СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДЛИННОСТИ СИРОПА ПИЖМЫ ОБЫКНОВЕННОЙ Российский патент 2016 года по МПК G01N30/90 A61K36/28 A61K9/08 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной.

Современные требования, предъявляемые к методикам анализа сырья и препаратов на основе лекарственного растительного сырья, предполагают универсальный подход к определению ведущей группы биологически активных соединений. Следовательно, актуальным являются исследования по совершенствованию стандартизации как цветков пижмы обыкновенной, так и препаратов на их основе.

В современной медицине цветки пижмы обыкновенной применяют в качестве желчегонного и противогельминтного средств (1, 4, 5, 8, 9) благодаря высокому содержанию в них флавоноидов. В Российской Федерации зарегистрированы следующие лекарственные препараты, получаемые из цветков пижмы: «Танацехол таблетки, покрытые оболочкой 0,05 г», «Сибектан таблетки 0,1 г». Также цветки пижмы обыкновенной входят в состав «Желчегонного сбора №3» (1).

Однако вопросы химической стандартизации сырья и препаратов данного растения решены не в полной мере. В Фармакопейной статье на цветки пижмы Государственной Фармакопеи СССР XI издания (2) отсутствует раздел «Качественные реакции», что не соответствует современным тенденциям в области фармацевтического анализа лекарственного растительного сырья (10). Аналогичные подходы используются и при анализе лекарственных средств из цветков пижмы обыкновенной.

Для препарата «Сироп с экстрактом пижмы» (11) приводится методика определения терпеноидов, в том числе туйона, методом тонкослойной хроматографии, в системе петролейный эфир - метилэтиленкетон в соотношении 8:2. Однако при этом способе анализа не идентифицируются биологически активные компоненты - флавоноиды, которые в первую очередь определяют фармакологическую активность сиропа.

В ходе изучения химического состава цветков пижмы обыкновенной нами выделен доминирующий флавоноид - тилианин, позволяющий идентифицировать сырье и препараты пижмы обыкновенной (6) и использовать его в качестве стандартного образца при определении подлинности сырья и препаратов пижмы обыкновенной. На основе результатов данных исследований разработан способ определения подлинности цветков пижмы обыкновенной с использованием тонкослойной хроматографии (7). Этот способ взят в качестве прототипа, однако реализация данного метода для целей анализа лекарственного препарата «Сиропа пижмы обыкновенной» крайне затруднительна в силу того, что сиропы имеют высокую вязкость растворов. Имеется опыт количественного анализа сиропа зверобоя с использованием пробоподготовки в виде экстракции целевых веществ ацетоном (3), однако последующее упаривание и растворение сухого остатка в этиловом спирте делает эту процедуру громоздкой, а полученный при этом сильно разбавленный раствор экстрактивных веществ (для метода спектрофотометрии) неприменим для анализа методом тонкослойной хроматографии.

Следует подчеркнуть, что анализ лекарственной формы сиропа с точки зрения определения подлинности с использованием тонкослойной хроматографии крайне затруднителен в силу того, что сиропы имеют высокую вязкость растворов.

В соответствии с вышеизложенным целью изобретения является разработка способа определения подлинности лекарственного препарата «Сиропа пижмы обыкновенной».

Техническим результатом предлагаемого способа является улучшение методики определения подлинности для идентификации флавоноидов, в частности доминирующего и диагностичного флавоноида тилианина, используя метод тонкослойной хроматографии.

Технический результат достигается тем, что определение доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина в сиропе из этого лекарственного растительного сырья проводят методом тонкослойной хроматографии благодаря стадии предварительного извлечения из препарата флавоноида в результате обработки равным количеством ацетона, но без предварительного упаривания ацетонового извлечения и последующего растворения анализируемых веществ. Способ осуществляется следующим образом.

Сироп (точная навеска) помещают в колбу со шлифом объемом 30 мл и экстрагируют равным объемом ацетона путем встряхивания вручную в течение 1-2 минут. Отстаивают двухфазную систему после экстракции до полного расслоения слоев (верхний слой - ацетон, нижний - сироп). В результате в ацетоновый слой переходят анализируемые вещества, в том числе диагностически значимый флавоноид тилианин.

На линию старта хроматографической пластины наносят микропипеткой 0,02 мл ацетонового извлечения из сиропа и 0,05 мл рабочего стандартного образца тилианина в виде пятен диаметром 5 мм. Пластинку с нанесенной пробой помещают в вертикальную камеру, которую предварительно насыщают не менее 24 ч смесью растворителей: хлороформ-этанол-вода в соотношении 26:16:3 и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей проходит около 9 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. Хроматограмму опрыскивают раствором диазобензолсульфокислоты и нагревают на плитке в течение 3 мин при 100-105°C. На хроматограмме обнаруживается ряд пятен с R_f от 0,10 до 0,80; при этом доминирующим является пятно на уровне пятна стандарта тилианина с величиной R_f около 0,7 (рис. 1).

Примечание 1: подготовка пластинок. Хроматографические пластинки перед использованием активируют в сушильном шкафу при 110°C в течение 1 ч.

Примечание 2: приготовление раствора диазобензолсульфокислоты. 0,01 г диазобензолсульфокислоты (Государственная Фармакопея X издания, стр. 876) растворяют в 10 мл 10% раствора натрия карбоната. Раствор используют свежеприготовленным.

Технический результат реализуется примером 1.

Пример 1.

5,0 г сиропа (точная навеска) помещают в колбу со шлифом объемом 30 мл и экстрагируют 5 мл ацетона путем встряхивания вручную в течение 1-2 минут. Отстаивают двухфазную систему после экстракции до полного расслоения слоев (верхний слой - ацетон, нижний - сироп).

На линию старта пластинки «Сорбфил - ПТСХ-АФ-А-УФ» микропипеткой 0,02 мл ацетонового извлечения из сиропа и 0,05 мл рабочего стандартного образца тилианина в виде пятен диаметром 5 мм. Пластинку с нанесенной пробой помещают в вертикальную камеру, которую предварительно насыщают не менее 24 ч смесью растворителей: хлороформ-этанол-вода в соотношении 26:16:3 и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей проходит около 9 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. Хроматограмму опрыскивают раствором диазобензолсульфокислоты и нагревают на плитке в течение 3 мин при 100-105°С. На хроматограмме обнаруживается ряд пятен с R_f от 0,10 до 0,80; при этом доминирующим является пятно на уровне пятна стандарта тилианина с величиной R_f около 0,7.

Таким образом, предлагаемый способ определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной позволяет объективно оценивать качество данной лекарственной формы путем определения флавоноидов, определяющим фармакологическое действие сиропа и отвечает современным требованиям, предъявляемым к методикам фармацевтического анализа. В заявленном способе по сравнению с препаратом «Зверобоя сироп» упрощена процедура анализа путем исключения стадии упаривания ацетонового извлечения и последующего растворения в этиловом спирте. Это позволяет упростить стадию пробоподготовки и сократить продолжительность анализа.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:

1. Государственный реестр лекарственных средств [Электронный ресурс]. - Электрон. дан. - 2011. - Режим доступа: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx - Загл. с экрана.

2. Государственная Фармакопея СССР. - Одиннадцатое издание. - Вып. 2. - М.: Медицина, 1990. - 400 с.

3. Зимина Л.Н. Фармакогностическое исследование по обоснованию по созданию антидепрессантных препаратов на основе травы зверобоя: дис. … канд. фармац. наук: 14.04.03 / Зимина Любовь Николаевна. - Самара, 2011. - 121 с.

4. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов / В.А. Куркин. - 2-е изд., перераб. и доп. - Самара: Офорт; СамГМУ, 2007. - 1239 с.

5. Куркин В.А. Основы фитотерапии: учебное пособие / В.А. Куркин. - Самара: Офорт; СамГМУ, 2009. - 963 с.

6. Куркина А.В. Флавоноиды цветков Tanacetum vulgare / А.В. Куркина, А.И. Хусаинова, Е.Д. Даева, В.И. Каденцев // Химия природных соединений. - 2011. - №2. - С. 256-257.

7. Куркина А.В. Возможности применения метода ВЭЖХ для стандартизации цветков пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.) / А.В. Куркина, Е.А. Калабухова, Г.И. Власова, Г.А. Демидова, Е.В. Авдеева // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №5; URL: www.science-education.ru/111-10031 (дата обращения: 30.08.2015).

8. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.

9. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Asteraceae (Compositae). - СПб.: Наука, 1993. - С. 190-192.

10. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных средств / И.А. Самылина // Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: Материалы I Международного научного конгресса. - М.: Институт традиционных методов лечения МЗ РФ, 1994. - С. 254.

11. Якусевич Р.В. Разработка состава, технологии и норм качества корригированной лекарственной формы - сиропа на основе пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.): автореф. дис. … канд. фармац. наук: 14.04.01 / Якусевич Роман Викторович. Пятигорск, 2013. - 23 с.

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона. Изобретение характеризуется упрощенной стадией пробоподготовки, а также улучшенной методикой определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной и позволяет объективно оценивать качество данной лекарственной формы. 1 ил., 1 пр.

Способ определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной методом тонкослойной хроматографии, отличающийся тем, что определение доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина в сиропе из этого лекарственного растительного сырья проводят методом тонкослойной хроматографии благодаря стадии предварительного извлечения из препарата флавоноида в результате обработки равным количеством ацетона.