КОМБИНИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ КОКЛЮША, ДИФТЕРИИ, СТОЛБНЯКА, ГЕПАТИТА В И ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ HAEMOPHILUS INFLUENZAE ТИП В Российский патент 2017 года по МПК A61K39/116 A61K39/10 A61K39/08 A61K39/29 A61K39/102 

Изобретение относится к медицине, а именно к комбинированным вакцинам, содержащим в одном препарате несколько антигенов, и может применяться для одновременной профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b.

За прототип принято описание комбинированной вакцины для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка и гепатита В адсорбированной (вакцина АКДС-Геп В) (инструкция по применению вакцины АКДС-Геп В, http://www.vidal.ru/poisk_reparatov/diphtheria--tetanus--pertussi-and-hepatitis-b-adsorbed-vaccine-(vaccine-dtp-hepb).htm). Вакцина АКДС-Геп В представляет собой смесь убитых формальдегидом коклюшных микробов 1 фазы (цельноклеточный коклюшный компонент) и сорбированных на геле алюминия гидроксида дифтерийного и столбнячного анатоксинов и рекомбинантного дрожжевого поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg). Лекарственная форма вакцины АКДС-Геп В представляет собой суспензию для внутримышечного введения

Состав:

Одна доза вакцины (0,5 мл) содержит:

Активные вещества:

Дифтерийный анатоксин 15 Lf Столбнячный анатоксин 5 Lf Коклюшные бактерии 10 млрд Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5 мкг

Вспомогательные вещества:

Алюминия гидроксид (Al³⁺) от 0,3 до 0,55 мг Формальдегид не более 50 мкг Консервант-тиомерсал от 35 до 50 мкг

Признаки прототипа, совпадающие с признаками заявленного изобретения, заключаются в наличии в составе комбинированного препарата коклюшного компонента, очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, рекомбинантного поверхностного антигена вируса гепатита В, адсорбированных на гидроксиде алюминия.

Причины, препятствующие получению технического результата в прототипе, который обеспечивается изобретением, заключаются в наличии в составе комбинированной вакцины цельноклеточного коклюшного компонента, обладающего высокой профилактической эффективностью, но при этом являющимся одним из наиболее реактогенных препаратов, включенных в национальные календари прививок различных стран. Кроме того, в составе АКДС-Геп В вакцины в качестве консерванта используется тиомерсал, который может потенциально негативно влиять на детский организм, чувствительный к соединениям ртути. В связи с этим Комитет по патентованным лекарственным средствам ЕМЕА (Европейское агентство по оценке медицинских продуктов для общественности), американская контролирующая организация FDA, а также современный Национальный календарь профилактических прививок рекомендуют для иммунизации детей использовать вакцины, которые не содержат тиомерсал.

Задача, решаемая изобретением, состоит в повышении качества вакцины и расширении сферы ее применения.

Технический результат, обеспечивающий решение указанной задачи, состоит в снижении реактогенности вакцины и расширении сферы ее применения.

Указанный технический результат достигается тем, что в комбинированной вакцине для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b, содержащей коклюшный компонент, дифтерийный, столбнячный анатоксины, поверхностный антиген вируса гепатита В, сорбированные на алюминии гидроксида, согласно изобретению, в качестве коклюшного компонента используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная и включающая дополнительно вакцину Haemophilus influenzae тип b конъюгированную, при следующем соотношении ингредиентов в одной дозе (0,5 мл):

Вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 60-70 мкг Дифтерийный анатоксин 15-20 Lf Столбнячный анатоксин 5-7,5 Lf Рекомбинантный поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5-10 мкг Вакцина Haemophilus influenzae тип b конъюгированная (Hib) 8-12 мкг Алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al³⁺) от 0,3 до 0,55 мг

При этом совокупность отличительных признаков обеспечивает снижение реактогенности вакцины и расширение сферы применения, а также повышение иммуногенности Hib-компонента в составе комбинированной вакцины. Использование бесклеточного коклюшного компонента обеспечивает снижение реактогенности препарата, а введение в состав комбинированной вакцины Hib-компонента расширяет ее сферу применения в отличии от прототипа - АКДС-Геп В, применяемого для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В, вакцину аАКДС-Геп B+Hib (где, индекс «а» обозначает бесклеточный коклюшный компонент) можно использовать для профилактики инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b.

Новые признаки изобретения состоят в том, что в качестве коклюшного компонента используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная и включает дополнительно вакцину Haemophilus influenzae тип b конъюгированную, при следующем соотношении ингредиентов в одной дозе (0,5 мл):

Вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 60-70 мкг Дифтерийный анатоксин 15-20 Lf Столбнячный анатоксин 5-7,5 Lf Рекомбинантный поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5-10 мкг Вакцина Haemophilus influenzae тип b конъюгированная (Hib) 8-12 мкг Алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al³⁺) от 0,3 до 0,55 мг

Вакцину аАКДС-Геп B+Hib получают следующим способом: Hib-компонент (вакцина Haemophilus influenzae тип b конъюгированная) получают путем его лиофилизации в присутствии вспомогательных веществ при следующем соотношении в одной прививочной дозе: полирибозилрибитола фосфат Haemophilus influenzae тип b, конъюгированный со столбнячным анатоксином - 8-12 мкг, сахароза - 42,5 мг, натрия дигидрофосфат - 0,16 мг, динатрия гидрофосфат - 0,50 мг. Лекарственная форма - лиофилизат Hib-компонента.

аАКДС-Геп В компонент получают путем последовательного добавления к гелю гидроксида алюминия коклюшного, дифтерийного, столбнячного и гепатитного антигенов. Лекарственная форма - суспензии для внутримышечного введения.

Коклюшный компонент представляет собой антигенную фракцию Bordetella pertussis, очищенную без разделения компонентов, полученную по технологии (патент №2504399), включающей следующие основные операции:

1) выращивают культуры трех штаммов разных серовариантов Bordetella pertussis на плотной питательной среде (казеиново-угольный агар);

2) смывают полученную биомассу с поверхности питательной среды;

3) проводят экстракцию комплекса антигенов раствором дезоксихолата натрия;

4) центрифугируют для отделения полученного экстракта, содержащего комплекс антигенов, от микробной биомассы;

5) проводят очистку экстракта ультрадиафильтрацией, с последующим удалением эндотоксинов хроматографией;

6) проводят обезвреживание формальдегидом и теплом.

Полученная субстанция вакцины коклюшной бесклеточной содержит в одном мл:

- антигенную фракцию Bordetella pertussis, очищенную без разделения компонентов - не менее 1 мг белка;

- формальдегид - не более 200 мкг;

- сукцинатно-боратный буферный раствор 0,005 М до 1 мл.

Для приготовления аАКДС-Геп В компонента используют дифтерийный, столбнячный и гепатитный антигены, соответствующие по показателям качества требованиям нормативных документов.

Перед соединением указанных компонентов проводят расчет, исходя из того, что в одной прививочной дозе (0,5 мл) вакцины должно содержаться 60-70 мкг вакцины коклюшной бесклеточной очищенной, 15-20 Lf очищенного дифтерийного анатоксина, 5-7,5 Lf очищенного столбнячного анатоксина, 5-10 мкг дрожжевого рекомбинантного поверхностного антигена вируса гепатита В и не более 0,55 мг алюминия гидроксида (в пересчете на алюминий).

Расчет проводят по формуле: , где

Vi - требуемый объем антигенного ингредиента в мл;

V - объем аАКДС-Геп В компонента, мл;

Т₁ - титр антигенного ингредиента в аАКДС-Геп В компоненте (показатель специфической активности) или концентрация по белку в мкг/мл;

T₂ - титр исходного антигенного полуфабриката (показатель специфической активности) или концентрация по белку в мкг/мл.

Пример: Требуется приготовить 80 л аАКДС-Геп В вакцины с содержанием в одной прививочной дозе: 20 Lf дифтерийного анатоксина, 5 Lf столбнячного анатоксина, 5 мкг антигена вируса гепатита В, 60 мкг вакцины коклюшной бесклеточной очищенной, 0,45 мг алюминия гидроксида (в 1 мл соответственно: 40 Lf дифтерийного анатоксина, 10 Lf столбнячного анатоксина, 10 мкг антигена вируса гепатита В, 120 мкг вакцины коклюшной бесклеточной очищенной, 0,9 мг алюминия гидроксида).

Потребуется:

а) дифтерийного анатоксина с титром 500 Lf/мл,

б) столбнячного анатоксина с титром 500 Lf/мл,

в) бесклеточной коклюшной вакцины с содержанием белка 1000 мкг/мл,

г) поверхностного антигена вируса гепатита В с содержанием белка 800 мкг/мл:

д) суспензии алюминия гидроксида с содержанием алюминия 6,0 мг/мл:

е) 0,9% раствора натрия хлорида:

V6=V-VΣ_1-5, где

V₆ - объем 0,9% раствора хлорида натрия, л.

V₆=80 л - (6,4 л + 1,6 л + 9,6 л + 1,0 + 12,0 л)=49,4 л.

После проведения расчетов проводят сорбцию компонентов вакцины: последовательно добавляют антигены в расчетных количествах к гелю гидроксида алюминия и тщательно перемешивают смесь в течение 20 минут после добавления каждого компонента. После соединения всех компонентов с гелем гидроксида алюминия добавляют стерильный апирогенный 0,9% раствор натрия хлорида до необходимого объема и доводят pH до 6,4-7,4.

Разработанный алгоритм приготовления суспензии аАКДС-Геп В обеспечивает полноту сорбции всех компонентов на уровне не ниже 99%.

Лекарственная форма вакцины представляет собой лиофилизат Hib-компонента для внутримышечного введения (1), в комплекте с суспензией для внутримышечного введения аАКДС-Геп В компонент (2). Лиофилизат Hib-компонента растворяют перед использованием в суспензии для внутримышечного введения аАКДС-Геп В компонента.

Результаты проведенных испытаний показали, что комбинированная вакцина аАКДС-Геп B + Hib, полученная по разработанному способу, полностью соответствует требованиям, предъявляемым к препаратам такого класса Всемирной Организации Здравоохранения (табл. 1).

Из представленных данных видно, что разработанный способ обеспечивает получение стабильных вакцин: регламентированные показатели качества при хранении существенно не изменялись.

Сравнительное изучение вакцин в реакции гиперчувствительности замедленного типа и по содержанию бактериальных эндотоксинов показало, что разработанная вакцина аАКДС-Геп B+Hib в предлагаемом составе согласно изобретению обладает значительно меньшей реактогенностью, чем вакцина АКДС-Геп В (прототип).

Показатели интенсивности иммунного воспаления по массе и толщине стоп мышей были достоверно выше (p<0,05) в группе сравнения, получившей вакцину АКДС-Геп В (табл. 2).

Кроме того, по содержанию бактериальных эндотоксинов, в основном определяющих реактогенность препаратов с цельноклеточным компонентом, предлагаемый состав вакцины аАКДС-Геп B + Hib в отличие от прототипа содержит в десять раз меньше эндотоксических единиц в дозе и по данному показателю соответствует требованиям Европейской Фармакопеи (табл. 3).

Предлагаемый состав комбинированной вакцины аАКДС-Геп B + Hib обеспечивает гуморальный иммунный ответ на дифтерийный, столбнячный, коклюшный и гепатитный компоненты на уровне препарата сравнения -прототипа (вакцина АКДС-Геп В). Кроме того, установлено, что в составе комбинированного препарата усиливаются иммуногенные свойства вакцины Haemophilus influenzae тип b. Полученные результаты представлены в таблице 4.

Таким образом, комбинированная вакцина предлагаемого состава для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b характеризуется слабой реактогенностью, безопасностью и высокой иммуногенностью и может быть использована для вакцинации детей в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок России.

Изобретение относится к медицине, а именно к комбинированным вакцинам, содержащим в одном препарате несколько антигенов. Представленная комбинированная вакцина содержит в своем составе следующие компоненты: коклюшный, в качестве которого используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 60-70 мкг, дифтерийный анатоксин - 15-20 Lf, столбнячный анатоксин 5-7,5 Lf, рекомбинантный поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5-10 мкг, вакцину Haemophilus influenzae тип b конъюгированную (Hib) 8-12 мкг, алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al³⁺) от 0,3 до 0,55 мг. Охарактеризованная вакцина является высокоиммуногенным, нетоксичным препаратом, позволяющим одновременно проводить иммунизацию против коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b. Использование изобретения позволяет расширить арсенал средств для вакцинации детей в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок России. 4 табл., 1 пр.

Комбинированная вакцина для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b, содержащая коклюшный компонент, дифтерийный, столбнячный анатоксины, поверхностный антиген вируса гепатита В, сорбированные на алюминии гидроксида, отличающаяся тем, что в качестве коклюшного компонента используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная и включающая дополнительно вакцину Haemophilus influenzae тип b конъюгированную, при следующем соотношении ингредиентов в одной дозе (0,5 мл):

Вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 60-70 мкг Дифтерийный анатоксин 15-20 Lf Столбнячный анатоксин 5-7,5 Lf Рекомбинантный поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5-10 мкг Вакцина Haemophilus influenzae тип b конъюгированная (Hib) 8-12 мкг Алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al³⁺) от 0,3 до 0,55 мг