальной шкале от 5 (отсутствие прорастания) до 0 (отсутствие действия). Эти результаты показаны в Таблице 8.

Таблица 8 Доза соединения (г/га) A-87774-2 A-87774-3 ежовник ранний японский камыш стрелолист карликовый стрелолист сыть поздноцветущая курогувай ежовник ранний японский камыш стрелолист карликовый стрелолист сыть поздноцветущая курогувай 500 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

Исходя из этих результатов было обнаружено, что соединения A-87774 также проявляют превосходные гербицидные действия на сорняки затопляемого поля.

Промышленная применимость

Новые соединения A-87774-1, A-87774-2 и A-87774-3 по настоящему изобретению обладают превосходным гербицидным действием и регулирующим действием на рост растений и полезны в качестве агрохимиката (в частности, гербицида для сельского хозяйства и садоводства и регулятора роста растения).

Депозитарный номер

FERM BP-10840

Группа изобретений относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложены соединения A-87774, представленные соединениями A-87774-1, A-87774-2, A-87774-3 или их солью, способ получения соединений A-87774, штамм Streptomyces sp. FERM BP-10840, продуцирующий соединения A-87774, продукт культуры, получаемый посредством культивирования штамма Streptomyces sp. FERM BP-10840, способ удаления сорняков и способ регулирования роста растения с применением указанных соединений, а также гербицид и регулятор роста растений, содержащий продукт культуры или указанные соединения в качестве активного ингредиента. Соединения A-87774 обладают превосходным гербицидным и регулирующим рост растений действием, легко разлагаются в окружающей среде. 12 н. и 1 з.п. ф-лы, 9 ил., 8 табл., 7 пр.

1. Соединение A-87774-1, обладающее гербицидной активностью и способностью регулировать рост растений, имеющее следующие свойства:
1) Молекулярный вес: 668,
2) Молекулярная формула: C₁₈H₂₉N₄O₁₇PS₂,
3) Спектр ¹Н-магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 5,86 (1H, д, J=5,9 Гц), 5,59 (1H, д, J=11,0 Гц), 4,56 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,42 (1H, дд, J=11,2, 2,9 Гц), 4,38 (1H, дд, J=11,2, 3,7 Гц), 4,30-4,27 (2H, м), 4,24-4,23 (2H, м), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 3,97 (1H, дд, J=12,7, 2,1 Гц), 3,61 (1H, дд, J=11,3, 10,3 Гц), 3,55 (1H, м), 3,52 (1H, м), 3,33 (1H, дд, J=11,4, 1,8 Гц), 2,72 (1H, дд, J=7,0, 6,6 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),
4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 174,0 (с), 154,8 (с), 91,4 (с), 89,2 (д), 87,6 (д), 80,8 (д), 74,8 (д), 73,5 (д), 70,2 (д), 70,2 (д), 70,0 (т), 63,7 (д), 60,6 (д), 53,8 (т), 36,5 (т), 30,3 (т), 18,3 (кв),
5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3423, 1703, 1639, 1487, 1450, 1406, 1383, 1339, 1258, 1217, 1184, 1088, 1067, 937, 899, 827, 536, и
6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+40,0° (с, 0,22, в H₂O),
или его соль.

2. Соединение A-87774-2, обладающее гербицидной активностью и способностью регулировать рост растений, имеющее следующие свойства:
1) Молекулярный вес: 666,
2) Молекулярная формула: C₁₈H₂₇N₄O₁₇PS₂,
3) Спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса (δ_ppm) при измерении в дейтерированной воде: 7,73 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,91 (1H, д, J=2,4 Гц), 5,90 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,60 (1H, д, J=10,8 Гц), 4,57 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,55 (1H, д, J=11,4 Гц), 4,46 (1H, дд, J=11,2, 2,2 Гц), 4,34-4,32 (3H, м), 4,22 (1H, д, J=12,6 Гц), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 3,96 (1H, дд, J=12,6, 1,7 Гц), 3,61 (1H, дд, J=11,4, 10,1 Гц), 3,32 (1H, д, J=11,4 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),
4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 166,3 (с), 151,8 (с), 141,7 (д), 102,8 (д), 91,3 (с), 89,3 (д), 89,2 (д), 81,5 (д), 74,8 (д), 73,5 (д), 73,4 (д), 69,5 (д), 69,4 (т), 63,7 (д), 60,6 (д), 53,8 (т), 18,3 (кв),
5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3399, 1706, 1455, 1405, 1346, 1266, 1185, 1087, 1067, 934, 900, 826, 534, и
6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+47,2° (c, 1,0, в H₂O),
или его соль.

3. Соединение A-87774-3, обладающее гербицидной активностью и способностью регулировать рост растений, имеющее следующие свойства:
1) Молекулярный вес: 828,
2) Молекулярная формула: C₂₄H₃₇N₄O₂₂PS₂,
3) Спектр ¹Н-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 7,74 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,94 (1H, д, J=5,3 Гц), 5,91 (1H, д, J=8,1 Гц), 5,60 (1H, д, J=11,0 Гц), 5,01 (1H, уш.с), 4,57 (1H, кв, J=6,9 Гц), 4,57 (1H, м), 4,50-4,48 (3H, м), 4,41 (1H, м), 4,22 (1H, д, J=12,5 Гц), 4,07 (1H, д, J=10,1 Гц), 4,04 (1H, дд, J=3,3, 1,8 Гц), 3,96 (1H, дд, J=12,5, 1,3 Гц), 3,87 (1H, д, J=12,3 Гц), 3,85 (1H, м), 3,71 (1H, дд, J=12,3, 4,4 Гц), 3,63-3,61 (3H, м), 3,32 (1H, д, J=11,4 Гц), 1,42 (3H, д, J=6,9 Гц),
4) Спектр ¹³C-ядерного магнитного резонанса (δ_м.д.) при измерении в дейтерированной воде: 178,6 (с), 166,3 (с), 151,8 (с), 141,6 (д), 102,9 (д), 100,3 (д), 91,3 (с), 89,2 (д), 89,1 (д), 80,2 (д), 74,8 (д), 74,1 (д), 73,8 (д), 73,5 (д), 72,2 (д), 70,3 (д), 69,9 (д), 69,3 (т), 66,8 (д), 63,7 (д), 61,0 (т), 60,6 (д), 53,7 (т), 18,3 (кв),
5) Спектр поглощения в инфракрасной области (ν_макссм^-1) при измерении посредством KBr диска: 3396, 1705, 1402, 1340, 1265, 1184, 1090, 1063, 937, 899, 825, 538, и
6) Удельное оптическое вращение: [α]_D ²⁴+78,7° (C, 1,0, в H₂O),
или его соль.

4. Штамм Streptomyces sp. FERM BP-10840 - продуцент соединения по любому из пп.1-3.

5. Способ получения соединения по пп.1, 2 или 3, включающий культивирование штамма Streptomyces sp. FERM BP-10840 по п.4, и получение соединения по пп.1, 2 или 3 из культуры.

6. Гербицид, содержащий соединение по пп.1, 2 или 3 в качестве активного ингредиента.

7. Регулятор роста растения, содержащий соединение по пп.1, 2 или 3 в качестве активного ингредиента.

8. Способ удаления сорняков, включающий обработку сорняков или почвы соединением по пп.1, 2 или 3.

9. Способ по п.8, где сорняками являются сорняки на поле на возвышенности и/или сорняки на затопляемом поле.

10. Способ регулирования роста растения, включающий обработку органа растения соединением по пп.1, 2 или 3.

11. Продукт культуры, получаемый посредством культивирования штамма Streptomyces sp. FERM BP-10840 согласно п.4, обладающий гербицидной активностью и способностью регулировать рост растений.

12. Гербицид, содержащий продукт культуры по п.11.

13. Регулятор роста растений, содержащий продукт культуры по п.11.