ОРГАНИЧЕСКИЕ СОЛИ БРОМФЕНАКА И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ИХ КОМПОЗИЦИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2016 года по МПК C07C229/42 C07C227/18 A61K31/196 A61P27/02 A61P29/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к фармакологии и фармацевтике и относится к органической соли бромфенака. Настоящее изобретение также относится к способу получения органической соли бромфенака, к композиции, содержащей органическую соль бромфенака, к применению органической соли бромфенака или содержащей ее композиции для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики воспаления, или лекарственного средства, предназначенного для обезболивания, и к способу лечения и/или профилактики воспаления или к способу обезболивания.

Уровень техники

Натриевая соль бромфенака является нестероидным противовоспалительным средством, разработанным фирмой Wyeth-Ayerst Lab Inc, и является производным 2-амино-3-бензоилфенилуксусной кислоты (Amfenac), которое поступило в продажу в США в 1997 г.; натриевая соль бромфенака обладает сильным обезболивающим воздействием и применяется для лечения острой боли, не характеризуется привыканием и ее активность в 10 раз больше активности других нестероидных противовоспалительных средств. Натриевая соль бромфенака является наиболее эффективным ингибитором циклооксигеназы и это приводит к противовоспалительному, антианафилаксическому и обезболивающему эффектам, преимущественно вследствие ингибирования циклооксигеназы с блокированием синтеза простагландинов - регуляторов воспаления.

Химическое название натриевой соли бромфенака - полуторный гидрат натриевой соли 2-амино-3-(4-бромбензоил)фенилуксусной кислоты и представлен приведенной ниже химической структурой:

.

Натриевая соль бромфенака

Натриевая соль бромфенака растворима в воде, почти нерастворима в 0,1M растворе хлористоводородной кислоты, ацетонитриле и ацетоне, растворима в метаноле и слабо растворима в этаноле.

Офтальмологический раствор натриевой соли бромфенака разработала фирма Senju Company of Japan и он поступил в продажу в Японии в 2000 г. в виде флакона, содержащего 5 мл 0,1% офтальмологического раствора натриевой соли бромфенака, и он применяется для лечения воспалительных заболеваний наружных участков глаз и передних участков глаз, таких как блефарит, конъюнктивит, изъязвление роговицы, послеоперационные воспаления.

Содержание изобретения

После проведения исследований и постоянных усилий авторы настоящего изобретения нашли, что новая органическая соль бромфенака обладает хорошей противовоспалительной и обезболивающей активностью и обладает хорошей стабильностью, и одновременно авторы неожиданно установили, что характеристики проникновения через кожу и концентрации при распределении в тканях лучше, чем для натриевой соли бромфенака. Таким образом, в объем настоящего изобретения входит следующее:

одним объектом настоящего изобретения является органическая соль бромфенака, представленная приведенной ниже формулой I:

,

I

в которой A означает органическое основание, предпочтительно означает азотсодержащее органическое основание.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения органической солью бромфенака является соль бромфенака с диэтиламином или соль бромфенака с трометамолом, которая предпочтительно обладает структурой, представленной приведенной ниже формулой II или формулой III:

.

II III

Другим объектом настоящего изобретения является способ синтеза органической соли бромфенака, предлагаемой в настоящем изобретении, включающий следующие стадии:

1) растворение бромфенака в органическом растворителе, нагревание для растворения, последующее прибавление органического основания в эквимолярном количестве, перемешивание до завершения реакции (с использованием тонкослойной хроматографии для определения завершения реакции);

2) концентрирование и выпаривание досуха раствора реакционной смеси с получением светло-желтого или оранжево-желтого твердого вещества;

3) перекристаллизация твердого вещества, полученного на стадии 2), с получением органической соли бромфенака.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанным органическим растворителем на стадии 1) является один или большее количество выбранных из группы, включающей метанол, этанол, ацетон, н-бутанол и толуол, предпочтительно ацетон; указанным органическим основанием является азотсодержащее органическое основание, предпочтительно диэтиламин или трометамол.

.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения температура, при которой проводят нагревание на стадии 1), равна 25-80°C; предпочтительно равна 45-60°C, более предпочтительно равна 55°C.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения перемешивание реакционной смеси на стадии 1) проводят в течение времени, равного 0,5-2 ч; предпочтительно равного 1 ч.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения перекристаллизацию на стадии 3) проводят при температуре, равной 0°C или ниже; предпочтительно при -5°C.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения способ получения дополнительно включает следующие стадии:

4) вакуумная сушка кристаллов, полученных путем перекристаллизации.

Еще одним объектом настоящего изобретения является композиция, которая содержит органическую соль бромфенака, предлагаемую в настоящем изобретении. Композиция необязательно дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель или инертный наполнитель.

В настоящем изобретении термин "композиция" означает фармацевтическую композицию, которую можно вводить субъекту для обеспечения лечения, профилактики, облегчения протекания и/или ослабления заболеваний или нарушений, предлагаемых в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтической композицией является лекарственное средство, предназначенное для лечения и/или профилактики воспалений, или фармацевтическая композиция, предназначенная для обезболивания.

Обычно фармацевтическая композиция, предлагаемая в настоящем изобретении, содержит 0,01-90 масс.% соединения, предлагаемого в настоящем изобретении. Фармацевтическую композицию можно получить по методикам, известным в данной области техники, и можно переработать во вводимую форму или дозированную форму, подходящую для введения людям.

Соединение или фармацевтическую композицию, содержащую соединение, можно вводить в разовой дозированной форме и путями введения могут быть интестинальный путь или парентеральный путь, такой как пероральный, внутримышечный, назальный, трансбуккальный, подкожный, брюшинный, ректальный путь. Дозированной формой могут быть таблетки, капсулы, микропилюли, аэрозоли, пилюли, порошки, растворы, суспензии, эмульсии, гранулы, липосомы, средства, обеспечивающие проникновение через кожу, трансбуккальные таблетки, суппозитории и высушенные вымораживанием порошки для инъекции. Ими могут быть обычные препараты или препараты замедленного высвобождения, препараты регулируемого высвобождения, а также различные системы доставки измельченных частиц. Для приготовления таблеток в качестве разовой дозированной формы можно использовать различные носители, известные в данной области техники. Примерами носителей являются, например, разбавители и абсорбенты, такие как крахмал, декстрин, сульфат кальция, лактоза, маннит, сахароза, хлорид натрия, глюкоза, мочевина, карбонат кальция, каолин, микрокристаллическая целлюлоза, силикат алюминия; смачивающие агенты и связующие, такие как вода, глицерин, полиэтиленгликоль, этанол, пропанол, паста крахмала, декстрин, сироп, мед, раствор глюкозы, камедь акации, паста желатина, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, шеллак, метилцеллюлоза, фосфат калия, поливинилпирролидон; разрыхлители, такие как сухой крахмал, альгинат, порошкообразный агар, порошкообразная ламинария, гидрокарбонат натрия и лимонная кислота, карбонат кальция, полиоксиэтилен, эфиры сорбита и жирных кислот, додецилсульфат натрия, метилцеллюлоза, этилцеллюлоза; ингибиторы распада, такие как сахароза, тристеарин, масло какао, гидрированное масло; усилители абсорбции, такие как четвертичная соль аммония, додецилсульфат натрия; смазывающие вещества, такие как порошкообразный тальк, диоксид кремния, кукурузный крахмал, стеараты, борная кислота, жидкий парафин, полиэтиленгликоль. Таблетки также можно дополнительно обработать с получением таблеток с покрытием, таких как таблетки с покрытием из сахара, таблетки с тонким мембранным покрытием, таблетки с энтеросолюбильным покрытием или двуслойные таблетки, или многослойные таблетки. Для приготовления пилюль в качестве разовой дозированной формы можно использовать различные носители, известные в данной области техники. Примерами этих носителей могут быть, например разбавители и абсорбенты, такие как глюкоза, лактоза, крахмал, масло какао, гидрированное масло, поливинилпирролидон, гелюцир, каолин, порошкообразный тальк; связующие, такие как камедь акации, трагакантовая камедь, желатин, этанол, мед, жидкий сахар, рисовая паста или паста из хлеба с молоком; разрыхлители, такие как порошкообразный агар, сухой крахмал, альгинаты, додецилсульфат натрия, метилцеллюлоза, этилцеллюлоза. Для приготовления суппозиториев в качестве разовой дозированной формы можно использовать различные носители, известные в данной области техники. Примерами этих носителей являются, например полиэтиленгликоль, лецитин, масло какао, жирные спирты, сложные эфиры жирных спиртов, желатин и полусинтетические глицериды. Для приготовления капсул в качестве разовой дозированной формы соединение формулы I или его стереоизомер в качестве эффективного компонента смешивают с различными носителями и полученную смесь помещают в капсулу из твердого желатина или в капсулу из мягкого желатина. Соединение формулы I или его стереоизомер в качестве эффективного компонента также можно обработать и получить микрокапсулы, суспендировать в водной среде и получить суспензию, или поместить в твердые капсулы или обработать и получить препараты для инъекции. Для приготовления препаратов для инъекции в качестве разовой дозированной формы, таких как растворы, эмульсии, высушенные вымораживанием порошки для инъекции или суспензии, можно использовать все разбавители, обычно применяющиеся в данной области, такие как вода, этанол, полиэтиленгликоль, 1,3-пропандиол, этоксилированный изостеариловый спирт, многократно окисленный изостеариловый спирт, полиоксиэтиленсорбитановый эфир жирной кислоты. Кроме того, для приготовления изоосмотических препаратов для инъекции к препарату для инъекции можно добавить соответствующее количество хлорида натрия, глюкозы или глицерина. Кроме того, также можно добавить обычные сорастворители, буферные агенты, регуляторы pH и т. п.

Кроме того, при желании к фармацевтическим препаратам также можно добавить красители, консерванты, отдушки, корректирующие агенты, подсластители или другие вещества.

Реальные дозы различных активных компонентов в фармацевтической композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, можно менять так, чтобы активные соединения находились в количествах, эффективных для конкретных пациентов, композиций и путей введения, и можно было обеспечить необходимый терапевтический эффект. Величину дозы можно определить в соответствии с активностью конкретного соединения, путем введения, тяжестью подвергающегося лечению заболевания и состояния и анамнезом пациента. Однако методика, использующаяся в данной области техники, заключается в первоначальном использовании дозы соединения, которая меньше необходимой для обеспечения желательных терапевтических эффектов, и последующее постепенное увеличение дозы, пока не будут обеспечены желательные эффекты.

Еще одним объектом настоящего изобретения является применение органической соли бромфенака или композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики воспаления, или лекарственного средства, предназначенного для обезболивания; воспаление включает воспаления различных тканей организма человека (такие как воспаления кожи, воспаления уха, такие как воспаления ушной раковины или опухание ушной раковины, опухание стопы); предпочтительно, если воспалением является воспаление, связанное с простагландином или опосредуемое им, более предпочтительно, если им являются воспаления глаз, такие как блефарит, конъюнктивит, изъязвление роговицы или послеоперационные воспаления глаз. Обезболивание включает уменьшение болей в различных частях организма человека; предпочтительно, если ими являются боли, вызванные простагландином или опосредуемые им; более предпочтительно, если ими являются боли, вызванные заболеваниями глаз.

Простагландин может усиливать способность других воспалительных медиаторов индуцировать воспаления, стимулировать развитие воспаления и одновременно оказывает гипералгезирующее воздействие, которое повышает чувствительность болевых рецепторов, способствуя выработке вызывающих боль соединений, таких как брадикинин и сам простагландин, также вызывающий боль.

Механизм действия нестероидных противовоспалительных средств заключается в ингибировании циклооксигеназы, блокировании биосинтеза и высвобождении простагландина, предупреждения стимуляции глаза и повреждения, вызванного воспалительными медиаторами, так что они обладают хорошей способностью к антианафилаксии, облегчению зуда и обезболиванию. Следовательно, нестероидные противовоспалительные средства, ингибирующие синтез простагландина, оказывают противовоспалительное, а также обезболивающее воздействие. Кроме того, нестероидные противовоспалительные средства подавляют миоз, вызванный хирургическим вмешательством, и могут поддерживать мидриаз во время хирургического вмешательства; так что невоспалительные средства можно использовать заранее или на ранней стадии после повреждения, и они значительно уменьшают воспалительные реакции и осложнения.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения и/или профилактики воспаления или способ обезболивания, включающий стадию введения эффективного количества органической соли бромфенака, предлагаемой в настоящем изобретении, или композиции, предлагаемой в настоящем изобретении; предпочтительно, если воспаление включает воспаления, связанные с простагландином или опосредуемые им, более предпочтительно, если ими являются воспаления кожи или воспаления уха, или глаз, также предпочтительно, если воспалениями являются блефарит, конъюнктивит, изъязвление роговицы или послеоперационные воспаления глаз; предпочтительно, если обезболиванием является облегчение болей, вызванных простагландином или опосредуемых им; более предпочтительно, если им является облегчение болей, вызванных заболеваниями глаз.

Вводимая доза соединения (органической соли бромфенака) или композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, зависит от многих факторов, таких как характеристики и тяжесть заболевания, которое предупреждают или лечат, пол, возраст, масса тела и индивидуальная реакция пациента или животного, то, какое конкретное соединение используют, пути введения и времени введения и т. п. Указанная доза может быть одной дозой или включает несколько разделенных доз, например 2, 3 или 4 разделенных дозы, предназначенные для введения.

В настоящем изобретении термин "эффективное количество" означает дозу, которая может обеспечить лечение, профилактику, облегчение протекания и/или ослабление заболеваний или нарушений, предлагаемых в настоящем изобретении.

Термин "субъект" означает пациента или животного, которому вводят композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, для лечения, профилактики, облегчения протекания и/или ослабления заболевания или нарушения, предлагаемых в настоящем изобретении, предпочтительно млекопитающее, такое как человек, собака, обезьяна, крупный рогатый скот, лошадь и т. п.

Термин "заболевание и/или нарушение" означает физикальное состояние субъекта и физикальное состояние относится к заболеванию и/или нарушению, предлагаемому в настоящем изобретении.

Благотворное воздействие настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к новой органической соли бромфенака, которая оказывает противовоспалительное и обезболивающее воздействие, обладает хорошей растворимостью в воде и растворимостью в жирах, высокой стабильностью после длительного хранения. Кроме того, по сравнению с имеющейся в продаже натриевой солью бромфенака соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, обладает лучшим чрескожным воздействием и большей концентрацией при распределении в тканях.

Способ получения, предлагаемый в настоящем изобретении, является простым, в нем используется легкодоступное сырье, стабильные условия проведения реакции, он приводит к высокому выходу, высокой чистоте продукта и приводит к меньшему загрязнению окружающей среды отходами.

Предпочтительная модель осуществления настоящего изобретения

Варианты осуществления настоящего изобретения подробно проиллюстрированы с помощью приведенных ниже примеров. Однако специалисты в данной области техники должны понимать, что приведенные ниже примеры используются только для иллюстрации настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Конкретные средства или условия, которые не указаны в примерах, используются в соответствии с документами, действующими в данной области техники, или спецификациями. Все реагенты или приборы, для которых не указаны изготовители, являются обычными продуктами, которые имеются в продаже.

Пример 1: Получение соли бромфенака с диэтиламином

Отвешивали точно 3,8 г (0,0113 моля) бромфенака и помещали в сухую и чистую трехгорлую колбу объемом 100 мл, добавляли 60 мл ацетона, перемешивали, нагревали при 55°C до растворения, добавляли в реактор вместе с 1,2 мл (0,0113 моля) диэтиламина, непрерывно нагревали, пока осадок полностью не растворялся, перемешивали и реакцию проводили при 55°C в течение 1 ч до завершения реакции (завершение реакции устанавливали с помощью тонкослойной хроматографии), растворитель удаляли путем отгонки при пониженном давлении и получали светло-желтое твердое вещество, к которому добавляли 28 мл смеси растворителей ацетона и воды (объемное отношение составляло 3:1), кипятили с обратным холодильником, пока светло-желтое твердое вещество полностью не растворялось, добавляли небольшое количество активированного угля и дополнительно перемешивали в течение 10 мин, теплый раствор фильтровали, фильтрат помещали в холодильник на ночь (охлаждали и кристаллизовали при -5°C), фильтровали, осадок на фильтре сушили в вакууме и получали 2,7 г светло-желтых кристаллов, температура плавления: 151-153°C, выход 58,7%.

Проводили элементный анализ продукта, измеренные значения (теоретические значения): С 56,03(56,07), H 5,69(5,46), Br 19,62(19,67), N 6,88(6,89), О 11,78(11,81), ¹H ЯМР (300 МГц, d₆-ДМСО (диметилсульфоксид)): δ 1,67(т, 6H, -CH₃) δ 3,29 (с, 2H, ArCH2 COO^-), δ 3,37(кв, 4H, -CH₂-N-), δ 6,47 (т, 1H, J=7,5 Гц, N-Ar⁵H), δ 7,10 (д, 1H, J=7,8 Гц, N-ArH), δ 7,17 (д, 1H, J=6,8 Гц, N-ArH), δ 7,49 (д, 2H, J=8,3 Гц, Br-ArH), δ 7,71 (д, 2H, J=8,3 Гц, Br-ArH), δ 7,01 (с, 2H, NH₂ ⁺), δ 7,88 (широкий, 2H, Ar-NH₂). Результаты анализов с помощью МС (масс-спектрометрия), УФ (ультрафиолетовая спектроскопия), ИК (инфракрасная спектроскопия), и ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) показывали, что продуктом являлась соль бромфенака с диэтиламином и она обладала чистотой, равной 99,5%.

Пример 2: Получение соли бромфенака с трометамолом

Отвешивали точно 3,8 г (0,0113 моля) бромфенака и помещали в сухую и чистую трехгорлую колбу объемом 100 мл, добавляли 80 мл ацетона, перемешивали, нагревали при 55°C до растворения, добавляли в реактор вместе с 1,4 г (0,0113 моля) трометамола, непрерывно нагревали, пока осадок полностью не растворялся, перемешивали при 55°C в течение 1 ч до завершения реакции (завершение реакции устанавливали с помощью тонкослойной хроматографии), растворитель удаляли путем отгонки при пониженном давлении и получали оранжево-желтое твердое вещество, к которому добавляли 33 мл смеси растворителей этанола и воды (объемное отношение составляло 9:1), кипятили с обратным холодильником, пока оранжево-желтое твердое вещество не растворялось, добавляли небольшое количество активированного угля и непрерывно перемешивали в течение 10 мин, фильтровали в теплом виде, фильтрат помещали в холодильник на ночь (охлаждали и кристаллизовали при -5°C), фильтровали, осадок на фильтре сушили в вакууме и получали 3,5 г светло-желтых кристаллов. Температура плавления: 144-147°C, выход 67,3%.

Проводили элементный анализ продукта, измеренные значения (теоретические значения): С 50,12(50,15), H 5,09(5,08), Br 17,55(17,52), N 6,15(6,15), О 21,05(21,08). ¹H ЯМР (300 МГц, d₆-ДМСО): δ 3,34 (с, 2H, ArCH2 COO^-), δ 3,67(с, 3H, -OH), δ 4,19(с, 6H, -CH₂-OH), δ 6,53 (т, 1H, J=7,7 Гц, N-Ar⁵H), δ 7,13(д, 1H, J=8,1 Гц, N-ArH), δ 7,22 (д, 1H, J=6,9 Гц, N-ArH), δ 7,43 (д, 2H, J=8,7 Гц, Br-ArH), δ 7,76 (д, 2H, J=8,7 Гц, Br-ArH), δ 7,13 (с, 3H, NH₃ ⁺), δ 7,84 (широкий, 2H, Ar-NH₂). Результаты анализов с помощью МС, УФ, ИК и ВЭЖХ показывали, что продуктом являлась соль бромфенака с трометамолом и она обладала чистотой, равной 99,6%.

Пример 3: Исследование чрескожного всасывания органических солей бромфенака in vitro

Приготовление растворов солей бромфенака: натриевую соль бромфенака, соль бромфенака с диэтиламином, полученную в примере 1, и соль бромфенака с трометамолом, полученную в примере 2, точно отвешивали по отдельности и получали образцы массой 0,25 г, которые по отдельности помещали в мерные колбы объемом 25 мл и фосфатным буферным раствором (значение pH равнялось 7,0), доводили до метки и получали запасные исходные растворы.

Условия проведения хроматографии: детектор: ультрафиолетовый детектор поглощения (длина волны: 266 нм). Хроматографическая колонка: колонка с диоксидом кремния, к которому привит октадецил (4,0 мм×150 мм, 5 мкм). Подвижная фаза: точно отвешенные 3,85 г ацетата аммония разбавляли водой до объема, равного 1000 мл. Брали 600 мл этого раствора и добавляли 250 мл метанола и 150 мл тетрагидрофурана. Скорость потока: 1,5 мл/мин.

Построение калибровочных кривых: натриевую соль бромфенака, соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом в подходящих количествах точно отвешивали по отдельности, растворяли в подвижной фазе, по отдельности разбавляли с получением исследуемых растворов, обладающих концентрациями, равными 10, 30, 60, 120, 300, 700 мкг/мл, которые точно отмеряли по отдельности, получая 20 мкл, и инжектировали в хроматограф и по отдельности анализировали. Площадь пика образца (A) использовали в качестве ординаты и концентрации натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом (C) использовали в качестве абсциссы для линейной регрессии и получали соответствующие уравнения для калибровочных кривых: для натриевой соли бромфенака, A=0,0224 С+0,0584 (r=0,9998), для соли бромфенака с диэтиламином, A=0,0217 С-0,0186 (г=0,9997), для соли бромфенака с трометамолом, A=0,0231 С-0,0436 (r=0,9999). Результаты показывали, что концентрации солей бромфенака в диапазоне 10-700 мкг/мл хорошо линейно коррелировали с площадями пиков.

Определение степени извлечения: подходящие количества исходных растворов точно отвешивали, разбавляли физиологическим раствором и по отдельности получали растворы натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, для каждой из солей готовили растворы низкой, средней и высокой концентрации (80,0 мкг/мл, 100,0 мкг/мл и 120,0 мкг/мл) и для каждой концентрации готовили 3 образца и проводили измерения, отдельные степени извлечения найдены равными: натриевая соль бромфенака (99,5%, 100,1%, 100,2%), соль бромфенака с диэтиламином (99,6%, 99,9%, 100,3%), соль бромфенака с трометамолом (99,6%, 100,0%, 100,4%).

Исследование чрескожного всасывания: ex vivo брали образцы кожи со спины и с живота крыс массой 200-260 г и их использовали в качестве осмотических мембран, которые закрепляли нитью в ячейках для изучения диффузии (ячейки для изучения диффузии обладали диаметром, равным 1,25 см, и эффективной площадью, равной 1,23 см²). По 2 мл исходных растворов натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом по отдельности добавляли в подающую камеру, 100 мл физиологического раствора использовали в качестве принимающего раствора в приемных ячейках, выдерживали при постоянной температуре, равной 32°C, перемешивали (250 об/мин). Образцы по 5 мл принимающих растворов точно отбирали через 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24 ч, фильтровали, исследовали по описанной выше методике определения первых производных спектра поглощения света и рассчитывали параметры и суммарную осмоляльность Q по следующей формуле;

$$Q=\frac{{\displaystyle \sum _{i=1}^{n-1}{c}_i\cdot {\nu }_1+c_n\cdot {\nu }_2}}{A}$$ .

В приведенной выше формуле с означает концентрацию образца принимающего раствора; v1 означает объем образца, взятого в каждом цикле; v2 означает объем ячейки для изучения диффузии; A означает площадь, через которую происходит диффузия. Диаграммы строили с использованием t в качестве абсциссы, Q в качестве ординаты и получали зависимости для осмоса натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом; линейную регрессию проводили с использованием зависимости суммарной осмоляльности Q от времени, полученный наклон К представлял собой скорость осмоса через кожу; суммарную осмоляльность за 24 ч умножали на эффективную площадь, через которую происходит осмос (1,23 см²), и получали полную осмоляльность за 24 ч; и полную осмоляльность за 24 ч делили на массу продукта, добавленного в подающую камеру, и получали степень осмоса в процентах.

Результаты: суммарные осмоляльности солей бромфенака в разные моменты времени приведены в таблице 1 и скорости осмоса, значения полной осмоляльности за 24 ч и степени осмоса в процентах приведены в таблице 2.

Таблица 2 Данные по чрескожному всасыванию для трех лекарственных средств Группа, получавшая указанное средство Скорость осмоса, мкг/см².ч^-1 Полная осмоляльность за 24 ч, мкг Степень осмоса, % Группа, получавшая натриевую соль бромфенака 219,05 5600,0 28,0 Группа, получавшая соль бромфенака с диэтиламином 369,04 10360,0 51,80 Группа, получавшая соль бромфенака с трометамолом 320,61 9010,0 45,05

Анализ результатов:

из данных таблицы 1 и таблицы 2 можно видеть, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом, предлагаемая в настоящем изобретении, а также натриевая соль бромфенака все характеризуются способностью всасываться через кожу, при которой полная осмоляльность за 24 ч для соли бромфенака с диэтиламином является наибольшей, тогда как для соли бромфенака с трометамолом она является второй по величине, но большей, чем для натриевой соли бромфенака. Результаты показывают, что способность всасываться через кожу in vitro для соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом были намного более значительными, чем для натриевой соли бромфенака, и что их способность всасываться через кожу была в 1,85 раза и 1,61 раза большей, чем для натриевой соли бромфенака. Это показывает, что указанные две новые органические соли бромфенака, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают превосходной способностью всасываться через кожу и являются перспективными для клинического применения.

Пример 4: Исследование распределения органических солей бромфенака в тканях

Приготовление растворов солей бромфенака: по отдельности точно отвешивали образцы массой 0,25 г натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином, полученной в примере 1, и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 2, по отдельности помещали в мерные колбы объемом 25 мл, доводили до метки и получали запасные исходные растворы.

Условия проведения хроматографии: детектор: ультрафиолетовый детектор поглощения (длина волны: 266 нм). Хроматографическая колонка: колонка с силикагелем, к которому привит октадецил (4,6 мм×150 мм, 5 мкм). Подвижная фаза: точно отвешенные 3,85 г ацетата аммония разбавляли водой до объема, равного 1000 мл. Брали 700 мл этого раствора и добавляли 300 мл ацетонитрила. Скорость потока: 1,0 мл/мин.

Построение калибровочных кривых: отбирали образцы по 200 мкл необработанной ткани, к ним по отдельности добавляли по 50 мкл серии стандартных растворов натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, добавляли по 50 мкл внутреннего стандарта и получали растворы образцов с эквивалентными концентрациями в ткани натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, равными 50, 100, 250, 500, 1000, 5000, 10000 нг/мл, которые точно отмеряли по отдельности, получая 20 мкл, и инжектировали в хроматограф и по отдельности анализировали. Концентрацию исследуемого вещества (X) использовали в качестве абсциссы и отношение площади пика исследуемого вещества к площади пика внутреннего стандарта (Y) использовали в качестве ординаты и линейную регрессию рассчитывали с помощью взвешенного метода наименьших квадратов (весовой коэффициент равнялся 1/X²) и получали уравнение линейной регрессии в виде стандартного линейного уравнения, которое имело вид для натриевой соли бромфенака, Y=0,000083X+0,01205 (r=0,998), для соли бромфенака с диэтиламином, Y=0,000082X-0,00013 (г=0,9998), для соли бромфенака с трометамолом, Y=0,000096X-0,00361 (r=0,996). Результаты показывали, что концентрации солей бромфенака в диапазоне 50-10000 нг/мл хорошо линейно коррелировали с площадями пиков.

Определение степени извлечения: брали образцы по 200 мкл необработанной ткани и по отдельности готовили образцы ткани с добавлением натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом и для каждой из солей готовили растворы низкой, средней и высокой концентрации (100,0 нг/мл, 500,0 нг/мл и 5000 нг/мл) и проводили измерения, отдельные степени извлечения найдены равными: натриевая соль бромфенака (85,7%, 83,8%, 83,2%), соль бромфенака с диэтиламином (86,6%, 85,5%, 84,3%), соль бромфенака с трометамолом (84,6%, 83,0%, 84,4%).

Исследование распределения в ткани:

1) в первый день исследования для обнажения поверхностного слоя кожи с помощью машинки для стрижки волос удаляли короткие волосы со спины крыс, при удалении волос стараясь не повредить кожу, и затем участок, с которого удалены волосы, промывали большим количеством воды;

2) крыс анестезировали 10% хлоральгидратом при дозе анестезирующего агента, равной 3,5 мл/кг;

3) крыс случайным образом разделяли на 3 группы по 15 крыс в группе. На участки спины крыс 3 групп, с которых удалены волосы, по отдельности наносили 1 г препаратов натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, и обработанные участки закрывали сохраняющей влажность пластиковой пленкой;

4) крыс умерщвляли перед нанесением (0 ч) и через 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч после нанесения, удаляли мышечные ткани под кожей на участках нанесения;

5) мышечные ткани просто промывали физиологическим раствором, затем избыточную воду удаляли с помощью фильтровальной бумаги;

6) отвешивали точно 1 г мышечной ткани, нарезали на кусочки, гомогенизировали в 3 мл физиологического раствора в электрической мельнице. Гомогенный гомогенизат мышечной ткани получали после полного размола мышечной ткани;

7) брали 200 мкл образца ткани, добавляли 50 мкл раствора внутреннего стандарта, перемешивали до гомогенности, добавляли 1 мл метанола, перемешивали путем встряхивания в течение 1 мин, центрифугировали в течение 5 мин (3500 об/мин), разделяли и верхнюю органическую фазу помещали в другую пробирку, сушили путем продувания воздуха при температуре, равной 37°C, остаток растворяли путем добавления 100 мкл подвижной фазы, перемешивали путем встряхивания и отбирали 20 мкл для проведения анализа с помощью ВЭЖХ.

Результаты: распределения концентраций солей бромфенака в мышечной ткани в разные моменты времени приведены в таблице 3.

Таблица 3 Распределения концентраций трех лекарственных средств в мышечной ткани в разные моменты времени (нг/мл, n=3) Группа, получавшая указанное средство 0 ч 2 ч 4 ч 6 ч 8 ч 10 ч Группа, получавшая натриевую соль бромфенака 0 238,5 693,1 508,6 312,8 130,5 Группа, получавшая соль бромфенака с диэтиламином 0 1092,1 2657,6 1803,7 1108,3 262,4 Группа, получавшая соль бромфенака с трометамолом 0 851,7 1492,3 1098,9 789,5 201,2

Из данных таблицы 3 можно видеть, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом, предлагаемые в настоящем изобретении, а также натриевая соль бромфенака все характеризуются хорошим распределением в ткани, причем распределения соли бромфенака с диэтиламином, соли бромфенака с трометамолом и натриевой соли бромфенака в ткани (в мышечной ткани, предпочтительно в мышечной ткани под кожей) достигают максимума, т. е. устанавливаются пиковые концентрации, через 2 ч. Результаты показывают, что концентрации соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, распределенных в ткани, значительно больше, чем для натриевой соли бромфенака, и это показывает, что по сравнению с натриевой солью бромфенака эти две новые органические соли бромфенака, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать большей местной активностью и обладают хорошими характеристиками для клинического применения.

Пример 5: Исследование противовоспалительной активности органических солей бромфенака

В приведенном примере противовоспалительные активности натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом исследовали путем изучения влияния солей бромфенака на опухание уха у мышей, вызванное ксилолом, и опухание лапки у крыс, вызванное яичным белком.

1. Исследование влияния на опухание уха у мышей, вызванное ксилолом: группы для исследований: 40 мышей, масса тела 20±2 г, случайным образом разделяли на 4 группы, 10 мышей в группе, т. е. контрольную группу, получавшую физиологический раствор, группу, получавшую натриевую соль бромфенака, группу, получавшую соль бромфенака с диэтиламином, и группу, получавшую соль бромфенака с трометамолом.

Приготовление растворов солей бромфенака: по отдельности точно отвешивали образцы массой 1 г натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином, полученной в примере 1, и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 2, помещали в мерные колбы объемом 100 мл, доводили до метки дистиллированной водой и получали запасные исходные растворы.

Методика исследования: мышам каждой группы два раза в день с помощью желудочного зонда вводили физиологический раствор, раствор натриевой соли бромфенака, раствор соли бромфенака с диэтиламином и раствор соли бромфенака с трометамолом в дозе, равной 50 мл/кг, в течение 7 последовательных дней, через 1 ч после последнего введения ксилол в дозе, равной 0,05 мл/мышь, наносили на правые уши мышей каждой подопытной группы, а их левые уши использовали в качестве контролей, мышей умерщвляли через 30 мин, части ушей из одинаковых положений и обладавшие одинаковой площадью вырезали из обеих ушей компостером диаметром 6 мм и взвешивали с точностью до 10 десятичных знаков на электронных аналитических весах, и разность масс участков обоих ушей использовали в качестве показателя степени опухания. Результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4 Влияние натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом на опухание уха у мышей Группа Количество животных (мыши) Степень опухания (мг) Контрольная группа, получавшая физиологический раствор 10 11,31±1,13 Группа, получавшая натриевую соль бромфенака 10 5,45±0,36 Группа, получавшая соль бромфенака с диэтиламином 10 5,37±0,50 Группа, получавшая соль бромфенака с трометамолом 10 5,41±0,47

Как показано в таблице 4, натриевая соль бромфенака, соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом все значительно подавляют опухание уха у мышей, вызванное ксилолом, и противовоспалительные воздействия соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом сходны с воздействием натриевой соли бромфенака.

2. Исследование влияния на опухание лапки у крыс, вызванное яичным белком

Группы для исследований: 40 крыс, масса тела 200-220 г, случайным образом разделяли на 4 группы, 10 крыс в группе, т. е. контрольную группу, получавшую физиологический раствор, группу, получавшую натриевую соль бромфенака, группу, получавшую соль бромфенака с диэтиламином, и группу, получавшую соль бромфенака с трометамолом.

Приготовление растворов солей бромфенака: по отдельности точно отвешивали образцы массой 1 г натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином, полученной в примере 1, и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 2, точно отвешивали по отдельности, помещали в мерные колбы объемом 100 мл, доводили до метки физиологическим раствором и получали запасные исходные растворы.

Крысам каждой группы два раза в день с помощью желудочного зонда вводили физиологический раствор, раствор натриевой соли бромфенака, раствор соли бромфенака с диэтиламином и раствор соли бромфенака с трометамолом в дозе, равной 50 мл/кг, в течение 7 последовательных дней, перед последним введением измеряли объемы подошвы нормальной правой и левой лапки каждой крысы и измерение проводили по методике определения объема капиллярной крови. Положение линии метки на голеностопном суставе крысы выбирали так, чтобы объемы подошвы правой и левой лапки равнялись примерно 1 мл, через 0,5 ч после последнего введения в подошвы правой и левой лапки путем подкожной инъекции вводили 0,1 мл свежеприготовленного 10% раствора яичного белка и повторно измеряли объемы подошвы правой и левой лапки крыс через 0,5, 1, 2, 4, 6 ч после инъекции яичного белка, и рассчитывали степень опухания (степень опухания подошвы лапки = объем подошвы лапки в разные моменты времени после инъекции яичного белка - объем подошвы лапки с той же стороны после инъекции яичного белка/объем подошвы лапки с той же стороны до инъекции яичного белка) и результаты приведены в таблице 5.

Таблица 5 Исследование влияния на опухание лапки у крыс, вызванное яичным белком Группа Количество животных (крыс) Объем подошвы лапки в разные моменты времени после введения, мл (степень опухания) Здоровые крысы 0,5 ч 1,0 ч 2,0 ч 4,0 ч 6,0 ч Контрольная группа, получавшая физиологический раствор 10 1,00±0,08 (1,84±0,13) 1,83±,09 (0,84±0,13) 1,73±0,08 (0,74±0,11) 1,54±0,09 (0,55±0,11) 1,35±0,09 (0,35±0,10) 1,17±0,08 (0,17±0,08) Группа, получавшая натриевую соль бромфенака 10 1,51±0,11 (0,58±0,06) 1,56±0,11 (0,58±0,06) 1,51±0,10 (0,53±0,07) 1,39±0,11 (0,40±0,09) 1,20±0,10 (0,22±0,08) 1,04±0,06 (0,06±0,05) Группа, получавшая соль бромфенака с диэтиламином 10 1,61±0,08 (0,65±0,08) 1,61±0,08 (0,65±0,08) 1,55±0,09 (0,58±0,08) 1,38±0,06 (0,41±0,08) 1,21±0,06 (0,23±0,05) 1,06±0,08 (0,08±0,06) Группа, получавшая соль бромфенака с трометамолом 10 1,59±0,09 (0,63±0,09) 1,59±0,09 (0,63±0,09) 1,54±0,11 (0,57±0,10) 1,41±0,13 (0,44±0,13) 1,24±0,10 (0,20±0,10) 1,08±0,08 (0,10±0,07)

Как показано в таблице 5, по сравнению с контрольной группой, получавшей физиологический раствор, натриевая соль бромфенака, соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом могли значительно подавлять опухание подошвы лапки у крыс, вызванное яичным белком в течение от 0,5 ч до 6 ч, так что степень опухания уменьшалась и эти три соли оказывали сходное подавляющее воздействие на опухание.

Из результатов исследования влияния на опухание уха у мышей, вызванное ксилолом, и на опухание лапки у крыс, вызванное яичным белком, можно видеть, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом, а также натриевая соль бромфенака все могли значительно подавлять опухание и это показывает, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом, а также натриевая соль бромфенака обладают сходной противовоспалительной активностью.

Пример 6: Исследование стабильности органических солей бромфенака

1) Химическая стабильность органической соли бромфенака в твердом состоянии

Для натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином, полученной в примере 1, и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 2, проведены ускоренные исследования стабильности при 60°C, результаты приведены в таблице 6.

Условия проведения анализа с помощью ВЭЖХ:

детектор: ультрафиолетовый детектор поглощения (длина волны: 266 нм).

Хроматографическая колонка: колонка с силикагелем, к которому привит октадецил (4,0 мм×150 мм, 5 мкм).

Подвижная фаза: точно отвешенные 3,85 г ацетата аммония разбавляли водой до объема, равного 1000 мл. Брали 600 мл этого раствора и добавляли 250 мл метанола и 150 мл тетрагидрофурана.

Скорость потока: 1,5 мл/мин.

Таблица 6 Химическая стабильность органических солей бромфенака в твердом состоянии Название образца Цикл хранения Исходное состояние 1 неделя 2 недели 3 недели Натриевая соль бромфенака 99,6% 99,5% 99,3% 99,1% Соль бромфенака с диэтиламином 99,5% 99,5% 99,3% 99,2% Соль бромфенака с трометамолом 99,6% 99,6% 99,4% 99,2%

Как показано в таблице 6, по данным ускоренного исследования при 60°C содержание натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином, полученной в примере 1, и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 2, не подвергается значительному изменению, и это показывает, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом при сопоставлении с натриевой солью бромфенака, солью бромфенака с диэтиламином и солью бромфенака с трометамолом также обладают превосходной химической стабильностью.

2) Химическая стабильность органических солей бромфенака в водной среде

Для определения стабильности в водной среде водные растворы натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом, полученной в примере 3, хранили в совершенно темном месте при 25°C в течение 4 недель, затем содержание органических солей бромфенака определяли с помощью ВЭЖХ при тех же условиях, при которых проводили исследование стабильности в твердом состоянии, и результаты приведены в таблице 7.

Таблица 7 Химическая стабильность органических солей бромфенака в водной среде Название образца Цикл хранения Исходное состояние 1 неделя 2 недели 3 недели Натриевая соль бромфенака 99,6% 99,5% 99,4% 99,1% Соль бромфенака с диэтиламином 99,5% 99,5% 99,4% 99,2% Соль бромфенака с трометамолом 99,6% 99,6% 99,3% 99,1%

Результаты исследования стабильности в темноте показывают, что в водных растворах натриевой соли бромфенака, соли бромфенака с диэтиламином и соли бромфенака с трометамолом не обнаруживались продукты разложения и изменения содержания.

Резюмируя, можно отметить, что соль бромфенака с диэтиламином и соль бромфенака с трометамолом склонны к кристаллизации, не поглощают влагу, обладают стабильными химическими характеристиками, обладают хорошей растворимостью в воде, а также обладают хорошей растворимостью в жирах, так что улучшены характеристики всасывания через кожу и мембраны; они обладают эквивалентной противовоспалительной и обезболивающей активностью по сравнению с натриевой солью бромфенака и обладают повышенной концентрацией при распределении в ткани (в мышечной ткани, предпочтительно в мышечной ткани под кожей). Следовательно, их можно использовать в качестве нестероидных противовоспалительных средств для местного нанесения in vitro.

Хотя варианты осуществления настоящего изобретения подробно описаны, специалисты в данной области техники должны понимать, что эти подробные описания можно изменить и заменить в соответствии с раскрытыми положениями и все эти изменения подпадают под объем охраны настоящего изобретения. Объем настоящего изобретения определяется прилагаемой формулой изобретения и любыми ее эквивалентами.

Изобретение относится к органическим солям бромфенака, которые являются диэтиламиновой или трометамоловой солью бромфенака и имеют структуру, представленную приведенными ниже формулами II или III. Указанные соли обладают хорошей противовоспалительной и обезболивающей активностью, стабильностью, а также имеют улучшенные характеристики проникновения через кожу и распределения в тканях. Изобретение относится также к способу получения указанных органических солей бромфенака, содержащей их фармацевтической композиции, способам лечения и/или профилактики воспаления или обезболивания с их использованием, а также к их применению для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики воспаления или обезболивания. 7 н. и 16 з.п. ф-лы, 7 табл., 6 пр.

1. Органическая соль бромфенака, которая является диэтиламиновой солью бромфенака или трометамоловой солью бромфенака и имеет структуру, представленную приведенной ниже формулой II или формулой III:
.

2. Способ получения органической соли бромфенака по п.1, включающий следующие стадии:
1) растворение бромфенака в органическом растворителе, нагревание для растворения, последующее прибавление органического основания в эквимолярном количестве, перемешивание до завершения реакции;
2) концентрирование и выпаривание досуха раствора реакционной смеси с получением светло-желтого или оранжево-желтого твердого вещества;
3) перекристаллизация твердого вещества, полученного на стадии 2), с получением органической соли бромфенака;
где указанное органическое основание представляет собой диэтиламин или трометамол.

3. Способ по п.2, в котором указанным органическим растворителем на стадии 1) является один или более, выбранных из группы, включающей метанол, этанол, ацетон, н-бутанол и толуол.

4. Способ по п.2, в котором указанным органическим растворителем на стадии 1) является ацетон.

5. Способ по п.2, в котором температура, при которой проводят нагревание на стадии 1), равна 25-80°C.

6. Способ по п.2, в котором температура, при которой проводят нагревание на стадии 1), равна 45-65°C.

7. Способ по п.2, в котором температура, при которой проводят нагревание на стадии 1), равна 55°C.

8. Способ по п.2, в котором длительность перемешивания и реакции на стадии 1) равна 0,5-2 ч.

9. Способ по п.2, в котором длительность перемешивания и реакции на стадии 1) равна 1 ч.

10. Способ по п.2, в котором перекристаллизацию на стадии 3) проводят при температуре, равной 0°C или меньшей.

11. Способ по п.2, в котором перекристаллизацию на стадии 3) проводят при температуре, равной -5°C.

12. Способ по п.2, дополнительно включающий стадию 4): вакуумная сушка кристаллов, полученных путем перекристаллизации.

13. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики воспаления, содержащая эффективное количество органической соли бромфенака по п.1, причем композиция находится в лекарственной форме, выбранной из таблетки, капсулы, микропилюли, аэрозоля, пилюль, порошка, эмульсии, гранулы, липосомы, трансдермального средства, трансбуккальных таблеток, суппозитория и высушенных вымораживанием порошков для инъекции.

14. Применение органической соли бромфенака по п.1 или композиции по п.13 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики воспаления.

15. Применение по п.14, где воспалением является воспаление, связанное с простагландином или опосредуемое им.

16. Применение по п.14, где воспалением является воспаление кожи или воспаление уха, или воспаление глаз.

17. Применение по п.14, где воспалением является блефарит, конъюнктивит, изъязвление роговицы или послеоперационное воспаление глаз.

18. Применение органической соли бромфенака по п.1 или композиции по п.13 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для обезболивания, где обезболиванием является облегчение боли, вызванной простагландином или опосредуемой им.

19. Способ лечения и/или профилактики воспаления, включающий стадию введения эффективного количества органической соли бромфенака по п.1 или композиции по п.13.

20. Способ по п.19, где воспалением является воспаление, связанное с простагландином или опосредуемое им.

21. Способ по п.19, где воспалением является воспаление кожи или воспаление уха, или воспаление глаз.

22. Способ по п.19, где воспалением является блефарит, конъюнктивит, изъязвление роговицы или послеоперационное воспаление глаз.

23. Способ лечения и/или профилактики обезболивания, включающий стадию введения эффективного количества органической соли бромфенака по п.1 или композиции по п.13, где обезболиванием является облегчение боли, вызванной простагландином или опосредуемой им.