1-АРИЛПИРРОЛО[1,2-A]ПИРАЗИН-3-КАРБОКСАМИДЫ С НЕЙРОПСИХОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2015 года по МПК C07D487/04 A61K31/4985 A61P25/00 

Изобретение относится к области биологически активных соединений, конкретно к новой группе 1-арилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамидов общей формулы (1):

где R¹ может быть водородом или метильной группой, R² может быть (C₁-C₄)-алкильной или бензильной группой и R³ может быть водородом или атомом галогена.

Заявляемые соединения обладают анксиолитической активностью, обусловленной тем, что они являются лигандами транслокаторного протеина (TSPO).

Периферический бензодиазепиновый рецептор, более известный как транслокаторный протеин (18 kDa) (TSPO), представляет собой обогащенный триптофаном белок, локализующийся преимущественно на наружной мембране митохондрий в тканях, продуцирующих стероидные гормоны, таких как ткани здорового головного мозга, яичники, тестикулы, надпочечники и др. (A. Beurdeley-Thomas et al, J. Neuro-Oncol, 2000, 46, 45-56). TSPO участвует в транспорте холестерина от внешней к внутренней митохондриальной мембране, что является лимитирующей стадией в синтезе стероидов и нейростероидов (V. Papadopoulos et al, Mol. Cell Endocrinol, 2007, 266, 59-64). Хорошо известно, что нейростероиды, усиливающие нейромедиаторную функцию ГАМК, играют ключевую роль в функционировании центральной нервной системы, формировании психического статуса, эмоций, поведения, обучения и памяти (N.J. Alkayed et al, J. of the Amer. Heart Assoc. 2000, 31, 161-168). Поэтому считается перспективным использование TSPO в качестве мишени для создания лекарственных средств для лечения нейрональных заболеваний. В настоящее время рядом зарубежных фармацевтических компаний и научных групп проводится поиск лигандов TSPO с целью получения веществ, обладающих нейропсихотропной активностью.

Наиболее подробно в этом отношении изучены следующие классы веществ: производные изохинолинов (пример - соединение РК11195) (M. Gavish, et. al, J. Neurochem., 1992, 58, 1589-1601.); производные хинолинов; производные бензоксазепинов (пример - соединение OXA-17f) (G. Campiani, et. al, J. Med. Chem., 1996, 39, 3435-3450); производные бензотиазепинов (пример - соединение THIA-4i) (I. Fiorini, et. al, J. Med. Chem., 1994, 37, 1427-1438); производные индолацетамидов (пример - соединение FGIN-1-27) (Е. Romeo, et. al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1992, 262, 971-978); производные имидазопиридинов (примеры - алпидем, соединение СВ-34) (G. Trapani, et. al, J. Med. Chem., 1999, 42, 3934-3941); производные пиразолопиримидинов (пример - соединение PYPvA-3q) (S. Selleri, et. al, Bioorg. Med. Chem., 2001, 9, 2661-2671.); трициклические лиганды (A. Capelli, et al., Bioorg. Med. Chem., 2008, 16, 3428-3437); тетрациклические лиганды и производные бензимидазолов (Т. Okubo, et al., Bioorg. Med. Chem., 2004, 12, 3569-3580); производные хиназолинов (S. Castellano, et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 4506-4510); производные пиразолохинолинов (A. Capelli, et al., J. Med. Chem., 2011, 54, 7165-7175); производные пурина (пример - соединение XBD-173 (эмапунил)) (A. Kita, et al., Br. J. Pharmacol, 2004, 142, 1059-1072) производные имидазопиридазинов (US Patent 8,492,379 B2 (2013)).

Для ряда полученных лигандов TSPO было показано, что они обладают значительной эффективностью на различных животных моделях нейродегенерации (С. Girard et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2008, 105, 20505-20510), тревоги (F. Da Settimo et al, J. Med. Chem., 2008, 51, 5798-5806), депрессии (A. Kita et al, Br. J. Pharmacol. 2004, 142, 1059-1072) и в ряде других поведенческих тестов.

Несмотря на достаточно большое количество полученных лигандов TSPO, на сегодняшний день не создано практически ни одного эффективного нейропсихотропного препарата вследствие нежелательных побочных эффектов, низкой биодоступности и токсичности. Единственный из лигандов TSPO, показавший удовлетворительные фармакологические свойства - соединение XBD-173 (фармкомпания Dainippon Sumitomo Pharma Co.), в настоящее время находится на II стадии клинических испытаний как анксиолитическое средство.

Соединения, описанные в вышеприведенных ссылках, не открывают и не предполагают новых структурных вариаций патентуемых соединений.

В связи с указанным целью настоящей работы является поиск новых лекарственных средств, обладающих анксиолитической активностью, в ряду новых лигандов TSPO, обладающих высокой эффективностью, нетоксичных и без побочных эффектов. В результате интенсивных исследований мы нашли, что эта цель может быть достигнута соединениями, относящимися к группе 1-арилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамидов общей формулы (1).

Соединения общей формулы (1), их свойства и способ получения в специальной и патентной литературе не описаны.

В качестве примеров соединений формулы (1) настоящего изобретения следует назвать:

N-бензил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1a).

N-бензил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1б).

N-бензил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1в).

N-бутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1г).

N-бутил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1д).

N-бутил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1е).

N-бензил-1-(2-бромфенил)-N-метилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1ж).

N-изобутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1з).

N-(втор-бутил)-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1и).

N-бензил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1к).

N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1л).

В соответствии с настоящим изобретением соединения общей формулы (1) можно получить по двум схемам. Первая схема заключается во взаимодействии 2-азидоакриламидов (2) с пирроларилкетонами (3)

Пирроларилкетоны общей формулы (3), где R³ имеет вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с 2-азидоакриламидами общей формулы (2), где R¹ и R² имеют вышеуказанные значения, в полярных апротонных растворителях в присутствии оснований, таких как, например, карбонаты щелочных металлов. В качестве полярных апротонных растворителей пригодны диметилформамид или диметилсульфоксид.

2-Азидоакриламиды (2) получают по схеме:

При взаимодействии хлорангидрида акриловой кислоты с аминами (4) получают соответствующие акриламиды (5), при галогенировании которых образуются дигалогенпроизводные (6). Реакцией дибромидов (6) с азидом натрия в диметилформамиде получают 2-азидоакриламиды (4).

Пирролфенилкетон (3a) получают по схеме (J. White, et al., J. Org. Chem., 1977, 42, 4248-4251):

Из хлорангидрида бензойной кислоты сначала получают амид (7) взаимодействием с морфолином. Пирролфенилкетон (3а) образуется в реакции Вильсмайера между амидом (7) и пирролом в присутствии фосфорилхлорида в дихлорэтане.

Пиррол(2-галогенфенил)кетоны (3б-г) получают по схеме (D.M. Bailey, US Patent 3876660, 1975):

На пиррол действуют реактивом Гриньяра - этилмагнийбромидом, получая магнийорганическое производное пиррола, которое вводят в реакцию с хлорангидридами 2-галогенбензойных кислот, получая целевые пиррол(2-галогенфенил)кетоны (3б-г).

Вторая схема получения соединений общей формулы (1) в соответствии с настоящим изобретением заключается во взаимодействии 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновых кислот общей формулы (8), где R³ имеет вышеуказанные значения, с аминами общей формулы (4), где R¹ и R² имеют вышеуказанные значения в соответствии со схемой:

Для проведения реакции к раствору 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновой кислоты (8) в подходящем органическом растворителе, в качестве которого может быть использован дихлорметан, хлороформ, тетрагидрофуран или другие, прибавляют неорганический хлорангидрид, такой как, например, фосфорилхлорид, тионилхлорид, пентахлорид фосфора, или другой; акцептор кислоты, такой как, например, триэтиламин или другие третичные амины, карбонаты щелочных металлов, и небольшое количество диметилформамида. К полученной смеси добавляют амин общей формулы (4), что приводит к образованию целевых соединений общей формулы (1).

1-Фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновые кислоты общей формулы (8), где R³ имеет вышеуказанные значения, получают по схеме:

При взаимодействии эфира дигалогенкарбоновой кислоты (9), в которой R⁴ может быть метилом или этилом, с азидом натрия в диметилформамиде получается метиловый или этиловый эфир 2-азидоакриловой кислоты (10). Конденсацию эфиров (10) с пирроларилкетонами (3) осуществляют в полярных апротонных растворителях в присутствии оснований, таких как, например, карбонаты щелочных металлов. В качестве полярных апротонных растворителей пригодны диметилформамид или диметилсульфоксид. Промежуточные эфиры (11) омыляют до 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновых кислот (8) действием водно-спиртового раствора гидроксида щелочного металла, например, гидроксида натрия, с последующим подкислением раствора неорганической кислотой, такой как, например, соляная кислота.

Строение веществ общей формулы (1) подтверждено данными спектров ЯМР ¹H, а их чистота - данными элементного анализа.

Пример 1

N-бензил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1a)

1.1. N-бензил-N-метилакриламид (5а)

К раствору 150 ммоль (18.18 г) метилбензиламина и 195 ммоль (19.69 г) триэтиламина в 60 мл сухого хлористого метилена при перемешивании прикапывали раствор 150 ммоль (13.58 г) хлорангидрида акриловой кислоты в 40 мл сухого хлористого метилена в течение 30 минут при температуре -5°C, после чего перемешивали реакционную массу в течение часа при комнатной температуре и прибавляли 70 мл воды. Органический раствор отделяли, а водный промыли 60 мл хлористого метилена. Объединенные органические растворы промывали последовательно 50 мл 10%-ной соляной кислоты, 50 мл 5%-ного раствора гидроксида натрия и 50 мл воды, профильтровывали через бумажный фильтр и упаривали досуха, получая 17.53 г светло-желтого масла (выход 67%). Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 2.98, 2.99 (два c, 3Н, CH₃); 4.58, 4.67 (два с, 2Н, CH₂); 5.69 (м, 1Н, Н(3а)); 6.37 (м, 1H, Н(3b)); 6.59 (м, 1H, Н(2а)); 7.12-7.38 (м, 5H, Ph).

1.2. N-бензил-2,3-дибром-N-метилпропанамид (6а)

К раствору 44 ммоль (7.71 г) N-бензил-N-метилакриламида (5а) в 100 мл сухого хлористого метилена прикапывали 45 ммоль (7.19 г) брома при перемешивании при 0°C в течение 20 минут. Реакционную массу перемешивали при комнатной температуру в течении 2 часов, промывали раствором 5 г Na₂S₂O₄ в 60 мл воды и 2 раза по 40 мл воды, профильтровывали через бумажный фильтр и упаривали досуха, получая 12.24 г продукта в виде желтого масла (выход 83%). Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 2.99, 3.02 (два c, 3H, CH₃); 3.68 (м, 1H, Н(3а)); 4.22 (м, 1H, Н(3b)); 4.38-4.84 (м, 3H, H(2), CH ₂Ph); 7.15-7.43 (м, 5H, Ph).

1.3. 2-азидо-N-бензил-N-метилакриламид (2a)

К суспензии 44 ммоль (2.86 г) азида натрия в 50 мл сухого ДМФА прибавляли раствор 20 ммоль (6.7 г) N-бензил-2,3-дибром-N-метилпропанамида (6а) в 30 мл сухого ДМФА при температуре 75°C. Реакционную смесь перемешивали при температуре 75°C в течение 25 минут, после чего охлаждали до комнатной температуры и разбавляли 350 мл воды. Продукт экстрагировали 3 раза по 100 мл диэтилового эфира, объединенные эфирные растворы промывали 80 мл воды, профильтровывали через бумажный фильтр и упаривали досуха. Остаток хроматографировали на силикагеле, используя в качестве элюента смесь этилацетата и гексана (1:3). Нужные фракции упаривали досуха, получая 3.37 г продукта в виде желтого масла (выход 78%). Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 2.90, 2.98 (два c, 3H, CH₃); 4.62 (с, 2H, CH₂); 5.08 (м, 2H, CH₂=); 7.10-7.43 (м, 5H, Ph).

1.4. (1H-Пиррол-2-ил)фенилметанон (3a) был получен по литературной методике (J. White, et al., J. Org. Chem., 1977, 42, 4248-4251).

1.5. N-бензил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1a)

К раствору 2 ммоль (0.43 г) 2-азидо-N-бензил-N-метилакриламида (2а) в 6 мл сухого ДМФА прибавляли 2.2 ммоль (0.72 г) карбоната цезия и 2 ммоль (0.34 г) (1H-пиррол-2-ил)фенилметанона (3а), и реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Полученную смесь разбавляли 30 мл воды, и продукт экстрагировали 4 раза по 20 мл этилацетата. Объединенные этилацетатные растворы промывали 20 мл воды, профильтровывали через бумажный фильтр и упаривали досуха. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь этилацетата с гексаном сначала (1:3), затем (2:3). Фракции с продуктом упаривали досуха, остаток растворяли в 4 мл этанола и оставляли при -4°C на ночь. Выпавший осадок отфильтровывали, получая 0.41 г светло-желтых кристаллов (выход 61%). Т.пл. 101-103°C. Найдено (%): C, 77.63; H, 5.65; N, 12.47. C₂₂H₁₉N₃O. Вычислено (%): C, 77.40; H, 5.61; N, 12.31. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 3.06, 3.29 (два с, 3H, CH₃); 4.76, 5.03 (два с, 2H, CH₂); 6.73 (м, 1H, Н(8)); 6.95 (м, 1H, Н(7)); 7.26-8.02 (м, 11H, 2 Ph, Н(6)); 8.52 (с, 1H, Н(4)).

Пример 2

N-бензил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1б)

2.1. (1H-Пиррол-2-ил)(2-фторфенил)метанон (3б) был получен по литературной методике (D.M. Bailey, US Patent 3876660, 1975).

2.2. N-бензил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1б)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бензил-N-метилакриламида (2а, получен в соответствии с пунктом 1.3 Примера 1) и (1H-пиррол-2-ил)(2-фторфенил)метанона (36). Выход 69% (светло-желтое масло). Найдено (%): C, 73.48; Н, 5.26; N, 11.62; F, 5.39. C₂₂H₁₈FN₃O. Вычислено (%): C, 73.52; H, 5.05; N, 11.69; F, 5.29. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 3.04, 3.24 (два с, 3H, CH₃); 4.77, 5.03 (два с, 2H, CH₂); 6.73 (м, 1H, Н(8)); 6.95 (м, 1H, Н(7)); 7.08-7.74 (м, 10 Н, Ar, Ph, Н(6)); 8.53 (с, 1H, Н(4)).

Пример 3

N-бензил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1в)

3.1. (1H-Пиррол-2-ил)(2-хлорфенил)метанон (3в) был получен по литературной методике (D.M. Bailey, US Patent 3876660, 1975).

3.2. N-бензил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1в)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бензил-N-метилакриламида (2a, получен в соответствии с пунктом 1.3 Примера 1) и (1H-пиррол-2-ил)(2-хлорфенил)метанона (3в). Выход 61% (светло-желтое масло). Найдено (%): C, 70.18; Н, 4.77; N, 11.31; Cl, 9.44. C₂₂H₁₈ClN₃O. Вычислено (%): C, 70.30; Н, 4.83; N, 11.18; Cl, 9.43. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 3.02, 3.22 (два с, 3H, CH₃); 4.75, 5.04 (два с, 2H, CH₂); 6.54 (м, 1H, Н(8)); 6.93 (м, 1H, Н(7)); 7.17-7.61 (м, 10 Н, Ar, Ph, Н(6)); 8.52 (с, 1H, Н(4)).

Пример 4

N-бутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1г)

4.1. N-бутил-N-метилакриламид (5б)

Получали в соответствии с пунктом 1.1. Примера 1 из метилбутиламина и акрилоилхлорида. Выход 80%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.90 (т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.29 (м, 2H, CH ₂CH₃); 1.51 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 2.95, 3.01 (два с, 3H, NCH₃); 3.30, 3.39 (два т, 2H, NCH₂, ³J=7.4); 5.62 (м, 1H, Н(3а)); 6.28 (м, 1H, Н(3b)); 6.53 (м, 1H, Н(2а)).

4.2. N-бутил-2,3-дибром-N-метилпропанамид (6б)

Получали в соответствии с пунктом 1.2. Примера 1 из N-бутил-N-метилакриламида (5б). Выход 81%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.91, 0.95 (два т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.33, 1.53 (два м, 2H, CH ₂CH₃); 1.62, 3.18 (два м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 2.99, 3.05 (два с, 3H, NCH₃); 3.42 (м, 2H, NCH₂); 3.65 (м, 1H, Н(3а)); 4.14 (м, 1H, Н(3b)); 4.62 (м, 1H, Н(2)).

4.3. 2-азидо-N-бутил-N-метилакриламид (2б)

Получали в соответствии с пунктом 1.3. Примера 1 из N-бутил-2,3-дибром-N-метилпропанамида (6б). Выход 79%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.92 (т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.30 (м, 2H, CH ₂CH₃); 1.55 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 2.94, 3.05 (два с, 3H, NCH₃); 3.39 (т, 2H, NCH₂, ³J=7.3); 4.95, 5.02 (оба м, по 1H, CH₂=).

4.4. N-бутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1г)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бутил-N-метилакриламида (26) и (1H-Пиррол-2-ил)фенилметанона (3а) Выход 57% (светло-желтые кристаллы). Т.пл. 85-87°C. Найдено (%): C, 74.21; Н, 6.70; N, 13.50. C₁₉H₂₁N₃O. Вычислено (%): C, 74.24; Н, 6.89; N, 13.67. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.81, 0.97 (два т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.19, 1.39 (два м, 2H, CH ₂CH₃); 1.67 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 3.11, 3.32 (два с, 3H, NCH₃); 3.54, 3.69 (два т, 2H, NCH₂, ³J=7.4); 6.90-7.05 (м, 2H, Н(7), Н(8)); 7.40-8.05 (м, 6H, Ph, Н(6)); 8.41 (c, 1H, Н(4)).

Пример 5

N-бутил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1д)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бутил-N-метилакриламида (2б, получен в соответствии с пунктом 4.3 Примера 4) и (1H-пиррол-2-ил)(2-фторфенил)метанона (3б). Выход 54% (светло-желтые кристаллы). Т.пл. 91-93°C. Найдено (%): C, 70.21; H, 6.00; N, 12.92; F, 5.87. C₁₉H₂₀FN₃O. Вычислено (%): C, 70.13; Н, 6.20; N, 12.91; F, 5.84. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.78, 0.96 (два т, 3H, CH ₂CH₃, ³J=7.3); 1.18, 1.38 (два м, 2H, CH ₂CH₃); 1.64 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 3.09, 3.27 (два с, 3H, NCH₃); 3.52, 3.68 (два т, 2H, NCH₂, ³J=7.4); 6.70, 6.72 (два м, 1H, Н(8)); 6.94, 6.96 (два м, 1H, Н(7)); 7.16-7.71 (м, 5H, Ar, Н(6)); 8.44 (с, 1H, Н(4)).

Пример 6. N-бутил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1е)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бутил-N-метилакриламида (2б, получен в соответствии с пунктом 4.3 Примера 4) и (1H-пиррол-2-ил)(2-хлорфенил)метанона (3в). Выход 50% (светло-желтые кристаллы). Т.пл. 61-63°C. Найдено (%): C, 66.46; Н, 5.84; N, 12.59; Cl, 10.28. C₁₉H₂₀N₃OCl. Вычислено (%): С, 66.76; Н, 5.90; N, 12.29; Cl, 10.37. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.76, 0.95 (два т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.16, 1.38 (два м, 2H, CH ₂CH₃); 1.60 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 3.08, 3.25 (два с, 3H, NCH₃); 3.50, 3.69 (два т, 2H, NCH₂, ³J=7.4); 6.50, 6.52 (два м, 1H, Н(8)); 6.91, 6.92 (два м, 1H, Н(7)); 7.32-7.58 (м, 5H, Ar, Н(6)); 8.42 (с, 1H, Н(4)).

Пример 7

N-бензил-1-(2-бромфенил)-N-метилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1ж)

7.1. (2-Бромфенил)(1H-пиррол-2-ил)метанон (3г) был получен по литературной методике (D.M. Bailey, US Patent 3876660, 1975).

7.2. N-бензил-1-(2-бромфенил)-N-метилпирроло[1,2-a]-пиразин-3-карбоксамид (1ж)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-бутил-N-метилакриламида (2б, получен в соответствии с пунктом 4.3 Примера 4) и (2-бромфенил)(1H-пиррол-2-ил)метанона (3г). Выход 66% (белые кристаллы). Т.пл. 57-59°C. Найдено (%): C, 58.88; Н, 5.20; N, 10.93; Br, 20.57. C₁₉H₂₀BrN₃O. Вычислено (%): C, 59.08; Н, 5.22; N, 10.88; Br, 20.68. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, 8, м.д., J/Гц): 0.76, 0.95 (два т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.18, 1.39 (два м, 2H, CH ₂CH₃); 1.62 (м, 2H, CH ₂CH₂CH₃); 3.08, 3.26 (два с, 3H, NCH₃); 3.50, 3.70 (два т, 2H, NCH₂, ³J=7.4); 6.48, 6.49 (два м, 1H, Н(8)); 6.92, 6.93 (два м, 1H, Н(7)); 7.24-7.75 (м, 5H, Ar, Н(6)); 8.42 (с, 1H, Н(4)).

Пример 8

N-изобутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1з)

8.1. N-изобутил-N-метилакриламид (5в)

Получали в соответствии с пунктом 1.1. Примера 1 из метилизобутиламина и акрилоилхлорида. Выход 80%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.87, 0.88 (два д, 3H, CH(СН ₃)₂, ³J=6.7); 1.93 (м, 1H, CH(СН₃)₂); 2.96, 3.03 (два с, 3H, NCH₃); 3.13, 3.24 (два д, CH₂, ³J=7.5);); 5.63 (м, 1H, Н(3а)); 6.28 (м, 1H, Н(3b)); 6.53 (м, 1H, Н(2а)).

8.2. 2,3-дибром-N-изобутил-N-метилпропанамид (6в)

Получали в соответствии с пунктом 1.2. Примера 1 из N-изобутил-N-метилакриламида (5в). Выход 84%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.33-1.05 (м, 6H, CH(СН ₃)₂); 2.00 (м, 1H, CH(CH₃)₂); 2.99, 3.07 (два с, 3H, NCH₃); 3.26 (д, CH₂, ³J=7.6); 3.66 (м, 1H, Н(3а)); 4.16 (м, 1H, Н(3b)); 4.66 (м, 1H, Н(2)).

8.3. 2-азидо-N-изобутил-N-метилакриламид (2в)

Получали в соответствии с пунктом 1.3. Примера 1 из 2,3-дибром-N-изобутил-N-метилпропанамида (6в). Выход 77%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.64-0.99 (м, 6H, CH(СН ₃)₂); 1.98 (м, 1H, CH(СН₃)₂); 2.93, 3.06 (два с, 3H, NCH₃); 3.23 (д, CH₂, ³J=7.6); 4.94, 5.03 (оба м, по 1H, CH₂=).

8.4. N-изобутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1з)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-изобутил-М-метилакриламида (2в) и (1H-Пиррол-2-ил)фенилметанона (3а) Выход 63% (светло-желтое масло). Найдено (%): C, 74.30; Н, 6.99; N, 13.50. C₁₉H₂₁N₃O. Вычислено (%): C, 74.24; Н, 6.89; N, 13.67. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.82, 0.99 (оба д, 6H, CH(CH ₃)₂, ³J=6.6); 2.01, 2.12 (оба м, 1H, CH(СН₃)₂); 3.11, 3.31 (два с, 3H, NCH₃); 3.41, 3.70 (оба д, CH₂, ³J=7.6); 6.96 (м, 1H, Н(8)); 6.99 (м, 1H, Н(7)); 7.39-8.03 (м, 6H, Ph, Н(6)); 8.40 (с, 1H, Н(4)).

Пример 9

N-(втор-бутил)-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1и)

9.1. N-(втор-бутил)-N-метилакриламид (5г)

Получали в соответствии с пунктом 1.1. Примера 1 из метил-(втор-бутил)амина и акрилоилхлорида. Выход 73%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.82 (т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.07, 1.15 (два д, 2H, CHCH ₃, ³J=6.8); 1.47 (м, 2H, CH ₂CH₃); 2.78, 2.82 (два с, 3H, NCH₃); 3.87, 4.67 (два м, 1H, CHCH₃); 5.62 (м, 1H, Н(3а)); 6.23 (м, 1H, Н(3b)); 6.56 (м, 1H, Н(2а)).

9.2. N-(втор-бутил)-2,3-дибром-N-метилпропанамид (6г)

Получали в соответствии с пунктом 1.2. Примера 1 из N-втор-бутил-N-метилакриламида (5 г). Выход 80%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 0.77-0.95 (м, 3H, CH₂CH ₃); 1.03-1.24 (м, 2H, CHCH ₃); 1.39-1,61 (м, 2H, CH ₂CH₃); 2.77-2.90 (м, 3H, NCH₃); 3.59-4.79 (три м, 4H, CHCH₃, BrCH ₂CH).

9.3. 2-азидо-N-(втор-бутил)-N-метилакриламид (2г)

Получали в соответствии с пунктом 1.3. Примера 1 из N-(втор-бутил)-2,3-дибром-N-метилпропанамида (6г). Выход 77%. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.84 (м, 3H, CH₂CH ₃); 1.12, 1.17 (два д, 2H, CHCH₃, ³J=6.6); 1.51 (м, 2H, CH ₂CH₃); 2.77, 2.87 (два с, 3H, NCH₃); 3.94 (м, 1H, СНСН₃); 4.92, 5.01 (оба м, по 1H, CH₂=).

9.4. N-(втор-бутил)-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1и)

Получали в соответствии с пунктом 1.5 Примера 1 из 2-азидо-N-(втор-бутил)-N-метилакриламида (2г) и (1H-Пиррол-2-ил)фенилметанона (3а) Выход 68% (светло-желтые кристаллы). Т.пл. 117-119°C. Найдено (%): C, 74.36; Н, 7.13; N, 13.80. C₁₉H₂₁N₃O. Вычислено (%): C, 74.24; Н, 6.89; N, 13.67. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.81, 0.96 (оба т, 3H, CH₂CH ₃, ³J=7.3); 1.22, 1.30 (два д, 2H, CHCH ₃, ³J=6.6); 1.40-1.70 (м, 2H, CH ₂CH₃); 2.94, 3.10 (два с, 3H, NCH₃); 4.38, 4.72 (два м, 1H, CHCH₃); 6.95 (м, 1H, Н(8)); 6.99 (м, 1H, Н(7)); 7.46-8.01 (м, 6H, Ph, Н(6)); 8.33 (с, 1H, Н(4)).

Пример 10

N-бензил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1к)

10.1. Метил 2-азидоакрилат (10а)

К суспензии 100 ммоль (6,2 г) азида натрия в 60 мл сухого ДМФА прибавляли раствор 40 ммоль метил 2,3-дибромпропионата (9а) при температуре 60°C. Реакционную смесь перемешивали при температуре 60°C в течение 30 минут, после чего охлаждали до комнатной температуры и разбавляли 350 мл воды. Продукт экстрагировали 60 и 60 мл метиленхлорида, объединенные органические растворы промывали 60 мл воды, и упаривали досуха. Остаток хроматографировали на силикагеле, используя в качестве элюента смесь этилацетата и гексана (1:5). Нужные фракции упаривали, получая 4.2 г продукта в виде светло-желтого масла (выход 83%). Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 3.96 (с, 3H, OCH₃); 5.14 (м, 2H, CH₂=).

10.2. 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновая кислота (8a)

К 44 ммоль (5.6 г) 2-азидометилакрилата (10а) и 34 ммоль (5.8 г) (1H-пиррол-2-ил)фенилметанона (3а) в 80 мл ДМФА прибавляли 53 ммоль (13.3 г) карбоната цезия, и реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течении двух суток. Полученную смесь упаривали, разбавляли 200 мл воды и 50 мл метанола, добавляли 68 ммоль (2.7 г) NaOH и кипятили до полного омыления эфира (11a). Смесь охлаждали до комнатной температуры, и продукт экстрагировали 40, 40 и 40 мл смеси этилацетат:гексан (1:3). Водный слой подкисляли конц. HCl до pH ~5 и продукт дополнительно экстрагировали 50, 50 и 50 мл дихлорметана. Объединенные растворы профильтровывали через бумажный фильтр и упаривали досуха, получая 4,0 г продукта в виде светло-желтых кристаллов (выход 48%). Т.пл. 155-157°C. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 7.08 (м, 1H, Н(8)); 7.14 7.01 (м, 1H, Н(7)); 7.51-8.03 (м, 6H, Ph, Н(6)); 8.80 (с, 1H, Н(4)); 11.5 (уш. с, 1H, COOH).

10.3. N-бензил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1к)

4.4 ммоль (1.1 г) 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновой кислоты (8а) растворяли в 40 мл дихлорметана, к раствору приливали 0,9 г (57 ммоль) POCl₃ и 5 мл триэтиламина, и добавляли 1 каплю ДМФА. Смесь перемешивали 25 мин, после чего приливали 5.7 ммоль (0.61 г) бензиламина и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь разбавляли 40 мл воды, подкисляли до кислой реакции, продукт экстрагировали 40, 30 и 30 мл дихлорметана, объединенные растворы упаривали досуха. Остаток 2 раза перекристаллизовывали из этанола, получая 0.8 г желтых кристаллов (выход 53%). Т.пл. 173-175°C. Найдено (%): C, 77.31; Н, 5.27; N, 13.15. C₂₁H₁₇N₃O. Вычислено (%): C, 77.04; Н, 5.23; N, 12.84. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 4.71 (д, 2H, CH₂, ³J=6.2); 6.98 (м, 1H, Н(8)); 7.01 (м, 1H, Н(7)); 7.25-7.99 (м, 11H, 2 Ph, Н(6)); 8.35 (т, 1H, NH, ³J=6.2); 8.77 (с, 1H, Н(4)).

Пример 11

N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1л)

Получали в соответствии с пунктом 10.3 Примера 10 из 1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоновой кислоты (8а) и гидрохлорида метиламина. Выход 37% (светло-розовые кристаллы). Т.пл. 167-169°C. Найдено (%): C, 71.86; Н, 5.22; N, 16.90. C₁₅H₁₃N₃O. Вычислено (%): C, 71.70; Н, 5.21; N, 16.72. Спектр ЯМР ¹H (CDCl₃, δ, м.д.): 3.03, 3.05 (два с, 3H, СН3); 6.95 (м, 1H, Н(8)); 7.00 (м, 1H, Н(7)); 7.49-8.02 (м, 7 Н, Ph, Н(6), NH); 8.73 (с, 1H, Н(4)).

Результаты фармакологического изучения соединений

1. Влияние соединений ГМЛ-1, ГМЛ-2, ГМЛ-3, ГМЛ-4, ГМЛ-5, ГМЛ-6, ГМЛ-7, ГМЛ-8 на поведение мышей линии Balb/c в условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте «открытое поле»

Тест «открытое поле» - распространенная модель оценки поведения грызунов в условиях эмоционального стресса, формирующегося как реакция на новую обстановку и угрожающую ситуацию. В работе применена методика освещенного «открытого поля», при котором перенос животного из темноты на ярко подсвеченную арену создает дополнительный стрессирующий фактор, основанный на естественном стремлении грызунов избегать ярко освещенных мест (С.Б. Середенин, А.А. Ведерников / Влияние психотропных препаратов на поведение инбредных мышей в условиях открытого поля / Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 1979, 88(7), 38-40).

В исследовании использованы мыши-самцы инбредной линий Balb/c массой 19-25 г (НПП «Питомник лабораторных животных ФИБХ РАН). Животные содержались в условиях лабораторного вивария в контролируемых условиях окружающей среды (20-22°C и 30-70% относительная влажность, 12-часовой цикл освещения, 10-кратная смена объема воздуха комнаты в час), в пластмассовых клетках с верхней крышкой из нержавеющей стали с обеспыленной подстилкой из деревянной стружки, по 20 мышей в каждой клетке, при постоянном доступе к экструдированному брикетированному корму ГОСТ P 50258-92 [1993] и питьевой воде. Животные распределялись по группам рандомизированно, по критерию массы тела, с отклонением от среднего значения не более чем на ±10%. Перед опытом животных выдерживали в экспериментальной комнате в «домашних» клетках в течение 24 часов.

Соединения ГМЛ-1, ГМЛ-2, ГМЛ-3, ГМЛ-4, ГМЛ-5, ГМЛ-6, ГМЛ-7, ГМЛ-8 готовились в виде суспензии с Твин-80 и дистиллированной водой и вводились однократной внутрибрюшинной инъекцией.

Через 30 минут после внутрибрюшинного введения соединения животное сначала помещали на 1 мин в темную камеру, а затем - на один из периферических квадратов "открытого поля", которое представляет из себя белую круглую арену диаметром 1 метр с белыми бортами высотой 50 см. Арена равномерно освещена четырьмя бестеневыми лампами по 75 Вт каждая, расположенными на высоте 1 м над поверхностью поля. Все пространство арены равномерно разделено 4-мя концентрическими окружностями, которые в свою очередь разбиты радиусами на сектора так, что периферическая окружность состоит из 16 одинаковых криволинейных квадратов. Наблюдение за животным производили в течение 3 минут, раздельно фиксировали число пересеченных квадратов на периферии (ПА), в центральных областях (ЦА), число заходов в центр (Ц), а также число вертикальных стоек (ВА) и количество дефекаций (Д). Суммарное число пересеченных квадратов вместе с числом вертикальных стоек обозначали как общую активность (ОДА).

О наличии анксиолитического действия судили по выявлению активирующего эффекта на двигательную активность у животных с реакцией замирания в тесте «открытое поле» (линия Balb/c).

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA, критерий Краскела-Уоллиса) и непараметрический анализ для независимых переменных (U-критерий Манна-Уитни).

В условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте «открытое поле» при внутрибрюшинном введении у соединения ГМЛ-1 в дозах 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг обнаружено статистически значимое повышение периферической, центральной и общей двигательной активности мышей линии Balb/c по сравнению с контролем (таблица 1).

Введение соединения ГМЛ-3 в дозах 0,1 и 0,5 мг/кг привело к значимой активации двигательной активности мышей в тесте «открытое поле» по сравнению с контрольной инъекцией (таблица 3).

Соединения ГМЛ-4 в дозе 10,0 мг/кг и ГМЛ-8 в дозе 1,0 мг/кг статистически значимо (для ГМЛ-8 только по U-критерию Манна-Уитни) увеличивали отдельные виды двигательной активности мышей по сравнению с контролем (таблица 4 и 8).

Таким образом, соединения ГМЛ-1 и ГМЛ-3 в широком диапазоне доз при внутрибрюшинном способе введения обладают ярко выраженным анксиолитическим действием у мышей Balb/c. Данная активация происходила за счет увеличения периферической и центральной двигательной активности, что характерно для соединений, обладающих анксиолитическим действием.

2. Влияние соединений ГМЛ-1 и ГМЛ-3 на поведение беспородных мышей CD-1 в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»

Метод «приподнятого крестообразного лабиринта» (ПКЛ) является в настоящее время общепринятым для оценки анксиолитического действия (File S.E., Factors controlling measures of anxiety and responses to novelty in the mouse. Behav. Brain. Res., 2001, 125, 151-157). Сущность метода заключается в анализе соотношения реакции страха животных в незнакомом пространстве и высоты с одной стороны и поисковой активности в новой обстановке с другой.

Установка ПКЛ для мышей представляет собой две взаимопересекающиеся под прямым углом горизонтальные дорожки 65×5 см. Два противоположных отсека имеют непрозрачные вертикальные стенки высотой 15 см. Лабиринт приподнят от пола на 40 см. В месте перекрестья плоскостей находится открытая центральная платформа 5×5 см.

Эксперимент проводился в условиях дневного освещения. В начале тестирования животное помещалось в центр лабиринта, что давало возможность переместиться в темные, либо светлые рукава лабиринта - в зависимости от преобладания тревоги (боязнь высоты, открытого пространства) или исследовательской активности (что побуждало животное выходить из «защищенных» рукавов). Фиксировали следующие показатели поведения в ПКЛ в течение 300 сек: время нахождения в открытых рукавах, время нахождения в закрытых рукавах, время нахождения на центральной площадке, число заходов в открытые рукава, число заходов в закрытые рукава.

В исследовании использованы беспородные мыши-самцы CD-1 массой 19-25 г (НЛП «Питомник лабораторных животных ФИБХ РАН). Животные содержались в условиях лабораторного вивария в контролируемых условиях окружающей среды (20-22°C и 30-70% относительная влажность, 12-часовой цикл освещения, 10-ти кратная смена объема воздуха комнаты в час), в пластмассовых клетках с верхней крышкой из нержавеющей стали с обеспыленной подстилкой из деревянной стружки, по 20 мышей в каждой клетке, при постоянном доступе к экструдированному брикетированному корму ГОСТ P 50258-92 [1993] и питьевой воде. Животные распределялись по группам рандомизированно, по критерию массы тела, с отклонением от среднего значения не более чем на ±10%. Перед опытом животных выдерживали в экспериментальной комнате в «домашних» клетках в течение 24 часов.

Соединения ГМЛ-1 и ГМЛ-3 готовились в виде суспензии с Твин-80 и дистиллированной водой и вводились однократной внутрибрюшинной инъекцией.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA, критерий Краскела-Уоллиса) и непараметрический анализ для независимых переменных (U-критерий Манна-Уитни).

В соответствии с характеристиками для лабораторных мышей формами поведения реакция страха определяла стремление животных находиться в закрытых рукавах лабиринта, снижением двигательной активности. Поисковая (анксиолитическая) активность определяет пребывание животных в открытых рукавах, увеличением двигательной активности.

Соединение ГМЛ-1, введенное внутрибрюшинно за 30 минут до эксперимента в дозах 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг, активировало поведение мышей CD-1 (таблица 9), статистически значимо увеличивая время нахождения в открытых и уменьшая время пребывания в закрытых рукавах лабиринта по сравнению с контролем. Таким образом, в тесте ПКЛ показано, что соединение ГМЛ-1 оказывает достоверный анксиолитический эффект в диапазоне доз 0,1-1,0 мг/кг.

Соединение ГМЛ-3, введенное внутрибрюшинно за 30 минут до эксперимента в дозах 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг активировало поведение мышей CD-1 (таблица 10). В дозе 0,1 мг/кг ГМЛ-3 статистически значимо увеличивало время нахождения в открытых и уменьшало время пребывания в закрытых рукавах лабиринта, в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг снижало время нахождения в закрытых рукавах по сравнению с контролем. Таким образом, в тесте ПКЛ показано, что соединение ГМЛ-3 оказывает достоверный анксиолитический эффект в диапазоне доз 0,1-1,0 мг/кг.

3. Влияние специфического ингибитора TSPO (18 kDa) на анксиолитический эффект соединений ГМЛ-1 и ГМЛ-3

TSPO (18 kDa), ранее обозначавшийся как переферический бензодиазепиновый рецептор, представляет собой внутриклеточный белок, расположенный на внешней мембране митохондрий, который стимулирует стероидогенез, осуществляя транспорт холестерина от внешней к внутренней митохондриальной мембране. Образующиеся нейростероиды выполняют ряд физиологических функций, являются, в частности, аллостерическими модуляторами ГАМК_А рецептора, усиливая ГАМК трансмиссию. В настоящее время лиганды TSPO рассматриваются как перспективные кандидаты для фармакотерапии ряда неврологических и психиатрических расстройств, включая тревожные и депрессивные состояния (R. Rupprecht, et al., Translocator protein (18 kDa) (TSPO) as a therapeutic target for neurological and psychiatric disorders. Nat. Rev. Drug. Discov., 2010, 9(12), 971-988. C. Nothdurfter, et al., Translocator protein (18 kDa) as a target for novel anxiolytics with a favourable side-effect profile. J. Neuroendocrinal., 2012, 24(1), 82-92).

Вещество PK11195 (1-(2-chlorophenyl)-N-methyl-(1-methylpropyl)-3-isoquinoline-carboxamide) является специфическим ингибитором, связывающимся с рецепторным участком TSPO и при совместном введении с лигандами TSPO (18 kDa) блокирует их анксиолитический эффект (A. Kita, et al., Antianxiety and antidepressant-like effects of AC-5216, a novel mitochondrial benzodiazepine receptor ligand. Br. J. Pharmacol., 2004, 142, 1059-1072; G. Le Fur, et al., Peripheral benzodiazepine binding sites: effect of PK 11195, 1-(2-chlorophenyl)-N-methyl-(1-methylpropyl)-3 isoquinolinecarboxamide. II. Invivostudies. Life ScL, 1983, 32(16), 1849-1856).

С целью изучения зависимости эффекта соединений ГМЛ-1 и ГМЛ-3 от взаимодействия на участке связывания TSPO эксперимент выполнялся по следующей схеме: беспородные мыши-самцы CD-1 были разделены на 4 группы по 8 особей в каждой. Группа 1 являлась контрольной, мышам внутрибрюшинно вводилась дистиллированная вода из расчета 0,1 мл на 10 г веса, через 30 мин проводилась повторная аналогичная инъекция и через 30 мин поведение животных оценивали в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Мышам группы 2 в/бр вводилась суспензия РКП 195 в дозе 10,0 мг/кг, через 30 мин - дистиллированная вода и через 30 мин поведение животных оценивали в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Мышам группы 3 в/бр вводилась дистиллированная вода, через 30 мин суспензия ГМЛ-1 в дозе 0,5 мг/кг или ГМЛ-3 в дозе 0,1 мг/кг и через 30 мин поведение животных оценивали в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Мышам группы 4 в/бр вводилась суспензия РКП 195 в дозе 10,0 мг/кг, через 30 мин суспензия ГМЛ-1 в дозе 0,5 мг/кг или ГМЛ-3 в дозе 0,1 мг/кг и через 30 мин поведение животных оценивали в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт».

В работе использовали соединения ГМЛ-1 в дозе 0,5 мг/кг или ГМЛ-3 в дозе 0,1 мг/кг и субстанцию РКП 195 (Sigma-Aldrich, USA) в дозе 10,0 мг/кг. Все вещества готовились в виде суспензии с Твин-80 и дистиллированной водой и вводились однократной внутрибрюшинной инъекцией.

Эксперимент выполнен на беспородных мышах-самцах CD-1 массой 19-25 г.Поведение животных оценивали в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт».

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA, критерий Краскела-Уоллиса) и непараметрический анализ для независимых переменных (U-критерий Манна-Уитни).

Соединение ГМЛ-1 в дозе 0,5 мг/кг вызывало выраженный анксполитический эффект у мышей CD-1 в тесте ПКЛ, статистически значимо увеличивая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и снижая время пребывания в закрытых рукавах по сравнению с контрольной группой 1. Предварительное введение РК11195 в дозе 10,0 мг/кг (Группа 4) полностью блокировало анксиолитический эффект ГМЛ-1, значимо снижалось время нахождения в открытых рукавах и увеличивалось время в закрытых (Таблица 11).

Соединение ГМЛ-3 в дозе 0,1 мг/кг активировало исследовательскую активность животных в тесте ПКЛ, статистически значимо снижая время пребывания в закрытых рукавах и увеличивая время нахождения на центральной площадке установки по сравнению с контрольной группой 1. Предварительное введение РК11195 в дозе 10,0 мг/кг (Группа 4) полностью блокировало анксиолитический эффект ГМЛ-3, значимо снижалось время нахождения и количество заходов в открытые рукава, увеличивалось время в закрытых рукавах (Таблица 12).

Результаты эксперимента демонстрируют зависимость анксиолитического эффекта соединений ГМЛ-1 и ГМЛ-3 от взаимодействия с рецепторным участком TSPO.

Изобретение относится к новой группе 1-арилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамидов формулы (1), где R¹ может быть водородом или метальной группой, R² может быть (С₁-С₄)-алкильной или бензильной группой и R³ может быть водородом или атомом галогена. Также изобретение относится к конкретным соединениям, способам получения соединения формулы (1), способу лечения тревожных расстройств. Технический результат: получены новые 1-арилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамиды, обладающие полезной биологической активностью. 15 н.п. ф-лы, 13 табл., 11 пр.

1. 1-Арилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамиды общей формулы (1):

где R¹ может быть водородом или метальной группой, R² может быть (С₁-С₄)-алкильной или бензильной группой и R³ может быть водородом или атомом галогена.

2. N-бензил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1а).

3. N-бензил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1б).

4. N-бензил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1в).

5. N-бутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1г).

6. N-бутил-N-метил-1-(2-фторфенил)пирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1д).

7. N-бутил-N-метил-1-(2-хлорфенил)пирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1е).

8. N-бензил-1-(2-бромфенил)-N-метилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1ж).

9. N-изобутил-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-a]пиразин-3-карбоксамид (1з).

10. N-(втор-бутил)-N-метил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1и).

11. N-бензил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1к).

12. N-метил-1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамид (1л).

13. Способ получения 1-арилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамидов общей формулы (1), где R¹, R² и R³ имеют вышеуказанные значения по п.1, заключающийся в том, что 2-азидоакриламиды обшей формулы (2):

где R¹ может быть водородом или метильной группой, R² может быть (С₁-С₄)-алкильной или бензильной группой, вводят во взаимодействие с пирроларилкетонами общей формулы (3):

где R³ может быть водородом или атомом галогена, в полярных апротонных растворителях, таких как диметилформамид или диметилсульфоксид, в присутствии оснований, таких как, например, карбонаты щелочных металлов.

14. Способ получения 1-арилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоксамидов общей формулы (1), где R¹, R² и R³ имеют вышеуказанные значения по п.1, заключающийся в том, что эфиры 2-азидоакриловой кислоты общей формулы (10):

где R⁴ может быть метилом или этилом, вводят во взаимодействие с пирроларилкетонами общей формулы (3):

где R³ имеют вышеуказанные значения, в полярных апротонных растворителях, таких как диметилформамид или диметилсульфоксид, в присутствии оснований, таких как карбонаты щелочных металлов, после чего реакционную массу обрабатывают водно-спиртовым раствором гидроксида щелочного металла, например гидроксида натрия, с последующим подкислением неорганической кислотой, такой как, например, соляная кислота, что приводит к образованию 1-фенилпирроло[1,2-а]пиразин-3-карбоновых кислот общей формулы (8):

где R³ имеют вышеуказанные значения; при действии на кислоты общей формулы (8) неорганическим хлорангидридом, таким как фосфорилхлорид, тионилхлорид, пентахлорид фосфора, или другим в присутствии акцептора кислоты, такого как, например, триэтиламина, других третичных аминов или карбонатов щелочных металлов, и небольшого количества диметилформамида в подходящем органическом растворителе, в качестве которого может быть использован дихлорметан, хлороформ, тетрагидрофуран или другие, с последующим добавлением аминов общей формулы (4):

где R¹ и R² имеют вышеуказанные значения, получают соединения общей формулы (1).

15. Метод лечения тревожных расстройств с помощью эффективных количеств соединений по п. 2 или 5.