БИОМАРКЕРЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ, ПРОГНОЗА, ОЦЕНКИ И СТРАТИФИКАЦИИ ТЕРАПИИ ОБМОРОКОВ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/68 

Область изобретения

[0001] Настоящее изобретение относится к области клинической диагностики. В частности, настоящее изобретение относится к диагностике, и/или прогнозу, и/или оценке и/или стратификации терапии обмороков.

Предпосылки изобретения

[0002] Оценка кратковременной потери сознания (TLOC) в отсутствие явной и определенной этиологии является сложной задачей. TLOC разделяют на травматические и нетравматические формы, и нетравматические TLOC классифицируют на приступы эпилепсии, психогенный псевдообморок, редкие различные случаи и обморок. Для большинства случаев с неясным диагнозом лежащей в основе причиной является временное нарушение кровообращения, приводящее к гипоперфузии головного мозга, традиционно классифицируемое как синкопальный эпизод (Blanc et al., 2002. Eur Heart J. 23:815-820; Bartoletti et al., 2006. Eur Heart J 27:83-88).

[0003] Обморок представляет собой TLOC, характеризующуюся быстрым началом, короткой продолжительностью и спонтанным полным восстановлением, которая часто возникает внезапно. В частности, обморок можно разделить на нейроопосредованный рефлекторный обморок (NMS), ортостатическую гипотензию (OH) и кардиогенный обморок (аритмический или структурный), хотя могут возникать менее частые состояния (Moya et al., 2009. Heart J. 30:2631-2671).

[0004] NMS обычно классифицируют на основании наиболее затронутого эфферентного пути, т.е. симпатический или парасимпатический: если преобладает гипотензия, обусловленная потерей сосудосуживающего тонуса в вертикальном положении, используют термин обморок вазодепрессорного типа; если преобладает брадикардия или асистолия, используют термин кардиоингибирующий обморок; и смешанную форму диагностируют, если присутствуют оба механизма. Более того, NMS можно также классифицировать на основании запускающего его механизма (т.е. афферентного пути) на вазовагальный обморок (VVS), ситуационный обморок (NMS, ассоциированный с некоторыми конкретными условиями), гиперчувствительность сонного синуса (CSH) и атипичная форма (при которой NMS возникает с неясным или даже очевидно отсутствующим запускающим механизмом).

[0005] В отличие от NMS, при ортостатической гипотензии симпатическая эфферентная активность хронически нарушена, так что сужение сосудов является недостаточным. При стоянии кровяное давление (BP) падает, и возникает обморок или предобморочное состояние. OH определяют как аномальное снижение BP при стоянии. Строго с патофизиологической точки зрения не существует перекрывания между NMS и OH, но клинические проявления двух состояний часто перекрываются, иногда делая дифференциальную диагностику сложной (Moya et al., 2009. Heart J. 30:2631-2671). OH можно разделить на классическую OH (определенную как снижение систолического BP≥20 мм рт.ст. (2666 Па) и диастолического BP≥10 мм рт.ст. (1333 Па) в течение 3 мин стояния (J Neurol Sci 1996; 144: 218-219)), начальную OH (характеризующуюся снижением BP немедленно при вставании >40 мм рт.ст. (5333 Па) и спонтанным и быстрым возвращением BP к нормальному, приводящему в результате к короткому периоду гипотензии и симптомов (Wieling et al., 2007. Clin. Sci (Lond) 112:157-165)), отсроченную (прогрессирующую) OH (характеризующуюся медленно прогрессирующим снижением систолического BP при принятии вертикальной позы (Gibbons and Freeman 2006. Neurology 67:28-32)), и синдром постуральной ортостатической тахикардии (POTS) (характеризующийся очень заметным увеличением частоты сердечных сокращений на >30 ударов в мин или до >120 ударов в мин и нестабильностью BP (Grubb et al., 1997. Pacing Clin. Electrophysiol 20: 2205-2212)).

[0006] Кардиогенный обморок может быть вызван аритмией (брадикардией, тахикардией) или структурным заболеванием (например, заболеванием сердечного клапана, острым инфарктом миокарда/ишемией, врожденными аномалиями коронарных артерий, легочной гипертензией и другие).

Обзор классификации обмороков показан на фиг.1.

[0007] Согласно современным руководствам по контролю обмороков, рекомендованы две основных линии исследований, углубленное кардиологическое обследование, основанное на долговременном мониторировании ЭКГ и автономные тесты, где ортостатическая проба (HUTT) играет центральную роль (Moya et al., 2009. Heart J. 30:2631-2671). Выбор линии часто зависит от анамнеза пациента и протекания обморока.

[0008] Мониторирование ЭКГ представляет собой способ для диагностики перемежающихся бради- и тахиаритмий. Золотым стандартом для диагностики обморока является регистрация корреляции между симптомами и документированной аритмией. По общему правилу, мониторирование ЭКГ показано только когда присутствует высокая предсказуемость идентификации аритмии, ассоциированной с обмороком.

[0009] В автономных тестах ортостатический тест (изменение от положения лежа на спине до положения стоя) вызывает перемещение крови от грудной клетки к нижним конечностям, приводящее к снижению венозного оттока и сердечного выброса. В отсутствие компенсаторных механизмов, падение BP может приводить к обмороку. В настоящее время существует два различных способа оценки ответа на изменение позы от положения лежа на спине до положения стоя: тест активного вставания, в котором пациенты активно встают от положения лежа на спине до выпрямленного положения стоя, и другой представляет собой наклонное положение тела головой вверх при 60 или 70°. Тест активного вставания используют для диагностики различных типов ортостатической неустойчивости с использованием сфигмоманометра. Наклонное тестирование позволяет воспроизвести нейроопосредованный рефлекс в лабораторных условиях. Депонирование крови и уменьшение венозного возврата из-за ортостатического стресса и иммобилизации запускают рефлекс. Однако, процесс диагностики является длительным и не всегда успешным (Croci et al., 2002. Europace 4:351-355).

[0010] Уровни циркулирующих вазоактивных гормонов исследовали у пациентов с различными типами обморока с гетерогенными результатами. У пациентов с VVS никаких различий в исходной точке (перед тестом HUT) не обнаружено для аргинина-вазопрессина (AVP) (Kaufmann et al., 1991. Lancet 338:8782-8783; Kaufmann et al., 1992. Neurology 42:590-593; Jardine et al., 1997. Am J Cardiol 79:1302-1306; Roul et al., 1999. Pacing Clin. Electrophysiol 22:1020-1030; Theopistou et al., 2001. Am J Cardiol. 88:376-381). Показано, что увеличение зрелого AVP являлось более явным в группе с положительным результатом теста HUT (классифицированной как пациенты с VVS) по сравнению с группой с отрицательным тестом HUT (Jardine et al., 1997. Am J Cardiol 79:1302-1306; Roul et al., 1999. Pacing Clin Electrophysiol 22:1020-1030; Kaufmann et al., 1991. Lancet 338:8782-8783; Kaufmann et al., 1992. Neurology 42:590-593; Theopistou et al., 2001. Am J Cardiol. 88:376-381). Более того, уровни копептина, стабильного фрагмента-предшественника проAVP, также известного как C-концевой проAVP (CT-проAVP), не отличались между пациентами с кардиоингибирующим и вазодепрессорным рефлекторным обмороком (Holmegard et al., 2012. Scand J Clin. Lab Invest, in press). Сходным образом, не обнаружено различий у пациентов с VVS для предсердного или мозгового натрийуретических пептидов (ANP или BNP) (Jardine et al., 1997. Am J Cardiol. 79:1302-1306; Roul et al., 1999. Pacing Clin. Electrophysiol 22:1020-1030; Magerkurth et al., 2005. Clin. Autonom Res 15:299-301). Напротив, Holmegard et al. опубликовали более высокие уровни среднерегионарного предсердного натрийуретического пропептида (MR-проANP), стабильного фрагмента-предшественника проANP, у пациентов с кардиоингибирующим обмороком по сравнению с пациентами с вазодепрессорным рефлекторным обмороком, в то время как уровни BNP не различались между группами (Holmegard et al., 2012. Scand J Clin. Lab Invest, in press). Сходным образом, Jardine et al. показали снижение ANP в ходе наклона у нормальных субъектов и при VVS, которое являлось более выраженным в нормальной популяции (Jardine et al., 1997. Am J Cardiol. 79:1302-1306). В отличие от этих результатов, Freitas et al. опубликовали, что уровни BNP в положении лежа на спине явно ниже у пациентов с нейроопосредованным обмороком по сравнению с пациентами с нейрогенной OH, в то время как уровни ANP были неизменными (Freitas et al., 2007. Int J Cardiol. 116:242-248). Более того, различие (Δ наклон/исходное) как ANP, так и BNP не отличалось у пациентов с нейроопосредованным обмороком по сравнению с пациентами с нейрогенной OH. Gajek et al. опубликовали, что не присутствовало различий исходных концентраций адреномедуллина между пациентами с кардиоингибирующим рефлекторным обмороком, пациентами со спонтанным обмороком и пациентами с индуцированным лекарственным средством обмороком (Gajek et al., 2004. Pol Merkur Lekarski 17: 267-270).

[0011] Не обнаружено различий исходных уровней AVP у пациентов с CSH по сравнению со здоровыми контрольными субъектами или пациентами с необъяснимым обмороком, в то время как для AVP у пациентов с CSH и пациентов с необъяснимым обмороком показано значительное увеличение в ходе наклона, которое являлось не явным у здоровых субъектов (Kenny et al., 1987. Cardiovasc Res 21:545-550).

[0012] У здоровых добровольцев без VVS в анамнезе, но с некоторой ортостатической неустойчивостью, уровни эндотелина в сыворотке были значительно выше в исходной точке у субъектов, испытывающих обморок в ходе HUTT, по сравнению с субъектами без обморока (Magerkurth et al., 2005. Clin. Autonom Res 15:299-301). Более того, авторы указали, что эти результаты указывают на постоянно усиливающееся высвобождение эндотелина у субъектов с тенденцией к вазовагальному обмороку, и что будущие исследования должны изучать, могут ли уровни эндотелина в сыворотке увеличивать специфичность и чувствительность диагностики вазовагального обморока. ET-1 увеличивался в ходе HUT как у пациентов с VVS, так и у нормальных субъектов, в то время как это увеличение являлось более выраженным у пациентов с VVS (Kaufmann et al., 1991. Lancet 338:8782-8783). В отличие от этого, Mehta et al. опубликовали, что исходные уровни эндотелина были значительно выше у пациентов с обмороком в анамнезе и отрицательным результатом HUTT по сравнению с пациентами с положительным результатом HUTT (Mehta et al., 1995. Am J Cardiol. 76:86-88). Однако не присутствовало различий между обмороками подтипов кардиоингибирующего, вазодепрессорного и смешанного типа, и отсутствовали различия между временными выборками.

[0013] Адреномедуллин (ADM) исследовали у здоровых добровольцев, и субъектов разделяли на высокую (без обмороков) и низкую устойчивость (синкопальные симптомы) к ортостатическому тесту согласно тесту с отрицательным давлением в нижней части тела (LBNP) (Gasiorowska et al., 2005. J Physiol. Pharmacol. 56:179-193). Исходные уровни ADM были значительно выше у субъектов с низкой устойчивостью по сравнению с субъектами с высокой устойчивостью к ортостатическому тесту, в то время как уровень ADM увеличивался сходным образом в обеих группах в ходе теста.

[0014] Однако для всех этих исследований является важным отметить, что до публикации руководства ESC в 2009 г. (Moya et al., 2009. Heart J. 30:2631-2671) не существовало золотого стандарта диагностики для пациентов с обмороком и, следовательно, не было доступно согласования относительно различных форм ортостатической неустойчивости и их связи с приступами обморока. Более того, вышеописанные исследования биомаркеров проводили на небольших избранных сериях пациентов, главным образом, по сравнению со здоровыми индивидуумами, и они не включали полный спектр лежащих в основе механизмов. Таким образом, диагностика конкретного типа обморока являлась затруднительной и не слишком надежной.

[0015] Более того, надежный диагноз является важным необходимым условием для выбора подходящей терапии. Целью терапии является в первую очередь предотвращение рецидивов и сопутствующих повреждений, и улучшение качества жизни. Вариантами терапии для нейроопосредованного обморока являются, например, приемы физической компенсации (например, изометрические PCM для рук или ног, подобные скрещиванию ног или кистевому жиму и напряжению рук) и наклонная тренировка, так же как фармакологическая терапия (например, мидодрином, α-антагонистом) и кардиостимуляция. Brignole опубликовал, что активная кардиостимулирующая терапия значительно уменьшает рецидивы обморока у пациентов с тяжелым нейроопосредованным обмороком, особенно при CSH с кардиоингибированием (устная презентация, American College of Cardiology, Chicago USA, 24-27 of March 2012). Фактически, кардиостимуляция противопоказана в отсутствие тяжелого кардиоингибирования. Таким образом, точная диагностика и оценка тяжести обморока является обязательной.

[0016] Что касается прогноза (т.е. стратификации риска), ассоциированного с обмороком, два важных элемента следует принимать во внимание: (i) риск смерти и опасных для жизни событий; и (ii) риск рецидива обморока и физического повреждения.

[0017] Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление способа, позволяющего диагностику и/или прогноз и/или оценку, и/или стратификацию терапии обморока.

Краткое изложение сущности изобретения

[0018] Объектом изобретения является способ диагностики и/или прогноза, и/или оценки, и/или стратификации терапии обморока у пациента, где способ включает:

- определение уровня по меньшей мере одного биомаркера, выбранного из группы, состоящей из проADM, проANP, проBNP, проAVP, проET-1 и PCT или фрагмента по меньшей мере из их 12 аминокислот, в образце физиологической жидкости указанного пациента,

- корреляцию указанного уровня по меньшей мере одного биомаркера с диагнозом и/или прогнозом, и/или оценкой, и/или стратификацией терапии обморока.

Предпочтительные варианты способа описаны в зависимых пунктах формулы изобретения.

Описание чертежей

[0019] Фиг. 1: Классификация подтипов обморока.

[0020] Фиг. 2: Диаграмма вида «ящик с усами» значений для MR-проANP для диагностики обморока.

[0021] Фиг. 3: Диаграмма вида «ящик с усами» значений для MR-проADM для диагностики обморока.

[0022] Фиг. 4: Диаграмма вида «ящик с усами» значений для CT-проET-1 для диагностики обморока.

[0023] Фиг. 5: Диаграмма вида «ящик с усами» значений для CT-проAVP для диагностики обморока.

[0024] Фиг. 6: Диаграмма вида «ящик с усами» значений для PCT для диагностики обморока.

[0025] Фиг. 7: Линейная взаимосвязь между MR-проANP и VVS.

[0026] Фиг. 8: Линейная взаимосвязь между CT-проET-1 и VVS.

[0027] Фиг. 9: Линейная взаимосвязь между CT-проET-1 и OH.

[0028] Фиг. 10: Линейная взаимосвязь и подобные пороговым эффекты между MR-проANP и CSH.

[0029] Фиг. 11: Линейная взаимосвязь между CT-проET-1 и кардиоингибирующим рефлексом.

[0030] Фиг. 12: Пороговый эффект между CT-проAVP и начальной OH.

Подробное описание изобретения

[0031] Объектом изобретения является способ диагностики и/или прогноза, и/или оценки, и/или стратификации терапии обморока у пациента, где способ включает:

[0032] определение уровня по меньшей мере одного биомаркера, выбранного из группы, состоящей из проADM, проANP, проBNP, проAVP, проET-1 и PCT или фрагмента по меньшей мере из их 12 аминокислот, в образце физиологической жидкости указанного пациента,

[0033] корреляцию указанного уровня по меньшей мере одного биомаркера с диагнозом и/или прогнозом, и/или оценкой, и/или стратификацией терапии обморока.

[0034] Обморок определяют как кратковременную потерю сознания из-за временной глобальной гипоперфузии головного мозга, характеризующейся быстрым началом, короткой продолжительностью, и самопроизвольным полным восстановлением (Moya et al., 2009. Heart J. 30:2631-2671).

[0035] VVS определяют как воспроизведение обморока, ассоциированное с характерной картиной выраженной гипотензии и/или брадикардии/асистолии.

[0036] CSH определяют как падение SBP ≥50 мм рт.ст. (6666 Па) и/или асистолию >3 с.

[0037] OH определяют как значительное снижение систолического BP (SBP) ≥20 мм рт.ст. (2666 Па) и/или снижение диастолического BP (DBP) ≥10 мм рт.ст. (1333 Па), или систолическое BP <90 мм рт.ст. (11997 Па) (классическая OH, в пределах 3 мин фазы наклона; и отсроченная OH, между 3 и 20 мин), в то время как POTS имеет характерные симптомы ортостатической неустойчивости с увеличением частоты сердечных сокращений на >30/мин или тахикардией >120/мин в положении стоя. Начальная OH присутствует, когда возникли временное снижение BP в течение 15 с после вставания, >40 мм рт.ст. (5333 Па) SBP и/или >20 мм рт.ст. (2666 Па) DBP с симптомами гипоперфузии головного мозга, и пациент сообщил о типичном протекании обморока (Wieling et al., 2007. Clin Sci (Lond). 112:157-165).

[0038] Кардиоингибирующий обморок определяют как падение частоты сердечных сокращений до желудочкового ритма менее 40 ударов в минуту в течение более 10 с, или асистолию >3 с, в то время как вазодепрессорный рефлекс определяют как падение частоты сердечных сокращений ≤10% от ее пика на время обморока (Brignole et al., 2000. Europace 2:66-76).

[0039] Как упомянуто в настоящем документе, «анализ» или «диагностический анализ» может относиться к любому типу, применяемому в области диагностики. Такой анализ может быть основан на связывании аналита, подлежащего детекции, с одним или несколькими связывающими зондами с определенной аффинностью. Что касается взаимодействия между связывающими молекулами и молекулами-мишенями или представляющими интерес молекулами, константа аффинности предпочтительно выше 10⁸ M^-1.

[0040] В контексте настоящего изобретения, «связывающие молекулы» представляют собой молекулы, которые можно использовать для связывания молекул-мишеней или интересующих молекул, т.е. аналитов (т.е. в контексте настоящего изобретения пептида(пептидов)), из образца. Связывающие молекулы должны, таким образом, иметь адекватную форму, как в пространстве, так и в отношении свойств поверхности, таких как поверхностный заряд, гидрофобность, гидрофильность, присутствие или отсутствие доноров и/или акцепторов Льюиса, чтобы специфически связывать молекулы-мишени или представляющие интерес молекулы. Таким образом, связывание может быть опосредовано, например, ионными взаимодействиями, взаимодействиями Ван-дер-Ваальса, пи-пи, сигма-пи, гидрофобными взаимодействиями или взаимодействиями водородных связей, или комбинацией двух или более из вышеупомянутых взаимодействий между связывающими молекулами и молекулами-мишенями или представляющими интерес молекулами. В контексте настоящего изобретения, связывающие молекулы могут, например, являться выбранными из группы, включающей молекулу нуклеиновой кислоты, молекулу углевода, молекулу PNA, белок, антитело, пептид или гликопротеин. Предпочтительно, связывающие молекулы представляют собой антитела, включая их фрагменты с достаточной аффинностью к мишени или представляющей интерес молекуле, и включая рекомбинантные антитела или фрагменты рекомбинантных антител, так же как химически и/или биохимически модифицированные производные указанных антител или фрагментов, полученные из варианта цепи длиной по меньшей мере их 12 аминокислот.

[0041] Предпочтительные способы детекции включают иммуноанализы в различных форматах, например, таких как радиоиммунный анализ (RIA), хемилюминесцентные и флуоресцентные иммуноанализы, твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA), массивы на бусинах на основе Люминекса, анализы белка на микромассивах, и форматы экспресс-анализов, например, такие как иммунохроматографические анализы на полосках.

[0042] Анализы могут представлять собой гомогенные или гетерогенные анализы, конкурентные и неконкурентные анализы. В особенно предпочтительном варианте осуществления анализ присутствует в форме сэндвич-анализа, который представляет собой неконкурентный иммуноанализ, где молекула, подлежащая детекции и/или количественной оценке, связана с первым антителом и вторым антителом. Первое антитело может быть связано с твердой фазой, например, бусиной, поверхностью лунки или другого контейнера, чипом или полоской, и второе антитело представляет собой антитело, которое является меченым, например, красителем, радиоактивным изотопом, или реакционноспособной или каталитически активной группой. Количество меченого антитела, связанного с аналитом, затем измеряют подходящим способом. Общая композиция и способы, включенные в «сэндвич-анализы», хорошо разработаны и известны специалисту в данной области (The Immunoassay Handbook, Ed. David Wild, Elsevier LTD, Oxford; 3^rd ed. (May 2005), ISBN-13: 978-0080445267; Hultschig C. et al., Curr Opin. Chem. Biol. 2006 Feb; 10(1):4-10. PMID: 16376134, содержание которого приведено в настоящем документе в качестве ссылки).

[0043] В особенно предпочтительном варианте осуществления анализ включает две связывающие молекулы, предпочтительно, антитела, которые оба присутствуют как распределенные в жидкой реакционной смеси, где первый компонент для мечения присоединен к первой связывающей молекуле, где указанный первый компонент для мечения является частью системы для мечения, основанной на флуоресценции- или хемилюминесценции-тушении или амплификации, и второй компонент для мечения указанной системы для мечения присоединен ко второй связывающей молекуле, так что при связывании обеих связывающих молекул с аналитом образуется поддающийся измерению сигнал, позволяющий детекцию сформированных сэндвич-комплексов в растворе, содержащем образец.

[0044] Даже более предпочтительно, указанная система для мечения содержит криптаты редкоземельных элементов или хелаты редкоземельных элементов в комбинации с флуоресцентным красителем или хемилюминесцентным красителем, в частности, красителем цианинового типа.

[0045] Даже более предпочтительно, указанная система для мечения содержит криптаты редкоземельных элементов или хелаты редкоземельных элементов в комбинации с флуоресцентным красителем или хемилюминесцентным красителем, в частности, красителем цианинового типа. В контексте настоящего изобретения, анализы на основе флуоресценции включают использование красителей, которые могут, например, являться выбранными из группы, включающей FAM (5- или 6-карбоксифлуоресцеин), VIC, NED, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат (FITC), IRD-700/800, цианиновые красители, такие как CY3, CY5, CY3.5, CY5.5, CY7, ксантен, 6-карбокси-2',4',7',4,7-гексахлорфлуоресцеин (HEX), TET, 6-карбокси-4’,5'-дихлор-2',7'-диметоксифлуоресцеин (JOE), N,N,N',N'-тетраметил-6-карбоксиродамин (TAMRA), 6-карбокси-X-родамин (ROX), 5-карбоксиродамин-6G (R6 G5), 6-Карбоксиродамин-6G (RG6), родамин, родамин зеленый, родамин красный, родамин 110, красители BODIPY, такие как BODIPY TMR, орегон зеленый, кумарины, такие как умбеллиферон, бензимиды, такие как Hoechst 33258; фенантридины, такие как техас красный, якима желтый, Alexa Fluor, PET, бромид этидия, акридиновые красители, карбазольные красители, феноксазиновые красители, порфириновые красители, полиметиновые красители и т.п.

[0046] В контексте настоящего изобретения, анализы на основе флуоресценции включают использование красителей, основанных на физических принципах, описанных для хемилюминесцентных веществ в Kirk-Othmer, Encyclopedia of chemical technology, 4^th ed., executive editor, J. I. Kroschwitz; editor, M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, 1993, vol.15, pp.518-562, содержание которого приведено в настоящем документе в качестве ссылки, включая цитаты на страницах 551-562. Предпочтительными хемилюминесцентными красителями являются сложные эфиры акридиния.

[0047] «Диагностика» в контексте настоящего изобретения относится к распознаванию и (ранней) детекции заболевания или клинического состояния у субъекта и может также включать дифференциальную диагностику.

[0048] Термин «оценка» относится к оценке тяжести заболевания у пациента.

[0049] По настоящему изобретению, термин «прогноз» обозначает предсказание того, как медицинское состояние субъекта (например, пациента) будет прогрессировать. Он может включать оценку шанса восстановления или шанса неблагоприятного исхода для указанного субъекта (например, рецидива приступа обморока или смерти).

[0050] Термин «пациент», как применяют в настоящем документе, относится к живому, относящемуся или не относящемуся к человеку организму, который получает медицинскую помощь или должен получать медицинскую помощь из-за заболевания. Он включает лиц без определенного заболевания, у которых исследуют признаки патологии. Таким образом, способы и анализы, описанные в настоящем документе, являются применимыми как для заболеваний человека, так и для ветеринарных заболеваний.

[0051] Термин «образец», как применяют в настоящем документе, относится к образцу физиологической жидкости, полученному с целью диагностики, прогноза или оценки представляющего интерес субъекта, такого как пациент. Предпочтительные тестовые образцы включают кровь, сыворотку, плазму, спинномозговую жидкость, мочу, слюну, мокроту и плевральные выпоты. Кроме того, специалисту в данной области понятно, что некоторые тестовые образцы можно более легко анализировать после процедуры фракционирования или очистки, например, разделения цельной крови на компоненты сыворотки или плазмы.

[0052] Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления изобретения образец выбран из группы, включающей образец крови, образец сыворотки, образец плазмы, образец спинномозговой жидкости, образец слюны и образец мочи или экстракт любого из вышеупомянутых образцов. Предпочтительно, образец представляет собой образец крови, наиболее предпочтительно, образец сыворотки или образец плазмы.

[0053] Термин «коррелирующий», как применяют в настоящем документе по отношению к использованию диагностического и прогностического маркера(маркеров), относится к сравнению присутствия или уровня маркера(маркеров) у пациента с его присутствием или количеством у лиц, как известно, страдающих от, или, как известно, подверженных риску данного состояния. Уровень маркера в образце от пациента можно сравнивать с уровнем, как известно, ассоциированным с конкретным диагнозом. Говорят, что уровень маркера в образце коррелирует с диагнозом; значит, специалист в данной области может использовать уровень маркера для определения того, страдает ли пациент от конкретного типа заболевания, и реагировать соответствующим образом. Альтернативно, уровень маркера в образце можно сравнивать с уровнем маркера, как известно, ассоциированным с хорошим исходом (например, отсутствием заболевания и т.д.). В предпочтительных вариантах осуществления, уровни панели маркеров коррелируют с общей вероятностью или конкретным исходом.

[0054] Чувствительность и специфичность диагностического и/или прогностического теста зависят от большего, чем просто аналитическое «качество» теста, они также зависят от определения того, что составляет аномальный результат. На практике, рабочие характеристические кривые (кривые ROC), как правило, рассчитывают посредством нанесения на график значения переменной по сравнению с его относительной частотой в «нормальной» (т.е. практически здоровой) популяции и популяциях «с заболеванием» (т.е. у пациентов, страдающих диабетом, устойчивостью к инсулину и/или метаболическим синдромом). Для любого конкретного маркера распределение уровней маркера у субъектов с заболеванием и без, вероятно, может перекрываться. В таких условиях тест не отличает абсолютно норму от заболевания со 100% точностью, и площадь перекрывания показывает, где тест не может отличать норму от заболевания. Выбирают порог, выше которого (или ниже которого, в зависимости от того, как маркер изменяется при заболевании) результат теста рассматривают как аномальный, и ниже которого результат теста рассматривают как нормальный. Площадь под кривой ROC является мерой вероятности того, что выявленное измерение может позволять корректную идентификацию состояния. Кривые ROC можно использовать, даже когда результаты теста не обязательно дают точное количество. При условии, что можно ранжировать результаты, можно получать кривую ROC. Например, результаты теста в образцах «с заболеванием» можно ранжировать по степени (например, 1=низкий, 2=нормальный, и 3=низкий). Это ранжирование можно коррелировать с результатами в «нормальной» популяции, и получать кривую ROC. Эти способы хорошо известны в данной области (см., например, Hanley et al., 1982. Radiology 143: 29-36). Предпочтительно, из кривых ROC получают в результате AUC более, чем приблизительно 0,5, более предпочтительно, более, чем приблизительно 0,7, еще более предпочтительно, более, чем приблизительно 0,8, даже более предпочтительно, более, чем приблизительно 0,85, и наиболее предпочтительно, более, чем приблизительно 0,9. Термин «приблизительно» в этом контексте относится к +/- 5% от данного измерения.

[0055] Горизонтальная ось кривой ROC представляет собой (1-специфичность), которая увеличивается с долей ложноположительных результатов. Вертикальная ось кривой представляет собой чувствительность, которая увеличивается с долей истинно-положительных результатов. Таким образом, для конкретного выбранного порога можно определять значение (1-специфичность) и можно получать соответствующую чувствительность. Площадь под кривой ROC является мерой вероятности того, что уровень измеряемого маркера может позволять корректную идентификацию заболевания или состояния. Таким образом, площадь под кривой ROC можно использовать для определения эффективности теста.

[0056] В конкретных вариантах осуществления, выбирают маркеры и/или панели маркеров, чтобы они обладали по меньшей мере приблизительно 70% чувствительностью, более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 80% чувствительностью, даже более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 85% чувствительностью, еще более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 90% чувствительностью, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 95% чувствительностью, в комбинации с по меньшей мере приблизительно 70% специфичностью, более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 80% специфичностью, даже более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 85% специфичностью, еще более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 90% специфичностью, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 95% специфичностью. В особенно предпочтительных вариантах осуществления, как чувствительность, так и специфичность составляют по меньшей мере приблизительно 75%, более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 80%, даже более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 85%, еще более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 90%, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 95%. Термин «приблизительно» в этом контексте относится к +/- 5% данного измерения.

[0057] Пороговые уровни можно получать, например, анализом по Каплану-Мейер, где возникновение заболевания коррелирует с квартилями маркеров сердечно-сосудистых заболеваний в популяции. Согласно этому анализу, субъекты с уровнями маркеров сердечно-сосудистых заболеваний выше 75-го процентиля обладают значимо увеличенным риском приобретения заболеваний согласно изобретению. Этот результат дополнительно поддержан регрессионным анализом Кокса с полной поправкой на классические факторы риска: наивысший квартиль по сравнению со всеми другими субъектами с высокой значимостью ассоциирован с увеличенным риском приобретения заболеваний согласно изобретению.

[0058] Другими предпочтительными пороговыми значениями являются, например, 90-й, 95-й или 99-й процентиль нормальной популяции. При использовании более высокого процентиля, чем 75-й процентиль, снижают количество идентифицированных ложноположительных субъектов, но можно пропустить идентификацию субъектов, подверженных умеренному, тем не менее все еще увеличенному риску. Таким образом, можно принимать пороговое значение в зависимости от того, считают ли более приемлемым идентификацию большинства субъектов, подверженных риску, ценой идентификации также «ложноположительных», или считают ли более приемлемым идентификацию в основном субъектов, подверженных высокому риску, ценой пропуска нескольких субъектов, подверженных умеренному риску.

[0059] Другими математическими возможностями расчета риска индивидуума с использованием значения уровня маркера сердечно-сосудистых заболеваний у индивидуума и других прогностических лабораторных и клинических параметров являются, например, NRI (остаточный индекс реклассификации) или IDI (интегрированный индекс дискриминации). Индексы можно рассчитывать согласно Pencina (Pencina M.J., et al.: Evaluating the added predictive ability of a new marker: from area under the ROC curve to reclassification и beyond. Stat Med. 2008; 27:157-172).

[0060] Термин «уровень» в контексте настоящего изобретения относится к концентрации (предпочтительно, выраженной как масса/объем; масс./об.) маркерных пептидов, полученных из образца от пациента.

[0061] Как упомянуто в настоящем документе в контексте белков и других пептидов, термин «фрагмент» относится к более мелким белкам или пептидам, которые можно получать из более крупных белков или пептидов, которые, таким образом, содержат частичную последовательность более крупного белка или пептида. Указанные фрагменты можно получать из более крупных белков или пептидов посредством сапонификации одной или нескольких из его пептидных связей. «Фрагменты» маркеров PCT, проANP, проBNP, проET-1, проADM и проAVP предпочтительно относятся к фрагментам длиной по меньшей мере 6 аминокислот, наиболее предпочтительно, длиной по меньшей мере 12 аминокислотных остатков. Такие фрагменты предпочтительно поддаются детекции с помощью иммунологических анализов, как описано в настоящем документе.

[0062] Натрийуретические пропептиды являются выбранными из группы, состоящей из предсердного натрийуретического пропептида (проANP) и мозгового натрийуретического пропептида (проBNP) или их фрагменты длиной по меньшей мере 12 аминокислот.

[0063] Последовательность из 153 аминокислот пре-проANP показана на SEQ ID NO:1. После отщепления N-концевого сигнального пептида (25 аминокислоты) и двух C-концевых аминокислот высвобождается проANP (SEQ ID NO:2). Этот прогормон расщепляется на зрелый пептид ANP из 28 аминокислот, известный также как ANP (1-28) или α-ANP, и амино концевой фрагмент проANP (1-98) (NT-проANP, SEQ ID NO:3). Среднерегионарный проANP (MR-проANP) определяют как NT-проANP или любые его фрагменты, содержащие по меньшей мере аминокислотные остатки 53-90 (SEQ ID NO:4) проANP.

[0064] В предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению определяют уровень фрагмента предшественника проANP, MR-проANP.

[0065] Аминокислотная последовательность пептида-предшественника адреномедуллина (препроадреномедуллин) приведена на SEQ ID NO:5. Проадреномедуллин относится к аминокислотным остаткам 22-185 последовательности препроадреномедуллина. Аминокислотная последовательность проадреномедуллина (проADM) приведена на SEQ ID NO:6. MR-проадреномедуллин (MR-проADM) относится к аминокислотным остаткам 45-92 препроADM. Аминокислотная последовательность MR-проADM представлена на SEQ ID NO:7.

[0066] В другом предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению определяют уровень фрагмента-предшественника проADM, MR-проADM.

[0067] Последовательность 164 аминокислот пептида-предшественника вазопрессина (препровазопрессина) приведена на SEQ ID NO:8. Провазопрессин относится к аминокислотным остаткам 19-164 последовательности препровазопрессина. Аминокислотная последовательность провазопрессина приведена на SEQ ID NO:9. Провазопрессин расщепляется на зрелый вазопрессин, нейрофизин II и C-концевой провазопрессин (CT-проAVP или копептин). Копептин относится к аминокислотным остаткам 126-164 препровазопрессина. Аминокислотная последовательность копептина представлена на SEQ ID NO:10. Нейрофизин II содержит аминокислотные остатки 32-124 препровазопрессина, и его последовательность представлена на SEQ ID NO:11.

[0068] В другом предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению определяют уровень фрагмента-предшественника проAVP, копептина.

[0069] Прокальцитонин является предшественником кальцитонина и катакальцина. Аминокислотная последовательность PCT 1-116 приведена на SEQ ID NO:12.

[0070] Последовательность 134 аминокислот пептида-предшественника мозгового натрийуретического пептида (препро-BNP) показана на SEQ ID NO:13. Про-BNP относится к аминокислотным остаткам 27-134 препро-BNP. Последовательность про-BNP показана на SEQ ID NO:14. Про-BNP расщепляется на N-концевой про-BNP (NT-про-BNP) и зрелый BNP. NT-про-BNP содержит аминокислотные остатки 27-102, и его последовательность показана на SEQ ID NO:15. На SEQ ID NO:16 показана последовательность BNP, содержащая аминокислотные остатки 103-134 пептида препро-BNP.

[0071] Последовательность 212 аминокислот пептида-предшественника эндотелина-1 (препроэндотелина-1) приведена на SEQ ID NO:17. Про-ET-1 относится к аминокислотным остаткам 18-212 последовательности препро-ET-1. Аминокислотная последовательность про-ET-1 приведена на SEQ ID NO:18. Про-ET-1 расщепляется на зрелый ET-1, big-ET-1 и C-концевой проET-1 (CT-проET-1). ET-1 относится к аминокислотным остаткам 53-73 препро-ET-1. Аминокислотная последовательность ET-1 показана на SEQ ID NO:19. CT-проET-1 относится к аминокислотным остаткам 168-212 препро-ET-1. Аминокислотная последовательность CT-проET-1 представлена на SEQ ID NO:20. Big-ET-1 содержит аминокислотные остатки 53-90 препро-ET-1, и его последовательность показана на SEQ ID NO:21.

[0072] В предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению определяют уровень фрагмента-предшественника проBNP, NT-проBNP или BNP.

[0073] В другом предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению определяют уровень PCT, состоящего из аминокислот 1-116 или 2-116 или 3-116.

[0074] В предпочтительном варианте осуществления изобретения у пациента диагностируют наличие ортостатической гипотензии (всей), когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговой уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л, более предпочтительно, между 45 и 70 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 55 и 70 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 60 и (выше) 70 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют наличие OH, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке выше чем 30 пмоль/л, предпочтительно, выше чем 40 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 45 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 55 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 60 пмоль/л, наиболее предпочтительно, выше чем 70 пмоль/л.

[0075] Даже более предпочтительно, что у пациента диагностируют отсутствие ортостатической гипотензии (всей), когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговой уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговой уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л, более предпочтительно, между 30 и 60 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 30 и 55 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 30 и 45 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют отсутствие OH, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке ниже чем 70 пмоль/л, предпочтительно, ниже чем 60 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 55 пмоль/л, даже более предпочтительно, ниже чем 45 пмоль/л, наиболее предпочтительно, ниже чем 30 пмоль/л.

[0076] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения у пациента диагностируют наличие CSH, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 50 и 200 пмоль/л, более предпочтительно, между 50 и 150 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 50 и 100 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 50 и 85 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют наличие CSH, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке ниже чем 200 пмоль/л, предпочтительно, ниже чем 150 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 100 пмоль/л, даже более предпочтительно, ниже чем 85 пмоль/л, наиболее предпочтительно, ниже чем 50 пмоль/л.

[0077] Является даже более предпочтительным, чтобы у пациента диагностировали отсутствие CSH, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 50 и 200 пмоль/л, более предпочтительно, между 85 и 200 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 100 и 200 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 150 и 200 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют отсутствие CSH, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке выше чем 50 пмоль/л, предпочтительно, выше чем 85 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 100 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 150 пмоль/л, наиболее предпочтительно, выше чем 200 пмоль/л.

[0078] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения у пациента диагностируют наличие кардиоингибирующего рефлекса, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л, более предпочтительно, между 30 и 60 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 30 и 55 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 30 и 45 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют наличие кардиоингибирующего рефлекса, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке ниже чем 70 пмоль/л, предпочтительно, ниже чем 60 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 55 пмоль/л, даже более предпочтительно, ниже чем 45 пмоль/л, наиболее предпочтительно, ниже чем 30 пмоль/л.

[0079] Является даже более предпочтительным, чтобы у пациента диагностировали отсутствие кардиоингибирующего рефлекса, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л, более предпочтительно, между 45 и 70 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 55 и 70 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 60 и 70 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют отсутствие кардиоингибирующего рефлекса, когда указанный определенный уровень CT-проET-1 в исходной точке выше чем 30 пмоль/л, предпочтительно, выше чем 45 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 55 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 60 пмоль/л, наиболее предпочтительно, выше чем 70 пмоль/л.

[0080] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения у пациента диагностируют наличие начальной OH, когда указанный определенный уровень CT-проAVP в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 2,5 и 20 пмоль/л, более предпочтительно, между 2,5 и 10 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 2,5 и 8 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 2,5 и 6 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 2,5 и 4 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют наличие начальной OH, когда указанный определенный уровень CT-проAVP в исходной точке ниже чем 20 пмоль/л, предпочтительно, ниже чем 10 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 8 пмоль/л, даже более предпочтительно, ниже чем 6 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 4 пмоль/л, наиболее предпочтительно, ниже чем 2,5 пмоль/л.

[0081] Является даже более предпочтительным, чтобы у пациента диагностировали отсутствие начальной OH, когда указанный определенный уровень CT-проAVP в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 2,5 и 20 пмоль/л, более предпочтительно, между 4 и 20 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 6 и 20 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 8 и 20 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 10 и 20 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют отсутствие начальной OH, когда указанный определенный уровень CT-проAVP в исходной точке выше чем 2,5 пмоль/л, предпочтительно, выше чем 4 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 6 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 8 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 10 пмоль/л, наиболее предпочтительно, выше чем 20 пмоль/л.

[0082] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения у пациента диагностируют наличие вазовагального обморока, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 50 и 200 пмоль/л, более предпочтительно, между 50 и 150 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 50 и 100 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 50 и 85 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют наличие вазовагального обморока, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке ниже чем 200 пмоль/л, предпочтительно, ниже чем 150 пмоль/л, более предпочтительно, ниже чем 100 пмоль/л, даже более предпочтительно, ниже чем 85 пмоль/л, наиболее предпочтительно, ниже чем 50 пмоль/л.

[0083] Является даже более предпочтительным, чтобы у пациента диагностировали отсутствие вазовагального обморока, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень. Предпочтительно, предопределенный пороговый уровень составляет между 50 и 200 пмоль/л, более предпочтительно, между 85 и 200 пмоль/л, даже более предпочтительно, между 100 и 200 пмоль/л, наиболее предпочтительно, между 150 и 200 пмоль/л. В предпочтительном варианте осуществления у пациента диагностируют отсутствие вазовагального обморока, когда указанный определенный уровень MR-проANP в исходной точке выше чем 50 пмоль/л, предпочтительно, выше чем 85 пмоль/л, более предпочтительно, выше чем 100 пмоль/л, даже более предпочтительно, выше чем 150 пмоль/л, наиболее предпочтительно, выше чем 250 пмоль/л.

[0084] Вышеупомянутые пороговые значения могут являться различными в других анализах, если они откалиброваны отлично от систем анализа, используемых по настоящему изобретению. Таким образом, вышеупомянутые пороговые значения следует применять к таким различно откалиброванным анализам соответственно, принимая во внимание различия в калибровке. Одной из возможностей количественной оценки различия в калибровке является способ сравнения анализа (корреляции) рассматриваемого анализа (например, анализа PCT) с анализом соответствующего биомаркера, используемым по настоящему изобретению (например, BRAHMS KRYPTOR, чувствительный к PCT), посредством измерения соответствующего биомаркера (например, PCT) в образцах с использованием обоих способов. Другой возможностью является определение с помощью рассматриваемого анализа, при условии, что этот тест обладает достаточной аналитической чувствительностью, медианного уровня биомаркера в репрезентативной нормальной популяции, сравнение результатов с медианными уровнями биомаркеров, как описано в литературе (например, в EP 09011073.5 для PCT - «Procalcitonin for the prognosis of adverse events in the asymptomatic population») и пересчет калибровки на основании различий, полученных при этом сравнении. С калибровкой, используемой по настоящему изобретению, в образцах от нормальных (здоровых) субъектов измерено: медиана (межквартильный размах) прокальцитонина в плазме составляла 0,018 (0,015-0,022) нг/мл у мужчин и 0,014 (0,012-0,017) нг/мл у женщин (Abbasi et al., 2010. JCEM 95:E26-E31), медиана (размах) MR-проADM в плазме составляла 0,41 (0,23-0,64) нмоль/л (Smith et al., 2009. Clin. Chem. 55:1593-1595), медиана (межквартильный размах) концентрации копептина составляла 4,7 (2,9-7,5) пмоль/л, со значительно более высокой концентрацией у мужчин (6,2 (4,1-9,5) пмоль/л), чем у женщин (3,6 (2,4-5,5) пмоль/л) (Meijer et al., 2010. Kidney Int 77:29-36), медиана (межквартильный размах) концентрации MR-проANP составляла 66 (51-86) пмоль/л (Melander et al., 2009. JAMA 302:49-57) и среднее (размах) концентрации в плазме CT-проET-1 составляло 44,3 (10,5-77,4) пмоль/л (Papassotiriou et al., 2006. Clin. Chem. 52:1144-1151).

[0085] В автоматизированном флуоресцентном сэндвич-анализе для детекции MR-проADM используют поликлональное антитело овцы, направленное против пептида, содержащего аминокислоты 68-86 последовательности препроADM человека (SEQ ID NO:5), и поликлональное антитело овцы, направленное против пептида, содержащего аминокислоты 83-94 последовательности препроADM человека (SEQ ID NO:5) (Caruhel et al., 2009. Clin. Biochem 42:725-8).

[0086] В автоматизированном флуоресцентном сэндвич-анализе для детекции CT-проET-1 используют моноклональное антитело мыши, направленное против пептида, содержащего аминокислоты 167-183 последовательности проET-1 человека (SEQ ID NO:18) и поликлональное антитело овцы, направленное против пептида, содержащего аминокислоты 183-195 последовательности проET-1 человека (SEQ ID NO:18) (Caruhel et al. 2008. Clin. Chem 54:A119).

[0087] В предпочтительном варианте осуществления изобретения уровни по меньшей мере двух биомаркеров можно комбинировать.

[0088] В одном варианте осуществления изобретения проводят серийные измерения биомаркеров, например, в исходной точке (до начала теста ортостатической устойчивости [например, теста HUT или теста активного вставания]) и во время или после такого теста. Иными словами, уровни по меньшей мере одного биомаркера определяют по меньшей мере в двух образцах физиологической жидкости от указанного пациента, отобранных в исходной точке до начала и во время или после теста ортостатической устойчивости.

[0089] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере два уровня по меньшей мере одного биомаркера можно комбинировать в математическом алгоритме.

[0090] В следующем предпочтительном варианте осуществления увеличение уровня копептина от исходной точки до вставания ассоциировано с кардиоингибирующим рефлексом.

[0091] В другом предпочтительном варианте осуществления увеличение уровня CT-проET-1 от исходной точки до вставания исключает ортостатическую гипотензию.

[0092] В другом предпочтительном варианте осуществления увеличение уровня PCT от исходной точки до вставания ассоциировано с POTS.

[0093] В следующем предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере один уровень по меньшей мере одного биомаркера комбинируют с одним или несколькими клиническими параметрами, выбранными из группы, состоящей из возраста, пола, индекса массы тела (BMI), систолического кровяного давления, диастолического кровяного давления, частоты сердечных сокращений, скорости клубочковой фильтрации (GFR), общего холестерина, HDL-холестерина, количества приступов обмороков и времени от начала первого приступа обморока.

[0094] Термин «комбинация» или «комбинирование» определяют как возможный выбор определенного количества параметров и компоновку этих параметров в специфические группы с использованием математического алгоритма (например, отклонения или соотношения). Например, можно рассчитывать соотношение между уровнем биомаркера в образце, взятом у пациента во время или после теста ортостатической устойчивости, и уровнем того же биомаркера в образце, взятом у пациента в исходной точке (до начала теста ортостатической устойчивости). Более того, можно рассчитывать отклонение между уровнем биомаркера в образце, взятом у пациента во время или после теста ортостатической устойчивости, и уровнем того же биомаркера в образце, взятом у пациента в исходной точке (до начала теста ортостатической устойчивости). В настоящем документе предусмотрено также, что можно рассчитывать соотношение между различными биомаркерами. Например, можно рассчитывать соотношение между уровнями биомаркеров, измеренных в образцах, взятых у пациента в одной и той же временной точке (например, соотношение между MR-проADM и CT-проET-1 в образце, взятом у пациента в исходной временной точке [до начала теста ортостатической устойчивости]) или в различных временных точках (например, соотношение между MR-проADM в образце, взятом у пациента в исходной временной точке, и CT-проET-1 в образце, взятом у пациента во время или после теста ортостатической устойчивости).

[0095] В другом предпочтительном варианте осуществления уровень по меньшей мере одного биомаркера можно комбинировать как непрерывную или категориальную переменную.

[0096] В предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM и CT-проET-1.

[0097] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM и MR-проANP.

[0098] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM и копептина.

[0099] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров CT-проET-1 и MR-проANP.

[0100] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров CT-проET-1 и копептина.

[0101] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM, CT-проET-1 и MR-проANP.

[0102] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM, CT-проET-1 и копептина.

[0103] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM, MR-проANP и копептина.

[0104] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров CT-проET-1, MR-проANP и копептина.

[0105] В другом предпочтительном варианте осуществления комбинируют уровни биомаркеров MR-проADM, CT-проET-1, MR-проANP и копептина.

[0106] Термин «балл» в контексте настоящего изобретения относится к рейтингу, в числовом выражении, основанному на конкретных уровне или степени, до которых качества или условия (например, уровень биомаркеров) присутствуют у указанного пациента.

[0107] Термин «стратификация терапии» в контексте настоящего изобретения относится к выбору и/или коррекции терапевтического лечения указанного пациента. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пациентов стратифицируют для терапевтического лечения, например, пациентов стратифицируют для приемов физической компенсации (например, изометрических PCM рук или ног, подобных скрещиванию ног или кистевому жиму и напряжению рук), наклонной тренировки, так же как фармакологической терапии (например, мидодрином, α-антагонистом) и кардиостимуляции, что включает: определение уровня по меньшей мере одного биомаркера, выбранного из группы, состоящей из проADM, проANP, проBNP, проAVP, проET-1 и PCT или фрагмента по меньшей мере из их 12 аминокислот, в образце физиологической жидкости указанного пациента и корреляцию указанного уровня с терапевтическим лечением.

[0108] В особенно предпочтительном варианте осуществления пациентов стратифицируют в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе. Является наиболее предпочтительным, чтобы пациентов стратифицировали в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе посредством определения по меньшей мере уровня CT-проET-1, где уровень ниже предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих ортостатической гипотензией, которые не нуждаются в кардиостимуляторе, и где уровень выше предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих кардиоингибирующим рефлексом, которые нуждаются в кардиостимуляторе.

[0109] Кардиостимуляцию проводят с помощью кардиостимулятора, который представляет собой медицинское устройство, в котором используют электрические импульсы, доставляемые электродами, контактирующими с сердечными мышцами, для регуляции сердцебиения. Первоочередным назначением кардиостимулятора является поддержание адекватной частоты сердечных сокращений, поскольку либо природный сердечный кардиостимулятор является недостаточно быстрым, либо присутствует блокирование сердечной системы электрической проводимости. Современные кардиостимуляторы поддаются внешнему программированию и позволяют кардиологу выбирать оптимальные модели стимуляции для индивидуальных пациентов. Кардиостимуляцию можно проводить временно или постоянно. Постоянная кардиостимуляция с помощью имплантируемого кардиостимулятора включает чрезвенное размещение одного или нескольких кардиостимулирующих электродов внутри камеры или камер сердца. Существует три основных типа постоянных кардиостимуляторов, классифицируемых в соответствии с количеством вовлеченных камер и их основного механизма действия: однокамерный, двухкамерный и кардиостимулятор с частотной адаптацией.

ПРИМЕРЫ

План исследования, протокол обследования и диагностические критерии

[0110] С сентября 2008 г. по апрель 2011 г. всего 255 пациентов с подозрением на синкопальный эпизод неизвестной этиологии (119 мужчин, средний возраст 60±21 лет, диапазон от 15 до 93) исследовали в отделении обмороков Skåne University Hospital в Malmо, в местном третичном медицинском центре. Первых 101 пациента набирали непосредственно из отделения неотложной помощи в ходе вступительной фазы, как описано ранее (Fedorowski et al., 2010. Europace 12:1322-1328). Когда в отделении обмороков оформляли набор пациентов, его удостоверяли посредством направлений от врачей первичной медицинской помощи, из отделений неотложной помощи и поликлиник или клинических больниц в районе Malmо. Обычно до обследования проводили набор дополнительных исследований, таких как Холтер-ЭКГ, томография головного мозга, эхокардиография и ЭКГ или, в некоторых случаях, ЭЭГ при нагрузке. Поскольку результаты этих исследований являлись отрицательными или неокончательными, пациентов далее направляли в отделение обмороков. Пациентов с клиническими признаками и результатами тестов, подтверждающими кардиологическую (т.е. аритмию или структурное заболевание сердца и сосудов), неврологическую, метаболическую, токсикологическую и другую определенную этиологию TLOC, априори исключали, так же как страдающих деменцией на поздних стадиях и имеющих инвалидность. Участников исследования просили принимать их обычные лекарственные средства и голодать в течение двух часов перед тестом, хотя им позволяли пить воду по желанию. Их просили также заполнить опросник, исследующий анамнез пациентов, включая продолжительность и частоту относящихся к обморокам симптомов, так же как текущее фармакологическое лечение. Из соображений логистики тесты проводили как утром (в 8-10 час), так и во второй половине дня (13-15 час).

[0111] Обследование было основано на расширенном протоколе ортостатической пробы (HUTT), включающем канюляцию периферической вены, покой в положении лежа на спине 15 мин, отбор образцов крови, массаж сонного синуса (CSM) согласно протоколу Ньюкасла (Parry et al., 2009. Heart 95:416-420), наклонное положение тела головой вверх с повторным отбором образцов крови через 3 мин и необязательной провокацией нитроглицерином согласно итальянскому протоколу (Bartoletti et al., 2000. Europace 2:339-342), проба Вальсальвы, как предложено Goldstein (Goldstein and Sharabi, 2009. Circulation 119:139-146), и наконец, тест активного вставания согласно Wieling (Wieling et al., 2007. Clin. Sci (Lond) 112:157-165). Кровяное давление (BP) и другие гемодинамические параметры, так же как ЭКГ, отслеживали постоянно с использованием утвержденного монитора Nexfin (BMEYE, The Netherlands) (Eeftinck et al., 2009. Hypertens 22:378-383). В случае диагностирования гемодинамического ответа в ходе конкретной части теста, авторы настоящего изобретения, тем не менее, переходили к следующей части для исследования потенциального перекрывания между диагнозами. Если результаты являлись недиагностическими или неокончательными, исследователь первичного исследования обсуждал дальнейшие процедуры со специалистом по сердечной аритмии, который может принимать решения относительно продолжительного мониторирования ЭКГ и дополнительных кардиологических тестов.

[0112] Тест являлся диагностическим, когда a) у пациента обнаруживали типичные продромы (вертиго, головокружение, предобморок) и/или воспроизведенный обморок, и b) гемодинамические ответы соответствовали диагностическим критериям вазовагального рефлекторного (нейроопосредованного) обморока (VVS, NMS), гиперчувствительности сонного синуса (CSH), синдрома постуральной ортостатической тахикардии (POTS) и ортостатической гипотензии (OH) (Moya et al., 2009. Eur Heart J 30:2631-2671; Parry et al., 2009. Heart 95:416-420). Кратко, VVS определяли как воспроизведение обморока, ассоциированного с характерной картиной выраженной гипотензии и/или брадикардии/асистолии, CSH как падение SBP ≥50 мм рт.ст. (6665 Па) и/или асистолию >3 сек, OH как значительное снижение систолического BP (SBP) ≥20 мм рт.ст. (2666 Па) и/или снижение диастолического BP (DBP) ≥10 мм рт.ст. (1333 Па), или систолическое BP <90 мм рт.ст. (11997 Па) (классическая OH, в пределах 3 мин фазы наклона; и отсроченная OH, между 3 и 20 мин), в то время как POTS имеет характерные симптомы ортостатической неустойчивости с увеличением частоты сердечных сокращений на >30/мин или тахикардией >120/мин в положении стоя. Кардиоингибирующий обморок определяли как падение частоты сердечных сокращений до желудочкового ритма менее 40 ударов в минуту в течение более 10 с, или асистолию >3 с, в то время как вазодепрессорный рефлекс определяли как падение частоты сердечных сокращений ≤10% от ее пика на время обморока (Brignole et al. 2000. Europace 2:66-76). Начальная OH присутствовала, когда возникли временное снижение BP в течение 15 с после вставания, >40 мм рт.ст. (5333 Па) SBP и/или >20 мм рт.ст. (2666 Па) DBP с симптомами гипоперфузии головного мозга, и пациент сообщил о типичном протекании обморока (Wieling et al., 2007. Clin. Sci (Lond). 112:157-165).

[0113] Если ортостатическая проба во время фазы наклона являлась положительной в отношении общепринятых критериев OH (стойкое падение SBP ≥20 мм рт.ст. (2666 Па)), но у пациента не воспроизводились симптомы или результаты являлись неокончательными, авторы настоящего изобретения обычно продолжали с нитроглицериновой пробой, если SBP при стоянии составляло >90 мм рт.ст. (11997 Па). Нитроглицериновая проба не являлась диагностической, если у пациента развивалась гипотензия и тахикардия без характерной гемодинамической вазовагальной картины и сопутствующих симптомов (Moya et al., 2009. Eur Heart J 30:2631-2671). Чтобы убедиться в точности диагнозов, цифровые результаты тестов затем проверяли офлайн с использованием Nexfin@PC (BMEYE, The Netherlands), программного обеспечения, разработанного для визуализации, воспроизведения и повторного анализа тестовых измерений (включая ЭКГ), предоставленного системой Nexfin.

Измерение уровня биомаркеров

[0114] Образцы крови отбирали после 15 мин покоя в положении лежа на спине до начала теста. Уровень биомаркеров в плазме измеряли в образцах крови (16 аликвот × 250 мкл плазмы с ЭДТА в пластиковых термопробирках), которые замораживали при -80º C после забора. Уровни копептина (C-концевого про-аргинина-вазопрессина; CT-проAVP), стабильного пептида из предшественника аргинина-вазопрессина (Fenske et al., 2009. J Clin. Endocrinol. Metab 94:123-129), C-концевого фрагмента предшественника эндотелина-1 (CT-проET-1) (Papassotiriouet al., 2006. Clin. Chem. 52:1144-1151), среднерегионарных фрагментов предсердного натрийуретического пропептида (MR-проANP) (Morgenthaler et al., 2004. Clin. Chem. 50:234-236), проадреномедуллина (MR-проADM) (Caruhel et al., 2008. Clin. Chem. 54: A119) и прокальцитонина (Morgenthaler et al., 2002. Clin. Chem. 48:788-790) измеряли с использованием следующих анализов согласно инструкциям изготовителя: Thermo Scientific B⋅R⋅A⋅H⋅M⋅S CT-proAVP LIA; Thermo Scientific B⋅R⋅A⋅H⋅M⋅S CT-proET-1 KRYPTOR; Thermo Scientific B⋅R⋅A⋅H⋅M⋅S MR-proANP KRYPTOR; Thermo Scientific B⋅R⋅A⋅H⋅M⋅S MR-proADM KRYPTOR; Thermo Scientific B⋅R⋅A⋅H⋅M⋅S PCT sensitive LIA (BRAHMS GmbH, Hennigsdorf, Germany).

Статистические анализы

[0115] Авторы настоящего изобретения использовали модели логистической регрессии для получения связи между конкретными диагнозами и анализируемыми биомаркерами. Авторы настоящего изобретения проводили многомерный скорректированный логистический регрессионный анализ, вводя VVS, CSH, OH, POTS, начальную OH, кардиоингибирующий и вазодепрессорный рефлекс в качестве зависимых переменных, в то время как каждый из биомаркеров добавляли в качестве ковариации, соответственно. Модель 1 корректировали по возрасту, полу и BMI, в то время как более широкую модель 2, кроме того, корректировали по SBP, DBP, частоте сердечных сокращений и оцененной GFR. На следующей стадии биомаркеры, значимо ассоциированные с конкретным диагнозом, вводили одновременно в модель 2, и авторы настоящего изобретения проводили обратное исключение ковариаций для идентификации независимых предикторов конкретных диагнозов обморока. Затем авторы настоящего изобретения оценивали распределение диагнозов обморока среди квартилей концентраций в плазме соответствующих значимо ассоциированных биомаркеров. Авторы настоящего изобретения применяли модели 1 и 2 логистической регрессии, вводя квартили (первую или четвертую) с наименьшей частотой конкретного диагноза в качестве контроля. Распределение CSH было ограничено индивидуумами в возрасте >60 лет, поскольку это состояние является необычайно редким у более молодых индивидуумов. Распределение POTS не оценивали, поскольку присутствовали только одиннадцать индивидуумов с диагнозом POTS. Все расчеты проводили с использованием статистического программного обеспечения IBM SPSS версии 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Все тесты являлись двусторонними, и p<0,05 рассматривали как статистически значимое.

Результаты

[0116] Как можно видеть в таблице 1, включенные пациенты сообщали в среднем о семи приступах обморока в течение периода 8 лет. Более того, четверо из десяти пациентов сообщили, что их подвергали лечению против гипертензии, в основном, с помощью бета-блокаторов, ингибиторов RAAS и блокаторов кальциевых каналов. Концентрации в плазме в покое оцененных биомаркеров представлены в таблице 2. На основании результатов расширенной HUTT, всего у 142 (56%) пациентов диагностировали VVS, у 85 (33%) - OH, у 47 (18%) - CSH и у 11 (4%) - POTS. Ортостатическая гипотензия являлась одинаково распределенной между классической (n=42) и отсроченной формой (n=43). У 30 пациентов (12%) не обнаружили определенной этиологии обморока, но у двух из них долговременное мониторирование ЭКГ показало брадиаритмию во время обморока и затем их лечили с помощью кардиостимулятора. Присутствовало перекрывание между диагнозами, поскольку OH и POTS часто вызывали VVS (у 31 и 6 пациентов, соответственно), и 18 пациентов с VVS удовлетворяли также критериям CSH. Всего 35 пациентов (13,7%) имели кардиоингибирующий обморок в ходе теста; из них 29 - из-за вазовагального рефлекса, и 6 - из-за рефлекса сонного синуса. Параллельно, у 32 пациентов (12,5%) наблюдали вазодепрессорную картину во время обморока. Тест активного вставания проводили у 179 пациентов с анамнезом, позволяющим предполагать начальную OH; из них 40 (22,3%) соответствовали диагностическим критериям начальной ортостатической гипотензии.

[0117] Диаграммы вида «ящик с усами» значений для отдельных маркеров для различных диагнозов обморока показаны на фиг.2-6.

[0118] В модели с одним маркером и коррекцией на множество факторов VVS являлся значимо ассоциированным с пониженным уровнем MR-проANP, MR-проADM, CT-проET-1, CT-проAVP, и прокальцитонина, в то время как OH - с повышенным уровнем ренина и CT-проET-1 (таблица 3). Кроме того, CSH являлась ассоциированной с пониженным уровнем MR-проANP, MR-проADM и CT-проET-1, так же как кардиоингибирующий рефлекс. Вазодепрессорный рефлекс слабо (p<0,10) коррелировал с пониженным уровнем прокальцитонина и MR-проADM. Наконец, POTS являлась значимо ассоциированной с пониженным уровнем прокальцитонина, и начальная OH - с пониженным уровнем CT-проAVP (таблица 3). В модели 2 с коррекцией на множество маркеров, после обратного исключения ковариаций, VVS являлся значимо ассоциированным с пониженным уровнем MR-проANP (отношение шансов [OR] на одно стандартное отклонение [SD]: 0,51, 0,34-0,77; p=0,001), и CT-проET-1 (OR: 0,38, 0,23-0,62; p<0,001), более высоким SBP в покое (OR на 10 мм рт.ст. (1333 Па): 1,17, 95% доверительный интервал: 1,03-1,32, p=0,015), и более низкой частотой сердечных сокращений в покое (OR на 10 ударов в минуту: 0,76, 0,61-0,95, p=0,020). Параллельно, более высокие уровни CT-проET-1 и ренина (OR на одно SD: 1,94, 1,27-2,96; p=0,002, и 1,34, 1,01-1,78; p=0,041, соответственно), и более высокий возраст (OR на 10 лет: 1,23, 1,04-1,42, p=0,015) являлись предсказательными для OH. Кроме того, CSH являлась ассоциированной с пониженным уровнем MR-проANP (OR на одно SD: 0,40, 0,24-0,66; p<0,001) и более высоким возрастом (OR на 10 лет: 2,38, 1,86-2,92; p<0,001), в то время как POTS - с пониженным уровнем прокальцитонина (OR на одно SD: 0,21, 0,06-080; p=0,023) и возрастом (OR на 10 лет: 0,46, 0,44-0,63; p=0,001), женским полом (OR: 10,0, 1,1-90,9; p=0,043), и более высокой частотой сердечных сокращений в покое (OR на 10 ударов в минуту: 1,94, 1,0-2,19; p=0,037). Начальная OH являлась ассоциированной с пониженным уровнем CT-проAVP (OR на одно SD: 0,57, 0,36-0,89, p=0,013), более высоким DBP в покое (OR на 10 мм рт.ст.: 1,11, 1,03-1,18, p=0,003) и, напротив, с более низким SBP в покое (OR на 10 мм рт.ст.: 0,68, 0,56-0,85; p=0,002) и оцененной скоростью клубочковой фильтрации (eGFR) (OR на 10 мл/мин: 0,86, 0,78-0,96; p=0,012). Более того, пониженный уровень CT-проET-1 являлся предсказательным для кардиоингибирующего обморока в ходе теста (OR на одно SD: 0,34, 0,22-0,53; p<0,001), так же как являлись более низкая частота сердечных сокращений в покое (OR на снижение на 10 ударов в минуту: 1,45, 1,04-1,89; p=0,037) и мужской пол (OR: 2,70, 1,17-6,32; p=0,021). Вазодепрессорный рефлекс обратно коррелировал с уровнем прокальцитонина (OR на одно SD: 0,59, 0,35-1,00; p=0,050).

[0119] Как показано на фиг. 7-12, связи между диагнозами обморока и квартилями идентифицированных предсказательных биомаркеров следовали двум различным схемам: линейной и подобной пороговой. Линейная схема характеризовала связь между MR-проANP и VVS (фиг. 7), так же как между CT-проET-1 и VVS (фиг. 8), OH (фиг. 9), и кардиоингибирующим рефлексом (фиг. 11), в то время как пороговый эффект наблюдали между CT-проAVP и начальной OH (фиг. 12). Связь между MR-проANP и CSH (фиг.10) объединяла как линейные, так и пороговые эффекты. Наиболее сильное положительное предсказательное значение обнаружено для самого низкого квартиля MR-проANP (<51 пмоль/л) и CT-проET-1 (<46 пмоль/л) по отношению к вазовагальному рефлексу, и для самого низкого квартиля CT-проAVP (<3,1 пмоль/л) по отношению к начальной OH. Параллельно, самый низкий квартиль CT-проET-1 являлся отрицательно предсказательным для OH, в то время как наивысший квартиль CT-проET-1 (>69 пмоль/л), как правило, исключал кардиоингибирующий рефлекс. Обобщение анализов логистической регрессии в модели 2 с полной коррекцией для каждой пары диагноза обморока и квартилей соответствующего биомаркера представлено в таблице 4.

[0120] Площади под кривой (AUC) рабочих характеристических кривых (ROC) для отдельных маркеров и различных диагнозов обморока обобщены в таблице 5. Различные пороговые значения использовали для определения соответствующей чувствительности и специфичности каждого маркера для диагностики соответствующей формы обморока (таблицы 6-12).

[0121] Для комбинаций маркеров проводили логистическую регрессию логарифмически преобразованных значений для биомаркеров. Комбинации MR-проANP, MR-проADM, CT-проET-1 и копептина для диагностики начальной OH действовали лучше (OR 0,62 [95% CI 0,41-0,91]), чем отдельные маркеры MR-проANP (OR 0,70 [95% CI 0,48-1,00]), MR-проADM (OR 0,72 [95% CI 0,50-1,02]), CT-проET-1 (OR 0,70 [95% CI 0,51-0,98]) или копептин (OR 0,65 [95% CI 0,44-0,96]. Более того, комбинация MR-проANP, MR-проADM, CT-проET-1 и копептина для диагностики вазовагального обморока действовала лучше (OR 0,29 [95% CI 0,20-0,42]), чем отдельные маркеры MR-проANP (OR 0,38 [95% CI 0,28-0,52]), MR-проADM (OR 0,35 [95% CI 0,25-0,49]), CT-проET-1 (OR 0,36 [95% CI 0,24-0,52]) или копептин (OR 0,51 [95% CI 0,38-0,68]).

[0122] Для серийных измерений применяли логистическую регрессию с использованием дельты логарифмически преобразованных значений для биомаркеров. Для увеличения уровня копептина от исходного уровня до вставания показали сильную ассоциацию с кардиоингибирующиим рефлексом (OR 1,48 [95% CI 1,11-1,98]). Увеличение уровня CT-проET-1 от исходного уровня до вставания исключало ортостатическую гипотензию (OR 0,84 [95% CI 0,65-1,08]), в то время как увеличение уровня PCT от исходного уровня до вставания является значимо ассоциированным с POTS (OR 2,42 [95% CI 1,04-5,62]).

[0123] Более того, результаты авторов настоящего изобретения показали, что увеличение уровня копептина от исходного уровня до вставания являлось сильно ассоциированным со спонтанным VVS (не спровоцированным введением нитроглицерина) (OR 2,54 [95% CI 1,47-4,39]), в то время как увеличение уровня MR-проANP от исходного уровня до вставания свидетельствовало против спонтанного VVS (OR 0,79 [95% CI 0,57-1,10)].

Таблица 1
Клинические характеристики участников исследования (N=255) Характеристика Среднее ± стандартное отклонение или процент Возраст (лет) 60±21 Пол (мужской, %) 46,7 Курение в настоящее время (%) 15,3 Приступы обмороков в анамнезе (лет) 8±12 Количество приступов обморока 7±13 Гипертензия в анамнезе (%) 43,1 MI в анамнезе (%) 7,8 Инсульт в анамнезе (%) 10,2 Сердечная недостаточность в анамнезе (%) 5,5 Диабет в анамнезе (%) 7,8 Фибрилляция предсердий (%) 8,2 BMI (кг/м²) 25±4 Систолическое BP, в положении лежа на спине (мм рт.ст.) 138±24 Диастолическое BP, в положении лежа на спине (мм рт.ст.) 73±10 Частота сердечных сокращений, в положении лежа на спине (ударов в мин) 69±11 Оцененная GFR (мл/мин/1,73 м²) 84±33 Общий холестерин (ммоль/л) 4,7±1,0 HDL-холестерин (ммоль/л) 1,3±0,4

Настоящее изобретение относится к способу стратификации терапии обморока у пациента путем определения уровня СТ-проЕТ-1 в образце жидкости организма указанного пациента, корреляции уровня СТ-проЕТ-1 со стратификацией терапии обморока, где пациентов стратифицируют в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе посредством определения уровня СТ-проЕТ-1. Уровень выше предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих ортостатической гипотензией, которые не нуждаются в кардиостимуляторе, и где уровень ниже предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих кардиоингибирующим рефлексом, которые нуждаются в кардиостимуляторе. Предопределенный пороговый уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л, где образец отбирают в исходной точке до начала теста ортостатической устойчивости, предпочтительно теста HUT или теста активного вставания. Изобретение также касается применения уровня СТ-проЕТ-1 для стратификации терапии обморока. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 12 табл., 12 ил.

1. Способ стратификации терапии обморока у пациента, где способ включает:

- определение уровня СТ-проЕТ-1 в образце жидкости организма указанного пациента,

- корреляцию указанного уровня СТ-проЕТ-1 с стратификацией терапии обморока, где пациентов стратифицируют в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе посредством определения уровня СТ-проЕТ-1, где уровень выше предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих ортостатической гипотензией, которые не нуждаются в кардиостимуляторе, и где уровень ниже предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих кардиоингибирующим рефлексом, которые нуждаются в кардиостимуляторе,

где предопределенный пороговый уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л и где образец отбирают в исходной точке до начала теста ортостатической устойчивости, предпочтительно теста HUT или теста активного вставания.

2. Способ по п. 1, где по меньшей мере один образец жидкости организма указанного пациента отбирают во время или после теста ортостатической устойчивости, предпочтительно теста HUT или теста активного вставания.

3. Способ по п. 1, где уровни СТ-проЕТ-1 определяют по меньшей мере в двух образцах жидкости организма указанного пациента, отобранных в исходной точке до начала и во время или после теста ортостатической устойчивости, предпочтительно теста HUT или теста активного вставания.

4. Способ по п. 1, где уровни СТ-проЕТ-1 комбинируют в математическом алгоритме.

5. Способ по п. 1, где уровень СТ-проЕТ-1 комбинируют по меньшей мере с одним клиническим параметром, выбранным из группы, состоящей из возраста, пола, индекса массы тела (BMI), систолического кровяного давления, диастолического кровяного давления, частоты сердечных сокращений, скорости клубочковой фильтрации (GFR), общего холестерина, HDL-холестерина, возраста, пола, количества приступов обморока и времени от первого начала приступа обморока.

6. Способ по п. 1, где дифференциальную диагностику проводят по меньшей мере для двух заболеваний, выбранных из группы, состоящей из нейроопосредованного обморока (NMS), ортостатической гипотензии и кардиогенного обморока.

7. Способ по п. 6, где нейроопосредованный обморок выбран из группы, состоящей из вазовагального обморока, гиперчувствительности сонного синуса, вазодепрессорного рефлекса, кардиоингибирующего рефлекса и смешанного рефлекса.

8. Способ по п. 6 или 7, где ортостатическая гипотензия выбрана из группы, состоящей из начальной ортостатической гипотензии, классической ортостатической гипотензии, отсроченной (прогрессирующей) ортостатической гипотензии и синдрома постуральной ортостатической тахикардии.

9. Способ по любому из пп. 6 или 7, где кардиогенный обморок выбран из кардиогенного обморока из-за аритмии и кардиогенного обморока из-за структурного заболевания.

10. Способ по п. 1 или 7, где образец выбран из группы, включающей образец крови, образец сыворотки, образец плазмы, образец спинномозговой жидкости, образец слюны и образец мочи или экстракт любого из вышеупомянутых образцов.

11. Способ по п. 1 или 7, где у пациента диагностируют отсутствие ортостатической гипотензии, когда указанный определенный уровень СТ-проЕТ-1 в исходной точке ниже, чем предопределенный пороговый уровень.

12. Способ по п. 1 или 7, где у пациента диагностируют отсутствие кардиоингибирующего рефлекса, когда указанный определенный уровень СТ-проЕТ-1 в исходной точке выше, чем предопределенный пороговый уровень.

13. Способ по п. 1 или 7, где СТ-проЕТ-1 детектируют посредством сэндвич-иммуноанализа с использованием первого антитела, направленного против пептида, содержащего аминокислоты 167-183 последовательности проЕТ-1 человека (SEQ ID NO: 18), и второго антитела, направленного против пептида, содержащего аминокислоты 183-195 последовательности проЕТ-1 человека (SEQ ID NO: 18).

14. Способ по п. 1 или 7, где уровень по меньшей мере одного из биомаркеров MR-проANP, MR-проADM и копептина определяют в образце жидкости организма указанного пациента в дополнение к уровню СТ-проЕТ-1.

15. Применение СТ-проЕТ-1 для стратификации терапии обморока, где пациентов стратифицируют в соответствии с их потребностью в кардиостимуляторе посредством определения уровня СТ-проЕТ-1, где уровень выше предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих ортостатической гипотензией, которые не нуждаются в кардиостимуляторе, и где уровень ниже предопределенного порогового уровня является показательным для пациентов, страдающих кардиоингибирующим рефлексом, которые нуждаются в кардиостимуляторе,

где предопределенный пороговый уровень составляет между 30 и 70 пмоль/л.