ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2016 года по МПК A61K31/7056 A61K47/48 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам, обладающим противоопухолевым действием.

Среди соединений, способных ингибировать ферменты ДНК-топоизомеразы, отвечающие за суперспирализацию ДНК и участвующие в процессе репликации и транскрипции, известны вещества различных химических групп. Особый интерес среди этих веществ представляют производные индолокарбазолов [Татарский В.В. Механизмы гибели опухолевых клеток при действии новых углеводных производных индолокарбазолов. Автореферат диссертации на соискание ученой степени ст. канд. биологических наук. Москва. 2010].

Известно средство из этой группы соединений бекатекарин, которое ингибирует топоизомеразы I и II и применяется в качестве противоопухолевого средства, при мелкоклеточном раке легкого [Schwandt A, Mekhail Т, Halmos В, O′Brien Т, Ma PC, Fu Р, Ivy Р, Dowlati A. Phase-II trial of rebeccamycin analog, a dual topoisomerase-I and -II inhibitor, in relapsed “sensitive” small cell lung cancer. J Thorac Oncol. 2012 Apr.; 7(4):751-4].

Задачей заявляемого изобретения является создание противоопухолевого средства из группы производных индолокарбазолов, позволяющего расширить спектр противоопухолевых препаратов.

Технический результат состоит в том, что создано новое противоопухолевое средство из группы производных индолокарбазолов, позволяющее расширить спектр противоопухолевых препаратов.

Поставленная задача достигается тем, что создано новое противоопухолевое средство из группы производных индолокарбазолов, включающее 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион, диметилсульфоксид (ДМСО); поливинилпирролидон (ПВП) при следующем соотношении компонентов (мг):

6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион 8,1-9,9 ДМСО 95,0-125,0 ПВП 540,0-660,0

Получение 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона

К 0,55 г (0,9 ммоль) 13-формил-12-(2,3,4-три-О-ацетил-α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона добавляли 3,2 мл (65,25 ммоль) гидразин-гидрата, смесь выдерживали при температуре 50°C в течение двух часов, охлаждали до 22°C, выливали в воду. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали 10% спиртом. Выход 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона составил 0,37 г (89%). Масс-спектр: М⁺ 457 m/z.

¹Н-ЯМР (DMSO-d₆, δ м.д.): 12.15 (с, 1H, NH-индол), 9.23 (д, 1H, Ar), 9.14 (д, 1Н, Ar), 7.94 (д, 1Н, Ar), 7.70 (д, 1Н, Ar), 7.62 (т, 1Н, Ar), 7.59 (т, 1H, Ar), 7.41 (т, 1Н, Ar), 7,37(т, 1H, Ar), 6.11 (д, 1Н, H1′, J_1′2′ 9.1), 6.86, 5.38, 5.24 (3 уш с, 3Н, 2′,3′,4′-ОН), 4.99 (2Н, с, NH₂), 4.20-4.05 (м, 3Н, Н2′, Н3′, Н5′′), 4.25 (м, 1Н, Н5′), 3.85 (м, 1Н, Н4′).

Способ получения заявляемого средства

К навеске 2970,0 мг 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона добавляли 50,0 мл ДМСО, получали прозрачный раствор оранжевого цвета. Отдельно готовили 20% раствор ПВП в воде для инъекций. В водный раствор ПВП добавляли при постоянном перемешивании раствор 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона в ДМСО. Полученный раствор стерилизовали при помощи фильтрации и разливали по 3,0 мл во флаконы вместимостью 20 мл и подвергали сублимационной сушке. По окончании лиофилизации флаконы закрывали пробками и укупоривали алюминиевыми колпачками.

Изобретение иллюстрируется примерами 1-3:

Пример 1.

6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с] карбазол-5,7-дион 8,1 ДМСО 95,0 ПВП 540,0

Пример 2.

6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с] карбазол-5,7-дион 9,0 ДМСО 110,0 ПВП 600,0

Пример 3.

6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с] карбазол-5,7-дион 9,9 ДМСО 125,0 ПВП 660,0

Изучение противоопухолевой активности заявляемого средства

Исследование противоопухолевой активности заявляемого средства проводили на самках и самцах мышей гибридов первого поколения BDF₁ (C₅₇B1/_6j×DBA/2), массой 18-20 грамма, полученных из питомника «Столбовая» РАМН.

Опухолевые клетки лимфолейкоза-Р388 перевивали мышам гибридам первого поколения BDF₁ (C₅₇B1/6×DBA/2) внутрибрюшинно асцитной жидкостью по 0,3 мл, содержащей 1×10⁶ опухолевых клеток при разведении асцита в цитрате и среде 199. Введение заявляемого средства начинали через 24 часа после перевивки опухоли.

Опухолевую ткань эпидермоидной карциномы легкого Lewis (LLC) измельчали ножницами до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 до соотношения 1:10. Полученную суспензию в объеме 0,5 мл вводили подкожно в область правой подмышечной впадины мышам - самцам BDF₁. Введение заявляемого средства начинали через 48 час после перевивки опухоли.

Опытные группы при перевивке опухолевых клеток лимфолейкоза-Р388 состояли из 8 мышей. При перевивке опухолевой ткани эпидермоидной карциномы легкого Lewis опытные группы состояли из 9-10 мышей. Контрольные группы включали по 10-12 мышей, которые не получали заявляемого средства.

Критериями оценки противоопухолевой активности заявляемого средства служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %) опытных мышей по сравнению с контрольными.

Для оценки ТРО измеряли три максимальных взаимно перпендикулярных размера опухоли (длина, ширина, высота) у каждой мыши и вычисляли ее объем, а затем определяли средний объем опухолей в группе. Измерение объема опухоли проводили каждые 3 дня, начиная с 1 дня после окончания введения соединения, когда размеры опухолей у мышей контрольных групп были измеримыми.

$$V(м{м}^3)=l\times b\times h$$ ,

где: l - длина опухоли, мм;

b - ширина опухоли, мм;

h - высота опухоли, мм.

ТРО вычисляли по формуле:

ТРО(%)=(Vк-Vo)/Vk×100, где

Vк - средний объем опухолей в контрольной группе (мм³);

Vo - средний объем опухолей в опытной группе (мм³).

Сравнительную оценку противоопухолевой активности по УПЖ проводили после гибели мышей от опухолевого процесса. Сначала определяли среднюю продолжительность жизни (СПЖ) в днях в опытной и контрольной группах, а затем вычисляли УПЖ по формуле:

УПЖ(%)=(СПЖо-СПЖк)/СПЖк×100, где

СПЖк - средняя продолжительность жизни мышей в контрольной группе (дни);

СПЖо - средняя продолжительность жизни мышей в опытной группе (дни).

Минимальными критериями противоопухолевой активности служили: ТРО≥50% и УПЖ≥25%.

Статистическую значимость результатов оценивали по критерию Стьюдента-Фишера. Статистически значимой противоопухолевую активность считали при p≤0,05.

Заявляемое изобретение иллюстрировано таблицами 1-2.

В табл. 1 представлена противоопухолевая активность заявляемого средства в зависимости от дозы и режима введения опытным мышам с лимфолейкозом-Р388. Показано, что при введении заявляемого средства в дозе 25 мг/кг при ежедневном применении в течение 5 дней выявлена высокая противоопухолевая активность, при этом УПЖ составило 76%. При введении заявляемого средства в дозе 35 мг/кг УПЖ составило 80%, но при этом отмечена гибель двух из 8 мышей. При однократном введении заявляемого средства в диапазоне доз от 75 мг/кг до 160 мг/кг не выявлено различий в терапевтическом эффекте: УПЖ варьировало от 28% до 34%. При введении заявляемого средства в дозе 160 мг/кг наблюдали гибель одной из 8 мышей.

Таким образом, режим введения заявляемого средства в дозе 25 мг/кг ежедневно в течение 5 дней у мышей с лимфолейкозом-Р388 являлся оптимальным.

В табл. 2 представлена противоопухолевая активность заявляемого средства в зависимости от дозы и режима введения опытным мышам с эпидермоидной карциномой легкого Lewis (LLC). Показано, что при введении заявляемого средства в дозах 20 мг/кг и 25 мг/кг при ежедневном внутривенном введении в течение 5 дней выявлена статистически значимая противоопухолевая активность только в течение 5 дней после окончания его применения. ТРО на 1-й и 5-й дни после введения заявляемого средства в дозе 20 мг/кг составило 88% и 57%, соответственно. При применении заявляемого средства в дозе 25 мг/кг ТРО на 1-й и 5-й дни после введения составило 85% и 60%, соответственно. При однократном введении заявляемого средства в дозе 150 мг/кг достоверный противоопухолевый эффект сохранялся в течение 17 дней. При применении заявляемого средства в дозе 160 мг/кг наблюдали гибель двух из 9 мышей, соответственно.

Таким образом, введение заявляемого средства в дозе 150 мг/кг у мышей с эпидермоидной карциномой легкого Lewis (LLC) является оптимальным при однократном введении.

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам, обладающим противоопухолевым действием. Предложено новое противоопухолевое средство, содержащее 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион, диметилсульфоксид и поливинилпирролидон и при следующих соотношениях компонентов (мг):

6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион 8,1-9,9 диметилсульфоксид 95,0-125,0 поливинилпирролидон 540,0-660,0

Созданное новое противоопухолевое средство из группы производных индолокарбазолов позволяет расширить спектр противоопухолевых препаратов. 3 пр., 2 табл.

Противоопухолевое средство, содержащее 6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион, диметилсульфоксид и поливинилпирролидон и при следующих соотношениях компонентов (мг):
6-амино-12-(α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дион 8,1-9,9 диметилсульфоксид 95,0-125,0 поливинилпирролидон 540,0-660,0