СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ НАЛИЧИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ВЛИЯНИЯ ЖЕЛЕЗОДЕКСТРАНА НА СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ ПОРОСЯТ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к патоморфологической практике, и может быть использовано для морфологической диагностики побочных эффектов железодекстрановых препаратов.

В настоящее время для лечения и профилактики железодефицитной анемии применяются препараты железа для энтерального и парентерального (внутримышечного и внутривенного) введения [2, 5]. Профилактическое применение наиболее распространенных железодекстрановых препаратов осуществляется в основном путем внутримышечных инъекций. Вместе с тем известно, что железо, являясь металлом с переменной валентностью, в ряде биохимических реакций приводит к образованию активных форм кислорода, которые оказывают разрушающее действие на биологические структуры [1, 3].

Из уровня техники известен способ диагностики токсического поражения печени, заключающийся в ультразвуковом исследовании брюшной полости (Клиническое руководство по ультразвуковой диагностике. Под ред. В.В. Митькова. 1Т. М., ВИДАР, 1996 г., стр.39). Недостатками этого способа являются необходимость наличия соответствующего оборудования для ультразвуковой диагностики и условий для проведения исследования; сложность интерпретации полученных результатов; идентичность картины токсического поражения печени с другими хроническими заболеваниями печени.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ ранней диагностики токсических поражений печени, состоящий в исследовании сыворотки крови (заявка №2005112395 от 25.04.2005, опубл. 10.11.2006. Бюл. №31). Недостатками этого способа являются сложность осуществления способа; необходимость использования дорогостоящего оборудования и реактивов; диагностическая неточность в связи с изменениями вышеуказанных показателей и при других патологиях печени.

В предлагаемом нами способе диагностики используются наиболее объективные гистологические и морфометрические методы исследования, позволяющие наиболее точно определить характерные признаки влияния железодекстрана на печень.

Повышение точности диагностики заключается в выделении наиболее информативных морфологических критериев, имеющих определяющее значение при выявлении патологического влияния на печень поросят железодекстрана, применяемого для лечения и профилактики анемий. В заявленном способе учитывается влияние железа на интенсификацию процесса перекисного окисления липидов, приводящую к повреждению структур печени, а также реакцию клеток мононуклеарно-макрофагальной системы, сопровождаемую увеличением их количества.

Задачей изобретения является создание способа качественной и количественной морфологической диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на состояние печени поросят.

Целью изобретения является создание объективной качественной и количественной морфологической диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на состояние печени у поросят после применения его в качестве профилактического лекарственного средства для предотвращения развития алиментарной железодефицитной анемии.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение точности посмертной диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на печень поросят.

Указанный технический результат достигается путем системного пошагового комплексного качественного и количественного морфологического анализа состояния печени при изучении морфологии органа по гистологическим срезам окрашенных гематоксилином и эозином, включающего изучение и описание гистологических структур, а также подсчет среднего количества клеток мононуклеарно-макрофагальной системы, в том числе гемосидерофагов, двуядерных гепатоцитов (BH - binuclear hepatocytes) и апоптозных телец (AB - apoptotic bodies).

Для изучения наличия патологического влияния железодекстрана на печень поросят были проведены исследования на клинически здоровых поросятах крупной белой породы, обоего пола в период от рождения до достижения ими 14-дневного возраста. Животные для проведения экспериментов подбирались в группы по принципу аналогов с учетом пола, возраста, породы и массы тела. На всем протяжении опыта животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания. В соответствии с задачами проводимого исследования животные были разделены на контрольную и опытную группы. Опытной группе животных однократно на 4 день жизни внутримышечно вводили железодекстран в дозе 2 мл на поросенка.

Убой животных проводили по достижении поросятами 14-дневного возраста. Материалом для гистологических исследований служили образцы печени, из которых изготавливали гистологические срезы по общепринятым методикам с последующим их окрашиванием для обзорных целей гематоксилином и эозином.

Далее проводится морфологический системный последовательный анализ гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерением среднего количества двуядерных гепатоцитов, апоптозных телец и клеток мононуклеарно-макрофагальной системы.

Измерения проводятся с помощью светового микроскопа в 30 последовательных полях зрения при общем увеличении 100х. Для удобства подсчета количества клеток необходимо воспользоваться окулярной стереометрической сеткой, вмонтированной в окуляр микроскопа. А все полученные цифровые данные обработать методами математической статистики, принятой в биологии и медицине с определением вероятности различия между двумя средними по таблице Стьюдента.

Результаты морфологических исследований показывают, что в печени альтеративные процессы после введения железодекстрана, прежде всего, характеризуются повреждением эндотелия крупных и мелких сосудов, что проявляется набуханием эндотелиальных клеток и расширением межклеточных щелей. В результате повреждения сосудов происходит нарушение их проницаемости, из-за чего в органах наблюдается незначительное увеличение межклеточной жидкости в периваскулярной ткани (пространство Диссе), которое не сопровождается выходом тяжелых фракций белков и форменных элементов крови из просвета сосудов. В меньшей степени альтеративные процессы затрагивают гепатоциты, в которых развивается зернистая дистрофия.

Наблюдается (табл.1) увеличение среднего количества двуядерных гепатоцитов в два и более раза (BH×2), свидетельствующее об усилении компенсаторных процессов, протекающих в печени. Одновременно в два и более раза достоверно увеличивается и среднее количество апоптозных телец (AB×2), инициированных перекисным повреждением клеток [4]. Также происходит усиление функции мононуклеарно-макрофагальной системы органа, что проявляется возрастанием в два и более раза средней численности гемосидерофагов (KC×2) и изменением их морфологии в виде набухания и увеличения количества цитоплазматических отростков. При этом в цитоплазме гемосидерофагов выявляются многочисленные зерна гемосидерина.

Таблица 1 Морфометрические показатели печени поросят контрольной и опытной групп Морфометрический показатель Группа контрольная опытная 1 2 3 Среднее количество:     двуядерных гепатоцитов 2,3±1,0 5,0±1,0* апоптозных телец 0,7±0,8 1,5±1,1* гемосидерофагов 9,3±3,4 25,4±6,3* Примечание: * p≤0,01.

Таким образом, точность диагностики патологического влияния железодекстрана на орган определяется по совокупности патоморфологических признаков, включающих наличие кровенаполнения синусных капилляров, отека пространства Диссе, набухания эндотелия сосудов, увеличения среднего количества клеток мононуклеарно-макрофагальной системы, в том числе гемосидерофагов (KC×2), а также увеличения количества двуядерных гепатоцитов (BH×2) и апоптозных телец (AB×2).

Эти сведения имеют значение при комплексной оценке новых и уже известных лекарственных средств на основе железодекстрана, предназначенных для лечения и профилактики железодефицитной анемии поросят.

Литература:

1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский Образовательный Журнал. 2000. Т 6, №12. - С.13-19.

2. Гуревичев П.А., Дельцов А.А., Уразаев Д.Н. Железодекстрановые препараты в ветеринарии. // Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России. - Материалы съезда. - Воронеж, 2007. - 699 с.

3. Зенков Н.К. Окислительный стресс. Биохимические и патофизиологические аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Лапкин, Е.Б. Меньщикова. - М.: Наука / Интерпериодика, 2001. - 343 с.

4. Лю Б.Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза и возможные варианты его механизма // Успехи соврем. биол. 2001. 121 (5). 488-501.

5. Уразаев Д.Н., Дельцов А.А., Парасюк Л.П., Уразаева Р.Д. Биологическая роль железа. Применение железосодержащих препаратов в ветеринарной медицине: монография. - М.: Колос, 2010. - 104 с.

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на печень поросят. Сущность способа заключается в проведении морфологического системного пошагового анализа гистологических срезов печени с описанием ее гистологической структуры, измерением среднего количества двуядерных гепатоцитов, апоптозных телец и клеток мононуклеарно-макрофагальной системы. При выявлении комплекса патогномоничных морфологических изменений, включающего наличие кровенаполнения синусных капилляров, отека пространства Диссе, набухания эндотелия сосудов, зернистой дистрофии гепатоцитов, увеличения среднего количества клеток мононуклеарно-макрофагальной системы, в том числе гемосидерофагов, в 2 раза и более, а также увеличения количества двуядерных гепатоцитов и апоптозных телец в 2 раза и более, считают влияние железодекстрана на состояние печени поросят патологическим. Изобретение обеспечивает повышение точности посмертной диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на печень поросят. 1 табл.

Способ качественной и количественной морфологической диагностики патологического влияния железодекстрана на состояние печени поросят после его введения поросятам, заключающийся в проведении морфологического системного последовательного анализа гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерением среднего количества двуядерных гепатоцитов, апоптозных телец и клеток мононуклеарно-макрофагальной системы с помощью светового микроскопа в 30 последовательных полях зрения при общем увеличении 100х, и при выявлении комплекса патогномоничных морфологических изменений, включающего наличие кровенаполнения синусных капилляров, отека пространства Диссе, набухания эндотелия сосудов, зернистой дистрофии гепатоцитов, увеличения среднего количества клеток мононуклеарно-макрофагальной системы, в том числе гемосидерофагов, в 2 раза и более (KC×2), а также увеличения количества двуядерных гепатоцитов (BH×2) и апоптозных телец в 2 раза и более (AB×2), считают влияние железодекстрана на состояние печени поросят патологическим.