СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ БИОЦИДНОЙ И ЛЕЧЕБНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ Российский патент 2015 года по МПК A61K9/08 A61K39/85 A61K33/38 

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии.

Известны способы повышения получения стафилококковой инактивированной вакцины для гуманной медицины и антистафилококкового препарата (АСП), изготавливаемого научно-исследовательским центом Игнатова (Справочник «Видаль ветеринар». 2013 г., 56-58; А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. С-Петербург, 1998, с.330-335; А.И. Воробьев. Справочник практикующего врача. М.: Медицина, 1990, с.321-327).

Существенным недостатком указанных препаратов является выращивание производственных штаммов стафилококков на мясогидрализатном глицериновом бульоне, необходимость подачи углекислого газа, применение для детоксикации и полимеризации комплекса стафилококковых анатоксинов 0,5-0,7%-ного раствора формальдегида, который обладает не только канцерогенами, но и не обеспечивает полноту детоксикации стафилококковых и других бактериальных токсинов. Следует указать, что название антистафилококковый препарат Игнатова не отражает общепринятую терминологию - анатоксин или вакцина. Кроме того, концентрация каждого из 3-х штаммов стафилококков 10 м.к./мл является весьма завышенной, т.к. на мясопептонном бульоне максимальное накопление составляет 3-5 млрд/мл и не более, а использование мясопептонного агара технологически не выгодно и не безопасно при работе с живыми микроорганизмами.

За прототип взят способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины (патент РФ №23377014, опубл. 27.12.2009), включающий выращивание стафилококков на жидкой синтетической среде в 2-литровых бутылях в течение 10-12 суток до 11-12 млрд/мл взвеси стафилококков с последующим автоклавированием, детоксикацией и полимеризацией вначале 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида при 40°C в течение 2-3 суток, а затем 0,2-0,3%-ным раствором этония в течение 2-3 суток и сорбцией на 3-5 мг/мл гидроокиси алюминия.

Недостатком является недостаточное биоцидное действие в отношении ряда микроорганизмов и лечебная эффективность при гнойно-некротических поражениях кожи, дерматитах, экземах у коров, больных маститом.

Технической задачей изобретения является повышение биоцидного и лечебного действия стафилококковой анатоксин-вакцины путем активирования суспензии (взвеси) и комплекса стафилококковых токсинов коллоидными ионами серебра.

Технический результат достигается использованием для выращивания стафилококков жидкой синтетической питательной среды, автоклавирования микроорганизмов и детоксикацией и полимеризацией комплекса токсинов вначале 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида при 38-40°C в течение 2-3 суток, а затем 0,3-0,5%-ным раствором этония с последующим активированием раствора биопрепарата 10 мг/л коллоидными ионами серебра.

Полученные результаты представлены технологией изготовления и примерами по изучению биоцидных и лечебных свойств биопрепарата. Технология изготовления анатоксин-вакцины содержит следующие этапы:

- выращивание золотистых стафилококков на жидкой синтетической питательной среде в 2-литровых биобутылях в течение 10-12 суток при 37°C до концентрации 11,0±1,0 миллиардов микробных тел в 1 мл;

- автоклавирование суспензии стафилококков при 1,0 атм в течение 30 минут;

- первая детоксикация стафилококковых токсинов 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида при 40°C в течение 2-3 суток;

- вторая детоксикация комплекса стафилококковых экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов 0,3-0,5%-ным раствором этония при 40°C в течение 2-3 суток;

- активирование суспензии стафилококков в комплексе с анатоксином 10 мг/л ионами серебра и сорбцией биопрепарата на гидроокиси алюминия;

- расфасовка препарата по флаконам и стерилизация при 1,0 атм в течение 30 минут.

Полученная стафилококковая анатоксин-вакцина была использована для изучения эффективности профилактики и лечения ожоговых и рваных ран, маститов у коров, дерматита и трофических язв плотоядных.

Предложенная технология изготовления стафилококковой анатоксин-вакцины отличается от существующих выращиванием стафилококков на жидкой синтетической питательной среде вместо мясопептонного глицеринового бульона и проведением полной детоксикации и инактивации экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов вначале 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида при 40°C в течение 2-3 суток, а затем 0,3-0,5%-ным раствором этония при 40°C в течение 2-3 суток.

Пример 1. Определение безвредности стафилококковой анатоксин-акцины (CAB)

Изучение токсичности CAB проводили на 12 белых мышах массой 20+2,0 г путем двукратного внутрибрюшинного (6 гол.) и подкожного (6 гол.) введения по 0,5 мл биопрепарата с интервалом 3 суток.

Все животные без видимых некротических, воспалительных процессов и общего токсикоза оставались живыми при наблюдении в течение 10 суток.

Пример 2. Испытание безвредности на собаках

Для исследования использовано 8 беспородных щенков в возрасте 2-3 месяцев массой 3-4 кг. Подопытным животным двукратно подкожно (4 гол.) и внутримышечно (4 гол.) ввели по 5 мл CAB с интервалом 5 суток. В течение 12 суток все животные оставались живыми, а на месте введения биопрепарата не отмечено воспалительных и гнойно-некротических поражений.

Пример 3. Сравнительная оценка биоцидного действия контрольной и экспериментальной анатоксин-вакцины без гидроокиси алюминия приведена в таблице 1,

где ИД - содержание инфекционных доз в 1 мл культуральной и эмбриональной жидкости, «+» - биоцидно действует, «-» - не действует.

Из данных, представленных в таблице 1, следует, что контрольные CAB с 0,1%-ным раствором глутарового альдегида и 0,2-0,3%-ным раствором этония биоцидное действие проявляют в разведении 1:1 и 1:2, а CAB с 10 мг/л ионами серебра 0,1%-ным раствором глутарового альдегида и 0,2-0,3%-ным раствором этония биоцидное действие проявляют в разведении 1:1,1:2, 1:8 и 1:16.

Пример 4

Сравнительная оценка эффективности лечения ожоговых ран у собак

Ожог кожи в диаметре 5-6 см у 12 беспородных щенков в возрасте 2-2,5 месяца проводили путем приложения на 4-5 минут нескольких слоев марли, смоченной 5%-ным раствором карболовой кислоты с последующим промыванием водой. Лечение проводили контрольной CAB и экспериментальной CAB с 10 мг/л ионами серебра на 2-й день после ожога кожи карболовой кислотой вначале промыванием, а затем приложением тканевой салфетки, пропитанной CAB.

Полученные результаты представлены в таблице 2.

Из полученных результатов следует, что при лечении ожоговых ран у собак экспериментальной стафилококковой анатоксин-вакциной с коллоидными ионами серебра процесс заживления ран завершался на 2-3 суток раньше по сравнению с контрольной стафилококковой анатоксин-акциной.

Пример 5

Сравнительная оценка эффективности контрольной и экспериментальной анатоксин-вакцины с ионами серебра при лечении коров, больных маститом, приведена в таблице 3.

Из данных, представленных в таблице 3, следует, что сроки лечения 36 коров, больных маститом, экспериментальной анатоксин-вакциной с коллоидными ионами серебра сократились в два раза.

Пример 6

Сравнительная оценка лечения собак, больных дерматомикозом, контрольной и экспериментальной анатоксин-вакциной с коллоидными ионами серебра приведена в таблице 4.

Известно, что к дерматомикозам относится фавус (парша) трихофития под общей нозологической формой «лишай». Возбудители дерматомикозов являются несовершенные плесневые грибы Asp. flavus и Asp. niger.

Из представленных данных следует, что лечение собак, больных дерматомикозом, с поражениями до 5-7 см в 2-3-х местах кожи с помощью экспериментальной анатоксин-вакцины с ионами серебра ускоряло заживление пораженных участков кожи на 4 дня по сравнению с контрольной анатоксин-вакциной.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой способ повышения биоцидной и лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины. Технический результат достигается использованием для выращивания стафилококков жидкой синтетической питательной среды, автоклавированием микроорганизмов и детоксикацией раствором глутарового альдегида и раствором этония с последующим активированием раствора биопрепарата 10 мг/л коллоидными ионами серебра. 4 табл., 6 пр.

Способ повышения биоцидной и лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины, включающий выращивание стафилококков на жидкой синтетической среде, автоклавирование, детоксикацию комплекса токсинов вначале 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида при 40°C в течение 2-3 суток, а затем 0,3-0,5%-ным раствором этония с последующим активированием раствора биопрепарата 10 мг/л коллоидными ионами серебра.