СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МАСТИТА Российский патент 2017 года по МПК G01N33/483 G01N33/487 

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарии, в частности ветеринарной лабораторной диагностике, и может быть использовано для ранней диагностики мастита у коров.

Заболевания вымени наносят молочному скотоводству экономический ущерб, многократно превосходящий таковой от всех незаразных болезней. Он складывается из снижения продуктивности коров и ухудшения технологических свойств молока, вынужденной выбраковки животных по причине гипо- и агалактии, заболеваемости и гибели телят из-за выпойки им некачественного молозива, затрат на ветеринарное обслуживание. Суммарный экономический ущерб, наносимый заболеваниями вымени, эквивалентен стоимости 5-8% валового годового удоя.

Самым распространенным и опасным заболеванием вымени является мастит - воспаление молочной железы. Чаще всего маститом заболевают высокопродуктивные коровы. За период болезни и после клинического выздоровления натуральные потери молока на одну корову составляют в среднем 10-15% годового удоя. У некоторых коров даже при успешном лечении прежние удои не восстанавливаются из-за необратимых изменений тканей молочной железы. До 30% переболевших маститом коров выбраковываются из-за атрофии четвертей вымени. В результате средняя продолжительность жизни коровы не превышает пяти лет, а продукцию от нее получают всего 2-3,5 года (Черепахин Д.А. Диагностика, лечение и профилактика скрытых мастито у коров: метод, указ. M.: МВА, 1987. - 16 с.).

При попадании патогенных микроорганизмов в молоко и молочные продукты последние становятся весьма опасными для здоровья людей. Патогенные стафилококки могут вызывать у людей такие болезни, как пневмонии, гастроэнтериты, нефриты, энтероколиты. Термоустойчивый стафилококковый токсин не разрушается даже при кипячении и пастеризации молока. При употреблении молочных продуктов, содержащих стафилококковый энтеротоксин, у людей возникают тяжелейшие пищевые отравления, нередко приводящие к летальному исходу (Бочаров И.А., Бесхлебов А.В., Губаревич Л.Г., Соколов Н.И., Поспелов А.И. Акушерство, гинекология сельскохозяйственных животных. - Ленинград: Колос, 1968). Патогенные стрептококки в молоке могут являться причиной таких заболеваний у человека, как эндокардиты, менингиты у новорожденных, стрептококковые ангины и пищевые расстройства. Молоко маститных коров, содержащее токсины кишечной палочки, может вызывать тяжело протекающие энтериты.

В целях предотвращения экономических потерь, связанных с маститами, важно раннее выявление субклинических форм.

В связи со всем вышеперечисленным борьба с маститом коров является одной из актуальнейших проблем при современном ведении молочного скотоводства. Это один из путей сокращения потерь продукции и затрат на лечение животных.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения выбран способ диагностики мастита при помощи каталазной пробы, активно применяющийся в молочном скотоводстве.

Известный способ осуществляется следующим образом: в градуированную центрифужную пробирку наливают 9 мл молока и 1 мл 3%-ного раствора перекиси водорода, закрывают резиновой пробкой со вставленной в нее изогнутой стеклянной трубочкой, переворачивают вверх дном и оставляют на 3 часа при комнатной температуре. По окончании экспозиции регистрируют количество выделившегося кислорода. При выделении 4 см³ и более кислорода реакцию считают положительной, от 3 до 4 см³ - сомнительной, менее 3 см³ - отрицательной.

Однако данный способ обладает следующими недостатками. Установлено, что в молоке количество каталазы может увеличиваться не только при воспалении ткани вымени, но и у здоровых коров в первые 5 дней после отела, в период запуска и даже в середине лактационного периода. Каталазная проба становится резко положительной при наличии в молоке эритроцитов, что в большинстве случаев не является признаком мастита. Наконец, иногда каталазная проба дает положительную реакцию без заметного увеличения количества клеток в молоке. Методика каталазной пробы сложна, требует много времени, а поэтому неприменима в практических условиях.

Кроме того, известным способом диагностики мастита является проба отстаивания, которую проводят следующим образом: в конце доения в пробирку надаивают 10 мл молока и помещают ее на 16-18 часов в холодильник. Регистрируют наличие осадка, количество и характер сливок и цвет молока. Молоко здоровых коров имеет белый или слегка синеватый оттенок, осадка не образует. Молоко от больных маститом коров водянистое, сливки становятся тягучими, слизистыми, хлопьевидными.

Из недостатков данного способа можно отметить длительность экспозиции, что не дает возможности применять описываемый метод в качестве экспресс-диагностики мастита. При помощи пробы отстаивания невозможно провести диагностику раннего (скрытого) мастита, т.к. способ не обладает достаточной чувствительностью. Кроме того, количество молока (10 мл) недостаточно для точной дифференцировки осадка от надосадочной жидкости и сливок.

Одним из известных непрямых методов обнаружения повышенного количества клеток в молоке является проба Тромсдорфа. Сущность ее заключается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока. После центрифугирования по объему осадка судят о наличии или отсутствии заболевания вымени.

Однако было замечено, что при центрифугировании сырого молока не все соматические клетки выпадают в осадок, какая-то их часть остается в слое сливок, поэтому при нагревании молока перед центрифугированием до температуры 60-70°С объем осадка увеличивается. Таким образом, нельзя считать данный способ достаточно точным для диагностики мастита.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности диагностики, обеспечение возможности проведения экспресс-диагностики, сокращение времени исследования и упрощение способа диагностики мастита.

Поставленная задача решается тем, что в предлагаемом способе диагностики мастита, включающем исследование молока коров, его наносят на предметное стекло (объем капли 100-200 мкл) и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°С и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении. При обнаружении многочисленных хаотично расположенных разломов краевой зоны фации и кристаллических элементов с выраженной деструкцией (Мартусевич А.К., Гришина А.А. Биокристалломика: общие представления, методология и методы исследования. Учебное пособие. Киров: Типография ВГСХА, 2009. - 26 с. ) в центральной зоне фации диагностируют мастит.

Способ может рассматриваться в качестве экспресс-метода ранней диагностики мастита, он не требует специализированного оборудования и реактивов, выполняется в течение 15-20 минут, прост в исполнении и экономичен.

Предлагаемое изобретение отвечает критериям «новизна» и «изобретательский уровень», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников патентной и научно-технической литературы, которые бы порочили новизну предлагаемого способа, равно как и известных способов существенными признаками предлагаемого технического решения.

Авторами изобретения проведена научно-исследовательская работа, касающаяся оценки информативности кристаллоскопических фаций молока коров. Для решения поставленной задачи было проведено исследование особенностей свободного кристаллообразования молока от 12 коров с маститом, наличие которого было подтверждено классическими методами диагностики (проба с 10% раствором мастидина, проба отстаивания, проба Тромсдорфа, проба с индикаторными карточками, каталазная проба, титрация лизоцима) и молока от 10 здоровых коров. В результате исследования было сделано заключение о достаточной информативности и точности предлагаемого авторами метода диагностики мастита.

На фиг. 1 изображена кристаллоскопическая картина молока здоровой коровы. Отсутствуют разломы краевой зоны (1 - на фиг. 1а), в центральной части фации видны одиночные кристаллические элементы (2 - на фиг. 1б). На фиг. 2 представлена кристаллограмма молока коровы, больной маститом, на которой видны множественные хаотично расположенные глубокие разломы краевой зоны (1 - на фиг. 2а) и многочисленные кристаллы с выраженной деструкцией в центральной зоне фации (1 - на фиг. 2б).

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для ранней диагностики мастита у коров. Способ заключается в том, что молоко в объеме 100-200 мкл наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°С и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении. При обнаружении в образце многочисленных хаотично расположенных разломов краевой зоны и кристаллических элементов с выраженной деструкцией в центральной зоне фации диагностируют мастит. Заявленное изобретение позволяет быстро и точно диагностировать мастит у коров. 2 ил., 1 пр.

Способ диагностики мастита, заключающийся в исследовании молока коров, отличающийся тем, что молоко в объеме 100-200 мкл наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°C и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении, при обнаружении в образце многочисленных хаотично расположенных разломов краевой зоны и кристаллических элементов с выраженной деструкцией в центральной зоне фации диагностируют мастит.