(21)4027022/28-13
(22)04.02.86
(31)2060J/1985
(32)05.02.85
(33)JP
(46) 30.11.88. Вюл. № 44
(71)Санкио Компани Лимитед (JP)
(72)Тацуо Ханейси, Муцуо Накадзима, Акио Ториката, Такао Оказаки, Манабу Тодзигамори и Кацухико Кавакубо (JP) (53) 576.8(088.8)
(56) Патент США № 4263036, кл. А 01 N 63/00, 1981.
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕРБВД1ЩА № 51262
(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способу получения нового гербицида, именуемого как вещество 51262. Цель изобретения - получение нового более эффективного гербицида. Способ заключается в культивировании актиномицета Streptomyces hygrosco- picus PERM на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота в минеральные соли, с последующим удалением биомассы и выделением целевого продукта из куль- туральной жидкости и его очисткой. Полученный гербицид более эффективен по сравнению с биолафосом, 4 табл., 3 ил.
СО
с
1 | tc
о о
со
сн
11442063
Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности, к способу получения гербицидов, а именно - нового соединения, именуемого как вещество № 51262, которое проявляет гербицидную активность и способность тормозить рост растений.
Цель изобретения ,- получение HOBO-JQ элементов. В процессе культивироваго более эффективного гербицида.
Структура вещества № 51262 не выяснена в достаточной мере. Оно имеет следующие характеристики:
Внешний вид: нейтральные, бесцвет- 5 ные кристаллы.
Удельное вращение: al +28,8 (,04, Н20, D - линия натрия). С 38,54; Н 4,62;
N
Вычислено,, 12,84. C-,H oN20g
20
ния в жидкой среде можно использовать противовспениватели, такие как силиконовое, растительное масла или подходящие ПАВ.
Культивирование проводят при нейтральной рН и температуре 24-38°С, наиболее предпочтительно при температуре около 28 С.
Продуцирование вещества № 51262 в процессе культивирования контролируют путем оценки ингибирующей активности культуральной жидкости по отношению к чувствительным видам растений, таких как Brassica Кара (L) var. Komatsuna (Комацуна).
Найдено,%: С 38,55; Н 4,53; N12,9
Температура плавления кристаллов :i87-189°C.
Молекулярная масса 218 м/е.
УФ-спектр (см.фиг.1): отсутствуют максимумы поглощения вьше 220 нм в водном растворе.
ИК-спектр для таблетки КВ пред- ставлен на фиг. 2. ,
ЯМР-спектр (сГ, ррт), замерен на 400 МГц в тяжелой воде с использованием тетраметилсилана в качестве внешнего эталона, (см.фиг.3).
Растворимость: растворимо в воде, метаноле и эт аноле, нерастворимо в этилацетате и ацетоне.
Цветовые реакции: положительные для реакций с серной кислотой, ани- сальдегидом (серной кислотой и пер- манганатом калия).
Тонкослойная хроматография: значение Rf 0,3 на пластине силикагеля № 5715 ( фирма Мерк Ко, проявление смесью 50:10:2 по объему этилацетата изопропанола и воды.
Способ получения гербищща № 5126 заключается в следующем-.
Штамм актиномицета Streptomyces hydroscopicus (FERMBP-958)AnK 63584 культивируют в жидкой питательной среде при перемещиванйи и аэрации. Питательная среда содержит источники углерода, азота, минеральные соли. В качестве источника углерода могут быть использованы глюкоза, мальтоза, сахароза, маннит, мелассы, глицерин, декстрин, крахмал, соевое масло и хлопковое масло, из источников азота
соевая, арахисовая, хлопковая мука, рыбная мука, экстракт кукурузы, пептон, мясной экстракт, прессованные дрожжи, дрожжевой экстракт, нитрат натрия, аммония или сульфат аммония, из солей - хлористый натрий, фосфаты, карбонат кальция и, при необходимости, соли металлов в виде микро5
0
5
0
5
0
5
0
5
ния в жидкой среде можно использовать противовспениватели, такие как силиконовое, растительное масла или подходящие ПАВ.
Культивирование проводят при нейтральной рН и температуре 24-38°С, наиболее предпочтительно при температуре около 28 С.
Продуцирование вещества № 51262 в процессе культивирования контролируют путем оценки ингибирующей активности культуральной жидкости по отношению к чувствительным видам растений, таких как Brassica Кара (L) var. Komatsuna (Комацуна).
Наибольший вьЕфд вещества № 51262 наблюдается после культивирования в течение 60-120 ч. Однако этот период может колебаться в зависимости от условий и методов культивирования, может быть приемлемым более короткий или более длительный период каждого конкретного случая путем экспериментирования, с использованием подходящих методов контроля.
Вещество № 51262 растворимо в воде, выделяется, главным образом, в культуральную жидкость, я может быть выделено путем удаления сухого вещества, включая мицелий, например фильтрованием, предпочтительно с использованием фильтровальных средств, таких как диатомит, или центрифугированием. Оно может быть затем вьще- лено из отделенной жидкой части традиционными методами на основе его специфических физико-химических свойств и с последующей очисткой при необходимости.
Вещество № 51262 отделяют от других продуктов с помощью адсорбента, либо адсорбированием примесей, либо адсорбированием вещества- № 51262, либо адсорбированием того и другого отдельно или вместе с последующим элюированием вещества № 51262. Может использоваться широкий ассортимент адсорбентов, в частности активированный уголь смолоподобные адсорбенты, такие как Амберлит (зарегистрированный товарный знак) XAD-2, XAD-4 или XAD-7 (производства фирмы Ром энд Хаас), и Диайон (зарегистрированный товарный знак) HP 10, НР20, CHP20F или НР50 (производства фирмы Мицубиси кемикл индастриз). Присутствующие в жидкой части примеси могут быть удалены пропусканием содержащего вещество № 51262 раствора через слой или колонку с одним или несколькими упомянутыми адсорбентами или адсорбированием вещества № 51262 на одном или нескольких адсорбентах с последующим его элюи- рованием подходящим элюентом, в частности смесью метанола, ацетона или бутанола с водой,
Полученное вещество № 51262 может быть дополнительно очищено различными средствами, например распределительной хроматографией в колонке с использованием целлюлозного продукта, такого как Авицел (зарегистрированный товарньй знак продукции фирмы Асахи кемикл индастриз) или Сефа- декс LH-20 (зарегистрированный товарный знак продукции фирмы ФармаШвеция), Примеси, присутствую- зо ного порошка, гранул, микрогранул.
40
ция,
щие в жидкой части, содержащей вещество № 51262, могут быть также удалены адсорбированием их на различных катионообменных смолах (сильных или слабых), таких как Дауэкс 50У(зарегистриг- рованный товарный знак продукции фирмы Дау кемикл) или Амберлит 1КС-50(за- регистрированньш товарный знак продукции фирмы Ром энд Хаас) или же на анионобменной смоле, такой как Дауэкс Г или Диайон W А10.
Дальнейшая очистка вещества № 51262 может быть осуществлена с помощью хроматографии с использованием сшшка- геля (при необходимости),
Вещество № 51262 проявляет гер- бицидную активность, а также способность тормозить рост растений. Под гербицидной активностью имеется в виду то, что вещество подавляет рост растений и может, в конечном счете, привести к их гибели. С другой стороны, под способностью тормозить рост растений имеется в виду то, что вещество тормозит или подавляет рост растений, не давая таких признаков гербицидной активности, которые проявлялись бы в некрозе или гибели растений. Реакция растения на вещество
(проявление гербнцидного эффекта или эффекта торможения роста) коле лется в зависимости от метода нане сения или применения, концентрации вещества № 51262 и чувствительности обработанного растения к веществу. Соединение проявляет гербицидную активность по отношению к различным
10 сорнякам и применимо перед и после всходов. Гербицид может быть нанесен на листву растений. Вещество мо жет тормозить рост растений, не вызывая их гибели. Оно пригодно для
15 предотвращения полегания рисовых растений благодаря укорочению соломы рисового растения, для уменьшения продолжительности или частоты скапшвания, пасынкования шш обрез20 ки благодаря торможению роста травянистых и садовых растений, для обеспечения карликовости цветущих растений и т.п,
Вещество № 51262 может быть ис25 пользовано самостоятельно или в сме си с носителем и/или добавками. Кон позиция может быть представлена в различных видах, -например, может быть составлена в виде дуста, крупсмачиваемого порошка, водорастворимого порошка или жидкого препарата Необязательно использовать совершенно чистую форму вещества № 51262 в связи с чем очистка может быть пр остановлена на любой стадии, а результирующее сырое вещество может быть употреблено в качестве активного ингредиента композиции.
Используемые в такой композиции носители могут быть синтетическим или природным, органическим или неорганическим веществом, и их смешивают с соединением для облегчения 45 хранения, транспортировки и обращения с активным ингредиентом или же для того, чтобы,способствовать гаг- рации активного ингредиента в расте ние, В качестве твердых носителей могут быть использованы глина, таль диатомит, каолин, бентонит, карбона кальция, гипс, синтетический осажде ный кремнезем, аттапульгит, цеолит или пемза, такие синтетические и на туральные смолы, как кумароновая см ла, алкидние смолы, полихлорвинил, сложноэфирная или ксантановая камед такие воски, как карнаубский воск и парафин-, и другие органические мат
50
(проявление гербнцидного эффекта или эффекта торможения роста) колеблется в зависимости от метода нанесения или применения, концентрации вещества № 51262 и чувствительности обработанного растения к веществу. Соединение проявляет гербицидную активность по отношению к различным
сорнякам и применимо перед и после всходов. Гербицид может быть нанесен на листву растений. Вещество может тормозить рост растений, не вызывая их гибели. Оно пригодно для
предотвращения полегания рисовых растений благодаря укорочению соломы рисового растения, для уменьшения продолжительности или частоты скапшвания, пасынкования шш обрезки благодаря торможению роста травянистых и садовых растений, для обеспечения карликовости цветущих растений и т.п,
Вещество № 51262 может быть использовано самостоятельно или в смеси с носителем и/или добавками. Кон- позиция может быть представлена в различных видах, -например, может быть составлена в виде дуста, круп0
смачиваемого порошка, водорастворимого порошка или жидкого препарата. Необязательно использовать совершенно чистую форму вещества № 51262, в связи с чем очистка может быть приостановлена на любой стадии, а результирующее сырое вещество может быть употреблено в качестве активного ингредиента композиции.
Используемые в такой композиции носители могут быть синтетическим или природным, органическим или неорганическим веществом, и их смешивают с соединением для облегчения 5 хранения, транспортировки и обращения с активным ингредиентом или же для того, чтобы,способствовать гаг- рации активного ингредиента в расте-, ние, В качестве твердых носителей могут быть использованы глина, тальк, диатомит, каолин, бентонит, карбонат кальция, гипс, синтетический осажденный кремнезем, аттапульгит, цеолит или пемза, такие синтетические и натуральные смолы, как кумароновая смола, алкидние смолы, полихлорвинил, сложноэфирная или ксантановая камедь, такие воски, как карнаубский воск или парафин-, и другие органические мате0
риалы, такие как ореховая скорлупа (нагфимер, грецких и других орехов) или соевый порошок. В качестве жидких носителей используют воду и спирты, такие как метанол, этанол, изопропа- нол или этиленгликоль.
Композиция может содержать поверхностно-активное вещество (ПАВ), способствующее диспергированию, смачива- нию или распределению композиции. Анионные ПАВ вводят в виде натриевой и кальциевой соли лигнинсульфоновой кислоты, олеата натрия, додецилбензолВегетативные гифы штамма ЗАЖ 5358 растут хорошо, с ветвлением, на срес ветвлением, дах ISP при в течение 14 сут
сульфоната натрия, диалкилсульфосук- g цинаты натрия, натриевой, аммониевой и аминовой соли полиоксиэтиленалкил- арилэфирсульфат.ов или полиоксиэтилен- алкилэфирсульфатов или свободных кислот или солей полиоксизтиленалкиларШ1-2л бой в основном замкнутую спираль, эфирфосфатов или полиоксиэтиленалкил- Поверхностная.структура цепочки спор
При микроскопическом изучейии на воз душных гифах наблюдаются простые вет вления. Цепочки спор представляют со
фосфатов, Из катионньк ПАВ используют высшие алифатические амины и конденсаты окиси зтилена с такими нами, как хлориды четвертичного аммония, N-алкиламинацетаты и N-алкил- аминоксиды. Из амфотерных ПАВ используют бетаины и ПАВ типа аминокислот. Из неионогенных ПАВ вводят глицерид- ные и сахарозные сложнью эфиры жирных кислот, конденсаты окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, конденсаты окиси этилена с алкил- фенолами или апкилнафтолами, амиды или этоксилированные амиды высших жирньк кислот, высшие жирнокислотные сложные, эфиры сорбита или этоксшш- рованных сорбитов, высшие жирнокислотные сложные эфиры глицерийборатов или этоксилированных глицеринборатов и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена.
Композиции могут содержать защитные коллоидальные вещества, такие как желатин, гуммиарабик, ::казеин, поливиниловый спирт или карбоксиме- тилцелпюлозу, или загустители, такие как полифосфат натрия или бентонит. Для расширения применимости и экономии трудовых затрат композиция может быть скомбинирована с фунгицидами, инсектицидами, другими гербицидами, регуляторами роста растений или удобрениями.
Используемый штамм актиномицета идентифицирован по Краткому определению бактерий Вергй, Mi, Мир, 1980 т. 2, Actonomycetes-штамму присвоен № 8АПК 63384. Он депонирован в Институте ферментационных исследований Агенства промьшшенной науки и техники Министерства международной торговли и промьшшенности, Япония, где ему присвоен номер PERM Р-8004, и повторно депонирован в Институте ферментационных исследований с присвоением номера FERM ВР-958.
Штамм имеет следующие характеристики.
Морфологические и культуральные признаки.
Вегетативные гифы штамма ЗАЖ 5358 растут хорошо, с ветвлением, на срес ветвлением, дах ISP при в течение 14 сут
бой в основном замкнутую спираль, Поверхностная.структура цепочки спор
бой в основном замкнутую спираль, Поверхностная.структура цепочки спор
При микроскопическом изучейии на воздушных гифах наблюдаются простые ветвления. Цепочки спор представляют со5
бородавчато-складчатая. Не наблюдается специальных органов, таких как склероции, фрагментированные вегера- 5 тивные гифи или спорангии.
Воздушный мицелий увлажняется и чернеет в процессе культивирования. Растворимый пигмент не продуцирует. В табл. 1 представлена характеристи- Q ка роста и колоний штамма, полученных после культивирования в течение 14ч при 28°С, на различных стандартных средах.
Физиологические свойства:
Гидролизует крахмал. Разжижает желатин. Восстанавливает нитрат. Молоки не коагулирует. Молоко пептони- зирует. Растет при температуре (среда 1) 11-4б с. Оптимальная температура роста (среда 1) 24-38°С. Растет на среде 1, содержащей 7% NaCl, при содержании 10% - роста нет. Разлагает казеин и тирозин. Не разлагает ксантин. Меланоидный пигмент на средах 1, 3, 4 не образует. Меланоид- ного пигмента (среда 3) нет. Вьфабот- ки меланоидного пигмента (среда 4) нет.
Используемые среды:
Среда 1: агар на дрожжевом и солодовом экстрактах (ISP2),
Среда 2: триптоно-дрожже- экстрактовый бульон (ISP 1),
Среда 3: пептоно-дрожже-экстрак- товый агар с железом (ISP 6),
Среда 4: тирозиновый агар (ISP 7),
Использование источников углерода изучали, применяя безальноагаровую с cjpegy Придхэма-Готлиба после инкуби0
5
0
5
рования штамма 6358А в течение 14 сут. Поскольку штамм SANK 63584 может расти, в базальной среде без введения дополнительного источника углерода, довольно трудно точно описать его способность использовать источники углерода. Ниже показана степен относительного использования источников углерода.В качестве контроля использовали базальную среду, обозначено знакомС -).
Отношение к источникам углерода:
D-глюкоза + L-арабиноза i D-ксилоза i
инозит D-маннит - используется.
D-фруктоза +
L-рамноза сахароза - раффиноза - контроль - - слабо используется, - - не используется).
Компоненты цельной клетки.
Стенки клеток штамма Streptomyces hygroscopicus 8АЖ 63584 содержат Ь,Ъ-диаминопимелитовую кислоту и глицин.
Пример 1. Культуру Strepto- nycessp. штамм SANK 63584 инокули- руют в четыре колбы Эрленмайера по 500 мл, каждая из которых содержит 80 мл среды, имеющей следующий состав, мас.%:
Глюкоза3
ДрОЯЕЖИ1
Соевая мука 3
Карбонат кальция 0,4
MgS04-7H-iO 0,2
Противовспениватель
(Ниссан Дисфоум
СВ-442, изготовляемый фирмой Ниссан
кемикл индастриз) 0,01
Вода до рН 7,2
.до стерилизации 100
Затем штамм культивируют на качалке при 220 об/мин в течение 72 ч при 28°С.
2 мл полученной культуры засевают в 130 колб Эрлекмайера по 500мл, каждая из которых содержит 80 мл описанной среды, и культивируют на качалке при 220 об/мин в течение 96 ч при . Полученные культураль ные бульоны и смывки.смешивают, в объеме 11,4 л, смешивают и добавляют 1 кг Целита 545 (товарный знак на продукции фирмы Джонз Мэнвилл про дактс - смесь фильтруют с получением 1 1 л фильтрата, имеющего рН 7,1. Затем фильтрат пропускают через хро
матографическую колонку, заполненную 3 кг активированного угля (продукт производства фирмы Вакр пьюр кемиклз g индастриз) для адсорбирования веще10
,
ства № 51262,
Колонку промывают 4,5л деиони- зованной воды, а затем целевое вещество элюируют 15 л 10%-ного (по объему) водного ацетона. 16 л активного элюата конденсируют упариванием при пониженном давлении, а затем лиофизуют : с получением 61 г сьцро- го порошка, содержащего целевое ве15 щество № 51262. Полученный сырой порошок может быть использован как таковой для агрохимического употребления .,
Затем сырой порошок адсорбируют
20 на хроматографической колонке, содержащей 500 мл Авицела, который предварительно уравновешен ацето- нитрилом. После этого колонку злюиру- ют 2 л ацетонитрила, 3 литрами 97%25 ного (по объему) водного ацетонитрила и 6 л 85%-ного (по объему) ацетонитрила. Элюат собирают фракциями по 1 л каждая. Установлено, что целевое вещество № 51262 присутствует во
30 фракциях с 6-й по 9-ю. Эти фракции объединяют, конденсируют упариванием при пониженном давлении, а затем лио- филизуют с получением 4,6 г порошка. Порошок растворяют в небольшом
35 количестве 50%-ного (по объему) водного метанола и адсорбируют на дексе LH-20 в колонке, которую предварительно уравновешивают 50%-ным (по объему) водным метанолом. Колон40 ку элюируют, используя 50%-ный (по объему) водный метанол, элюат собирают фракциями по 15 мл. Фракции № 36-50 содержат целевое вещество № 51262, их собирают, объединяют,
45 конденсируют упариванием при пониженном давлении и вновь пропускают через ту же колонку с Сефадексом LH-20. Элюированные фракции собирают и лиофштизуют, получают 334 мг образца вещества № 51262 чистотой около 70%.
300 мл этого образца адсорбируют в колонке с силикагелем, которую предварительно уравновешивают смесью 10:1 по объему хлороформа и метанола. Целевое вещество элюируют смесью 6:1 По объему хлороформа и мета- . нола и элюат собирают фракциями по 15 мл. Фрак1щи № 22-60 собирают.
50
55
91
объединяют, конденсируют упариванием при пониженном давлении, а затем подвергают тонкослойной хроматографии на силикагеле, используя смесь 50:10:2 по объему этилацетата, изо- пропанола и воды в качестве прояви- тельного растворителя. Целевое вещество экстрагируют смесью 6:1 по объ му хлороформа и метанола. Экстракт конденсируют упариванием при пони- женном давлении, а затем лиофилизу- ют.
Получают 25,5 мг вещества № 51262 в виде бесцветного порошка, имеющего следующие характеристики.
Внешний вид: нейтральный, бесцветный порошок.
Удельное вращение: ofJ +24,4° (С 0,61, , D-линия натрия),
Вычислено,%: С 35,59i Н 5,08; N 11,86.
Найдено,%: С 35,65; Н 5,00; N 11,71, и т.д. все характеристики вещества № 51262,
Пример 2. 260 мг частично очищенного вещества № 51262 получают по примеру 1 (до стадии, на которой получают сырой образец чистотой око- ло 70%). Это частично очищенное соединение растворяют в небольшом количестве воды. Раствор адсорбируют на колонке, содержащей 300 мл Диай- она СНР-29Р, и элюируют водой. Элю- ат собирают фракциями по 5 мл и целевое вещество № 51262 элюируют в фракциях № 61-67, даюшдх одно пятно на тонкослойной хроматографии. Эти фракции объединяют, конденсируют упари-
ванием при пониженном давлении и лио- филизируют.
Получают 41 мг целевого вещества № 51262 в виде бесцветного порошка. Все характеристики соответствуют.
Пример 3. Получение кристаллического вещества № .
Методику по примеру 2 повторяют с получением 130 мг вещества № 51262 в виде бесцветного порошка. Весь этот порошок растворяют в горячем ацетоне и охлаждают. Отделившиеся кристаллы собирают.
Получают 37 мг вещества № 51262 в виде бесцветных игл. Характеристики соответствуют.
Пример 4. Получение вещества в виде гранул.
3
10
После культивирования по примеру 1 культуральный бульон адсорбируют в колонке с активированным углем. Активную фракцию, элюированную 10%-ным (по объему) ацетоном, упаривают до с хого остатка при пониженном давлении с получением сырого порошка. Этот/ сырой порошок растворяют в воде с получением 50%-ного (по массе) водного раствора и его адсорбируют на гранулированной пемзе (размер 10-48 меш по Тайлеру (0,295-1,651 мм), получая гранулы .
Пример 5. Получение смачиваемого порошка.
50 мае.ч. Сырого порошка, 3 мае.ч. додецилбензосульфоната натрия, 2 мае.ч.
поливинилового спирта и 45 мае.ч. глины смешивают при обеспечении однородности и пульверизируют, получая смачиваемый порошок.
Пример 6. Получение вещества в виде водорастворимого порошка.
50 мае.ч. вещества № 51262, 2 мае,ч. вещества № 51262, 2 мае.ч. полиокси- этиленапкилфенилового эфира, 10 мае.ч. еинтетичеекого кремнезема и 38мае.ч. еульфата аммония равномерно смешивают, получая водораетворимый порошок.
Пример 7. Получение жидкого препарата.
10 ч, вещества № 51262 и 2ч ла- урилеульфата натрия равномерно растворяют в 88 ч. метанола, получая жидкий препарат.
Пример 8, Получение жидкого препарата.
10 ч. вещеетва № 51262 и 2 ч. до- децилбензолсульфоната натрия растворяют в 88 ч. воды, получая жидкий препарат.
Пример 9. Эффект ингибиро- вания прораетания еемян комацуна,
Стерилизованную вату помещают на дно пробирок (10 X 100 мм) высотой около 5 мм. В одной пробирке вату пропитывают 0,5 мл диетиллированнрй воды, в других - водным раствором, содержащим вещество № 51262 в различных концентрациях, В каждую пробирку помещдют около 10 еемян раетения ко мацуна и вьщерживают 3 еут при 28 С для определения ингибирующей концентрации вещеетва № 51262, оцениваемой по наличию или отсутствию прорастания семян. Минимальной ингибирующий концентрацией вещеетва № 51262 в отноше11
комацуна явля
НИИ прорастания семян ся 3,13 мкг/мл.
Пример 10. Испытание на пре всходовую обработку почвы.
Пластмассовый горшок заполняют верховой почвой с обеспечением площади поверхности около 150 см , затем на почву высевают семена последующих однолетних сорняков Sefaria faberi Hernn sigitaria sanguinalis (L)Scorp , Echinochloa crus-galli(L) Beauv. Setari viridis(L)Beauv, Ana ranthusretroflexus L, Brassica ajrven sis(L)Kuntrei Chenopodium album L, Ambrosia Artemsicfolia L, Abutilon theophrasti Medic, and Sida spinoaa затем их покрывают слоем по,чвы.
Спустя сутки после высева семян, водный раствор вещества № 51262 рав мерно разбрызгивают по почве в количестве 15 мл на горшок. Затем горшк ставят в тешшцу на 3 недели, после истечения которых наблюдают роит соняков . Гербицидный эффект вещества № 51262 оценивают, сравнивая рост обработанных растений с контролем, который не был обработан.
Результаты приведены в табл. 2.
Пример 11. Обработка листв
Семена сорняков высевают в горшк покрьшают слоем почвы и оставляют в теплице. Спустя 10 сут после высева водньй раствор вещества № 51262 смешивают с 0,03 мас.% распределительного средства Грамин S (товарный знак фирмы Санкё). В каждый горшо разбрызгивают 5 мл полученного раствора. Спустя 10 суток после обработки наблюдают рост сорняков и гер бицидный эффект вещества № 51262.
Результаты опыта представлены в табл. 3.
Пример 12. Торможение рост растений.
Пластмассовый горшок заполняют верховой почвой с обеспечением площади поверхности почвы 150 см. Вы
12 семена заливного риса, сои
бобов, кукурузы и хлопчатника. Клубни многолетних сорняков, сыти пупур- ной (Cyperusrotondus), высаживают в каждьй горшок и семена и клубни покрывают той же почвой. Горшки помещают в теплицу на 10 сут. Готовят водные растворы вещества Р 51262 (по примеру 11) до требуемых концентраций, и вносят 0,03 об.% распредели- ного средства Грамин S, 5 мг полученного раствора разбрызгивают на почву каждого горшка. Рост растений сравнивают спустя 2 недели с контролем, который не подвергался такой обработке. У растений, обработанных 125 м.д. вещества № 51262, наблюдалось торможение роста у 50% ёсех растений, тогда как в горшках, обрабо- танных 500 м.д. вещества № 51262, наблюдалось почти полное подавление роста побегов и корневища сыти.
Пример 13. Испытание вещества № 51262 на токсичность.
Раствор вещества № 51262 внутривенно вводили в количестве 100 мг на 1 кг массы тела. .Мьш1ей наблюдали в течение 14 сут и не было выявлено никаких аномалий.
Сравнительные данные по эффективности гербицида № 51262 и Биалафос представлены в табл. 4.
Испытания осуществляли по примеру 11 при концентрации 250 ч/мпн.
Формула изобретения
Способ получения гербицида №51262 путем культивировануш актиномицета streptomyces hygroscopicus FERM ВР- 958 на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, при перемешивании и аэрации, при температуре 24-38°С с последующим удалением биомассы и вьщелением целевого продукта из куль- туральной жидкости.
13
Сахарозонитрат ный агар
Сахарозо-нитратный
агар
Глюконо-аспара- гиновый агар
Глицерин-аспара- гиновый агар
(ISP 5)
Крахмальный агар с неорганическим солями (ISP 4)
Тирозиновый агар (1SP 7)
Пептоно-дрожжевой экстракт в агаре с железом (ISP 6)
1442063
14 Таблица 1
Менее хороший, плоские, бледно-желто- оранжевые (2-9-9)
Слабосформированный, бархатистый, коричневато-белый (1-6-6)
Бледно-коричневая (2-8-9)
Отсутствует .
Хороший, плоские, бледно-желтовато- оранжевые (2-9-9) Слабосформированный, бархатистый, бел
Бледно-желтовато-оранжевая (2-9-9) Отсутствует
Обильный, плоские, бледно-желтовато- оранжевые (2-9-9)
Менее хороший, бархатистый, бельм Бледно-желтовато-оранжевая (2-9-9) Отсутствует
Обильный, плоские, бледно-желтовато- коричневые (6-7-9)
Обильносформированный, бархатистьй, коричневато-серый (1-5-6)
Желтовато-коричневый (6-6-8) Отсутствует
Обильный, плоские, бледно-желтовато- коричневые (4-8-9)
Менее хороший, бархатистый, белый Желтовато-коричневый (6-7-8) Отсутствует
Обильный, плоские, бледно-желтовато- коричневые (4-8-9)
,
Слабосформированный, бархатистый, бе
Водный, агар
Агар на картофельном и морковном экстрактах
Примечание.
Р - рост; ОС - обратная сторона, ВМ - воздушный мицелий; РП - растворимые пигменты.
Названия цветов и номера проставлены согласно справочнику Guide to Color standard, опублик. Ниппон сикисай кэнкюсе, Токио, Япония.
-f
коричневато-белый (1-6-6) Желтовато-коричневый (6-8-8) Отсутствуют
Плохой, плоские, бледно-желтовато-оранжевые (2-9-9)
Менее хороший, бархатистый, светло-кори невато-бельм (2-8-7)
Светло-коричневато-серый (2-8-7) Отсутствует
Плохой, плоские, бледно-желтовато-оранжевые (2-9-9)
Менее хоропшй, бархатистый, коричневато серый (1-5-6)
Светло-коричневато-белый (1-7-6) Отсутствует
1714А206318
Таблица 2
Примечание. Икгибирование роста 0-5% - эффективность О;
6-30% - i; 31-50% - 2; 51-70% - 3; 71-95% - 4; 96-100% - 5.
Т а б л и ц а 3
Широколистные сорняки Amaranthus retroflexus L.
Примечание, а- Мятлик однопетниЯ (роа annua)j Ь - просо куриное
(echinochloa crus-galli); с - костер бесплодный (bromufi sterillis); d - спорынья (blackgrass) (alopecrus myoeurol- das); e - лисохвост гигантский (setaria faberi); f - copro Алелпское (eorghuraHalepease);g-OBcnr(avena atue);h-лодма- реннйк (galium арат1пе){ i - ясколка (stellaria iKdia), j дурнишник 8canthium pensylvanicusn) к - Field puney (viola arveosis)} 1 - дурман обыкновенный (datyra stranoalum) j m - марь белая chenopodium album); n - вьюнок пурпурный (ipomoea purpu ea); о - Prickly eidb (side epinosa)} p - амброзия полынолистная (ambrosia astemisii folia)i g канатник теофраста (abutilon theophrastis); r - горчица белая (brassicaarvensis).
Продолжение табл.3
Таблица 4
г7% /г/vr
90
Ш 250 300 350 JTO
ftM
фиг. 1
тIIII
000 360ff 280O 20OO 1800 ISOO 12OO 1OOO вОО 650
Ф1/г.2
см
-/
II
650
см
-/
8
0
flfi/ L
ЦЗиг.з
