СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАСТУПЛЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ В ПРОГРАММЕ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ И ПЕРЕНОСА ЭМБРИОНОВ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/53 

Эффективность ЭКО в настоящее время не превышает 35%, и около трети всех беременностей прерывается на ранних сроках. До сих пор не определены наиболее информативные и диагностически ценные признаки, эффективные для раннего прогноза результативности лечения бесплодия с помощью ЭКО.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и клинической лабораторной диагностике, касается способа прогнозирования наступления беременности в результате ЭКО и ПЭ и может быть использовано в работе женских консультаций и отделений вспомогательных репродуктивных технологий.

Уровень техники

Аналогом данного изобретения выбран способ прогнозирования эффективности лечения бесплодия с помощью ЭКО, включающий трансвагинальную пункцию фолликулов под контролем УЗИ по программе ЭКО с последующим исследованием полученной фолликулярной жидкости [1].

Недостатками этого способа являются его сложность и необходимость специализированной лаборатории для проведения хемилюминесцентного анализа для определения свободнорадикальной активности образцов. Высок риск возникновения осложнений, связанных с выполнением трансвагинальной пункции фолликулов, которая проводится под общим наркозом и может осложниться кровотечением.

Метод осуществляется на этапе пункции фолликулов, когда невозможно скорректировать тактику ведения пациентки.

Представляет интерес исследование диагностической ценности параметров иммунитета, в том числе 17 цитокинов в фолликулярной жидкости, и показателей фертилизации ооцитов в раннем прогнозе эффективности лечения бесплодия с помощью ЭКО [2]. Высокая информативность выделенных диагностических комплексов в прогнозе вероятного исхода ЭКО свидетельствует о целесообразности использования методов иммунодиагностики при проведении вспомогательных репродуктивных технологий. К недостаткам способа можно, так же как и в первом способе, отнести высокую стоимость исследований, наличие специализированной лаборатории и проведение пункции фолликулов.

В качестве прототипа выбран способ прогнозирования наступления беременности в длинном протоколе ЭКО и ПЭ путем определения содержания рецепторов прогестерона в мононуклеарной фракции клеток периферической крови в середине лютеиновой фазы менструального цикла пациентки перед назначением лечения по стандартному длинному протоколу стимуляции суперовуляции [3]. При величине более 700 рецепторов прогестерона на клетку прогнозируют наступление беременности в результате проведения программы ЭКО и ПЭ в стандартном длинном протоколе стимуляции суперовуляции.

Недостатком метода является сложность исполнения анализа и его недоступность для большинства лабораторий практического здравоохранения, так как требуется специальное оборудование.

Сущность изобретения

Целью изобретения является прогнозирование конечных результатов применения экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ), т.е. наступление или отсутствие беременности у женщин репродуктивного возраста, на этапе подготовки к беременности.

Поставленная цель достигается с помощью вычисления прогностического индекса по результатам проведенного исследования крови.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Перед программой ЭКО и ПЭ в стандартном длинном протоколе стимуляции суперовуляции у пациентки выполняют исследование крови.

Материалом для исследования служит венозная кровь, полученная из локтевой вены пациента стандартизированным способом вакуумной венепункции для биохимических и общеклинических лабораторных исследований с использований первичных тест-систем (типа Vacuteiner) в объеме, указанном производителем для данного исследования.

Для получения сыворотки используют стандартный протокол проведения процедуры центрифугирования (3000 об/мин в течение 15 мин). Сыворотку отделяют от эритроцитарной массы.

Биохимическое исследование сыворотки венозной крови для определения мочевины выполняют на любом биохимическом анализаторе. Объем анализируемой пробы зависит от производителя и указывается в методических рекомендациях. Процедуру измерения производят в соответствии с инструкцией к прибору.

Определение количества лейкоцитов и относительного процентного содержания лимфоцитов выполняют на любом гематологическом анализаторе. Объем исследуемой пробы также зависит от производителя и указывается в методических рекомендациях.

Исследования выполняют с соблюдением всех регламентирующих организационных и метрологических аспектов лабораторной медицины [4, 6].

Интерпретацию результатов производят на основании подсчета диагностического индекса.

Диагностический индекс получен путем математической обработки результатов исследований методом пошагового дискриминантного анализа с помощью пакета прикладных программ Statistika.7 [7]. Были выделены информативные признаки и сформировано правило лабораторного прогнозирования эффективности вспомогательных репродуктивных технологий, которое заключается в определении диагностического индекса (D) по следующей формуле:

где значения X соответствуют параметрам:

X₁ - концентрация мочевины в сыворотке крови, ммоль/л

X₂ - относительное содержание лимфоцитов, ×10⁹/л

X₃ - общее количество лейкоцитов в крови, ×10⁹/л

K₁, K₂,K₃ - коэффициенты дискриминантной функции:

K₁=0,67

K₂=0,07

K₃=-0,25

Const=-3,95

При значении D>0 прогнозируют наступление беременности в программе ЭКО и ПЭ. При D<0 прогнозируют отсутствие беременности после проведения процедуры ЭКО и ПЭ. Предлагаемый способ дает вероятность правильной классификации 73% (специфичность метода) для нормы (наступление беременности), для патологии (отсутствие беременности) - 82% (чувствительность метода) при уровне значимости Р<0,01. Эффективность алгоритма 78%.

Пример 1. Пациентка К., 28 лет. Проходила обследование и лечение по поводу первичного бесплодия трубно-перитонеального генеза. Беременностей не было. В анамнезе - двусторонняя тубэктомия в 2000 г., 2006 г. Данной пациентке была предложена процедура ЭКО и ПЭ. Женщине проведено биохимическое и общеклиническое обследование крови, в результате которого были получены следующие данные: общее количество лейкоцитов - 4,4×10⁹/л, лимфоцитов - 44%; содержание мочевины 4,71 ммоль/л. Диагностический индекс D=1,2 (больше 0) свидетельствует о благоприятном прогнозе ЭКО. В результате трансвагинальной пункции получено 3 ооцита. На 3-и сутки произведен перенос одного 6-8 клеточного бластомера. На 14-е сутки после переноса эмбриона сдана кровь на β-хорионический гонадотропин, диагностировано наступление беременности.

Пример 2. Пациентка Н., 33 года. Проходила обследование и лечение по поводу вторичного бесплодия трубно-перитонеального генеза. Диагноз: состояние после двухсторонней тубэктомии. Спаечная болезнь органов малого таза. Была предложена процедура ЭКО и ПЭ. После обследования получены следующие результаты: общее количество лейкоцитов - 9,1,0×10%, содержание лимфоцитов - 31%; содержание мочевины -1,70 ммоль/л. Диагностический индекс D=-2,9 (меньше 0 - неблагоприятный прогноз ЭКО). На 14-е сутки после переноса эмбриона кровь пациентки была исследована на β-хорионический гонадотропин, получен низкий уровень, что указывало на то, что попытка ЭКО закончилось неудачно и беременность не наступила.

Пример 3. Пациентка Е., 32 года. Проходила обследование по поводу первичного бесплодия трубно-перитонеального генеза. Пациентке была предложена процедура ЭКО и ПЭ. По результатам исследования крови получены следующие показатели: общее количество лейкоцитов - 6,0×10⁹/л, лимфоцитов - 42,8%, содержание мочевины в сыворотке крови - 4,12 ммоль/л, диагностический индекс составил D=0,3. Значение показателя D>0 свидетельствует о благоприятном прогнозе процедуры ЭКО и ПЭ. В дальнейшем, после получения ооцитов и их переноса, у пациентки наступила беременность.

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования эффективности лечения бесплодия с помощью ЭКО и ПЭ, позволяет с достаточно высокой точностью выявить группу риска еще на этапе подготовки к проведению данной процедуры. Методика не требует дорогостоящей материально-технической базы, специальных реактивов, удобна в исполнении при использовании минимального количества исследуемого материала, обеспечивает получение необходимой информации в течение часа, воспроизводима на любом уровне (от женской консультации до перинатального центра).

Источники информации

1. Потехина Ю.П. (RU), Щербатюк Т.Г. (RU), Хрулева Н.B. (RU) Способ прогнозирования результатов лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (патент РФ №2357673).

2. Останин А.А., Айзикович Б.И., Айзикович И.В., Черных Е.Р. Прогностическая модель оценки эффективности лечения бесплодия с помощью ЭКО // Проблемы репродукции. - 2006. - №4. - С. 63-69.

3. Карева Е.Н., Крамаренко М.П., Савельева Г.М., Шимановский Н.Л., Сукновалова М.В., Клименко П.А., Каппушева Л.М. Способ прогнозирования наступления беременности в программе экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в стандартном длинном протоколе стимуляции суперовуляции (патент РФ №2430379):

4. Мошкин А.В., Долгов В.В. Обеспечение качества в клинической лабораторной диагностике - М. - 2004. - С. 14-23., 38-39.

5. ISO 151189: 2003. Медицинские лаборатории - специфические требования к качеству и компетентности (проект русского варианта). Стандартизация в клинической лабораторной медицине. Организационные и метрологические аспекты - М. - 2005. - С. 37-105.

6. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение прикладных программ STATISTICA. - М.: МедиаСфера, 2002. - 312 с.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбрионов (ПЭ). Для этого к крови определяют содержание мочевины, количество лейкоцитов, процент лимфоцитов. Подсчитывают диагностический индекс по формуле: D=0,67×X₁+0,07×Х₂-0,25×Х₃-3,95, где значения X соответствуют параметрам: X₁ - концентрация мочевины в сыворотке крови, ммоль/л; Х₂ - относительное содержание лимфоцитов, ×10⁹/л; Х₃ - общее количество лейкоцитов в крови, ×10⁹/л. При D более 0 прогнозируют наступление беременности в результате ЭКО и ПЭ. При D менее 0 прогнозируют неэффективную попытку ЭКО и ПЭ и отсутствие беременности. Использование данного способа позволяет выявить группу риска с неэффективной попыткой ЭКО и ПЭ еще на этапе подготовки к проведению данной процедуры. 3 пр.

Способ прогнозирования наступления беременности в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбрионов (ПЭ) путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют содержание мочевины, количество лейкоцитов, процент лимфоцитов и подсчитывают диагностический индекс по формуле:
D=0,67×X₁+0,07×Х₂-0,25×Х₃-3,95,
где значения X соответствуют параметрам:
X₁ - концентрация мочевины в сыворотке крови, ммоль/л;
Х₂ - относительное содержание лимфоцитов, ×10⁹/л;
Х₃ - общее количество лейкоцитов в крови, ×10⁹/л;
и при D более 0 прогнозируют наступление беременности в результате ЭКО и ПЭ, а при D менее 0 прогнозируют неэффективную попытку ЭКО и ПЭ и отсутствие беременности.