СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ Российский патент 1999 года по МПК A61K39/245 A61K39/265 A61K35/78 

Изобретение относится к лекарственным препаратам, в частности к препаратам, используемым в ветеринарии, и может найти применение для специфической защиты от инфекционного ларинготрахеита птиц.

Инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ) - острое контагиозное заболевание птиц - является причиной высокого процента смертности, у переболевших особей снижается суточный привес и яйценоскость. В комплексе мер борьбы с ИЛТ одним из основных средств является вакцинация с помощью убитых и живых вирусвакцин.

Известна (Бабкин В. Ф. и др. Ветеринарiя: Респ. мiжвiд. тематич. наук. 3б. Киев, 1975, вып.42, с. 14-19) инактивированная эмульсия-вакцина из штамма "Г", которую вводят внутримышечно. Эмульсия-вакцина дает хорошую защиту при заражении патогенным вирусом, однако в условиях птицехозяйств (сотни тысяч особей) внутримышечная вакцинация слишком трудоемка.

Также известна (Дутко Ю. С., Шевченко А.А., Изотова М.Н., Кишнер А.Т. Ветеринария, 1991, N3, с. 32-34) сухая вирусвакцина "НТ" штамма "ЦНИИПП", которую используют групповым методом - аэрозольным или выпаиванием, или индивидуальным методом (клоачным). Сухую вакцину разводят в дистиллированной воде. Однако, вирусвакцина "НТ" не обеспечивает достаточно быстрого приживления и накопления вируса в слизистых гортани и трахеи птиц.

Наиболее близким по сущности и достигаемому терапевтическому эффекту к заявляемому средству является средство для профилактики ИЛТ, включающее вирусвакцину из штамма "ВНИИБП" и биопротектор (Малушко В.В., Соколов В.Д., Быков В. Ф., Чабанова Л.П., Шорников В.В. Птицеводство, 1983, N 12, с. 21-23). Вирусвакцина против ИЛТ птиц из штамма "ВНИИБП" изготовлена из вируссодержащих экстраэмбриональной жидкости и хориоаллантоисных оболочек куриных эмбрионов. В качестве биопротектора известное средство содержит пептон, пищевой желатин и сахарозу, взятые в соотношении соответственно 2:5:5, или пептон с сахарозой, или лактозу с пептоном и обезжиренное коровье молоко.

Это средство используют для профилактики ИЛТ у птиц всеми известными методами, в первую очередь аэрозольным, создающим наибольшую защиту от заражения, недорогим и наименее трудоемким. Указанное средство обеспечивает быстрое приживление и накопление вируса в слизистых гортани и трахеи, что дает более эффективную защиту от заболеваний ИЛТ, предупреждает острые вспышки и клинические проявления ИЛТ.

Однако при первом введении указанного средства проявляется повышенная реактогенность, сопровождающаяся повышенной смертностью цыплят, особенно бройлеров.

Задача, поставленная в заявляемом изобретении, состоит в снижении реактогенности птицы при использовании средства для профилактики ИЛТ.

Указанная задача решается тем, что в средстве для профилактики ИЛТ у птиц, включающем вирусвакцину из штамма "ВНИИБП" и биопротектор, в качестве биопротектора используют липосомальные везикулы на основе соевого лецитина, взятые в количестве 40-65 мг на 1 мл вирусвакцины.

Липосомальные везикулы содержат в липидной оболочке соевый лецитин, или соевый лецитин с добавлением 1-2% альфа-токоферола, или соевый лецитин, холестерин и альфа-токоферол, взятые в соотношении (в г) 100:(30-35):(1-2).

Вирусную вакцину получают из 9-дневных куриных эмбрионов, зараженных вирусом ИЛТ птиц штамм "ВНИИБП", в соответствии с ТУ 9384-001.00495674-96, утвержденными Департаментом ветеринарии МСХП РФ 09.10.96. Активность вирусной вакцины, используемой в заявляемом изобретении, была в пределах 5,3 lg ЭИД₅₀ - 7,5 lg ЭИД₅₀ (ЭИД - эмбриональная инфицирующая доза).

Получение заявляемого средства описано в примерах.

Пример 1. В 10 мл хлороформа растворяют 3 г соевого лецитина и высушивают в 1 л круглодонной колбе на роторном испарителе до полного удаления хлороформа. Затем к образовавшейся в колбе пленке липидов добавляют 65 мл вирусной массы, 28 мл 5%-ного сорбита и 7 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и полученную взвесь ресуспендируют при комнатной температуре до получения однородной суспензии, которую в объеме 3 мл разливают в ампулы. На 1 мл вакцины приходится 46,2 мг липидов.

Лиофилизацию осуществляют после предварительного замораживания при -30 (-35)^oC и дальнейшего выпаривания водного растворителя.

Пример 2. В 10 мл хлороформа растворяют 4 г соевого лецитина и 0,04 г альфа-токоферола. Далее, как в примере 1.

На 1 мл вакцины приходится 62,2 мг липидов.

Пример 3. В 10 мл хлороформа растворяют 2 г соевого лецитина, 0,67 г холестерина, 0,02 г альфа- токоферола и высушивают в 1 л круглодонной колбе на роторном испарителе до полного удаления хлороформа. Затем к образовавшейся в колбе пленке липидов добавляют 65 мл вирусной массы, 28 мл 5%-ного сорбита и 7 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и полученную взвесь ресуспендируют при комнатной температуре до получения однородной суспензии, которую в объеме 3 мл разливают в ампулы. На 1 мл вакцины приходится 41,4 мг липидов.

Лиофолизацию осуществляют после предварительного замораживания и дальнейшего выпаривания водного растворителя.

Пример 4. К пленке липидов, полученных, как в примере 3, добавляют 65 мл вирусной массы, 28 мл 5%-ной сахарозы и 7 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и полученную взвесь ресуспендируют и разливают во флаконы, как в примере 1. На 1 мл вакцины приходится 41,4 мг липидов.

Пример 5. В 10 мл хлороформа растворяют 3 г соевого лецитина, 0,06 г DL-альфа-токоферола и высушивают в 1 л круглодонной колбе на роторном испарителе до полного удаления хлороформа. Затем к образовавшейся в колбе пленке липидов добавляют 120 мл 5% сахарозы и 30 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и полученную взвесь ресуспендируют, наливают во флакон на 250 мл и после предварительного замораживания при -30(-35)^oC и выпаривания водного растворителя лиофилизируют.

Затем во флакон, содержащий лиофилизированные липосомы добавляют 65 мл вирусной массы, 28 мл 5%-ной сахарозы и 7 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и полученную взвесь ресуспендируют в течение 2-3 минут при комнатной температуре.

Полученную однородную суспензию разливают в ампулы по 3 мл. На 1 мл вакцины приходится 47,1 мг липидов.

Полученное средство было испытано по нормам ТУ 9384-001- 00495674-96. По растворимости, остаточной влаге и стерильности оно соответствует ТУ.

Титр вируса во всех примерах равен 5,32-6,08 lg ЭИД₅₀/мл.

Для определения термостабильности заявляемое средство и вакцину по прототипу выдерживали при 37,5^oC в течение 7 дней. Титр вируса у заявляемого средства снизился с 5,82 lg ЭИД₅₀/мл до 5,39 lg ЭИД₅₀/мл; за это же время титр вируса вакцины по прототипу снизился с 5,81 до 4,55 lg ЭИД₅₀/мл.

Была проведена проверка иммуногенных свойств заявляемого средства (вакцины с липосомами) в сравнении со средствами по прототипу. Вакцинация проводилась в 2 группах из 20 цыплят, и 20 цыплят составляли контрольную группу.

При однократной иммунизации аэрозольным методом заявляемым средством не наблюдалось поствакцинальной реакции у цыплят. При однократной иммунизации вакциной по прототипу у 3 из 20 цыплят с третьего по восьмой день наблюдалось угнетение и снижение аппетита.

При однократной иммунизации заявляемым средством клеточный иммунный ответ (Е-РОК) к 9-му дню после иммунизации был выше на 3,5% по сравнению с прототипом; на 14 день после иммунизации процент фагоцитоза был выше на 4-7%, фагоцитарного числа на 0,2-0,4 единицы и фагоцитарного индекса на одну единицу по сравнению с прототипом.

Также для определения иммуногенных свойств заявляемого средства в сравнении с прототипом по 20 цыплят после однократной вакцинации заявляемым средством и вакциной по прототипу, а также 20 цыплят контрольной группы были заражены полевым вирусом ИЛТ (штамм "24а") в дозе 1000 ИД₅₀ по 0,2 мл интратрахеально. Наблюдение велось в течение 10 дней, павших вскрывали для установления причин гибели.

Клинические признаки ИЛТ у заболевших появлялись на 4-е - 5-е сутки и выражались в угнетении и снижении активности при приеме корма. На 6-7 день у единичных больных появился кашель, вытягивание шеи при вдохе.

В группе, вакцинированной заявляемым средством, заболело 2 из 20 цыплят; в группе, вакцинированной вакциной по прототипу, заболело 5 цыплят, один из числа заболевших пал, в контрольной (невакцинированной) группе на 2-4 день заболело 18 цыплят, пало с клиническими признаками ИЛТ - 3 цыплят. При вскрытии павших цыплят обнаружили гиперемию и отек гортани, кровоизлияния на слизистой гортани, тяжи и сгустки крови.

Была проведена также двукратная вакцинация заявляемым средством 34670 цыплят яичной породы в возрасте 41-42 дня (1 вакцинация) и 54-55 дней (II вакцинация) аэрозольным способом. Доза, аспирированная цыплятами при первой вакцинации, составляла 3 ЭИД₅₀, при второй - 7,5 ЭИД₅₀. Поствакцинальной реакции у цыплят не наблюдали. Вакцинация не повлияла отрицательно на рост и увеличение живой массы цыплят. У 100% птиц был сформирован гумморальный иммунитет (по РНГА).

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии. Средство для профилактики инфекционного ларинготрахеита птиц содержит вирусную вакцину из штамма "ВНИИБП" и биопротектор - липосомальные везикулы на основе соевого лецитина, взятые в количестве 40 - 65 мг на 1 мл вакцины. Везикулы могут содержать соевый лецитин, и/или альфа-токоферол, и/или холестерин. Через 14 дней после однократной иммунизации указанным средством иммунный ответ на 4 - 7% выше по сравнению с прототипом. 2 з.п. ф-лы.

1. Средство для профилактики инфекционного ларинготрахеита птиц, включающее вирусную вакцину из штамма "ВНИИБП" и биопротектор, отличающееся тем, что в качестве биопротектора средство содержит липосомальные везикулы на основе соевого лецитина, взятые в количестве 40 - 65 мг на 1 мл вирусвакцины. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что липосомальные везикулы содержат соевый лецитин и альфа-токоферол, взятые в соотношении 100 : (1 - 2). 3. Средство по п.1, отличающееся тем, что липосомальные везикулы содержат соевый лецитин, холестерин и альфа-токоферол, взятые в соотношении 100 : (30 - 35) : (1 - 2).