Способ получения гербицида корнексистин или соответствующей с разомкнутым кольцом кислоты, или ее соли Советский патент 1993 года по МПК A01N63/04 

Корнексистин плохо растворим в воде. Однако, при обработке водой, предпочтительно водой с величиной рН более 4,1, и еще предпочтительнее более 7, он может легко превращаться в кислотное соединение, представленное формулой (II), приведенной выше, которое растворимо в воде и которое может образовывать одно- или двухосновные соли, в зависимости от величины рН. Образуемое кислотное соединение . может быть экстрагировано несмешиваемым с водой органическим растворителем, таким как этилацетат, при кислотном значении рН, например, при значении рН от 3 до 4. В этом случае оно превращается в корнексистин, представленный первоначальной структурной формулой (I).

Корнексистин имеет физико-химические свойства, приведенные ниже:

(1)Внешний вид: жирорастворимые бесцветные иглы;

(2)Точка плавления: 100-103°С;

(3)Удельное вращение: а о23 +168,3° (С 1,0. );

(4)Молекулярная формула: CigHaoOe;

(5)Молекулярный вес: 308;

(6)Спектр ультрафиолетового поглощения Амакс НМ (EicM1);

Спектр ультрафиолетового поглощения, определяемый в метаноле, показывает максимальное поглощение при 238 нм (131);

(7)Спектр инфракрасного поглощения, vM3Kc (KB) см 1: 3400, 3300, 2900, 1850, 1820, 1760. 1710, 1640, 1440, 1300, 1260, 1220, 1160,1060,1000,920,800,760;

(8)Спектр аротонного ядерного магнитного резонанса ( н ЯМР) vMaKc:

Спектр 1Н-ЯМР (270 МГц), определяемый в тяжелом хлороформе с использовани- ем тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта, приведен ниже:

0,93 (ЗН, триплет);

1,29 (2Н, мультиплет);

1,70 (ЗН, дублет);

1,90-2,1 (2Н, мультиплет);

2,57 (1Н, дублет дублетов);

3.1-5(1 Н. дублет);

3,4 (1 Н, мультиплет);

4,07 (1Н, дублет);

5,12 (1Н, дублет дублетов);

5,85 (1 Н, дублет дублетов),

(9)Растворимость: Растворим в этаноле, ацетоне, этилацетате, хлороформе; почти нерастворим в воде; и нерастворим а гексане;

(10)Цветные реакции: положительны к серной кислоте и перманганату калия;

(11)Тонкослойная хроматография: Rf 0.43;

0

Адсорбент: силикагелевая пластина №

5715 (продукт фирмы Мерк энд Ко., Инкорп.); проявляющий растворитель: бензол:метанол:уксусная кислота (8:1:1 по

объему);

(12) Биологическая активность:

Корнексистин обладает ингибирующим прорастание действием на семена высших растений, гербицидной активностью и регулирующим рост растений эффектом.

Корнексистин получают путем культивирования выделенного штамма Paecflomyces variotii Bainier SANK (21086 PERM BP-1351), который также охватывается настоящим изобретением.

Новый выявленный микроорганизм Paecilomyces variotii Bainier SANK 21086 FERN BP-1351 представляет собой несовершенный гриб, который был выделен из экскрементов оленя. Он имеет следующие микологические свойства.

Он очень хорошо растет на агаровой среде мальтового экстракта и колония его достигает диаметра от 35 до 43 мм после выдержки культуры при 24°С в течение семи дней. Поверхность колонии сначала окрашивается в соломенно-желтый цвет 3 В4 и является бархатистой. Центр этой поверхности выступает. По мере развития культуры она становится зеленовато-желтого цвета 3 С4, и поверхность становится слегка порошкообразной. Обратная сторона колонии окрашивается в серовато-оранжевый цвет 5 ВЗ. (Название цвета, приведенное

0

0

5

0

5

0

5

выше, соответствует названиям из справочника The Methuen Handbook of Colour A. Kornerup и J.H. Wanscher, 1978, опубликованного Eyre Methuen, Лондон, Англия). На агаровой среде Czapek культура растет медленнее, чем на агаровой среде мальтового экстракта, и колония достигает диаметра 18-22 мм после выдержки культуры при 24°С в течение семи дней. В этот момент форма и цвет колонии аналогичны форме и цвету колонии, выращенной на агаровой среде мальтового экстракта. Хотя она растет очень слабо при температуре 37°С, можно пронаблюдать образование конидий.

При исследовании с помощью микроскопов видно, что разделенные перегородками мицелии почти бесцветны и .имеют выровненные поверхности диаметром каждая от 2 до 5 мкм. Конидиофоры образуются непосредственно из надземных мицелий или из основных мицелий, и каждая имеет размер от 20 до 210 мкм х 2,5 до 4,0 мкм. Конидии образуются либо из стеригм на ко- нидиогенной структуре, в которой диверген- тные, с большим расхождением ветви расходятся от вершины конидиофор или от

стеригм, образуемых почти на каждой неразветвленной гифе. Стеригмы имеют гладкую поверхность и имеют размер от 10 до 40 мкм х 2,5 до 4 мм каждая, и концы их имеют форму линейных трубок, Конидии имеют светло-коричневый цвет, имеют форму длинных цепей и имеют от почти шаровидной до яйцевидной формы размерами каждая от 3 до 5,5 мкм х 2 до 4 мкм.

Таким образом. SANK 21086 был идентифицирован как штамм Paecilomyces variotil Bainler. Штамм SANK 21086 был сдан на хранение 24 апреля 1987 года в научно- исследовательский институт ферментации. Агентство промышленных исследований и технологии, Министерство Международной торговли и промышленности, Япония, согласно условиям Будапештского договора, под номером PERM BP-1351.

Было установлено, что штамм SANK 21086 продуцирует корнексистин. Однако, как уже хорошо известно, свойства микроорганизмов данного типа могут изменяться в широких пределах, и такие микроорганизмы могут легко претерпевать мутацию, как по естественным причинам, так и по причинам, вызванным искусственно.

Культивирование штаммов осуществляют в обычных условиях, принятых для культивирования несовершенных грибковых организмов, предпочтительно в жидкой культуре, и желательно с взбалтыванием или с перемешиванием и с аэрацией. Питательная среда, используемая для культивирования, является совершенно обычной средой и она содержит такие составляющие компоненты, которые обычно используют для культивирования несовершенных грибов. В частности, данная среда должна содержать предпочтительно ассимилируемый источник углерода, и примерами такого источника углерода могут быть глюкоза, мальтоза, сахароза, маннит, меласса, глицерин, декстрин, крахмал (особенно полезным крахмальным источником для данного микроорганизма, как и для большинства несовершенных грибов, является свежий картофель), соевое масло и хлопковое масло; ассимилируемый источник азота, примерами которого могут быть соевая мука, арахисовая мука, мука из жмыха семян хлопчатника, ферманин, рыбная мука, экстракт замоченного хлебного злака, дрожжи (например, прессованные дрожжи), дрожжевой экстракт, нитрат натрия, нитрат аммония или сульфат аммония: одну или несколько неорганических солей, таких как хлорид натрия, фосфаты, карбонаты кальция и при желании соли металлов в следовых количествах.

В случае, когда культивирование осуществляют в жидкой среде, как правило желательно вводить в среду культивирования противовспенивающее средство (напри- мер, силиконовое масло, растительное маслоилисоответствующееповерхностно-активное вещество).

Культивирование желательно осуществлять в среде, величина рН которой может

0 изменяться от слабо кислотной до нейтральной, и температура которой составляет от 20 до 30°С, еще более предпочтительно примерно 24°С.

Продуцирование корнексистина по ме5 ре осуществления культивирования можно регулировать различными приемами, общепринятыми для регулирования продуцирования биологически активных веществ посредством микробной культуры, где тре0 буются очень незначительные специальные разработки или вообще они не требуются. Наиболее принятым прииемом является определение гербицидной активности культивированного питательного бульона по

5 отношению к чувствительным растительным видам, например, к куриному просу (Echlnochloa cruss galli (L.) P. Beaut).

Количество продуцируемого корнексистина обычно достигает максимального зна0 чения после культивирования в течение от 150 до 200 ч, и желательно отделять корнексистин от среды не позже, чем в тот момент времени, когда достигнут этот максимум. Однако, этот период времени может быть

5 различным в зависимости от условий и приемов культивирования, и этот период может быть более коротким или более длинным в зависимости от обстоятельств. Правильное время культивирования может быть легко

0 определено для каждого случая путем обычного эксперимента с использованием подходящего приема регулирования процесса, как, например, описано выше.

Наибольшая часть корнексистина оста5 ется в, жидкой порции культивированного питательного бульона и таким образом он может быть извлечен путем удаления твердой фазы, включающей мицелий, путем, например, фильтрации, желательно с

0 использованием фильтрующего средства, такого, как диатомовая земля, или путем центрифугирования. Затем он может извлекаться из отделенной жидкой порции общепринятыми приемами, основываясь на его

5 специфических физико-химических свойствах, и при жепэнии он подвергается последующей очистке.

Корнексистин предпочтительно отделяется от других продуктов в жидкой порции посредством адсорбента, либо путем адсорбции примесей, либо путем адсорбции кор- нексистина, либо путем адсорбции как раздельно, так и совместно и последующего элюирования корнексйстина. Могут использоваться различные типы адсорбентов; при- мерами наиболее подходящих для данной цели адсорбентов являются: активированный уголь, и смолистые адсорбенты, такие, как Амберлит (зарегистрированная торговая марка) ХАД-2. ХАД-4 или ХАД-7 (про- дукты фирмы Ром и Хаэс), и Диаион (зарегистрированная торговая марка) НР10, НР20, СНР20Р или НР50 (продукты фирмы Мицубиши Кемикэл Индастриз Ко., Лтд.). Примеси, присутствующие в жидкой пор- ции, могут быть удалены путем пропускания раствора, содержащего корнексистин, через слой или колонку одного или нескольких указанных выше адсорбентов или путем адсорбции корнексйстина одним или несколь- кими адсорбентами и последующего элюирования корнексйстина подходящим элюентом.

Подходящие для данной цели элюенты включают смеси метанола, ацетона или бу- танола с водой,

Корнексистин может быть экстрагирован непосредственно из фильтрата культивированного питательного бульона или его водного раствора в условиях от нейтраль- ных до кислотных посредством несмешиваемого с водой органического растворителя, такого как хлороформ, этилацетат или бута- нол в отдельности или в смеси двух или нескольких из них, и затем он подвергается очистке.

Полученный таким путем корнексистин можетбыть подвергнут дальнейшей очистке различными способами. Наиболее подходящими способами являются хроматография в адсорбционной колонке с использованием такого носителя адсорбента, как силикагель или флоразил, хроматография в разделительной колонке (распределительная хроматография) с использованием целлюлозного продукта, такого, как Авицел (зарегистрированная торговая марка продукта фирмы Асахи Кемикэл Индастриз Ко., Лтд) или Сефадекс LH-20 (зарегистрированная торговая марка продукта Фармация, Швеция), или жидкостная хроматография с использованием обычной колонки с обращенной фазой. Примеси, присутствующие в жидкой порции, содержащей корнексистин, могут быть также удалёны путем адсорбции их на различных типах катионробменных смол (сильных или слабых), таких, как Дау- экс 50 W (зарегистрированная торговая марка продукта фирмы Дау Кемикэл Ко.. Лтд) или Амберлит IRC-50 (зарегистрированная торговая марка продукта фирмы Ром и Хаас). или на катионообменных смолах (таких, как Дауэкс 1 и Диаион WA10). Эти способы очистки могут осуществляться либо индивидуально, либо в любой комбинаций друг с другом, с целью получения чистого корнексйстина, имеющего описанные выше физико-химические свойства.

В применении к растениям соединения, отвечающие настоящему изобретению, способны ингибировать прорастание семян и регулировать рост растений/и они обладают гербицидным действием. Следовательно, данные соединения можно использовать для регулирования роста растений и для уничтожения сорняков путем обработки почвы или листвы широколистных или узколистных сорняков и деревьев в предвсходовый период роста.

Корнексистин, как ясно продемонстрировано в примерах 1,2 и 3, обладает прекрасным гербицидным действием на различные типы сорняков как при обработке в предвсходовый период роста, так и при обработке в послевсходовый период роста. В частности, оно имеет полезный эффект при использовании в качестве гербицида для обработки листвы.

Соединение формулы (II) и его соли (в которых кольцо молекулы корнексйстина является открытым) также проявляют герби- цидное действие и находят полезное использование в качестве гербицидов.

Данная композиция может быть приготовлена в любой принятой в агрохимии форме, например, она может быть приготовлена в виде дуста, грубого пылевидного препарата, гранул, микрогранул, смачиваемого порошка, водорастворимого порошка или жидкого препарата. Безусловно, нет необходимости использовать абсолютно чистую форму корнексйстина и, конечно, очистка может быть осуществлена на любой стадии, . и полученное в результате сырое вещество может быть использовано как активный ингредиент.

Носители, используемые в такой композиции, могут быть синтетическими или иметь природное происхождение, могут быть органическими или неорганическими веществами, и они смешиваются с соединением, для того, чтобы «облегчить хранение, транспортировку, и рабочие операции с активным ингредиентом или для того, чтобы способствовать транслокации активного ингредиента в растения. Носители могут быть твердыми или жидкими. Примерами твердых носителей являются: неорганические вещества, такие, как глина, тальк, диатомит, каолин, бентонит, карбонат кальция, гипс,

синтетические осажденные кремнеземы, аттапульгит, цеолит или пемза; синтетические и естественные смолы, такие, как кума- роновая смола, алкидные смолы, поливинилхлорид, эфир канифоли или эфир ксантогеновой кислоты; воски, такие, как карнаубский воск или парафин; и другие органические материалы, такие, как скорлупа ореха (например, грецкого или какого-либо другого ореха), или соевый порошок.Примерами жидких носителей являются: вода, спирты, такие, как метанол, этанол, изопропанол или этиленгликоль, и такие углеводороды, как ксилол, метилнаф- талин и лигроиновый растворитель.

В случае, когда композиция должна включать поверхностно-активное вещество, это поверхностно-активное вещество может быть ионным или неионным и служит для того, чтобы облегчить диспергирование, смачивание или распределение композиции. Примерами анионных поверхностно- активных веществ являются: соли или высшие жирные кислоты, например, мыла, такие, как олеат натрия, соли, например, натриевые и кальщ/е вые соли сульфокислот и сами кислоты как таковые, например, лиг- нинсульфокислота, додецилбензолсульфо- нат натрия или диалкилсульфосукцинзт натрия; такие соли, как натриевые, аммони- евые или аминовые соли полиоксиэтиленал- киларилэфирсульфатовили

полиоксиэтиленалкилэфирсульфатов или свободных кислот; или соли полиоксиэтиле- налкиларилэфирфосфатов, или полиоксиэ- тиленалкилфосфатов. Примерами катионных поверхностно-активных веществ являются высшие алифатические амины и продукты конденсации окиси этилена с такими аминами, четвертичные аммониевые соли, например, хлориды, М-алкиламинаце- таты и N-алкйламиноксиды.

Амфотерные поверхностно-активные вещества включают бетаины и поверхностно-активные вещества аминокислотного ти- па.Примерынеионных

поверхностно-активных веществ включают: глицериды и сложные эфиры сахарозы и жирных кислот, продукты конденсации окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, продукты конденсации окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафто- лами, амиды или этоксилированные амиды высших жирных кислот, сложные эфиры высшей жирной кислоты и сорбита или этокси- лированного сорбита, сложные эфиры высшей жирной кислоты и глицеринборатов или этоксилированных глицеринборатов и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена.

Агрохимические композиции, отвечающие настоящему изобретению, при желании могут содержать и другие компоненты, например, защитные коллоиды, такие, как желатин, аравийскую камедь, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцел- люлозу, диспергирующие вещества, такие, как полифосфат натрия, неорганические диспергирующие вещества, такие, как бентонит или вигум, стабилизаторы, связующие вещества и присадки, понижающие температуру замерзания. Для более широкого использования и экономии рабочей силы композиция, отвечающая настоящему изобретению, при желании может быть смешана с одним или несколькими агрохимическими средствами, например, с фунгицидами, инсектицидами, гербицидами, регуляторами роста растений и удобрениями.

Приготовление корнексистина. а также соответствующей кислоты и ее солей, далее будет иллюстрироваться на примерах, которые не являются ограничением настоящего изобретения. Приготовление препаратов, содержащих корнексистин, будет иллюстрироваться в описании препаратов, и активность действия корнексистина иллюстрируется в описании экспериментов.

Пример 1. Бактериальную культуру Paecilomyces varlotH SANK 21086 инокули- руют в 500-миллилитровой колбе с разделительной перегородкой, содержащей 80 мл среды, имеющей указанный ниже состав, и культивируют при 26°С в течение 168 ч при скорости вращения 200 об./мин с использованием вращающегося встряхивателя.

Составляющие компоненты среды: Глицерин50 г

Свежий картофель50 г

Дрожжевой экстракт5 г

Мальтовый экстракт5 г

Деионизированная вода(рН 6.0) 1 л 0,5 мл полученной культуры семян ино- кулируют в каждую из двадцати пяти 500- миллилитровых колб с разделительными перегородками, каждая из которых содержала 80 мл той же культуры, что указана выше, и данный микроорганизм культивируют при температуре 26°С в течение 192 ч при скорости вращения 200 об./мин с использованием вращающегося встряхивателя.

Полученные в результате культивированные питательные бульоны общим объемом 2 л соединяют и вводят 200 г фильтровального средства - Целита 545 (торговая марка продукта фирмы Джонс

Манвиль Продактс Корпорейшн США). Полученную смесь затем фильтровали и получали в результате 1,7 л фильтрата (рН 6,0). Этот фильтрат пропускали через колонку, содержащую 300 мл Диаиона НР20 (про- дукт фирмы Мицубиши Кемикэл Индастриз Ко.), где адсорбировалось активное вещество. Это активное вещество затем промывали одним литром деионизированной воды, после чего осуществлялось элюирова- ние одним литром водного раствора ацетона концентрацией 80% (об/об), и получался 1 л элюента. Этот один литр элюента конденсируют путем испарения при пониженном давлении и затем высушивают при температуре ниже 0°С, и получают 3 г сырого порошка, содержащего активное соединение, 2.7 г этого сырого порошка растворяют в 400 мл деионизированной воды, и величину рН раствора доводят до зна- чения 2.5. Затем осуществляют двухкратную экстракцию, каждый раз 400 мл этилацетата, и получают 800 мл этилаце- татного раствора, содержащего корнексистин. Этот этилацетатный раствор двухкратно промывают, каждый раз 300мл 0,1 молярного водного раствора двухосновного фосфора натрия, и затем снова двухкратно промывают, каждый раз 300 мл насыщенного водного раствора хлорида на- трия.

Затем этот раствор высушивают над безводным сульфатом натрия, после чего его конденсируют путем испарения при пониженном давлении, и получают 650 мг мае- лянистого вещества, содержащего корнексистин.

Это маслянистое вещество растворяют в смеси этилацетата с хлороформом (с соотношением компонентов смеси 1:1 по объе- му) и раствор подвергают хроматографическому разделению в колонке, наполненной 150 мл Сефадекс LH-20 (который предварительно был насыщен до состояния равновесия смесью (в обьемном отношении 1:1) этилацетата с хлороформом), где осуществлялась адсорбция. Затем осуществляют элюирование тем же смешанным растворителем. Элюат фракционируют на 10-миллилитровые фракции, и фракции. содержащие корнексистин, фракции № 22- 28, собирают и конденсируют путем испарения при пониженном давлении, ив результате получалось 100 мг корнексисти- на со степенью чистоты примерно 70%.

П р им е р 2. Процедуру культивирования осуществляют таким же образом, как описано в примере 1, и в результате получают 1,8 л фильтрата культуры. Величину рН этого фильтрата доводят до 2,5 и затем осуществляют двухкратную экстракцию, каждый раз 1,5 л этилацетата, и в результате получают Зл этилацетатного раствора, содержащего санкиоцидйн. Этот раствор двухкратно промывают, каждый раз 1 л 0,1 молярного водного раствора двухосновного фосфата натрия, и далее снова двухкратно промывают, каждый раз одним литром насыщенного водного раствора хлорида натрия. Раствор высушивают над безводным сульфатом натрия, и затем его конденсируют путем испарения в вакууме, и в результате получают 700 мг маслянистого вещества. Это маслянистое вещество пропускают через колонку, наполненную 80 мл Сефадекс LH-20 (Фармация, Ко.) (этот препарат предварительно насыщают до состояния равновесия смесью в объемном отношении 1:1 этилацетата с хлороформом) и осуществляют адсорбцию и проявление. Затем осуществляют элюирование тем же смешанным растворителем. Элюат разделяют ла десять фракций, и фракции, содержащие корнексистин, фракции 13-18, собирают и конденсируют путем испарения при пониженном давлении.

Продукт конденсации снова подвергают хроматографическому разделению в такой же колонке, наполненной Сефадекс Ш-20. После элюирования и фракционирования получают 290 мг маслянистого вещества.

Всю порцию этого частично очищенного маслянистого вещества затем дополнительно очищают посредством жидкостной хроматографии высокой степени разделения с использованием колонки с обратимой фазой. Более конкретно, пробу вводят в колонку с обратимой фазой (УМС; S-343 C1-15-ODS). Ямамура Кемикэл Индастриз Ко., Лтд), предварительно насыщенной до состояния равновесия 40%-ным (об/об) водным раствором ацетонитрила. При регулирований спектра ультрафиолетового поглощения до 240 нм, пробу проявляют и элюируют тем же смешанным растворителем при скорости потока 5 мл/мин. и фракции, элюированные в период между 30 и 39 мин. собирают. Данную процедуру повторяют три раза, и в результате получают 185 мг корнексистина, со степенью чистоты примерно 90%.

Пример 3. Бактериальную культуру Paecllomyces variotll SANK 21086 инокули- руют в 500-миллилитровой колбе с разделительной перегородкой, содержащей 80 мл той же среды, что описана в примере 1, и культивируют при 26°С в течение 144 ч при скорости вращения 200 об/мин с использованием вращающегося встряхивателя. Затем 75 мл полученной культуры инокулиру- ют в каждом из двух 30-литровых бродильных чанов, содержащих каждый по 15 л той же среды, что описана выше, и микроорганизм культивируют при 26°С в течение 192 ч, с одновременной аэрацией со скоростью 15 л/мин и с перемешиванием со скоростью 150-180 об/мин..

25 л полученной в результате жидкой культуры смешивают с 1 кг Целита (торговая марка) 545 в качестве фильтровального средства и осуществляют фильтрацию. Величину рН полученных в результате 19 л фильтрата доводят до 2,5 и осуществляют экстракцию 19л этилацетата, и затем дополнительно 9,5 л этилацетата и получают эти- лацетатный экстракт, составляющий суммарно 28 л. Этот экстракт трехкратно промывают каждый раз 5 л 0,1 молярного водного раствора двухосновного фосфята натрия, а затем снова двухкратно промывают, каждый раз 5 л насыщенного водного раствора хлорида натрия. Промытый экстракт высушивают над безводным сульфатом натрия и затем конденсируют путем испарения при пониженном давлении, и получают 2,02 г маслянистого вещества. Весь полученный объем этого маслянистого вещества растворяют в смеси этилацетата с хлороформом, взятыми в объемном соотношении -.1:1, и затем подвергают хроматогра- фическому разделению путем пропускания его через колонку, наполненную 500 мл Се- фадекс LH-20 (который предварительно насыщался до состояния равновесия тем же смешанным растворителем), где он адсорбируется, проявляется и элюируется тем же смешанным растворителем. Элюат разделяют на 20-миллилитровые фракции и фракции, содержащие корнексистин, т.е. фракции.№35-52, собирают, В результате конденсации путем испарения при пониженном давлении получают 7,56 г маслянистого вещества.

Всю порцию этого маслянистого вещества растворяют в 10 мл хлористого метиле- на и выстаивают при комнатной температуре и в результате получают 3,7 г корнексистина в виде бесцветных игл.

П р и м ар 4. Кор нексистин растворяют в 10%-ном (об/об) растворе этанола и титруют 1 -нормальным водным раствором гидрата окиси натрия. Были найдены два значения рКа равные 4,1 и 5,95, что говорит о том, что ангидридная форма корнексистина (формула (I) превращалась в свободную кислоту с открытым кольцом формулы (II).

Пример 5. Получение моно- и ди-на- триевых солей корнексистина

Корнексистин, полученный, как описано в примерах 1-3, суспендируют в воде, и величину рН доводят до 6,1 (для мононзтрие- вой соли) или до 7,95 (для динатриевой соли) путем добавления 1-нормального водного раствора гидрата окиси натрия. Корнекси стин растворяют и затем образуемый раствор частично испаряют с целью удаления большей части воды. Затем осуществляют 0 лиофилизацию с целью удаления остальной части воды, и в результате получают либо мононатриевую соль, либо двухнатриевую соль корнексистина.

Мононатриевая соль: 5 + 63.13°С(С 1,15, вода)

ФАБ Масс-спектр: 349 (М + Н)+

(ФАБ - Быстрая атомная бомбардировка)

Спектр ультрафиолетового поглощения

0 (Н20) Дике 235 (плечо).

Спектр инфракрасного поглощения (КВг) 3400,2960, 1705. 1564, 1450. 1440, 1050. 1010.

Спектр протонного ядерно-магнитного 5. резонанса НЯМР)(270 МГц, ОзО) 5 ч/млн:

0,68 (ЗН, триплет);

1,05-1,21 (ЗН, мультиплет);

1,49 (ЗН. дублет);

1,59 (1Н, мультиплет);

2,62 (1Н. дублет дублетов);

2.75 (1 Н, триплет дублетов);

2,85 (2Н, дублет дублетов);

3,22 (1Н, дублет дублетов);

4.00 (1Н, дублет):

4,90 (1 Н, дублет дублетов);

5,46 (1Н, дублет дублетов).

Двухнатриевая соль

+ 61,15° (С 1,22, вода).

ФАБ масс-спектр: 371 (М + Н)+.

Спектр ультрафиолетового поглощения

(ВДАЙакс : 235 (плечо).

Спектр инфракрасного поглощения (KBr)v макс. 3400, 2960, 1705, 1562, 1450, 5 1400. 1050, 1010.

Спектр протонного ядерного магнитного резонанса (1Н ЯМР) (270 МГц, DaO) дч/мин

0 . 0,68 (ЗН, триплет);

1,05-1,22 (ЗН, мультиплет);

1.49 (ЗН, дублет);

1,58 (1 Н, мультиплет);

2,62 (1Н, дублет дублетов); 5 2,72 (1Н, триплет дублетов);

2.85 (2Н, дублет дублетов);

3,22 (1 Н, дублет дублетов);

4.01{1Н, дублет):

4,89 (1Н, дублет дублетов);

5,44 (1 Н, дублет дублетов).

0

5

Приготовление агрохимических препаратов иллюстрируют нижеследующими при- мерами приготовления препаратов. Указанные в этих примерах количества, выраженные в частях, являются массовыми частями..

Пример 1 приготовления препаратов

Гранулы.

Одну часть корнексистина растворяют в 10ч. метанола, и раствор адсорбируют на 99 ч. зерен пемзы, которую предварительно просеивают через сито (стандартное сито Тэйлора) 10-48 меш. (1,65-0,295 мм). Смесь высушивают путем испарения метанола и в результате получают гранулы с содержанием 1% (вес./вес.) корнексистина.

Пример 2 приготовления препарата

Смачиваемый порошок.

10 ч. корнексистина, 3 ч. додецилбен- золсульфоната натрия, 2 ч. поливинилового спирта 20 ч. диатомита и 65 ч. глины смешивают и распыляют, в результате чего получают смачиваемый порошок.

Пример 3 приготовления препарата.

Смачиваемый порошок

Пятьдесят частей корнексистина, 2 ч. полиоксиэтиленнонилфенилового простого эфира, 10 ч. синтетического кремнезема и 38 ч. сульфата аммония смешивают и распыляют, в результате получают смачиваемый порошок.

П р и м е р 4 приготовления препарата.

Жидкая рецептура.

Десять частей корнексистина и 2 ч. лау- рилсульфата натрия смешивают и растворяют в 88 ч. метанола, и в результате получают жидкий препарат.

Пример 5 приготовления препарата. Эмульсионный концентрат.

Десять частей корнексистина растворяют в 75 ч. ксилола, и затем в раствор вводят 15ч. ПараколаКРЗ (продукт фирмы Ниппон Ниуказаи Ко., Лтд) и весь объем этой смеси перемешивают, и в результате получают эмульсионный концентрат.

Активность действия гербицидн х соединений, отвечающих настоящему изобретению, иллюстрируется в нижеследующих описаниях экспериментов.

Эксперимент t.

Гербицидное действие на молодое куриное просо

Дно испытательной пробирки (10 х 100 мм) покрывают хлопковым адсорбентом на высоту примерно 5 мм. Затем хлопковый слой насыщают 1 мл воды. Примерно 10 зерен семени проса куриного (Echlnocrtloa crus-galll (L.) P. Beaut) помещают на хлопковый слой, и осуществляют выращивание в теплице до достижения высоты растения

примерно 80 мм. Приготавливают водные растворы корнексистина различных концентраций путем разбавления 10%-ного (вес/об) этанольного раствора корнексистина. Каждый из приготовленных таким образом водных растворов смешивают с распределителем New Gramln (фирмы Сан- кио Ко., Лтд) в количестве 0,01 мас.% и полученную композицию распыляют на листву.

Подвергнутые обработке сорняки выдерживают в течение примерно десяти дней в теплице, и затем определяют гербицидное действие данных соединений, взятых в различных концентрациях. Было установлено,

что минимальная гербицидная концентрация, оказывающая действие против проса петушьего, составляет 50 мкг/мл. Эксперимент 2 Испытание на гербицидное действие

путем обработки листвы

Пластмассовые горшки каждый длиной 7,5 см, шириной 20 см и высотой 7 см заполняют почвой, в которую высевают восемь типов растений, включающих 4 типа злаковых сорняков и 4 типа широколистных сорняков, и каждый из них покрывают почвой на глубину примерно 1 см. Горшок закапывают в вермикулит в ящике, который помещают на стеллаж в теплице. Осуществляют

подвод воды непосредственно через вермикулит, сорняки выращивались в течение примерно двух недель. В конце этого периода времени листву сорняков обрабатывают непосредственно растворами корнексистина или его натриевой соли различных концентраций(предварительно приготовленных в форме смачиваемых порошков, как описано в примере 2 приготовления препарата), дозой 5 см3 на горшок с

образцом. Наблюдают все изменения, происходящие после нанесения гербицида, и по прошествии 14 дней осуществляют исследование растений и определяют эффекты повреждения. Результаты представлены в

табл.1 (корнексистин) и 2 (мононатриевая соль корнексистина). Гербицидное действие определяют в соответствии с нижеследующими критериями:

Процент омертвленной площади поверхности листвы в подвергнутых обработке сорняках от площади поверхности необработанных сорняков:

0-10%

11-30%

31-50%

51-70%

71-90%

91-100%

Шкала оценки О 1 2 3 4 5

При обработке в тех же условиях активность действия Рубратроксина В против злачных сорняков и против широколистных сорняков составляла соответственно 0 и 1,5.

Эксперимент 3.. .

Испытание с обработкой почвы в пред- восходовый период роста.

Пластмассовые горшки длиной 7,5 см, шириной 20 см и высотой 7 см заполняют почвой, в которой высевают восемь типов растений, включающих четыре типа злачных сорняков и четыре типа широколистных сорняков, и покрывают их почвой, каждый на глубину 1 см. Затем горшки помещают в вермикулит в ящике, который помещают на стеллаже в теплицу. Поверхность почвы в каждом горшке обрабатывают одним из растворов корнексистина различных концентраций, приготовленных как описано в примере 2, дозой 15 см на горшок, через один день после высевания. По прошествии 20 дней проводили исследования растений и определяли эффекты обработки. Полученные результаты представлены в табл.3. Гер- бицидное действие определяли согласно следующим критериям:

Процент ингибирования роста обработанных сорняков относительно необработанных сорняков:

Шкала оценки

0-10%0 .

11-30%1

31-50%2

51-70%3

71-90%4

91-100%5

Нижепредставленные данные сравнения корнексистина и продукта 51262 как селективных гербицидов.

Способ тестирования

Пластмассовые горшки длиной 13,5 см, шириной 9,5 см, высотой 8 см заполняют землей, снятой с верхнего слоя почвы, и затем сеют семена нижеперечисленных сорняков и семена пшеницы и затем прикрывают сверху такой же землей слоем примерно глубиной 1 см.

Узколистные сорняки: просо куриное, ползучий сорняк, гигантский лисохвост и просо итальянское.

Широколистные сорняки: черный паслен, куколь посевной, красная марь и полевая горчица.

Горшки оставляют на 14 дней в теплице, т.е. до момента появления у проса куриного 3,5 листьев.

Каждое тестируемое соединение выпущено в форме 50% увлажняемого порошка,

0

5

0

его разбавляют водой до концентрации (по активному ингредиенту) 250 м.д. или 125 м.д.

Тестируемым раствором опрыскивают листву растений (5 мл тестируемого раствора на каждый горшок). Затем горшки оставляют еще на 14 дней в теплице, после чего определяют гербицидное действие согласно следующему подсчету.

Как видно из полученных результатов, корнексистин обладает более широким спектром гербицидного действия в отношении широколистных сорняков в сравнении с соединением 51262, и кроме того, оно не оказывает никакого вредного воздействия на пшеницу, что говорит о том, что его можно будет использовать в качестве селективного гербицида для пшеницы.

Формула изобретен и я Способ получения гербицида корнексистин формулы Л,,

или соответствующей с разомкнутым коль- цом кислоты, или ее соли, заключающийся в том, что осуществляют культивирование продуцирующего микроорганизма PaecHomyces variotii Bainier SANK PERM BP-1351 на питательной среде при 20- 30°С, выделение его и обработку полученного корнексистина водным раствором щелочи для получения соответствующей с разомкнутым кольцом кислоты или ее соли.

2.Способ по п. 1,отличающийся тем, что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижения величины рН по крайней мере 4,1.

3.Способ по п. 1,отличающийся тем, что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижения величины рН 6,1 с последующим выделением одноосновной соли из водной среды,

4.Способ по п.1,отличающийся тем. что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижения величины рН 7,95 с последующим выделением двухосновной соли.

5.Способ по п.З. о тличающийся тем. что используют водный раствор едкого

натра для получения мононатриевой соли.

6.Способ по п.4, отличающийся тем, что используют водный раствор едкого натра для получения двунатриевой соли.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют при 24°С.

Т а б л и ц а 1

Действие корнексистина при обработке листвы

Эффект мононатриевой соли корнексистина при обработке листвы

Таблица 2

Эффект корнексистина при обработке почвы в предвсходовый период

Таблица 3

Таблица4

ТаблицаБ