ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СОСТАВ С АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2015 года по МПК A61K31/194 A61K33/18 A61K35/12 A61K47/10 A61P31/04 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для превентивной и интенсивной терапии очаговых гнойно-септических и желудочно-кишечных заболеваний, стимуляции системы иммунитета и метаболических процессов у животных.

Известно применение йодинола для лечения гнойно-септических и желудочно-кишечных заболеваний животных. Йодинол включает в своем составе: йод кристаллический - 1 часть; калий йодид - 3 части; поливиниловый спирт - 10 частей; дистиллированная вода - 1000 частей (Мозгов И.Е. Фармакология, 1979. - С.290-291).

Преимущество применения препаратов йода в инфекционной патологии заключается в отсутствии привыкания к ним микроорганизмов. Однако наряду с высокой антиинфекционной активностью их применение per os противопоказано при почечной недостаточности и низкой функциональной активности печени. Кроме того, при длительном применении могут наблюдаться явления йодизма (избыток йода в организме).

Известно применение АСД второй фракции (антисептик стимулятор Дорогова-АСД Ф-№2) для лечения гнойно-септических и желудочно-кишечных заболеваний и стимуляции системы иммунитета. Препарат АСД при пероральном применении оказывает активизирующее действие на ЦНС и вегетативную нервную систему, стимулирует моторную деятельность желудочно-кишечного тракта, секрецию пищеварительных желез, повышает активность пищеварительных и тканевых ферментов, улучшает проникновение ионов Na+ и K+ через клеточные мембраны, способствует нормализации процессов пищеварения, усвоения питательных веществ и повышению естественной резистентности организма. При наружном применении препарат стимулирует активность ретикулоэндотелиальной системы, нормализует трофику и ускоряет регенерацию поврежденных тканей, обладает выраженным антисептическим и противовоспалительным действием. Следует отметить, что антисептическая активность препарата АСД напрямую связана с очень высокой щелочной реакцией. Нейтрализация янтарной кислотой щелочной реакции препарата АСД привела к утрате его антисептической активности.

(Ветеринарное законодательство СССР, т. №2. Наставление по применению АСД второй фракции в ветеринарной практике от 16 июля 1958 года, с.87-89).

Известно применение янтарной кислоты и ее солей (сукцинатов) для улучшения фармакологической активности и снижения токсического действия лекарственных средств (Коваленко А.Л., Белякова Н.В. Янтарная кислота: фармакологическая активность и лекарственные формы. Фармация 2000, №5-6. - С.40-42).

Известен комплексный иммунометаболический препарат на основе янтарной кислоты и АСД второй фракции - «Янтарный биостимулятор» (Патент РФ №2303979, 2007). Нейтрализация щелочной реакции препарата АСД Ф-2 янтарной кислотой позволила получить инъекционную форму комплексного иммунометаболического препарата, аккумулировавшего в себе положительные качества исходных компонентов. Однако препарат утратил антимикробную активность.

Известен комплексный иммунотропный антисептический препарат для лечения и профилактики инфекционного заболевания животных (Патент РФ №2361579 от 20 июля 2009 г.). Препарат включает в своем составе янтарную кислоту 1%, АСД второй фракции 4%, формалин 0,3%. Включение в состав препарата формалина обеспечивает высокую антиинфекционную активность при инъекционном методе введения. Тем не менее установлено, что спустя три месяца хранения антиинфекционная активность препарата снижается.

Известно, что включение янтарной кислоты в состав лекарственных препаратов позволяет улучшить их фармакологические свойства (Коваленко А.Л., Белякова Н.Е. Янтарная кислота: фармакологическая активность и лекарственные формы. Фармация 2000. - №5-6. - С.40-43). В этой связи есть все основания считать, что янтарная кислота в сочетании с препаратами йода вполне способна снизить риск йодизма при их длительном применении.

Задачей изобретения является способ получения нового состава на основе йода, янтарной кислоты и АСД второй фракции, обладающего иммунометаболической и антимикробной активностью.

Техническим результатом является получение комплексного иммунометаболического препарата с антимикробной активностью.

Иммунометаболический состав с антимикробной активностью, включающий янтарную кислоту, АСД второй фракции, в качестве антимикробного компонента используют йод и йодистый калий при следующем соотношении компонентов из расчета на 1 л, масс. %

Янтарная кислота 1,0 АСД второй фракции 4,0 Йод 0,015 Йодистый калий 0,05 Спирт поливиниловый 1,0 Дистиллированная вода Остальное

Способ получения нового состава препарата, названного нами йодинол янтарный биостимулятор, иллюстрируется следующим примером.

По технологии получения йодинола в стеклянную колбу внесли навеску из 9 г поливинилового спирта. В нее влили 700 мл дистиллированной воды. Нагрев до 90°C, получили светлый раствор. В другую стеклянную колбу внесли навеску из 10 г янтарной кислоты. В нее влили 200 мл дистиллированной воды. При нагревании до 70-80°C провели растворение кислоты. В отдельной колбе с 50 мл 70% спирта ректификата растворили навески из 5 г йодистого калия и 1,5 г кристаллического йода. Провели смешивание содержимого всех трех колб.

В полученный состав добавили 40 мл АСД второй фракции. Объем довели до 1 литра добавлением дистиллированной воды. Полученный раствор представлял прозрачную интенсивно темно-синего цвета жидкость. При длительном хранении (12 месяцев) осадка не образовалось, а антимикробная активность не уступала фармакопейному йодинолу.

Примеры применения заявляемого состава.

Пример 1. Влияние йод-янтарного биостимулятора на гематологические, иммунологические и биохимические показатели клинически здоровых телят при оральном применении

Для проведения опытов мы использовали янтарный биостимулятор, приготовленный согласно описанию патента РФ №2303979, и заявляемый состав, и фармакопейный йодинол. По принципу аналогов были сформированы три группы телят. Первой опытной группе (п=5) выпаивался янтарный биостимулятор, второй (п=5) йод-янтарный биостимулятор. Телятам третьей группы (п=5) выпаивался раствор йодинола, разведенный в трех частях воды. Препараты выпаивались в объеме 100 мл, один раз в сутки в течение 5 дней за 30 минут до выпойки молока.

Отбор проб крови для проведения исследований провели до, повторно на третьи и в завершении на четырнадцатые сутки после выпаивания препаратов. В таблицах 1, 2, 3 мы приводим сведения о динамике гематологических, иммунологических и биохимических исследований.

В таблице 1 приведено влияние препаратов на гематологические показатели телят, в таблице 2 - влияние препаратов на биохимические показатели крови телят, в таблице 3 - влияние препаратов на иммунологические показатели крови телят.

Результаты гематологических исследований свидетельствовали о том, что применение йод-янтарного биостимулятора оказало более выраженное влияние на уровень эритроцитов и насыщенность их гемоглобином. Уровень содержания гемоглобина на 3 и 14 сутки у телят этой группы был выше, чем у особей первой опытной и контрольной групп.

Пероральное применение препаратов янтарной кислоты обеспечило устранение метаболического ацидоза. Устранение метаболического ацидоза оказало позитивное влияние и на белковый обмен. Уровень общего белка в крови телят опытных групп находился в пределах средних физиологических показателей, в то время как у особей из контрольной группы он был чуть выше нижней границы.

Показатели бактерицидной и лизоцимной активности у телят обеих опытных групп были достоверно выше, чем у особей из контрольной группы. При этом эти показатели были выше у телят второй группы по отношению к первой.

Пример 2. Эффективность перорального применения йод-янтарного биостимулятора в клинике лечения легкого течения диареи новорожденных телят. При появлении первых клинических признаков диареи телятам первой группы (n=15) в течение 3 дней за 30 минут до выпойки молозива, а в дальнейшем молока выпаивали по 100 мл янтарного биостимулятора. Телята второй группы (n=15) в аналогичном порядке выпаивался йод-янтарный биостимулятор.

Результаты клинического наблюдения свидетельствовали о том, что у всех телят первой группы признаки диареи проявлялись в течение 3-4 дней, после чего они постепенно редуцировались. В среднем продолжительность клинического проявления диареи при легком течении составляла от 3 до 5 дней. Симптомы диареи у них были слабо выраженные и не требовали антибиотикотерапии. Тем не менее у 3 телят этой группы (20%) диарея сопровождалась симптомами интоксикации и обезвоживания.

Эффективность применения йод-янтарного биостимулятора оценивалась на телятах второй группы. При выстаивании препарата симптомы диареи редуцировались уже после первой выпойки. Продолжительность курса применения состава составляла 2-3 выпойки. При бактериологическом исследовании фецес от 5 больных диареей телят (отбиралась двукратно: - при клиническом проявлении и после ее затухания) выделены следующие микроорганизмы. Результаты бактериологического исследования фецес представлены в таблице 4.

Полученные данные бактериологических исследований свидетельствуют о том, что пероральное применение йод-янтарного биостимулятора обеспечивает выраженное влияние на микробиоценоз кишечника. В частности, произошло полное вытеснение стафилококков, стрептококков. Кишечная палочка была выделена в непатогенной форме, что указывало на возрастание ее роли в физиологическом процессе пищеварения. Одновременно выявлено повышение уровня лакто- и бифидобактерий, что указывало на восстановление нормальной микрофлоры кишечника.

Пример 3. Эффективность перорального применения йод-янтарного биостимулятора в клинике лечения диареи новорожденных телят с выраженным токсикоинфекционным синдромом.

Лечебная эффективность йод-янтарного биостимулятора была изучена в двух сериях опытов. В первой серии заявляемый состав применили на 5 телятах с признаками выраженной интоксикации и обезвоживания. Прогноз исхода заболевания был осторожный. Основанием для такого прогноза были результаты нестабильного лечебного эффекта при применении йодинола или янтарного биостимулятора.

Заявляемый состав выпаивали по 100 мл два раза в сутки за 30 минут до поения молозивом или молоком. Во всех случаях разовая дача молозива или молока уменьшалась в два раза. Однако недостающий объем восполнялся дачей подсоленной (8-9 г NaCl на 1 литр) кипяченой воды.

Во второй серии опытов йод-янтарный биостимулятор был испытан на 7 телятах во время эпизоотической вспышки колибактериоза. Проявлялся колибактериоз в септической форме. Заявляемый состав выпаивали по 100 мл два раза в сутки. Начальный прогноз исхода заболевания был отрицательный. Основанием для такого прогноза служили результаты неэффективной антибактериальной терапии павших телят.

От 5 из 7 телят до применения йодинол-янтарного биостимулятора были взяты пробы фецес. В ходе бактериологического исследования в 4 из 5 проб были выделены гемолитические штаммы кишечной палочки. Все культуры были патогенными для белых мышей. Вирулентность выделенных культур колебалась от 300 тыс. до 500 тыс. микр. тел.

Результаты бактериологического исследования фецес телят с синдромом тяжелого течения диареи представлены в таблице 5.

По результатам бактериологических исследований фецес установлено, что этиологию токсической диареи определяли ассоциации E.coli, S. aureus, Str. Haemoliticus. Это указывало на ее полимикробную этиологию, без выраженного доминирования того или иного возбудителя. При колибактериозе были выделены в монокультуры штаммы E.coli. В данном случае колибактериоз протекал как моноинфекция.

По результатам клинического наблюдения продолжительность диареи у телят первой группы составила от 2 до 3 дней.

При злокачественном течении диареи (больные колибактериозом) из 7 леченых йод-янтарным биостимулятором пало 4 теленка. Лечебная эффективность йод-янтарного биостимулятора составила 42,9%.

Пример 4. Изучение лечебной эффективности йод янтарного биостимулятора при полостном гнойно-септическом процессе.

Объектом для изучения являлись коровы, больные острым катарально-гнойным эндометритом. В опытах было задействовано 14 коров, из числа которых было сформировано 2 подопытных группы по 7 особей в каждой с одинаковым клиническим течением заболевания.

Для лечения коров первой группы использовали ежедневное внутриматочное введение заявляемого йод-янтарного биостимулятора, начиная с максимальной объемной дозы 100 мл. Объем вводимого препарата по мере уменьшения объема матки последовательно снижали до 15-10 мл.

Коровам второй группы в такой же последовательности и в том же объеме внутриматочно инстилировали фармакопейный йодинол.

Результаты клинических наблюдений свидетельствовали о том, что на третьи сутки у всех коров проявлялись выраженные признаки затухания воспалительного процесса. Изменился и характер экссудата в сторону преобладания гноя, что свидетельствовало об усилении процесса фагоцитоза. Более выраженные различия в течении патологического процесса обозначились на 5 сутки. Так, у коров первой группы в выделяемом экссудате заметно уменьшилось количество гноя. В экссудате преобладала слизь. Менее выраженная динамика затухания патологического процесса наблюдалась у коров второй группы. В выделяемом экссудате практически не было слизи.

На 10-12 сутки выделения из матки у коров первой группы практически полностью прекратились. Что касается коров второй группы - у них клиническое выздоровление наступало соответственно на 2-4 суток позже по отношению к особям первой группы.

Таким образом, в клинике лечения очагового гнойно-септического процесса установлено, что заявляемый йод-янтарный биостимулятор по лечебному эффекту превосходил фармакопейный йодинол.

Таблица 1 Показатели Периоды исследований   В начале опыта 3 14 Эритроциты, 10¹²/л 4,9±0,3 5,5±0,2 5,8±0,3 4,9±0,3 6,3±0,2 6,5±0,1 4,8±0,1 4,7+0,3 5,1+0,3 Гемоглобин, г/л 96,0±2,5 103,4±3,1 104,5±2,7 96,0±2,5 106,0±2,3 106,4±2,4 95,8±3,1 96,3±2,7 97,5+2,3 Лейкоциты, 10⁹/л 12,1±0,3 13,4±0,2 13,8±0,2 12,4±0,2 13,9±0,2 14,1±0,2 12,6±0,3 12,5+0,2 12,7+0,3 Лимфоциты, % 49,18±2,51 56,10±2,72 58,62±2,38 49,71±2,18 59,75±2,76 60,29±2,54 50,06±2,54 52,26+3,02 53,14+2,25 Нейтрофилы, % 36,41±2,72 44,52±2,43* 45,37±2,35* 36,22±2,45 46,17±2,35 46,25±2,28 36,12±2,38 37,42+2,17 39,26+2,11 Базофилы, % 0,10±0,03 0,11±0,09 0,11±0,05 0,10±0,03 0,13±0,08 0,14±0,04 0,11±0,05 0,12+0,03 0,12+0,04 Эозинофилы, % 1,17±0,14 2,19±0,26 2,12±0,25 1,19±0,12 3,35±0,22 2,39±0,18 1,22±0,16 3,67+0,12 3,72+0,24 Моноциты, % 7,84±0,35 10,22±0,21 10,18±0,24* 7,75±0,43 10,28±0,35 10,32±0,12 7,52±0,28 8,05+0,24 8,14+0,16 Примечание: верхняя строка - показатели крови телят 1-й группы; средняя строка - показатели крови телят 2-й группы; нижняя строка - показатели крови телят контрольной группы *p<0,05

Таблица 2 Показатели Периоды исследований В начале опыта 3 14 Общий белок, г/л 62,3±1,4 69,0±3,8 67,8±2,4 61,3±1,4 69,5±2,9 69,2±3,1 61,8±1,2 62,4+2,7 61,5+2,4 Общий кальций, ммоль/л 2,46±0,17 2,78±0,18 3,23±0,15* 2,45±0,25 2,84±0,12 3,49±0,14* 2,45±0,18 2,43+0,16 2,47+0,16 Неорганический фосфор, ммоль/л 1,82±0,12 1,92±0,15 2,14±0,12 1,83±0,14 1,86±0,11 1,95±0,17 1,85±0,11 1,91+0,14 2,05+0,12 Резервная щелочность, об.% CO₂ 31,1±2,5 40,8±3,3* 45.3±2,9* 31,7±2,8 42,5±2,6* 46,2±2,3* 32,1±2,7 33,7+1,9 35,2+2,6* Примечание: верхняя строка - показатели крови телят 1-й группы; средняя строка - показатели крови телят 2-й группы; нижняя строка - показатели крови телят контрольной группы *p<0,05

Таблица 3 Показатели Периоды исследований В начале опыта 3 14 Фагоцитарная активность нейтрофилов, % 46,8±2,43 51,7±2,92 52,6±2,29 46,2±2,29 53,8±3,25 56,2±2,91 45,4±2,42 46,6+56 49,1+2,78 Фагоцитарное число 8,06±0.26 9,32±0,47* 10,38±0,36 8,13±0,32 10,12±0,24 10,54±0,39 7,96±0,48 8,14+0,26 8,22+0,29 Бактерицидная активность, % 41,5±2,4 49,4±2,9 49,6±2,7* 40,8±2,2 52,3±2,8 54,8±2,9* 38,2±2,7 41,3+1,9 41,8+2,1 Лизоцимная активность, % 6,83±1,25 9,82±1,27* 10,83±1,44* 6,94±1,46 10,56±1,46* 11,64±1,18* 6,29±1,26 7,06+1,26 7,08+1,23

Таблица 4 Подопытные поросята До лечения После лечения 1 E.coli; S. aureus E.coli 2 E.coli; Ps. aureginosa E.coli 3 E.coli; S. aureus E.coli 4 E.coli   5 E.coli   Примечание: Числитель - культуры из фецес при диарее, Знаменатель - культуры из фецес после клинического выздоровления.

Таблица 5 Группа Выделены культуры микроорганизмов E.coli S. aureus Str. haemoliticus Контрольная (n=3) 2 1 2 2 - - Опытная (n=3) 3 3 2 2 - 1 Опытная (n=5) 4 - - - Примечание: числитель - выделены культуры в начале диареи, знаменатель - выделены культуры при клиническом выздоровлении

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для превентивной и интенсивной терапии очаговых гнойно-септических и желудочно-кишечных заболеваний, стимуляции системы иммунитета и метаболических процессов у животных. Задачей изобретения является способ получения нового состава на основе йода, янтарной кислоты и АСД второй фракции, обладающего иммунометаболической и антимикробной активностью. Техническим результатом является то, что в известный состав янтарного биостимулятора в качестве антимикробного компонента вводят йод и йодистый калий. Это делает возможным получение комплексного иммунометаболического препарата с антимикробной активностью. 4 пр., 5 табл.

Иммунометаболический состав с антимикробной активностью, включающий янтарную кислоту, АСД второй фракции, отличающийся тем, что в качестве антимикробного компонента дополнительно содержит йод и йодистый калий при следующем соотношении компонентов из расчета на 1 л раствора:
Янтарная кислота 10 г АСД второй фракции 40 мл Йод 1,5 г Йодистый калий 5 г Спирт поливиниловый 9 г Дистиллированная вода остальное