СПОСОБ СИНТЕЗА 2-ТИОГИСТИДИНА И ЕГО АНАЛОГОВ Российский патент 2015 года по МПК C07D233/84 

Настоящая заявка на патент относится к новому способу синтеза 2-тиогистидина и его производных.

L-2-тиогистидин, также называемый L-2-меркаптогистидином или α-амино-2,3-дигидро-2-тиоксо-1H-имидазол-4-пропановой кислотой, имеет приведенную ниже формулу I-1:

.

Эта аминокислота была получена путем кислотного гидролиза медьсодержащих белков, таких как гемоцианин моллюсков или тирозиназа грибов. L-2-тиогистидин является хорошим хелатором ионов двухвалентных металлов, таких как Zn²⁺ или Cu²⁺. Его применяют в особенности в косметических средствах по уходу в качестве депигментирующего агента или в качестве дезодоранта, а также в качестве антиоксиданта для фармацевтического, косметического или пищевого применения. В свете интереса к этому соединению в литературе описано несколько синтезов 2-тиогистидина или его производных.

Например, в первом способе синтеза описано преобразование L-гистидина метилового эфира в ди-трет-бутоксикарбонильное (di-Boc) производное. Затем последнее обрабатывают фенилхлортионоформиатом, и после обработки оно дает смесь моно- и ди-Вос-2-тиогистидина метиловых эфиров. После удаления защиты получают L-2-тиогистидин при суммарном выходе 70% (J. Хи, J.C.Yadan, J. Org. Chem. 60, 6296-6301 (1995)).

Однако такой синтез требует защиты аминогруппы гистидина, которая не может присутствовать в свободной форме. Кроме того, фенилхлортионоформиат должен быть получен из тиофосгена (CSCl₂), реагента, который является токсичным и нелегко доступен в больших количествах для использования в промышленном масштабе.

В международных заявках WO 95/18108 и WO 95/00494 описан синтез Nα,Nα-диметил-2-тиогистидина или его сложного эфира из Nα,Nα-диметил-гистидина метилового эфира путем взаимодействия с хлортиоформиатом, затем необязательно гидролиза.

В заявке на патент US 2009/093642 также описан синтез 2-тиогистидина (в соответствии со способом, описанным Heath, Н. et al., J. Chem. Soc, 1951, 2215) из гистидина путем размыкания имидазольного кольца, а затем взаимодействия с тиоцианатом, таким как KSCN. Кроме использования больших объемов соляной кислоты, KSCN, используемый в кислой среде, является высоко токсичным реагентом.

Авторы Shosuke Ito также описали в 1985 г.синтез 2-тиогистидина из гистидина (J. Org. Chem. 1985, 50, 3636-3638). Таким образом, гистидин подвергают взаимодействию с бромом с получением, скорее всего через бромолактон, 2-тиогистидина тиоэфира после взаимодействия с цистеином. Затем восстанавливающий гидролиз в присутствии йодистоводородной кислоты (HI) и красного фосфора (Р) приводит к получению ожидаемого 2-тиогистидина и (D,L)-аланина. 2-Тиогистидин может быть также получен непосредственно из промежуточного бромолактона путем взаимодействия с Na₂S.

Однако на промышленном уровне способ Ito создает проблемы с очисткой, поскольку для получения тиоэфирного промежуточного соединения, а также для получения конечного продукта необходимы две колоночные хроматографии, причем конечный 2-тиогистидин получают при суммарном выходе только 12%. Кроме того, использование красного фосфора не рекомендовано к применению на промышленном уровне, поскольку он является высоко воспламеняемым. Кроме того, в процессе этого взаимодействия между йодистоводородной кислотой (HI) и красным фосфором (Р) образуется водород (J. Organomet. Chem. 529, 295-299 (1997)), что также очень опасно в промышленном масштабе.

Таким образом, существует актуальная необходимость в разработке нового способа синтеза 2-тиогистидина и его производных, который применим на промышленном уровне, то есть, который не имеет трудностей с очисткой, в котором не используют продукты или растворители, которые являются опасными или токсичными для людей и окружающей среды, и который обеспечивает получение продукта в промышленном масштабе при хорошем выходе и низких затратах.

Таким образом, объектом настоящего изобретения является способ синтеза производного 2-тиогистидина приведенной ниже формулы (I):

,

или его физиологически приемлемой соли, таутомера,

стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и в особенности их рацемической смеси, где:

- R₁ и R₂ независимо друг от друга представляют собой атом водорода или (C₁-C₄)алкильную группу, такую как метил, где по меньшей мере одна из групп и R₂ представляет собой атом водорода, и предпочтительно каждая представляет собой атом водорода, и

- R₃ и R₄ независимо друг от друга представляют собой атом водорода или (C₁-C₄)алкильную группу, такую как метил,

включающий приведенные ниже последовательные стадии:

(i) реакция расщепления соединения приведенной ниже формулы (II):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и в особенности их рацемической смеси, где:

- представляет собой или ,

- R₂, R₃ и R₄ являются такими, как определено выше,

- R₅ представляет собой атом водорода или группу (C₁-C₄)алкил или -СО-((С₁-С₄)алкил), и, в частности, атом водорода или группу -СОСН₃, и более конкретно атом водорода, и

Re представляет собой атом водорода или (C₁-C₄)алкильную группу, и, в частности, атом водорода,

в присутствии тиола, предпочтительно растворимого в растворителе реакционной смеси, который может, в частности, представлять собой воду, при температуре 60°C или выше, с получением соединения формулы (I), и

(ii) выделение соединения формулы (I), полученного на предыдущей стадии (i), из реакционной среды.

В контексте настоящего изобретения "таутомер" относится к структурному изомеру соединения, полученному посредством прототропии, то есть посредством миграции атома водорода и перемещения двойной связи. Различные таутомеры соединения, как правило, являются взаимопревращаемыми, и присутствуют в растворе в равновесии в соотношениях, которые могут варьировать в соответствии с используемым растворителем, температурой или pH.

В контексте соединений по изобретению 2-тиоимидазольное кольцо может присутствовать в различных таутомерных формах, как показано ниже:

В настоящем изобретении "физиологически приемлемый" относится к тому, что в целом является безопасным, нетоксичным и ни биологически, ни иначе нежелательным, и что является приемлемым для фармацевтического, косметического или пищевого применения (человека или животного).

"Физиологически приемлемые соли" соединения относятся к солям, которые являются физиологически приемлемыми, как определено выше, и которые обладают желаемой активностью (фармакологической косметической или пищевой) исходного соединения. Такие соли включают:

(1) гидраты и сольваты,

(2) соли присоединения кислоты, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное; или образованные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, камфорсульфоновая кислота, лимонная кислота, этансульфоновая кислота, фумаровая кислота, глюкогептоновая кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гликолевая кислота, гидроксинафтойная кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, муконовая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, пропионовая кислота, салициловая кислота, янтарная кислота, дибензоил-L-винная кислота, винная кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, триметилуксусная кислота, трифторуксусная кислота и тому подобное, или

(3) соли, образованные, когда протон кислоты, присутствующий в исходном соединении, либо замещен ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; либо скоординирован с органическим или неорганическим основанием. Приемлемые органические основания включают диэтаноламин, этаноламин, N-метилглюкамин, триэтаноламин, трометамин и тому подобное. Приемлемые неорганические основания включают гидроксид алюминия, гидроксид кальция, гидроксид калия, карбонат натрия и гидроксид натрия.

В контексте настоящего изобретения "стереоизомеры" относятся к диастереоизомерам и энантиомерам; они, таким образом, являются оптическими изомерами. Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отражениями друг друга, называют "диастереоизомерами", а стереоизомеры, которые являются зеркальными отражениями друг друга, но не накладываются друг на друга, называют "энантиомерами".

Смесь, содержащая равные количества двух индивидуальных энантиомерных форм противоположной хиральности, называют "рацемической смесью".

В контексте настоящего изобретения группа "(C₁-C₄)алкил" относится к нормальной или разветвленной насыщенной углеводородной цепи, содержащей от 1 до 4 атомов углерода. Она может представлять собой метильную, этильную, пропильную, изопропильную, бутильную, изобутильную, втор-бутильную или трет-бутильную группу. В частности, она представляет собой метильную группу.

В контексте настоящего изобретения "тиол" относится к любому реагенту, содержащему группу SH или ее молекулярную структуру. Более конкретно она представляет собой соединение R-SH, где R представляет собой C₁-C₈, а именно нормальную или разветвленную насыщенную углеводородную цепь С₂-С₆, замещенную одним или более чем одним полярным заместителем.

В контексте настоящего изобретения "насыщенная углеводородная цепь" относится к нормальной или разветвленной насыщенной углеводородной цепи, предпочтительно содержащей от 1 до 8 атомов углерода. Более конкретно она может представлять собой нормальную насыщенную цепь, такую как метильная, этильная, пропильная, бутильная, пентильная или гексильная группа.

В контексте настоящего изобретения "полярные заместители" относятся к гидрофильным группам, таким как группы ОН, SH, NH₂ и СОЩН.

В контексте настоящего изобретения "реакция расщепления" означает, что соединение, участвующее в этой реакции, в процессе данной реакции делится на две части, чтобы дать возможность образования тиокарбонильной функциональной группы соединения формулы (I).

Соединение формулы (I) может, в частности, представлять собой соединение приведенной ниже формулы (Ia):

,

или его физиологически приемлемую соль, таутомер, стереоизомер или смесь стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смесь энантиомеров, и в особенности их рацемическую смесь, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются такими, как определено выше.

Соединение формулы (I) может, в частности, представлять собой 2-тиогистидин (в частности, в D или L форме или в виде рацемической D,L смеси), α-метил-2-тиогистидин и α,α-диметил-2-тиогистидин, и, в частности, представляет собой 2-тиогистидин и, в особенности, L-2-тиогистидин.

Стадия (i):

Данная реакция расщепления, проведенная в присутствии тиола, дает возможность получить как соединение формулы (I), так и пировиноградную кислоту (СН₃С(O)-CO₂H) или ее производное, в частности, эфир (CH₃C(O)-CO₂R₆) или его производное, полученное в результате взаимодействия с тиолом, такое как производное тиокеталя (две молекулы тиола, взаимодействующие с кетоновой функциональной группой пировиноградной кислоты).

Например, в реакцию Ito вовлечен восстанавливающий гидролиз с образованием 2-тиогистидина и (D,L)-аланина, а не пировиноградной кислоты. Этот результат можно объяснить тем фактом, что реакцию расщепления проводят в присутствии HI и красного фосфора, который генерирует водород in situ (J. Organomet. Chem. 529, 295-299 (1997)).

Получение пировиноградной кислоты или ее производного вместо (D,L)-аланина (который получают в способе Ito, J. Org. Chem. 1985, 50, 3636-3638) в процессе данной реакции расщепления обладает преимуществом облегчения последующей очистки соединения формулы (I), поскольку пировиноградная кислота (или ее производное) растворима в органических растворителях, тогда как (D,L)-аланин растворим в воде, как и соединения формулы (I). Кроме того, образование водорода в процессе данной реакции в значительной степени не рекомендовано в промышленном масштабе в связи с его взрывоопасной природой.

Кроме того, тиол должен быть предпочтительно растворимым в реакционном растворителе, который может представлять собой, в частности, воду, что обладает дополнительным преимуществом в том, что является лучшим для экологии.

Тиол, используемый на данной стадии (i), может более конкретно представлять собой тиол формулы R-SH, где R представляет собой нормальную или разветвленную, предпочтительно нормальную алкильную цепь, содержащую от 1 до 8, в особенности, от 2 до 6, в частности, от 2 до 4 атомов углерода, замещенную одной или более чем одной группой, выбранной из OH, SH, NH₂ и COOH.

Присутствие гидрофильных групп (OH, SH, NH₂ и COOH), в частности, даст возможность придать тиолу большую растворимость в воде, где воду используют в качестве растворителя.

Тиол может быть выбран из цистеина, дитиотрейтола, 2-меркаптоэтанола, 2-меркаптопропионовой кислоты, 3-меркаптопропионовой кислоты и тиогликолевой кислоты, и предпочтительно представляет собой 3-меркаптопропионовую кислоту.

Он также может представлять собой меркаптоуксусную кислоту и меркаптогексановую кислоту.

Предпочтительно используют по меньшей мере 2 молярных эквивалента тиола по отношению к соединению (II), то есть по меньшей мере 2 моль тиола используют на один моль используемого соединения (II). В частности, можно использовать по меньшей мере 5 молярных эквивалентов тиола, и, в особенности, от 5 до 10 молярных эквивалентов тиола по отношению к соединению (II).

Реакционную смесь нагревают при температуре выше 60°C, поскольку ниже этой температуры кинетика реакции была бы слишком медленной. Реакцию можно проводить при температуре от 60°C до 120°C, в особенности от 80°C до 100°C, более конкретно после добавления тиола.

Реакцию можно проводить, в частности, в кислой среде.

Стадия (ii):

Полученный конечный продукт (соединение формулы (I)) может быть выделен из реакционной среды методами, хорошо известными специалистам в данной области техники и применимыми в промышленном масштабе, в частности, путем осаждения соединения формулы (I), в особенности, путем доведения pH раствора до достижения, например, рН от 5,5 до 6,5, предпочтительно приблизительно 6 (более конкретно в случае 2-тиогистидина) или путем выпаривания, необязательно частичного выпаривания, растворителей, предпочтительно с последующей перекристаллизацией для очистки продукта.

Поскольку соединения формулы (I) растворимы в воде, одна или более чем одна предварительная экстракция органическим растворителем, таким как этилацетат или трет-бутилметиловый эфир, даст возможность элиминировать органические побочные продукты, образовавшиеся в процессе реакции, такие как пировиноградная кислота или ее производные, а также избыток тиола.

Полученный продукт можно при необходимости очистить методами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например, путем перекристаллизации.

До или после этой стадии (и) можно получить соль образовавшегося соединения, если желательно, в частности, путем присоединения физиологически приемлемой кислоты или основания, как определено выше.

Соединение формулы (II) может быть получено из соли присоединения кислоты, за исключением соли йодистоводородной кислоты (HI), соединения приведенной ниже формулы (III):

или его таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и в особенности их рацемической смеси,

где , R₃ И R₄, являются такими, как определено выше,

путем последовательного взаимодействия с бромом,

а затем с производным цистеина приведенной ниже формулы (IV):

,

или его стереоизомером или смесью стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смесью энантиомеров, и в особенности их рацемической смесью, где R₅ и R₆ являются такими, как определено выше.

В контексте настоящего изобретения "соль присоединения кислоты соединения формулы (III)" относится к соли соединения формулы (III), полученной путем присоединения кислоты за исключением йодистоводородной кислоты (HI). Кислота может, в частности, представлять собой соляную кислоту или серную кислоту.

В данной реакции бром можно использовать в соотношении от 1 до 1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).

Предпочтительно бром добавляют холодным (предпочтительно очень быстрое добавление) при температуре ниже 10°C, предпочтительно ниже 5°C. Добавление брома можно, таким образом, осуществлять при температуре от -10°C до 10°C, предпочтительно от -5°C до 5°C.

Производное цистеина может, в частности, представлять собой N-ацетилцистеин или цистеин (в частности, в D, L или рацемической форме), в частности, цистеин и, в особенности, L-цистеин.

Производное цистеина предпочтительно используют в избытке, в частности, в соотношении от 2 до 7, предпочтительно от 3 до 5 молярных эквивалентов производного цистеина по отношению к соединению формулы (III), то есть от 2 до 7, предпочтительно от 3 до 5 моль производного цистеина используют на моль используемого соединения (III).

Реакцию можно проводить в растворителе, таком как вода.

Выход данной стадии может быть равным 50% или выше, даже равным 70% или выше.

Предпочтительно соединение формулы (II) не выделяют из реакционной среды, но включают непосредственно в следующую стадию (i). Таким образом, получение соединения (I) из соединения (III) можно осуществлять в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II) (реакция в одном реакционном сосуде).

Способ получения соединения формулы (I) в соответствии с изобретением, таким образом, включает нижеописанные последовательные стадии:

(a1) взаимодействие соли присоединения кислоты, за исключением соли йодистоводородной кислоты, соединения формулы (III), как определено выше, или ее таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и в особенности их рацемической смеси,

с бромом,

а затем с производным цистеина формулы (IV), как определено выше, или его стереоизомером или смесью стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смесью энантиомеров, и в особенности их рацемической смесью, и, в частности, с цистеином и в особенности с L-цистеином,

с получением соединения формулы (II), как определено выше,

(b1) реакция расщепления соединения формулы (II), полученного на предшествующей стадии (a1), в присутствии тиола, как определено выше, предпочтительно растворимого в растворителе реакционной смеси, который представляет собой, в частности, воду, при температуре, равной 60°C или более высокой, с получением соединения формулы (I), и

(c1) выделение соединения формулы (I), полученного на предшествующей стадии (Ы), из реакционной среды.

Стадии (b1) и (c1) соответствуют вышеописанным стадиям (i) и (ii), соответственно. Стадия (a1) соответствует стадии получения соединения формулы (II), описанного выше.

Предпочтительно стадии (a1) и (b1) проводят в одном и том же растворителе, таком как вода, предпочтительно в одном и том же реакторе, то есть без выделения промежуточных продуктов (в частности, соединения формулы (II)).

В этих условиях реакционная среда содержит производное цистеина, предпочтительно используемое в избытке на стадии (a1). Перед выделением соединения формулы (I) из реакционной среды (стадия (c1)), таким образом, необходимо элиминировать избыток производного цистеина с целью облегчения выделения и очистки соединения формулы (I). В частности, в случае производного цистеина, где R₅=H или (C₁-C₄)алкил, такого как цистеин, например, можно добавлять бензальдегид, чтобы образовать с избытком производного цистеина производное 2-фенилтиазолидин-4-карбоновой кислоты, соединения, которое осаждается в растворителе, таком как вода. Такими способами производное цистеина можно возвращать в повторный цикл.

Суммарный выход соединения формулы (I), полученного из соединения формулы (III), может быть равным 40% или выше.

В соответствии с конкретной формой осуществления изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (Ia), и способ его получения включает приведенные ниже последовательные стадии:

(а2) взаимодействие соли присоединения кислоты, за исключением соли йодистоводородной кислоты, соединения приведенной ниже формулы (Ша):

,

или ее таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и в особенности их рацемической смеси,

где где , R_{3 И} R₄ и являются такими, как определено выше,

с бромом,

а затем с производным цистеина формулы (IV), как определено выше, или его стереоизомером или смесью стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смесью энантиомеров, и в особенности их рацемической смесью, и, в частности, с цистеином и в особенности с L-цистеином,

с получением соединения приведенной ниже формулы (IIa):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси,

где , R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено выше,

(b2) реакция расщепления соединения формулы (IIa), полученного на предшествующей стадии (а2), в присутствии тиола, как определено выше, предпочтительно растворимого в реакционном растворителе, который может представлять собой воду, и, в частности, с цистеином, дитиотрейтолом, 2-меркаптоэтанолом, 2-меркаптопропионовой кислотой, 3-меркаптопропионовой кислотой или тиогликолевой кислотой, и предпочтительно с 3-меркаптопропионовой кислотой, при температуре, равной 60°C или более высокой,

с получением соединения формулы (Ia), и

(c2) выделение соединения формулы (Ia), полученного на предшествующей стадии (b2), из реакционной среды.

Стадии (a2), (b2) и (c2) соответствуют вышеописанным стадиям (а1), (b1) и (c1), соответственно.

Соединения формулы (IIa) представляют собой конкретные формы соединения формулы (II). Подобным образом, соединения формулы (IIIa) представляют собой конкретные формы соединения формулы (III).

Объектом настоящего изобретения также является соединение приведенной ниже формулы (II):

,

или его физиологически приемлемая соль, таутомер, стереоизомер или смесь стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смесь энантиомеров, и, в особенности, их рацемическая смесь, где:

- , представляет собой или , и

- R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено в п.1, за исключением соединения, где представляет собой или , и каждый R₃, R₄, R₅ и R₆ представляет собой атом водорода.

Исключенное соединение описано в: Ito et al., J. Org. Chem. 1985, 50, 3636-3638.

Это соединение может представлять собой, в частности, 2-{2-[(2-аммонио-2-карбоксиэтил)тио]-1H-имидазол-4-ил}-1-карбокси-N,N-диметилэтанаминий (HisNMe₂-Cys) или его дигидрохлорид и 2-{2-[(2-аммонио-2-карбоксиэтил)тио]-1Н-имидазол-4-ил}-1-карбокси-N-метилэтанаминий (HisNHMe-Cys) или его дигидрохлорид.

Объектом настоящего изобретения также является способ получения соединения приведенной ниже формулы (II):

,

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси, где:

- представляет собой или , и

- R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено выше,

путем взаимодействия соли присоединения кислоты, за исключением соли йодистоводородной кислоты, соединения формулы (III) как определено выше, или ее таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности, смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси,

с бромом, а затем с 2-7, предпочтительно 3-5 молярными эквивалентами по отношению к соединению формулы (III) производного цистеина формулы (IV), как определено выше, и, в частности, цистеина и, в особенности, L-цистеина.

В данной реакции бром можно использовать в соотношении 1-1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).

Предпочтительно бром добавляют холодным (предпочтительно очень быстрое добавление) при температуре ниже 10°C, предпочтительно ниже 5°C. Добавление брома можно, таким образом, осуществлять при температуре от -10°C до 10°C, предпочтительно от -5°C до 5°C.

Реакцию можно проводить в растворителе, таком как вода.

Настоящее изобретение будет лучше понято в свете нижеследующих примеров, которые приведены только в иллюстративных целях и никоим образом не ограничивают объем изобретения.

ПРИМЕРЫ

Все реакции проводили на открытом воздухе, если не указано иное.

1 - Получение соединений Формулы (II) по изобретению

Пример 1: Получение 2-{2-[(2-аммонио-2-карбоксиэтил)тио]-1Н-имидазол-4-ил}-1-карбоксиэтанаминия дигидрохлорида (His-Cys, 2HCl)

1,57 г (7,5 ммоль) L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 15 мл воды, и раствор охлаждают при 0°C. При очень сильном перемешивании 500 мкл (1,56 г, 9,75 ммоль, 1,3 экв.) брома добавляют по каплям (время добавления: 2 мин 10 сек). Реакционная смесь становится желтой. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 2,81 г (22,5 ммоль, 3 экв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа смесь фильтруют, и осадок промывают 2×0,5 мл воды.

Фильтрат наносят на колонку, заполненную 75 г Dowex® 50WX2-400, предварительно уравновешенную 1 н. соляной кислотой (HCl). После элюирования 750 мл 1 н. соляной кислоты, а затем 500 мл 2 н. соляной кислоты фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют. После выпаривания и двух совместных выпариваний с 2×20 мл толуола получают 1,5 г (56%) желаемого продукта в форме желтых кристаллов после высушивания.

¹Н-ЯМР (D₂O/DCl, 400 МГц): δ (млн^-1)=3.32 (m, 2Н); 3.63 (m, 2Н); 4.22 (m, 2Н); 7.39 (s, 1Н).

СЭЖХ-МС (ES+): 275,8 (МН+)

Пример 2: Получение 2-{2-[(2-аммонио-2-карбоксиэтил)тио]-1H-имидазол-4-ил}-1-карбокси-N,N-диметилэтанаминия дигидрохлорида (HisNMe₂-Cys, 2HCl)

4,753 г (20 ммоль) N,N-диметилгистидина гидрохлорида моногидрата (V.N. Reinhold et a/., J. Med. Chem. 11, 258 (1968)) растворяют в 40 мл воды, и раствор охлаждают при 0°C. При очень сильном перемешивании 1,23 мл (3,835 г, 24 ммоль, 1,2 экв.) брома быстро добавляют по каплям (время добавления: 1 мин 20 сек), не превышая 2°C. Реакционная смесь становится желтой, и образуется красноватое твердое вещество. Через семь минут после окончания добавления брома все красное твердое вещество растворяется, а затем добавляют 7,417 г (60 ммоль, 3 экв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа получают белую суспензию. Смесь фильтруют, и осадок промывают 2×2 мл воды.

Фильтрат наносят на колонку, заполненную 100 г Dowex® 50WX2-400, предварительно уравновешенную 1 н. соляной кислотой (HCl). После элюирования 800 мл 1 н. соляной кислоты, а затем 1000 мл 2 н. соляной кислоты фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют.После выпаривания и двух совместных выпариваний с 2×50 мл толуола получают 4,84 г (63%) желаемого продукта в форме желтоватых кристаллов после высушивания.

¹Н-ЯМР (D₂O, 400 МГц): δ (млн^-1)=2.86 (s, 6Н); 3.32 (m, 2Н); 3.61 (m, 2Н); 4.21 (m, 1Н); 4.32 (m, 1Н); 7.37 (s, 1Н).

СЭЖХ-МС (ES+): 303,8 (МН+)

Пример 3: Получение 2-{2-[(2-аммонио-2-карбоксиэтил)тио]-1Н-имидазол-4-ил}-1-карбокси-N-метилэтанаминия ди гидрохлорида (HisNHMe-Cys, 2HCl)

1,187 г (5,656 ммоль) α-N-метилгистидина гидрохлорида (V.N.Reinhold et al., J. Med. Chem. 11, 258 (1968)) растворяют в 11,3 мл деминерализованной воды. Раствор охлаждают при 0°C, и 377 мкл (1,175 г, 7,353 ммоль, 1,3 экв.) брома добавляют по каплям при очень сильном перемешивании (время добавления: 1 мин 45 сек). Реакционная смесь становится желтой, и температура повышается до 4°C.

Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 2,119 г (16,96 ммоль, Зэкв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа смесь наносят на колонку, заполненную 50 г Dowex® 50WX2-400, предварительно уравновешенную 0,5 н. соляной кислотой. После элюирования 250 мл 0,5 н. соляной кислоты, а затем 250 мл 1 н. соляной кислоты и 500 мл 1,5 н. соляной кислоты фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют.После выпаривания и высушивания в вакууме (20 мбар) получают 1,427 г (68%) желаемого продукта в форме желтых кристаллов.

¹Н-ЯМР (D₂O, 400 МГц): δ (млн^-1)=2.71 (s, 3H); 3.33 (m, 2Н); 3.62 (m, 2Н); 4.08 (m, 1Н); 4.28 (m, 1Н); 7.40 (s, 1Н).

СЭЖХ-МС (ES+): 289,8 (МН+)

2 - Получение соединений Формулы (I) по изобретению (без выделения промежуточных соединений Формулы (II))

2-1 - Получение 2-тиогистидина

Пример 4: Получение L-2-тиогистидина из гистидина в одном реакторе

a) Синтез промежуточного соединения His-Cvs (соединение формулы (II))

317,6 г (1,5 моль) L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 3 литрах деминерализованной воды. Раствор переносят в стеклянный реактор с двойными стенками с механической мешалкой и охлаждают при -4°C. При очень сильном перемешивании 100,2 мл (311,6 г, 1,95 моль, 1,3 экв.) брома очень быстро добавляют через виалу для брома, не превышая 4°C (время добавления: 2 мин 50 сек). Реакционная смесь становится желто-оранжевой, но остается прозрачной и гомогенной. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 562 г (4,5 моль, 3 экв.) L-цистеина, и внутренняя температура повышается до 12°C. Смесь сразу теряет свой цвет. Через несколько минут раствор становится желтоватым.

После перемешивания при 0°C в течение 1 часа анализ образца с помощью ¹Н-ЯМР (D₂O) показывает, что аддукт His-Cys образовался при выходе реакции 70%.

Охлаждающую систему выключают, и реакционной смеси дают возможность перемешиваться в течение 1 часа. Внутренняя температура повышается до 12°C. Аддукт His-Cys не выделяют и задействуют непосредственно в следующей стадии.

b) Синтез L-2-тиогистидина

Затем к смеси добавляют 793,4 мл (960 г, 9 моль, 6 экв.) 3-меркаптопропионовой кислоты, а затем ее нагревают при сильном перемешивании при 100°C в течение 18 ч.

Анализ образца ¹Н-ЯМР (D₂O) показывает, что аддукт His-Cys полностью расщепляется до L-2-тиогистидина.

c) Выделение L-2-тиогистидина

После охлаждения при комнатной температуре темно-коричневую смесь экстрагируют 4×3 л этил ацетата.

Водную фазу сохраняют и помещают в сильный поток азота в бане при 40°C. pH смеси доводят до 8,5 быстрым добавлением 20% водного раствора аммиака (приблизительно 580 мл). Затем, еще в атмосфере азота, добавляют по каплям 37% концентрированную соляную кислоту (приблизительно 120 мл) до достижения pH 6,5. Бесцветный осадок образуется при добавлении кислоты, и суспензию поддерживают в течение 1 часа при 40°C при перемешивании (в атмосфере азота).

После фильтрования и промывания 3×300 мл деминерализованной воды с последующими 2 промывками 600 мл абсолютного этанола и 3×600 мл н-пентана полученное твердое вещество высушивают над P₂O₅ в вакууме (20 мбар). Получают 130,1 г (45%) L-2-тиогистидина в форме белого порошка.

Аналитические данные полученного продукта идентичны данным в литературе (J.Xu, J.C.Yadan, J. Org. Chem. 60, 6296-6301 (1995)).

[α]_D: -11,0 (c=1,0; 1 н. HCl)

¹Н-ЯМР (D₂O/DCl, 400 МГц): δ (млн^-1)=3.10 (m, 2H); 4.20 (m, 1H); 6.77 (s, 1H).

СЭЖХ-МС (ES+): 188,6 (MH+)

В приведенных ниже примерах 5-8 показаны варианты солей присоединения кислоты соединения формулы (III), которые можно использовать, а также варианты тиола, который можно использовать. Эти примеры предназначены только для иллюстративных целей и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.

Пример 5: Получение L-2-тиогистидина из L-гистидина в одном реакторе - варианты солей присоединения кислоты

Методика является такой, как описано в примере 2, за исключением того, что используют 5 г (32,2 ммоль) L-гистидина, растворенного в 65 мл воды, и 900 мкл (1,66 г, 16,1 ммоль, 1 экв.) 98% серной кислоты.

Получают 2,72 г (45%) L-2-тиогистидина в форме белого порошка. Анализ ¹Н-ЯМР (D₂O/DCl) идентичен описанному в примере 1.

Пример 6: Получение L-2-тиогистидина из L-гистидина в одном реакторе - вариант тиола (меркаптоуксусная кислота)

3,5 г (16,52 ммоль) L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 33 мл воды, и раствор охлаждают при -3°C. При очень сильном перемешивании 1,1 мл (3,433 г, 21,48 ммоль, 1,3 экв.) брома быстро добавляют по каплям (время добавления: 3 мин). Реакционная смесь становится желтой. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 6,19 г (49,58 ммоль, 3 экв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 30 мин добавляют 7,13 мл (9,4 г, 99,17 ммоль) меркаптоуксусной кислоты, а затем раствор при перемешивании нагревают при 80°C в течение 40 ч.

Для выделения L-2-тиогистидина методика является такой, как описано в примере 1. Получают 43% L-2-тиогистидина в форме кремово-белого порошка. Анализ ¹Н-ЯМР (D₂O/DCl) идентичен описанному в примере 1.

Пример 7: Получение L-2-тиогистидина из L-гистидина в одном реакторе - вариант тиола (меркаптогексановая кислота)

257 мг (1,21 ммоль) L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 2,4 мл воды, и раствор охлаждают при -3°C. При очень сильном перемешивании 80 мкл (252 мг, 1,58 ммоль, 1,3 экв.) брома быстро добавляют по каплям. Реакционная смесь становится желтой. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 455 мг (3,64 ммоль, 3 экв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа добавляют 933 мкл (1,0 г, 6,07 ммоль) меркаптогексановой кислоты, а затем раствор при перемешивании нагревают при 80°C в течение 40 ч.

Анализ ¹Н-ЯМР (D₂O) образца показывает, что аддукт His-Cys полностью расщепляется до L-2-тиогистидина.

Пример 8: Получение L-2-тиогистидина из L-гистидина в одном реакторе - вариант тиола (дитиотрейтол)

10,72 г (50,62 ммоль) L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 100 мл воды, и раствор охлаждают при 0°C. При очень сильном перемешивании 3,38 мл (10,51 г, 65,81 ммоль, 1,3 экв.) брома быстро добавляют по каплям (время добавления: 3 мин 20 сек), не превышая 1°C. Реакционная смесь становится желтой. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 18,96 г (151,8 ммоль, 3 экв.) L-цистеина. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа добавляют 47,08 г (303,7 ммоль, 6 экв.) дитиотрейтола, а затем раствор при перемешивании нагревают при 80°C в течение 40 ч.

Для выделения L-2-тиогистидина методика является такой, как описано в примере 1.

Получают 41% L-2-тиогистидина в форме белого порошка.

Анализ ¹Н-ЯМР (D₂O/DCl) идентичен описанному в примере 1.

Пример 9: Получение D-2-тиогистидина из D-гистидина в одном реакторе

Методика является такой, как описано в примере 2-1, за исключением того, что используют 10,32 г (65,84 ммоль) D-гистидина, растворенного в 132 мл воды, и 5,5 мл (6,48 г, 65,84 ммоль) концентрированной соляной кислоты.

Получают 4,4 г (35%) D-2-тиогистидина в форме белого порошка.

Анализ ¹Н-ЯМР (D₂0/DCl) идентичен описанному в примере 1.

[α]_D:+10,5 (с=1,0; 1 н. HCl)

Пример 10: Получение D,L-2-тиогистидина из D,L-гистидина в одном реакторе

a) Синтез аддукта His-Cvs

10,65 г (50,8 ммоль) D.L-гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в 100 мл деминерализованной воды. Раствор охлаждают при -3°C. При очень сильном перемешивании добавляют 3,43 мл (10,66 г, 66 ммоль, 1,3 экв.) брома очень быстро через виалу для добавления брома, не превышая 1°C (время добавления: 2 мин 40 сек). Реакционная смесь становится желто-оранжевой, но остается прозрачной и гомогенной. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 19,03 г (152,4 моль, 3 экв.) L-цистеина, и внутренняя температура повышается до 4°C. Смесь сразу теряет свой цвет. Через несколько минут раствор становится светло-желтым. После перемешивания при 0°C в течение 1 часа анализ с помощью ¹Н-ЯМР (D₂O) образца показывает, что аддукт His-Cys образуется при выходе реакции 72%.

Охлаждающую баню удаляют, и реакционной смеси дают возможность перемешиваться в течение 30 мин. Внутренняя температура повышается до 10°C.

b) Синтез D.L-2-тиогистидина

Затем к смеси добавляют 27 мл (32,68 г, 304,8 моль, 6 экв.) 3-меркаптопропионовой кислоты, после чего ее нагревают при сильном перемешивании при 80°C в течение 30 ч.

Анализ образца с помощью ¹Н-ЯМР (D₂O) показывает, что аддукт His-Cys полностью расщепляется до 2-тиогистидина.

c) Выделение D.L-2-тиогистидина

После охлаждения при комнатной температуре темно-коричневую смесь экстрагируют 4*100 мл этилацетата.

Водную фазу сохраняют и помещают в сильный поток азота в бане при 40°C. pH смеси доводят до 6 быстрым добавлением 20% водного раствора аммиака. Образуется бесцветный осадок, и суспензию поддерживают в течение 25 мин при 40°C при перемешивании (в атмосфере азота).

После фильтрования и промывания 3×15 мл деминерализованной воды с последующими 2 промывками 15 мл абсолютного этанола и 3×15 мл н-пентана полученное твердое вещество высушивают над P₂O₅ в вакууме (20 мбар). Получают 5,2 г D.L-2-тиогистидина в форме белого порошка, содержащего примерно 10% цистеина.

Продукт очищают кислотно-щелочной обработкой: 585 мг (3,79 ммоль) дитиотрейтола растворяют в 100 мл деминерализованной воды, а затем добавляют полученный выше продукт (5,2 г), суспензию помещают в атмосферу азота в водяной бане на 40°C и добавляют 10 мл (11,84 г) концентрированной соляной кислоты очень медленно по каплям до тех пор, пока твердое вещество не растворится полностью. Затем pH доводят до 6 медленным добавлением 3 мл (2,735 г) 20% водного раствора аммиака. Медленно образуется мелкий белый осадок, и суспензию поддерживают при перемешивании в течение 1 часа.

После фильтрования и промывания 3×10 мл деминерализованной воды с последующими 3 промывками 10 мл абсолютного этанола и 3×10 мл н-пентана полученное твердое вещество высушивают над P₂O₅ в вакууме (20 мбар). Получают 3,82 г (39%) D,L-2-тиогистидина в форме белого порошка.

Анализ ¹Н-ЯМР (D₂O/DCl) идентичен описанному в примере 1.

[α]_D: 0(c=1, ; 1 н.Cl)

2-2 - Получение производных 2-тиогистидина

Пример 11: Получение α,α-диметил-2-тиогистидина из α,α-диметилгистидина в одном реакторе

a) Получение аддукта HisNMe₂-Cvs (соединение формулы (II))

23,76 г (0,1 моль) α,α-диметилгистидина гидрохлорида моногидрата (V.N. Reinhold et al., J. Med. Chem. 11, 258 (1968)) растворяют в 200 мл воды. Раствор охлаждают при -3°C, и при очень сильном перемешивании 6,68 мл (20,77 г, 130 ммоль, 1,3 экв.) брома быстро добавляют по каплям, не превышая 3°C (время добавления: 4 мин). Реакционная смесь становится желтой, и образуется красноватое твердое вещество. Через семь минут после окончания добавления брома красное твердое вещество полностью растворяется, и добавляют 37,08 г (0,3 моль, 3 экв.) L-цистеина. Внутренняя температура повышается до 0°C-1°C, и смесь сразу теряет свой цвет.

После перемешивания при 0°C в течение 1 часа анализ образца ¹Н-ЯМР (D₂O) показывает, что аддукт HisNMe₂-Cys образуется при выходе реакции 63%. Ледяную баню удаляют, и реакционной смеси дают возможность перемешиваться в течение 1 часа. Внутренняя температура повышается до 10°C.

b) Получение α,α-диметил-2-тиогистидина

Затем к смеси добавляют 87,7 мл (106 г, 10 экв.) 3-меркаптопропионовой кислоты, и нагревают ее при сильном перемешивании при 80°C в течение 24 ч.

Анализ образца ¹Н-ЯМР (D₂O) показывает, что продукт HisNMe₂-Cys расщепляется полностью.

c) Выделение α,α-диметил-2-тиогистидина

После охлаждения при комнатной температуре оранжевую смесь экстрагируют 4×400 мл этилацетата.

Водную фазу сохраняют, и pH доводят до 4,5-5 20% водным раствором аммиака (приблизительно 21 мл). С целью улавливания избытка цистеина, присутствующего в среде, добавляют 30,5 мл (31,8 г, 3 экв.) бензальдегида (в соответствии с MP. Schubert, J. Biol. Chem. 114, 341-350 (1936) or M.Seki et al., J. Org. Chem. 67 (16), 5532 (2002)). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч, и 2-фенилтиазолидин-4-карбоновая кислота осаждается в форме светло-желтого твердого вещества. После фильтрования твердого вещества и промывания 4×40 мл воды фильтрат экстрагируют 2×200 мл этилацетата.

Водную фазу сохраняют, и pH доводят до 6 20% водным раствором аммиака (приблизительно 2 мл). Затем смесь выпаривают до сухости, и полученное твердое вещество перекристаллизуют в воде. Получают 7,28 г (33%) желаемого продукта в форме белого порошка.

Аналитические данные идентичны описанным в литературе (WO 95/18108).

¹Н-ЯМР (D₂O/DCl, 400 МГц): δ (млн^-1)=2.87 (s, 6Н); 3.20 (m, 2Н); 4.19 (m, 1Н); 6.78 (s, 1H).

СЭЖХ-МС (ES+): 216,5 (МН+)

Пример 12: Получение α-метил-2-тиогистидина из α-метилгистидина в одном реакторе

11,93 г (54,5 ммоль) α-метилгистидина гидрохлорида (V.N.Reinhold et al., J. Med. Chem. 11, 258 (1968)) растворяют в 109 мл воды, а затем раствор охлаждают при 0°C. При очень сильном перемешивании добавляют 3,64 мл (11,33 г, 70,9 ммоль, 1,3 экв.) брома добавляют по каплям, не превышая 5°C (время добавления: 2 мин 30 сек). Реакционная смесь становится желтой. Через три минуты после окончания добавления брома добавляют 20,22 г (163,6 ммоль, 3 экв.) L-цистеина, и внутренняя температура повышается до 8°C. Смесь сразу теряет свой цвет. После перемешивания при 0° в течение 1 часа к смеси добавляют 28,84 мл (34,9 г, 6 экв.) 3-меркаптопропионовой кислоты, и ее нагревают при сильном перемешивании при 100°C в течение 20 ч.

Путем продолжения протокола аналогично примеру 11 получают 5,398 г (48%) α-метил-2-тиогистидина в форме белого порошка.

¹Н-ЯМР (D₂O, 400 МГц): δ (млн^-1)=2.65 (s, 3H); 3.15 (m, 2Н); 4.12 (т, 1Н); 6.77 (s, 1Н).

¹³С-ЯМР (D₂O, 400 МГц): δ (млн^-1)=24.8; 32.3; 60.0; 116,4; 123.2; 156.9; 170.0.

СЭЖХ-МС (ES+): 202,7 (МН+)

Изобретение относится к способу синтеза производного 2-тиогистидина формулы (I) из соединения формулы (II) путем реакции расщепления в присутствии тиола при температуре, равной 60°C или выше, а также к соединениям формулы (II) и к способу их синтеза. В общей формуле (I), (II) R₁ и R₂ независимо друг от друга представляют собой атом водорода и R₃ и R₄ независимо друг от друга представляют собой атом водорода или (С₁-С₄)алкильную группу, R₅ и R₆ представляет собой атом водорода. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 12 пр.

1. Способ синтеза производного 2-тиогистидина приведенной ниже формулы (I):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси, где:
- R₁ и R₂ независимо друг от друга представляют собой атом водорода и
- R₃ и R₄ независимо друг от друга представляют собой атом водорода или (С₁-С₄)алкильную группу, такую как метил,
включающий приведенные ниже последовательные стадии:
(i) реакция расщепления соединения приведенной ниже формулы (II):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси, где:
- представляет собой или ,
- R₁, R₂, R₃ и R₄ являются такими, как определено выше,
- R₅ представляет собой атом водорода и
- R₆ представляет собой атом водорода,
в присутствии тиола, предпочтительно растворимого в реакционном растворителе, который может, в частности, представлять собой воду, при температуре 60°С или выше, с получением соединения формулы (I), и
(ii) выделение соединения формулы (I), полученного на предшествующей стадии (i), из реакционной среды.

2. Способ по п. 1, где тиол имеет формулу R-SH, где R представляет собой нормальную или разветвленную, предпочтительно нормальную, алкильную цепь, содержащую от 1 до 8, в частности от 2 до 6, атомов углерода, замещенную одной или более чем одной группой, выбранной из ОН, SH, NH₂ и СООН.

3. Способ по п. 2, где тиол выбран из цистеина, дитиотрейтола, 2-меркаптоэтанола, 2-меркаптопропионовой кислоты, 3-меркаптопропионовой кислоты, меркаптоуксусной кислоты, меркаптогексановой кислоты и тиогликолевой кислоты и предпочтительно представляет собой 3-меркаптопропионовую кислоту.

4. Способ по п. 1, где стадию (i) осуществляют при температуре от 60°С до 120°С, в частности от 80°С до 100°С.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (Ia):

или его физиологически приемлемую соль, таутомер, стереоизомер или смесь стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смесь энантиомеров, и, в особенности, их рацемическую смесь,
где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются такими, как определено в п. 1.

6. Способ по п. 1, где соединение формулы (I) представляет собой 2-тиогистидин, α-метил-2-тиогистидин или Nα,α-диметил-2-тиогистидин, и, в частности, L-2-тиогистидин.

7. Способ по п. 1, где соединение формулы (II) получают из соли присоединения кислоты, за исключением соли йодисто-водородной кислоты, соединения формулы (III):

или его таутомера, или стереоизомера, или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси,
где , R₃ и R₄ являются такими, как определено в п. 1,
путем последовательного взаимодействия с бромом,
а затем с производным цистеина формулы (IV):

или его стереоизомером, или смесью стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смесью энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смесью, где R₅ и R₆ являются такими, как определено в п. 1.

8. Способ по п. 7, где соединение формулы (I) имеет формулу (Ia), как определено в п. 5, и способ включает приведенные ниже последовательные стадии:
(а2) взаимодействие соли присоединения кислоты, за исключением соли йодисто-водородной кислоты, соединения формулы (IIIa):

или ее стереоизомера, или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси,
где , R₃ и R₄ являются такими, как определено в п. 1,
с бромом,
а затем с производным цистеина формулы (IV), как определено в п. 7, или его стереоизомером, или смесью стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смесью энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смесью, и, в частности, с цистеином и, в особенности, L-цистеином,
с получением соединения формулы (IIa):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси,
где , R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено в п. 1,
(b2) реакция расщепления соединения формулы (IIa), полученного на предшествующей стадии (а2), в присутствии тиола при температуре 60°С или выше с получением соединения формулы (Ia), и
(с2) выделение соединения формулы (Ia), полученного на предшествующей стадии (b2), из реакционной среды.

9. Способ по п. 7, где производное цистеина формулы (IV) используют в избытке в соотношении от 2 до 7, предпочтительно от 3 до 5, молярных эквивалентов производного цистеина по отношению к соединению формулы (III).

10. Способ по п. 8, где производное цистеина формулы (IV) используют в избытке в соотношении от 2 до 7, предпочтительно от 3 до 5, молярных эквивалентов производного цистеина по отношению к соединению формулы (III).

11. Способ по п. 7, где бром используют в соотношении от 1 до 1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).

12. Способ по п. 8, где бром используют в соотношении от 1 до 1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).

13. Способ по п. 9, где бром используют в соотношении от 1 до 1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).

14. Способ по п. 7, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

15. Способ по п. 8, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

16. Способ по п. 9, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

17. Способ по п. 10, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

18. Способ по п. 11, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

19. Способ по п. 12, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

20. Способ по п. 13, где получение соединения (I) из соединения (III) осуществляют в одном реакторе без выделения промежуточного соединения (II).

21. Соединение формулы (II):

или его физиологически приемлемая соль, таутомер, стереоизомер или смесь стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смесь энантиомеров, и, в особенности, их рацемическая смесь, где:
- представляет собой или , и
- R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено в п. 1,
за исключением соединения, где представляет собой или , и каждый R₃, R₄, R₅ и R₆ представляет собой атом водорода.

22. Способ получения соединения формулы (II):

или его физиологически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или смеси стереоизомеров в любых соотношениях, в частности смеси энантиомеров, и, в особенности, их рацемической смеси, где:
- представляет собой или , и
- R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ и R₆ являются такими, как определено в п. 1,
путем взаимодействия соли присоединения кислоты, за исключением соли йодисто-водородной кислоты, соединения формулы (III), как определено в п. 7, с бромом, а затем с 2-7, предпочтительно 3-5, молярными эквивалентами по отношению к соединению формулы (III) производного цистеина формулы (IV), как определено в п. 7, и, в частности, цистеина и, в особенности, L-цистеина.

23. Способ по п. 22, где бром используют в соотношении от 1 до 1,5 молярных эквивалентов по отношению к соединению формулы (III).